CR3000 INFORMACJE O BADANIACH.

Transkrypt

1 CHOLESTEROL FRAKCJI HDL 0344 Przeznaczenie Pakiet odczynników do samodzielnej diagnostyki in vitro, służący do ilościowego oznaczania cholesterolu HDL w krwi pełnej. Wstęp Ponieważ znajdujące się we krwi lipidy (fosfolipidy, trójglicerydy, wolny i zestryfikowany cholesterol) nie są rozpuszczalne w wodzie, łączą się one z białkami, aby móc krążyć z krwią. Związki lipidów z białkami noszą nazwę lipoprotein, i można je podzielić na różne frakcje: chylomikrony, lipoproteiny o bardzo niskiej gęstości (VLDL), lipoproteiny o niskiej gęstości (LDL) oraz lipoproteiny o wysokiej gęstości (HDL). HDL, określany także jako "dobry" cholesterol to cząsteczka odpowiedzialna za transport cholesterolu do wątroby, w celu jego usunięcia. Dzięki temu stężenie cholesterolu we krwi utrzymywane jest na niskim poziomie. W pewnym sensie, HDL to ekipa sprzątająca, która zgarnia nadmiar cholesterolu z tkanek i tętnic, i usuwa go, zanim wyrządzi jakieś szkody. W konsekwencji, ważnym jest zachowanie wysokiego stężenia HDL we krwi. Wytyczne międzynarodowe zalecają stężenia przekraczające 35 mg/dl. Siedzący tryb życia i palenie są zwykle związane z niskim stężeniem HDL. Wykazano, że ryzyko choroby wieńcowej jest wprost proporcjonalne do stosunku stężeń całkowitego cholesterolu do cholesterolu HDL. Ogólne zalecenia leczenia i zapobiegania chorobom układu krążenia powinny bezwzględnie obejmować pełne badanie profilu lipidowego, obejmujące pomiar stężenia całkowitego cholesterolu, HDL, LDL i trójglicerydów. Zasada testu Frakcje VLDL i LDL ulegają wytrąceniu w polianionowym buforze reakcyjnym. Następnie, enzymy: esteraza cholesterolowa (CHE) i oksydaza cholesterolowa (CHO) reagują wyłącznie z frakcją cholesterolu HDL obecną w płynie nadosadowym (przeźroczystym płynie) uzyskanym w wyniku wirowania. Ester cholesterolowy CHE Cholesterol + Kwasy tłuszczowe Cholesterol + O 2 + H 2 O CHO 4-Cholesten-3-on + H 2 O 2 H 2 O 2 + PhOH + 4-AP POD Chinonoimina CZERWONA+ H 2 O Warunki pracy Długość fali: 505 nm Długość optyczna: 1 cm Temperatura reakcji: 37 C/98,6 F Typ reakcji: Punkt końcowy Czas reakcji: 120 sekund Ostrzeżenia i środki ostrożności Dokładnie zapoznać się z instrukcją użytkowania. Ustawić czynnik K, znajdujący się na zewnątrz opakowania. Nie używać odczynników po dacie ważności podanej na opakowaniu. Nie używać nadtlenku wodoru (H 2 O 2 ) do dezynfekcji. Nie używać składników zestawu do żadnego innego celu, niż opisany w rozdziale "Przeznaczenie". Strona 1

2 Zastosować konieczne środki ostrożności wymagane podczas posługiwania się wszelkimi substancjami chemicznymi: stosować jednorazowe rękawiczki; dokładnie zamykać kuwety i probówki zawierające próbki materiału biologicznego; nie jeść, nie pić i nie palić podczas wykonywania testu. Usuwać odpady postępując zgodnie z wymaganiami obowiązującego prawa miejscowego. Skład Kuweta Enzym Probówka stożkowa 50 mm bufor fosforanowy 10 mm PhOH Niejonowy środek powierzchniowo czynny Stabilizatory 4 mm 4-AP >0,11 U/L CHE >0,12 KU/L CHO >45 KU/L POD 0,2 M bufor glicynowy 20% PEG Przygotowanie i przechowywanie odczynników Wszystkie odczynniki są w postaci gotowej do użytku. Odczynniki zachowują stabilność do daty wskazanej na opakowaniu, pod warunkiem przechowywania w zamkniętym opakowaniu aluminiowym, w temperaturze pokojowej (15-30 C/ F). Po pierwszym otwarciu blistru, kuwety zachowują stabilność przez SZEŚĆ MIESIĘCY: po każdym użyciu należy dokładnie zamknąć aluminiowe opakowanie. Enzymy mogą być używane do daty ważności wskazanej na opakowaniu, jeśli są przechowywane w temperaturze 2-8 C/35,6-46,4 F. Zawartość opakowania Kod AD-12134: pudełko zawierające 5 probówek z buforem reakcyjnym, 5 gotowych do użytku kuwet z pokrywką, 1 fiolka z enzymem (pakowana osobno), jednorazowego użytku końcówki do pipety, kapilary 50 μl. Kod AD-12118: pudełko zawierające 10 probówek z buforem reakcyjnym, 10 gotowych do użytku kuwet z pokrywką, 1 fiolka z enzymem (pakowana osobno), jednorazowego użytku końcówki do Kod AD-12109: pudełko zawierające 20 probówek z buforem reakcyjnym, 20 gotowych do użytku kuwet z pokrywką, 2 fiolki z enzymem (pakowane osobno), jednorazowego użytku końcówki do Kod AD-12135: pudełko zawierające 30 probówek z buforem reakcyjnym, 30 gotowych do użytku kuwet z pokrywką, 1 fiolka z enzymem (pakowana osobno), jednorazowego użytku końcówki do Kontrola jakości Użytkownicy powinni ustanowić program kontroli jakości (QC). Należy sprawdzić sprawność instrumentu i odczynników używając w tym celu zalecanych kontroli lub zbliżonych procedur. Wartości uzyskane w toku kontroli jakości powinny mieścić się w dopuszczalnych zakresach określonych przez producenta i podanych na opakowaniu odczynników kontrolnych. Próbka 50 µl krwi włośniczkowej lub krwi żylnej pobranej na K 2 -EDTA. Próbkę krwi włośniczkowej należy badać niezwłocznie, podczas gdy próbkę krwi żylnej można badać w okresie sześciu godzin. Strona 2

3 Pobieranie próbki krwi włośniczkowej 1. Należy wybrać miejsce z boku opuszka jednego z środkowych palców dowolnej dłoni. Aby wspomóc przepływ krwi, palce i dłoń powinny być ciepłe w dotyku. 2. Przetrzeć gazikiem miejsce nakłucia i odczekać aż alkohol wyparuje. 3. Należy nacisnąć opuszek palca, przyłożyć lancet do skóry i przycisnąć do momentu kliknięcia. (Ostrzeżenie: używać wyłącznie urządzenie do nakłuwania oznaczone znakiem CE) 4. Delikatnie ucisnąć palec i usunąć suchym gazikiem pierwszą kroplę krwi, ponieważ może się w niej znajdować płyn tkankowy. 5. Ponownie, wolno i rytmicznie rozmasowywać nakłuty palec, aż do momentu pojawienia się kropli krwi. Nie uciskać palca zbyt mocno. 6. Dotknąć kapilarą kropli krwi, trzymając ją pod lekko opadającym kątem. Kapilara napełni się dzięki działaniu siły lepkości. Nie pobierać pęcherzyków powietrza. Mogą one wpłynąć na uzyskany wynik. 7. Po pobraniu pełnej kapilary należy jej końcówką przesunąć po suchej skórze palca, w celu pozbycia się nadmiaru krwi. Procedura testu 1. Dodać pobraną próbkę krwi (50 μl) do fabrycznie napełnionej probówki stożkowej, zamknąć pokrywkę i delikatnie wymieszać przechylając probówkę, aż do chwili całkowitego opróżnienia kapilary. 2. Odstawić na 1 minutę. 3. Wirować probówkę stożkową przez 2 minuty z prędkością około 3500 obrotów na minutę, aby uzyskać płyn nadosadowy Wlać 100 μl 23 płynu nadosadowego do kuwety, zamknąć pokrywkę i delikatnie wymieszać przez przechylanie. 5. Wprowadzić kuwetę do komory pomiarowej w celu dokonania pomiaru zerowego. 6. Wyjąć kuwetę, dodać 2 krople enzymu 24, zamknąć pokrywkę i delikatnie przechylić kuwetę kilkukrotnie do góry dnem. 7. Ponownie umieścić aktywowaną kuwetę w tej samej komorze odczytowej, w której odczytywano próbę ślepą. Test rozpocznie się automatycznie. Wartości referencyjne mg/dl (0,9-2,0 mmol/l). 22 Do wirowania użyć odpowiednią probówkę jako przeciwwagę. Po zakończeniu wirowania, sprawdzić, czy płyn nadosadowy jest klarowny i bezbarwny. 23 Dwukrotnie odmierzyć pipetą po 50 μl płynu nadosadowego używając załączonej do zestawu pipety Podczas pobierania próbek nie dotykać końcówką pipety komórek znajdujących się w osadzie na dnie probówki. Przed każdym użyciem pipety należy zmienić końcówkę. Płyn pobierany pipetą wchodzi w kontakt jedynie z końcówką pipety. Nie wolno dopuścić do tego, aby płyn dostał się do pipety, gdyż doprowadzi to do skażenia tłoka i nieprawidłowej pracy urządzenia. W razie konieczności, zwrócić się o nową pipetę. 24 Sprawdzić, czy roztwór nie jest mętny. Strona 3

4 Charakterystyka skuteczności Liniowość mg/dl (0,6-3,1 mmol/l). Powtarzalność Współczynnik wariancji (CV) <13%. Precyzja CV <13%. Zakłócenia Testy przeprowadzone u osób badanych, których hematokryt nie mieści się w zakresie 37-48% wykazują tendencję do odchyleń wobec testów przeprowadzonych na surowicy pochodzącej z tych samych próbek. Zaleca się sprawdzenie hematokrytu pacjentów. Ponieważ witamina C jest czynnikiem redukującym, jej duże ilości mogą wpływać antagonistycznie na proces utleniania, na którym opiera się test. Normalne użytkowanie innych substancji aktywnych farmakologicznie nie zakłóca wszelkich testów wykorzystujących reakcję Trindera, szeroko stosowaną w chemii. UWAGA: Automatyczne obliczenie stężenia cholesterolu LDL Urządzenia serii CR2000 i CR3000 automatycznie obliczają i drukują wartość stężenia cholesterolu LDL, jeśli kolejno wykonano oznaczenia całkowitego cholesterolu, HDL i trójglicerydów. Jeśli drukowane są więcej niż 2 wyniki tego samego testu (np. dwa wyniki stężenia cholesterolu) obliczenie odnosi się do ostatniego uzyskanego wyniku. Wartości stężenia LDL są wynikiem obliczenia matematycznego (wzór Friedewalda), które można zastosować wyłącznie, gdy: wartości całkowitego stężenia cholesterolu, HDL i trójglicerydów 25 mieszą się w ich odnośnych zakresach liniowości; wartości stężenia trójglicerydów są poniżej 400 mg/dl. W przeciwnym razie wyświetlane jest ostrzeżenie "N/A!" (nie dotyczy). Wartości referencyjne stężenia cholesterolu LDL mg/dl (1,3-3,6 mmol/l). Piśmiennictwo 1. Richmond W. Ann. Clin. Biochem. 29: 577, Allain, C.C., Poon, L.S., Chan, C.S.G., Richmond, W., and Fu, P.C. Clin. Chem. 20 (4): 470, Doukyu N. et al., Biochem. J. 341: 621:-627, Trinder P, Ann Clin Biochem 6: 24:-27, Friedewald WT, Levy RI, Frederickson DS. Clin. Chem. 18: , Producent Callegari S.p.A. Via Adamello 2/A Parma - Italy 25 Dla oprogramowania CR3000 w wersji 3.18 (1 komora)/2.18 (3 komory) olub nowszej, wartości stężenia LDL są szacowane w oparciu o przybliżenie algebraiczne, gdy odczyt stężenia trójglicerydów wynosi 90mg/dl. Strona 4

5 Dystrybutor Cambridge Diagnostics Sp. z o.o. Walecznych 56/2 Warszawa - Polska Lista symboli Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Numer serii Data ważności 0344 Znak CE - W zgodzie z Dyrektywą WE 98/79 i późniejszymi poprawkami Dlgs 332/2000 Okres stabilności po otwarciu blistra: 6 miesięcy Data otwarcia Producent Uwaga - Patrz instrukcja użytkowania Temperatura przechowywania Zagrożenia biologiczne Strona 5