CR3000 INFORMACJE O BADANIACH.

Transkrypt

1 CHOLESTEROL CAŁKOWITY 0344 Przeznaczenie Pakiet odczynników do samodzielnej diagnostyki in vitro, służący do ilościowego oznaczania całkowitego cholesterolu w krwi pełnej. Wstęp Cholesterol jest substancją tłuszczową występującą wyłącznie u zwierząt i niezbędną do życia. Odgrywa wiele zasadniczych ról biologicznych: jest konieczny do budowy i podtrzymania błon komórkowych, stanowi główny prekursor syntezy witaminy D, soli żółciowych i różnorodnych hormonów steroidowych i płciowych, a także odgrywa zasadniczą rolę we wzroście i podziałach komórkowych, a także ma zasadnicze znaczenie dla rozwoju zarodkowego. U ludzi, zasadnicza część całego cholesterolu jest syntetyzowana w organizmie, głównie w wątrobie. Jedynie niewielka część pochodzi z diety, a ilość ta jest w znacznym stopniu zmienna, ponieważ zależy od nawyków żywieniowych. Podobnie jak wszystkie substancje tłuszczowe, cholesterol nie rozpuszcza się w wodzie. Aby móc być transportowanym we krwi łączy się z białkiem tworząc lipoproteiny (HDL, LDL i VLDL). Hipercholesterolemia związana jest z wieloma poważnymi chorobami, w szczególności miażdżycowymi chorobami układu krążenia: głównie zawałem mięśnia sercowego i udarem niedokrwiennym. Hipercholesterolemię, jako czynnik ryzyka, pogłębia nadciśnienie i palenie. Ogólne zalecenia leczenia i zapobiegania chorobom układu krążenia powinny bezwzględnie obejmować pełne badanie profilu lipidowego, obejmujące pomiar stężenia całkowitego cholesterolu, HDL, LDL i trójglicerydów. Zasada testu Metoda oparta jest na oznaczeniu 4-cholesten-3-onu po enzymatycznym rozszczepieniu estru cholesterolowego przez enzym esterazę cholesterolową (CHE). Dalsze utlenienie przy udziale oksydazy cholesterolowej (CHO) prowadzi do powstania nadtlenku wodoru (H 2 O 2 ), który (w obecności peroksydazy, POD) przekształca fenol i 4-aminofenazon (4-AP) w substancję o czerwonej barwie (chinonoiminę), której ilość można mierzyć fotometrycznie. Nasilenie barwy czerwonej substancji jest wprost proporcjonalne do stężenia cholesterolu w próbce. Ester cholesterolowy CHE Cholesterol + Kwasy tłuszczowe Cholesterol + O 2 CHO 4-cholesten-3-on + H 2 O 2 H 2 O 2 + PhOH + 4-AP POD Chinonoimina CZERWONA + H 2 O Warunki pracy Długość fali: 505 nm Długość optyczna: 1 cm Czas reakcji: 120 sekund Typ reakcji: Punkt końcowy Objętość próbki: 10 μl Ostrzeżenia i środki ostrożności Dokładnie zapoznać się z instrukcją użytkowania. Ustawić czynnik K, znajdujący się na zewnątrz opakowania. Nie używać odczynników po dacie ważności podanej na opakowaniu. Nie używać nadtlenku wodoru (H 2 O 2 ) do dezynfekcji. Nie używać składników zestawu do żadnego innego celu, niż opisany w rozdziale "Przeznaczenie". Strona 1

2 Zastosować konieczne środki ostrożności wymagane podczas posługiwania się wszelkimi substancjami chemicznymi: stosować jednorazowe rękawiczki; dokładnie zamykać kuwety i probówki zawierające próbki materiału biologicznego; nie jeść, nie pić i nie palić podczas wykonywania testu. Usuwać odpady postępując zgodnie z wymaganiami obowiązującego prawa miejscowego. Arkusz danych dotyczących bezpieczeństwa substancji dla odczynników dostępny jest na życzenie. Zawartość opakowania Kod AD PHARMACOL 40 TEST: 1 pudełko zawierające kuwety PHARMACOL (kod 11104) + 1 fiolka enzymu (kod AD-10157). Kod AD PHARMACOL 10 TEST: 1 pudełko zawierające kuwety PHARMACOL (kod 11124) + 1 fiolka enzymu (kod AD-12110). Kod AD PHARMACOL Cuvettes 40 TEST: 4 blistry zawierające po 10 kuwet; 1 fiolka z POMARAŃCZOWYM korkiem zawierająca kapilary 10 μl; ulotka. Kod AD PHARMACOL Cuvettes 10 TEST: 1 blister zawierający 10 kuwet; 1 fiolka z POMARAŃCZOWYM korkiem zawierająca kapilary 10 μl; ulotka. Enzymy są dostarczane osobno. Skład odczynników Kuweta 50 mm bufor fosforanowy 10 mm PhOH Niejonowy środek powierzchniowo czynny Stabilizatory Enzym 4 mm 4-AP >0,11 U/L CHE >0,12 KU/L CHO >45 KU/L POD Przygotowanie i przechowywanie odczynników Wszystkie odczynniki są w postaci gotowej do użytku. Odczynniki w buforze zachowują stabilność do daty wskazanej na opakowaniu, pod warunkiem przechowywania w temperaturze pokojowej (15-30 C/59-86 F) i w zamkniętym opakowaniu aluminiowym. Po pierwszym otwarciu blistra, kuwety zachowują stabilność przez CZTERY MIESIĄCE: po każdym użyciu należy dokładnie zamknąć aluminiowe opakowanie. Enzymy mogą być używane do daty ważności wskazanej na opakowaniu, jeśli są przechowywane w temperaturze 2-8 C/35,6-46,4 F. Materiały pakowane osobno Następujące materiały są dostępne odrębnie, na zamówienie: Roztwór kontrolny cholesterolu. Akcesoria konieczne do przeprowadzenia testu Spektofotometr Callegari S.p.A. Wirówka. Rękawiczki, gazik namoczony alkoholem, jałowy suchy gazik - Stosować wyłącznie alkohol lub podobne środki. Jednorazowe, jałowe nakłuwacze (lancety) - Używać wyłącznie wyrobów posiadających znak CE. Szczypce do obsługi kapilar (w zestawie). Kapilary (dostarczane z odczynnikami). Odpowiednie pojemniki na odpady biologiczne. Strona 2

3 Próbka 10 µl krwi włośniczkowej lub krwi żylnej pobranej na K 2 -EDTA. Próbkę krwi włośniczkowej należy badać niezwłocznie, podczas gdy próbkę krwi żylnej można badać w okresie sześciu godzin. Pobieranie próbki krwi włośniczkowej 1. Należy wybrać miejsce z boku opuszka jednego z środkowych palców dowolnej dłoni. Aby wspomóc przepływ krwi, palce i dłoń powinny być ciepłe w dotyku. 2. Przetrzeć gazikiem miejsce nakłucia i odczekać aż alkohol wyparuje. 3. Należy nacisnąć opuszek palca, przyłożyć lancet do skóry i przycisnąć do momentu kliknięcia. (Ostrzeżenie: używać wyłącznie urządzenie do nakłuwania oznaczone znakiem CE) 4. Delikatnie ucisnąć palec i usunąć suchym gazikiem pierwszą kroplę krwi, ponieważ może się w niej znajdować płyn tkankowy. 5. Ponownie, wolno i rytmicznie rozmasowywać nakłuty palec, aż do momentu pojawienia się kropli krwi. Nie uciskać palca zbyt mocno. 6. Dotknąć kapilarą kropli krwi, trzymając ją pod lekko opadającym kątem. Kapilara napełni się dzięki działaniu siły lepkości. Nie pobierać pęcherzyków powietrza. Mogą one wpłynąć na uzyskany wynik. 7. Po pobraniu pełnej kapilary należy jej końcówką przesunąć po suchej skórze palca, w celu pozbycia się nadmiaru krwi. Procedura testu 1. Dodać pobraną próbkę krwi (10 μl) do fabrycznie napełnionej kuwety, zamknąć pokrywkę i delikatnie wymieszać przechylając kuwetę, aż do chwili opróżnienia kapilary. 2. Wprowadzić kuwetę do komory pomiarowej w celu dokonania pomiaru zerowego. 3. Wyjąć kuwetę, dodać 2 krople enzymu 19, zamknąć pokrywkę i delikatnie przechylić kuwetę kilkukrotnie do góry dnem. 4. Umieścić aktywowaną kuwetę w tej samej komorze odczytowej, w której odczytywano próbę ślepą. Test rozpocznie się automatycznie. Wartości referencyjne mg/dl (3,88-5,00 mmol/l). Charakterystyka skuteczności Liniowość mg/dl (2,60-10,40 mmol/l). Jeśli uzyskany wynik znajduje się poza zakresem liniowości, wyświetlany jest komunikat <X lub >Y (X oznacza granicę dolną, a Y granicę górną zakresu). Powtarzalność Powtarzalność analityczną rozumianą jako precyzję w obrębie oznaczenia, ustalono badając próbki krwi pełnej i wyrażono w postaci odsetka współczynnika wariancji (%CV). 19 Sprawdzić, czy roztwór nie jest mętny. Strona 3

4 Liczba testów Średnia (mg/dl) %CV <6 Precyzja Precyzję analityczną pomiędzy różnymi dniami oznaczenia, ustalono badając próbki krwi i wyrażono w postaci odsetka współczynnika wariancji (%CV). Liczba testów Średnia (mg/dl) Odchylenie Standardowe %CV ,78 <5 Porównanie Porównanie dokonane z zastosowaniem metody Callegari oraz certyfikowanej metody laboratoryjnej dało następujące wyniki: Liczba testów 80 Regresja liniowa y = 1,0189x - 3,0748 Liniowy R 2 0,9576 Zakłócenia Testy przeprowadzone u osób badanych, których hematokryt nie mieści się w zakresie 37-48% wykazują tendencję do odchyleń wobec testów przeprowadzonych na surowicy pochodzącej z tych samych próbek. Zaleca się sprawdzenie hematokrytu pacjentów. Ponieważ witamina C jest czynnikiem redukującym, jej duże ilości mogą wpływać antagonistycznie na proces utleniania, na którym opiera się test. Normalne użytkowanie innych substancji aktywnych farmakologicznie nie zakłóca wszelkich testów wykorzystujących reakcję Trindera, szeroko stosowaną w chemii. UWAGA: Automatyczne obliczenie stężenia cholesterolu LDL Wartość stężenia cholesterolu LDL jest obliczana automatycznie i drukowana po przeprowadzeniu testów stężenia całkowitego cholesterolu (TC), HDL i trójglicerydów (TG). Jeśli drukowane są więcej niż 2 wyniki tego samego testu (np. dwa wyniki stężenia cholesterolu) obliczenie odnosi się do ostatniego uzyskanego wyniku. Wartości stężenia LDL są wynikiem obliczenia matematycznego (wzór Friedewalda 20 ), które można zastosować wyłącznie, gdy: wartości całkowitego stężenia cholesterolu, HDL i trójglicerydów 21 mieszą się w ich odnośnych zakresach liniowości; wartości stężenia trójglicerydów są poniżej 400 mg/dl. W przeciwnym razie wyświetlane jest ostrzeżenie "N/A!" (nie dotyczy). Wartości referencyjne stężenia cholesterolu LDL mg/dl (1,3-3,6 mmol/l). 20 Wzór Friedewalda: Jednostki tradycyjne (mg/dl): LDL = TC HDL TG / 5 Jednostki SI (mmol/l): LDL = TC HDL TG / 2, Dla oprogramowania CR3000 w wersji 3.18 (1 komora)/2.18 (3 komory) lub nowszej, wartości stężenia LDL są szacowane w oparciu o przybliżenie algebraiczne, gdy odczyt stężenia trójglicerydów wynosi 90 mg/dl. Strona 4

5 Piśmiennictwo 1. Richmond W. Ann. Clin. Biochem. 29: 577, Allain, C.C., Poon, L.S., Chan, C.S.G., Richmond, W., and Fu, P.C. Clin. Chem. 20 (4): 470, Doukyu N. et al., Biochem. J. 341: 621:-627, Trinder P, Ann Clin Biochem 6: 24:-27, Friedewald WT, Levy RI, Frederickson DS. Clin. Chem. 18: , Europejskie wytyczne dot. zapobiegania chorobom układu krążenia w praktyce klinicznej (wersja 2012). European Heart Journal doi: /eurheartj/ehs092. Producent Callegari S.p.A. Via Adamello 2/A Parma - Italy Dystrybutor Cambridge Diagnostics Sp. z o.o. Walecznych 56/2 Warszawa - Polska Lista symboli Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Numer serii Data ważności Numer katalogowy 0344 Znak CE - W zgodzie z Dyrektywą WE 98/79 i późniejszymi poprawkami Dlgs 332/2000 Okres stabilności po otwarciu blistra: 6 miesięcy Data otwarcia Producent Uwaga - Patrz instrukcja użytkowania Temperatura przechowywania Nie używać powtórnie Zagrożenia biologiczne Przechowywać z dala od promieni słonecznych Znak recyklingu Usuwać z zachowaniem ostrożności i staranności. Nie śmiecić. Przechowywać w suchym miejscu Nie jeść i nie pić Przechowywać w miejscu niedostępnym dla dzieci Strona 5