(12) TŁUMACZENIE PATENTU EUROPEJSKIEGO (19) PL (11) PL/EP (96) Data i numer zgłoszenia patentu europejskiego:

Transkrypt

1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) TŁUMACZENIE PATENTU EUROPEJSKIEGO (19) PL (11) PL/EP Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (96) Data i numer zgłoszenia patentu europejskiego: (97) O udzieleniu patentu europejskiego ogłoszono: Europejski Biuletyn Patentowy 2013/38 EP B1 (13) (51) T3 Int.Cl. C07D 401/14 ( ) A61K 31/517 ( ) A61P 35/00 ( ) (54) Tytuł wynalazku: Inhibitory kinaz białkowych (30) Pierwszeństwo: EP US P (43) Zgłoszenie ogłoszono: w Europejskim Biuletynie Patentowym nr 2011/43 (45) O złożeniu tłumaczenia patentu ogłoszono: Wiadomości Urzędu Patentowego 2014/04 (73) Uprawniony z patentu: Eli Lilly and Company, Indianapolis, US (72) Twórca(y) wynalazku: PL/EP T3 DAVID ANDREW COATES, Indianapolis, US ALFONSO DE DIOS MAGANA, IIndianapolis, US ANA DE PRADO GONZALES, Alcobendas, ES MIRIAM FILADELFA DEL PRADO CATALINA, Alcobendas, ES MARIA CRISTINA GARCIA PAREDES, Alcobendas, ES LAWRENCE MARK GELBERT, Indianapolis, US JOHN MONTE KNOBELOCH, Indianapolis, US EVA MARIA MARTIN DE LA NAVA, Alcobendas Madrid, ES MARIA DOLORES MARTIN ORTEGA FINGER, Alcobendas, ES JOSE ANTONIO MARTINEZ PEREZ, Alcobendas, ES ANA ISABEL MATEO HERRANZ, Alcobendas, ES CARLOS PEREZ MARTINEZ, Alcobendas, ES CONCEPCION SANCHEZ MARTINEZ, Alcobendas, ES (74) Pełnomocnik: rzecz. pat. Ewa Wojasińska POLSERVICE KANCELARIA RZECZNIKÓW PATENTOWYCH SP. Z O.O. ul. Bluszczańska Warszawa Uwaga: W ciągu dziewięciu miesięcy od publikacji informacji o udzieleniu patentu europejskiego, każda osoba może wnieść do Europejskiego Urzędu Patentowego sprzeciw dotyczący udzielonego patentu europejskiego. Sprzeciw wnosi się w formie uzasadnionego na piśmie oświadczenia. Uważa się go za wniesiony dopiero z chwilą wniesienia opłaty za sprzeciw (Art. 99 (1) Konwencji o udzielaniu patentów europejskich).

2 2 Opis EP B1 [0001] W wysokim stopniu homologiczne kinazy cyklinozależne (Cyclin-dependent kinase, Cdk) CDK4 i CDK6 w połączeniu z cykliną D są kluczowymi regulatorami przejścia przez punkt restrykcyjny R między fazą G 1 (wzrost) a fazą S (replikacja DNA) cyklu komórkowego. CDK4/6 działają poprzez fosforylację białka glejaka siatkówki (prb). Po ufosforylowaniu, prb traci swój wpływ hamujący na transkrypcję genów sprzyjających wejściu w fazę S. [0002] Tym czasem, swoiste hamowanie aktywności kinazy CDK4/6 przez endogenny modulator białkowy p16 INK4 lub drobnocząsteczkowe inhibitory prowadzi do hipofosforylacji prb i zatrzymania komórek w punkcie restrykcyjnym G 1. Ponieważ jest to pierwszorzędowy mechanizm regulacji punktu restrykcyjnego G 1, w szerokim spektrum ludzkich guzów dochodzi do zmiany w szlaku regulowanym przez te kinazy, a zatem hamowanie CDK4/CDK6 w tych guzach daje korzyść terapeutyczną w postaci zapobiegania podziałowi komórki. [0003] Pim-1 to kinaza serynowo-treoninowa regulująca rozmaite funkcje biologiczne, obejmujące przejście przez cykl komórkowy, szlaki transdukcji sygnału/prowadzące do transkrypcji i apoptozę, a której ekspresja została powiązana z kilkom nowotworami obejmującymi nowotwory krwi, gruczołu krokowego i jamy ustnej (Bachmann, M. i T. Moroy, Int. J. Biochem. Cell Biol., (4): str ). [0004] Inhibitory kinaz są znane w stanie techniki. Międzynarodowe zgłoszenie patentowe nr WO 98/11095 ujawnia szereg podstawionych 2-pirymidynoamin i opisuje je jako inhibitory kinaz, w szczególności kinazy p56 lck, ZAP-70 i kinazy białkowej

3 3 C. Międzynarodowe zgłoszenie patentowe nr WO 98/11095 nie ujawnia hamowania Cdk. [0005] Szereg 2-(pirydyn-2-yloamino)pirydo[2,3-d]pirymidyn-7- onów opisanych jako mające aktywność hamującą CDK4/6 ujawniono w międzynarodowym zgłoszeniu patentowym nr WO 03/ Związki te opisano jako przydatne w leczeniu zaburzeń proliferacji komórkowej, takich jak rak i restenoza. Niemniej jednak, związki są słabo rozpuszczalne w roztworze wodnym i nie wykazują znacznej aktywności hamującej inne docelowe kinazy (inne niż Cdk). [0006] Międzynarodowe zgłoszenie patentowe nr WO 2005/ ujawnia formy polimorficzne soli - izetionianu 6-acetylo-8- cyklopentylo-5-metylo-2(5-piperazyn-1-ylopirydyn-2-yloamino)- 8H-pirydo[2,3-d]pirymidyn-7-onu, którą opisano jako selektywny inhibitor CDK4. [0007] Pozostaje zapotrzebowanie na inhibitory CDK4/6, które można stosować w leczeniu zaburzeń proliferacji komórkowej takich jak rak. Przedmiotem niniejszego wynalazku są inhibitory CDK4/6. Pewne związki według niniejszego wynalazku są silniejszymi inhibitorami CDK4/6 niż niektóre związki znane w stanie techniki. [0008] Ponadto, występuje zapotrzebowanie na inhibitory CDK4/6 cechujące się selektywnością w stosunku do CDK4/6, w porównaniu z innymi Cdk, a zatem zdolne do powodowania swoistego zatrzymania w fazie G 1, gdy występują z farmakologicznie stosownych stężeniach. Przedmiotem niniejszego wynalazku są inhibitory CDK4/6 zdolne do powodowania swoistego zatrzymania w fazie G 1, gdy występują w farmakologicznie stosownych stężeniach.

4 4 [0009] Pozostaje również zapotrzebowanie na inhibitory CDK4/6 o ulepszonej rozpuszczalności w roztworze wodnym. Niektóre związki według niniejszego wynalazku cechują się lepszą rozpuszczalnością w roztworze wodnym niż niektóre związki w stanie techniki. [0010] Następnie, występuje zapotrzebowanie na inhibitory CDK4/6 o ulepszonej dystrybucji do tkanki mózgowej, a zatem które można stosować do leczenia zaburzeń mających miejsce w mózgu, np. pierwotnych i przerzutowych guzów mózgu. Niektóre związki według niniejszego wynalazku mają ulepszoną dystrybucję do tkanki mózgowej. [0011] Istnieje również zapotrzebowanie na inhibitory CDK4/6 o dobrych właściwościach farmakokinetycznych takich jak dostępność po podaniu doustnym. Niektóre związki według niniejszego wynalazku mają ulepszoną dostępność po podaniu doustnym w porównaniu z niektórymi związkami znanymi w stanie techniki. [0012] Ponadto, występuje zapotrzebowanie na inhibitory kinaz o drugorzędowej aktywności hamującej kinazy inne niż Cdk, np. kinazę Pim-1. Niektóre związki według niniejszego wynalazku mają aktywność hamującą dwie kinazy - kinazę CDK4/6 i kinazę Pim-1. [0013] Przedmiotem niniejszego wynalazku są związki o wzorze: (I)

5 5 w którym, R1 oznacza C 3 -C 5 alkil, C 3 -C 5 cykloalkil lub cyklopropylometyl; R2 i R3 oznaczają H lub atom fluoru, przy czym co najmniej jeden spośród R2 lub R3 oznacza atom fluoru; R4 oznacza H lub CH 3 ; R5 oznacza C 1 -C 6 alkil lub -NR6R7, w którym R6 i R7 oznaczają C 1 -C 3 alkil; Q oznacza CH 2, O, S lub wiązanie bezpośrednie; i W i Y oznaczają C lub N, przy czym co najmniej jeden spośród W lub Y oznacza N i przy czym, gdy Q oznacza O lub S, W oznacza C; lub ich farmaceutycznie dopuszczalne sole. [0014] Przedmiotem niniejszego wynalazku jest preparat farmaceutyczny zawierający związek według niniejszego wynalazku, lub jego farmaceutycznie dopuszczalną sól, oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, rozcieńczalnik lub substancję pomocniczą. [0015] Przedmiotem niniejszego wynalazku jest związek według niniejszego wynalazku, lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól, do zastosowania w leczeniu. [0016] Przedmiotem niniejszego wynalazku jest związek według niniejszego wynalazku, lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól, do zastosowania w leczeniu raka. Zwłaszcza tych raków, które wybrane są z grupy obejmującej raka jelita grubego, raka sutka, raka płuc, zwłaszcza niedrobnokomórkowego raka płuc (NSCLC), raka gruczołu krokowego, glejaka niedojrzałego, chłoniaka z komórek płaszcza (MCL), przewlekłą białaczkę szpikową (CML) i ostrą białaczkę szpikową (AML).

6 6 [0017] Następnie, przedmiotem wynalazku jest sposób leczenia raka wybranego z grupy obejmującej raka jelita grubego, raka sutka, raka płuc, zwłaszcza niedrobnokomórkowego raka płuc (NSCLC), raka gruczołu krokowego, glejaka niedojrzałego, chłoniaka z komórek płaszcza, przewlekłą białaczkę szpikową i ostrą białaczkę szpikową u ssaków obejmujący podawanie ssakowi potrzebującemu takiego leczenia w skutecznej ilości związku według niniejszego wynalazku lub jego farmaceutycznie dopuszczalnej soli. [0018] Ponadto, przedmiotem wynalazku jest zastosowanie związku według niniejszego wynalazku, lub jego farmaceutycznie dopuszczalnej soli, do wytwarzania leku do leczenia raka. W szczególności tych raków, które wybrane są z grupy obejmującej raka jelita grubego, raka sutka, raka płuc, zwłaszcza niedrobnokomórkowego raka płuc (NSCLC), raka gruczołu krokowego, glejaka niedojrzałego, chłoniaka z komórek płaszcza, przewlekłą białaczkę szpikową i ostrą białaczkę szpikową. [0019] Ponadto, przedmiotem wynalazku jest preparat farmaceutyczny do zastosowania w leczeniu zawierający związek według niniejszego wynalazku, lub jego farmaceutycznie dopuszczalną sól, oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, rozcieńczalnik lub substancję pomocniczą. Przedmiotem wynalazku jest również preparat farmaceutyczny do leczenia raka jelita grubego, raka sutka, raka płuc, zwłaszcza niedrobnokomórkowego raka płuc (NSCLC), raka gruczołu krokowego, glejaka niedojrzałego, chłoniaka z komórek płaszcza, przewlekłej białaczki szpikowej i ostrej białaczki szpikowej zawierający związek według niniejszego wynalazku, lub jego farmaceutycznie dopuszczalną sól, oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, rozcieńczalnik lub substancję pomocniczą.

7 7 [0020] Ogólne terminy chemiczne użyte we wzorach powyżej mają swoje zwykłe znaczenia. Przykładowo, termin C 3 -C 5 alkil odnosi się do prostego lub rozgałęzionego, jednowartościowego nasyconego alifatycznego łańcucha o od trzech do pięciu atomach węgla i obejmuje, lecz bez ograniczenia do, n-propyl, izopropyl, n-butyl, izobutyl, sec-butyl i tert-butyl. [0021] Termin C 3 -C 5 cykloalkil odnosi się do nasyconego węglowego układu pierścieniowego zawierającego od trzech do pięciu atomów węgla. [0022] Wykwalifikowany czytelnik rozumieć będzie, że większość związków według niniejszego wynalazku, lub wszystkie z nich, może tworzyć sole. Związki według niniejszego wynalazku to aminy i zgodnie z tym reagują z dowolnymi spośród wielu kwasów nieorganicznych i organicznych z wytworzeniem farmaceutycznie dopuszczalnych soli addycyjnych z kwasami. Takie farmaceutycznie dopuszczalne sole addycyjne z kwasami i powszechna metodologia ich wytwarzania są dobrze znane w stanie techniki. Patrz np. P. Stahl i in., HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/ Wiley-VCH, 2002); L. D. Bighley, S. M. Berge, D. C. Monkhouse, w Encyclopedia of Pharmaceutical Technology. red. J. Swarbrick i J.C. Boilan, tom 13, Marcel Dekker, Inc., New York, Basel, Hong Kong 1995, str ; S.M. Berge i in., Pharmaceutical Salts, Journal of Pharmaceutical Sciences, tom 66, nr 1, styczeń Korzystne są sole kwasów chlorowodorowego i mesylowego. Szczególnie korzystna jest sól kwasu mesylowego. [0023] Korzystnie niniejszy wynalazek obejmuje związki o wzorze I, w którym R1 oznacza izopropyl, cyklopropyl, cyklo-

8 8 pentyl lub cyklopropylometyl. Korzystniej, R1 oznacza izopropyl. [0024] Korzystnie niniejszy wynalazek obejmuje związki o wzorze I, w którym R2 oznacza atom fluoru, a R3 oznacza atom wodoru. Korzystnie niniejszy wynalazek obejmuje związki o wzorze I, w którym R2 oznacza atom wodoru, a R3 oznacza atom fluoru. Najkorzystniej oba R2 i R3 oznaczają atom fluoru. [0025] Korzystnie niniejszy wynalazek obejmuje związki o wzorze I, w którym R4 oznacza atom wodoru. W alternatywnym rozwiązaniu, R4 oznacza korzystnie metyl. Najkorzystniej R4 oznacza atom wodoru. [0026] Korzystnie niniejszy wynalazek obejmuje związki o wzorze I, w którym R5 oznacza C 1 -C 3 alkil lub -NR6R7, w którym R6 i R7 oznaczają C 1 -C 3 alkil. Korzystniej, R6 i R7 oznaczają etyl. Korzystniej R5 oznacza C 1 -C 3 alkil. Najkorzystniej R5 oznacza etyl. [0027] Korzystnie niniejszy wynalazek obejmuje związki o wzorze I, w którym Q oznacza CH 2 lub wiązanie bezpośrednie. Najkorzystniej Q oznacza CH 2. [0028] Korzystnie niniejszy wynalazek obejmuje związki o wzorze I, w którym Y oznacza N. [0029] Korzystnie niniejszy wynalazek obejmuje związki o wzorze I, w którym W oznacza N. [0030] Korzystnie niniejszy wynalazek obejmuje związki o wzorze I, w którym zarówno W jak i Y oznaczają N. [0031] Korzystne związki według wynalazku obejmują te o wzorze:

9 9 (II) w którym: R1 oznacza izopropyl, cyklopropyl, cyklopentyl lub cyklopropylometyl; R4 oznacza H lub CH 3 ; R5 oznacza C 1 -C 3 alkil; Q oznacza CH 2, O lub wiązanie bezpośrednie; i W oznacza C lub N przy czym, gdy Q oznacza O, W oznacza C; lub ich farmaceutycznie dopuszczalną sól. [0032] Szczególnie korzystne są związki przedstawione tu przykładowo lub ich farmaceutycznie dopuszczalna sól. Dokładniej, korzystnym związkiem jest [5-(4-etylopiperazyn-1- ylometylo)pirydyn-2-ylo]-[5-fluoro-4-(7-fluoro-3-izopropylo- 2-metylo-3H-benzoimidazol-5-ilo)pirymidyn-2-ylo]amina lub jej farmaceutycznie dopuszczalna sól. [5-(4-etylopiperazyn-1- ylometylo)pirydyn-2-ylo]-[5-fluoro-4-(7-fluoro-3-izopropylo-2- metylo-3h-benzoimidazol-5-ilo)pirymidyn-2-ylo]amina może być nazwana alternatywnie N-[5-[(4-etylo-1-piperazynylo)metylo]- 2-pirydynylo]-5-fluoro-4-[4-fluoro-2-metylo-1-(1- metyloetylo)-1h-benzoimidazol-6-ilo]-2-pirymidynoaminą. [0033] Szczególnie korzystna jest forma krystaliczna III [5- (4-etylopiperazyn-1-ylometylo)pirydyn-2-ylo]-[5-fluoro-4-(7- fluoro-3-izopropylo-2-metylo-3h-benzoimidazol-5-ilo)pirymi-

10 10 dyn-2-ylo]aminy, charakteryzująca się dyfraktogramem rentgenowskim preparatu proszkowego (promieniowanie CuKα, λ = 1,54056 Å) zawierającym pik przy 21,29 (2θ ± 0,1 ) i ewentualnie jeden lub więcej pików wybranych z grupy obejmującej 11,54, 10,91 i 12,13 (2θ ± 0,1). Forma krystaliczna III [5-(4-etylopiperazyn-1-ylometylo)pirydyn-2-ylo]-[5-fluoro-4- (7-fluoro-3-izopropylo-2-metylo-3H-benzoimidazol-5- ilo)pirymidyn-2-ylo]aminy może następnie charakteryzować się widmem 13 C NMR z pikami przesunięcia chemicznego ν (F1) [ppm] przy 112,7, 127,3 i 129,4. [0034] Związki według niniejszego wynalazku są swoistymi inhibitorami CDK4 i CDK6 i są zatem przydatne w leczeniu choroby lub zaburzenia charakteryzującego się nieprawidłową proliferacją komórkową. W szczególności, związki według niniejszego wynalazku przydatne są w leczeniu raka. [0035] CDK4 i CDK6 modulują swoje działanie na cykl komórkowy poprzez fosforylację prb. Oczekuje się, że związki według niniejszego wynalazku, będące silnymi inhibitorami aktywności CDK4/6, a zatem fosforylacji prb, hamować będą proliferację komórkową (a więc wzrost guza) w każdym typie raka, w którym komórki proliferują i zawierają funkcjonalny, nienaruszony gen Rb1 (który koduje prb). Związki według wynalazku są zatem przydatne w leczeniu nowotworów prb -, takich jak rak jelita grubego, rak sutka, rak płuc, rak gruczołu krokowego, przewlekła białaczka szpikowa, ostra białaczka szpikowa (Fry, D. W. i in. Mol. Cancer Ther. (2004), 3(11), 1427), chłoniak z komórek płaszcza (Marzec, M. i in., Blood (2006), 108(5), 1744) rak jajnika (Kim, T. M. i in., Cancer Research (1994), 54, 605), rak trzustki (Schutte, M. i in., Cancer Research (1997), 57, 3126) czerniak złośliwy i przerzutowy czerniak

11 11 złośliwy (Maelandsmo, G.M. i in., British Journal of Cancer (1996), 73, 909) u ssaków. Oczekuje się również, że związki według wynalazku będą przydatne w leczeniu mięśniakomięsaka prążkowanego (Saab, R. i in., Mol. Cancer Ther. (2006), 5(5), 1299) i szpiczaka mnogiego (Baughn, L. B. i in., Cancer Res. (2006), 66(15), 7661) u ssaków. Korzystne jest, aby leczonym ssakiem był człowiek. [0036] Ponadto, korzystne związki według niniejszego wynalazku wykazują taką korzystną właściwość, że charakteryzują się ulepszoną dystrybucją do tkanki mózgowej. Przykładowo, gdy podawane w modelu szczurzym, wskaźnik ekspozycji mózg:osocze dla związku według przykładu 16 (określony z zastosowaniem pola powierzchni pod krzywą (AUC) lub maksymalnego stężenia w osoczu i mózgu (Cmax), patrz tabela 6c) wynosi w przybliżeniu 1, co wskazuje, że związek według przykładu 16 dobrze przechodzi do mózgu. Tymczasem, twórcy niniejszego wynalazku określili, że korzystny związek z międzynarodowego zgłoszenia patentowego nr WO 03/ (6-acetylo-8-cyklopentylo-5- metylo-2-(5-piperazyn-1-ylopirydyn-2-yloamino)-8h-pirydo[2,3- d]pirymidyn-7-on) wykazuje współczynniki dystrybucji mózg:osocze wynoszące 0,17 (AUC) i 0,1 (Cmax), co wskazuje, że związek względnie słabo przechodzi do tkanki mózgowej w tym modelu. Korzystne związki według niniejszego wynalazku mają zatem zdolność do przenikania do mózgu i są zatem przydatne w leczeniu guzów pierwotnych i przerzutowych mózgu, w których komórki proliferują i zawierają funkcjonalny, nienaruszony gen Rb1. Przykłady takich guzów mózgu prb + obejmują glejaka niedojrzałego jak również cewiaka nerwowego i gwiaździaka (Lee, W.-H. i in., Science (1987), 235, 1394). Temozolomid jest cytotoksycznym środkiem alkilującym DNA stosowanym do

12 12 leczenia guzów mózgu obejmujących glejaka niedojrzałego i gwiaździaka (Friedman, H. S. i in. (2000), Clin. Cancer Res. 6 (7): ) w tym przerzuty do mózgu z czerniaka, raka sutka i NSCLC (Siena, S. i in. (2009) Annals of Oncology, doi: /annonc/mdp343). Temozolomid oddziałuje wzajemnie z DNA, prowadząc do jego modyfikacji chemicznej/uszkodzenia (Marchesi, F. i in. (2007), Pharmacol. Res. 56(4): ). Związki według niniejszego wynalazku stosować można w skojarzeniu z temozolomidem do leczenia pierwotnych i przerzutowych guzów mózgu prb +, takich jak glejak niedojrzały i gwiaździak, np. gdy takie przerzuty pochodzącą z czerniaka, raka sutka lub NSCLC. [0037] Chlorowodorek gemcytabiny, analog nukleozydowy wykazujący aktywność przeciwnowotworową, to monochlorowodorek 2 - deoksy-2,2 -difluorocytydyny (izomer β), znany również jako monochlorowodorek 2,2 -difluoro-2 -deoksycytydyny lub 1-(4- amino-2-okso-1h-pirymidyn-1-ylo)-2-dezoksy-2,2 -difluororyboza. Chlorowodorek gemcytabiny opisano w zgłoszeniu patentowym St. Zjedn. Ameryki nr US 5,464,826. Wzór strukturalny przedstawiono poniżej: [0038] Chlorowodorek gemcytabiny skuteczny jest w leczeniu niedrobnokomórkowego raka płuc (NSCLC) (Sandler, A. i Ettinger, D.S., (1999), The Oncologist, 4, 241), raka trzustki (Pino, S. M. i in., (2004), Current Gastroenterology Reports, 6, 119), raka jajnika (Pfisterer, J. i in., (2006), Journal

13 13 of Clinical Oncology, 24(29), 4699) i przerzutowego raka sutka (Chan, S. i in., (2009), Journal of Clinical Oncology, 27 (11), 1753). Związki według niniejszego wynalazku można stosować w połączeniu z chlorowodorkiem gemcytabiny do leczenia NSCLC, raka trzustki, raka jajnika i przerzutowego raka sutka. [0039] Związki według niniejszego wynalazku można stosować w sposobie leczenia raka, zwłaszcza nowotworów opisanych powyżej, u ssaków, obejmującym podawanie ssakowi potrzebującemu takiego leczenia w skutecznej ilości związku według niniejszego wynalazku. W korzystnym rozwiązaniu, związki według niniejszego wynalazku stosować można w sposobie leczenia raka wybranego z grupy obejmującej raka jelita grubego, chłoniaka z komórek płaszcza, raka sutka, glejaka niedojrzałego, ostrą białaczkę szpikową i raka płuc, zwłaszcza NSCLC. W innym korzystnym rozwiązaniu, związki według niniejszego wynalazku stosować można w sposobie leczenia raka wybranego z grupy obejmującej raka jelita grubego, glejaka niedojrzałego, ostrą białaczkę szpikową i raka płuc. W innym korzystnym rozwiązaniu, związek według niniejszego wynalazku stosować można w sposobie leczenia glejaka niedojrzałego lub gwiaździaka u ssaków, obejmującym podawanie potrzebującemu tego ssakowi terapeutycznie skutecznej kombinacji związku według wynalazku i temozolomidu. W innym korzystnym rozwiązaniu, związek według wynalazku stosować można w sposobie leczenia NSCLC, raka trzustki, raka jajnika lub przerzutowego raka sutka u ssaka, obejmującym podawanie potrzebującemu tego ssakowi terapeutycznie skutecznej kombinacji związku według wynalazku i chlorowodorku gemcytabiny.

14 14 [0040] Związki według niniejszego wynalazku stosować można do leczenia raka, zwłaszcza nowotworów opisanych powyżej. W korzystnym rozwiązaniu, związki według niniejszego wynalazku stosować można do leczenia raka wybranego z grupy obejmującej raka jelita grubego, chłoniaka z komórek płaszcza, raka sutka, glejaka niedojrzałego, ostrą białaczkę szpikową i raka płuc, zwłaszcza NSCLC. W innym korzystnym rozwiązaniu, związki według niniejszego wynalazku stosować można do leczenia raka wybranego z grupy obejmującej raka jelita grubego, glejaka niedojrzałego, ostrą białaczkę szpikową i raka płuc. W innym korzystnym rozwiązaniu, przedmiotem wynalazku jest związek według niniejszego wynalazku do zastosowania w jednoczesnej, oddzielnej lub sekwencyjnej kombinacji z temozolomidem w leczeniu glejaka niedojrzałego lub gwiaździaka. W innym korzystnym rozwiązaniu, przedmiotem wynalazku jest związek według niniejszego wynalazku do zastosowania w jednoczesnej, oddzielnej lub sekwencyjnej kombinacji z chlorowodorkiem gemcytabiny w leczeniu NSCLC, raka trzustki, raka jajnika lub przerzutowego raka sutka. [0041] Ponadto, związki według niniejszego wynalazku stosować można w wytwarzaniu leku do leczenia raka, w szczególności, nowotworów opisanych powyżej. W korzystnym rozwiązaniu, związki według niniejszego wynalazku stosować można w wytwarzaniu leku do leczenia raka wybranego z grupy obejmującej raka jelita grubego, chłoniaka z komórek płaszcza, raka sutka, glejaka niedojrzałego, ostrą białaczkę szpikową i raka płuc, zwłaszcza NSCLC. W innym korzystnym rozwiązaniu, związki według niniejszego wynalazku stosować można w wytwarzaniu leku do leczenia raka wybranego z grupy obejmującej raka jelita grubego, glejaka niedojrzałego, ostrą białaczkę szpikową i raka

15 15 płuc. W innym korzystnym rozwiązaniu, przedmiotem wynalazku jest zastosowanie związku według wynalazku w wytwarzaniu leku do leczenia glejaka niedojrzałego lub gwiaździaka, przy czym lek zawiera również temozolomid lub przeznaczony jest do podawania jednoczesnego, oddzielnego lub sekwencyjnego z temozolomidem. W innym korzystnym rozwiązaniu, przedmiotem wynalazku jest zastosowanie związku według wynalazku w wytwarzaniu leku do leczenia NSCLC, raka trzustki, raka jajnika lub przerzutowego raka sutka, przy czym lek zawiera również chlorowodorek gemcytabiny lub przeznaczony jest do podawania jednoczesnego, oddzielnego lub sekwencyjnego z chlorowodorkiem gemcytabiny. [0042] Przedmiotem wynalazku jest również preparat farmaceutyczny do leczenia raka, zwłaszcza nowotworów opisanych powyżej, zawierający związek według niniejszego wynalazku, lub jego farmaceutycznie dopuszczalną sól, razem z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem. W korzystnym rozwiązaniu, przedmiotem wynalazku jest również preparat farmaceutyczny do leczenia raka wybranego z grupy obejmującej raka jelita grubego, chłoniaka z komórek płaszcza, raka sutka, glejaka niedojrzałego, ostrą białaczkę szpikową i raka płuc, zwłaszcza NSCLC, zawierający związek według niniejszego wynalazku, lub jego farmaceutycznie dopuszczalną sól, razem z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem. W korzystnym rozwiązaniu, przedmiotem wynalazku jest również preparat farmaceutyczny do leczenia raka wybranego z grupy obejmującej raka jelita grubego, glejaka niedojrzałego, ostrą białaczkę szpikową i raka płuc, zawierający związek według niniejszego wynalazku, lub jego farmaceutycznie dopuszczalną sól, razem z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem. W innym korzystnym rozwiązaniu, przedmiotem wynalazku jest preparat farmaceutyczny do lecze-

16 16 nia glejaka niedojrzałego lub gwiaździaka, zawierający związek według wynalazku i temozolomid, razem z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem. W innym korzystnym rozwiązaniu, przedmiotem wynalazku jest preparat farmaceutyczny do leczenia NSCLC, raka trzustki, raka jajnika lub przerzutowego raka sutka, zawierający związek według wynalazku i chlorowodorek gemcytabiny, razem z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem. [0043] Przedmiotem wynalazku jest również preparat farmaceutyczny zawierający związek według wynalazku, lub jego farmaceutycznie dopuszczalną sól i temozolomid, razem z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem, rozcieńczalnikiem lub substancją pomocniczą. [0044] Przedmiotem wynalazku jest również preparat farmaceutyczny zawierający związek według wynalazku, lub jego farmaceutycznie dopuszczalną sól, i chlorowodorek gemcytabiny, razem z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem, rozcieńczalnikiem lub substancją pomocniczą. [0045] Następnie, przedmiotem wynalazku jest preparat farmaceutyczny zawierający związek według wynalazku, lub jego farmaceutycznie dopuszczalną sól, razem z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem i ewentualnie innymi składnikami terapeutycznymi. [0046] Następnie, korzystnymi przedstawionymi przykładowo związkami są również inhibitory Pim-1. Jak wskazano powyżej, Pim-1 to kinaza serynowo-treoninowa, która zaangażowana jest w regulację rozmaitych funkcji biologicznych, w tym przejścia przez cykl komórkowy, szlaków transdukcji sygnału/prowadzących do transkrypcji i apoptozy, a której ekspresję powiązano z kilkoma nowotworami. W szczególności wykazano, że hamowanie Pim-1 przez drobnocząsteczkowy inhibitor

17 17 K00135 upośledza przeżycie i klonogenny wzrost panelu komórek ludzkiej ostrej białaczki (Pogacic, V. i in., Cancer Res. (2007). 67 (14): str ). Ponadto wykazano, że Pim-1 ulega ekspresji w neointimie uszkodzonej przez balon tętnicy szyjnej szczura oraz aorcie piersiowej człowieka i tętnicach wieńcowych wykazujących zgrubienie błony wewnętrznej naczynia. Następnie, swoiste hamowanie funkcji Pim-1 widocznie zahamowało zarówno powstawanie neointimy po uszkodzenie przez balon jak również proliferację hodowanych komórek mięśni gładkich naczyń (VSMC), co sugeruje, że Pim-1 odgrywa kluczową rolę w proliferacji takich komórek. Proliferację VSMC powiązano z patogenezą zwężających chorób naczyń, takich jak miażdżyca naczyń i restenoza, a zatem oczekuje się, że hamowanie Pim-1 stłumi proliferację VSMC, a przez to będzie przydatne w leczeniu zwężających chorób naczyń (Katakami N. i in., JBC (2004), 279 (52), ). [0047] Zgodnie z tym, korzystne związki według niniejszego wynalazku, lub ich farmaceutycznie dopuszczalną sól, stosować można w sposobie leczenia zwężającej choroby naczyń, takiej jak miażdżyca naczyń lub restenoza, u ssaków, obejmującym podawanie ssakowi potrzebującemu takiego leczenia w skutecznej ilości związku według niniejszego wynalazku. Korzystne związki według niniejszego wynalazku, lub ich farmaceutycznie dopuszczalną sól, stosować można w leczeniu zwężającej choroby naczyń, takiej jak miażdżyca naczyń lub restenoza. Ponadto, korzystne związki według niniejszego wynalazku, lub ich farmaceutycznie dopuszczalną sól, stosować można w wytwarzaniu leku do leczenia zwężającej choroby naczyń, takiej jak miażdżyca naczyń lub restenoza. Przedmiotem wynalazku jest również preparat farmaceutyczny do leczenia zwężającej choroby

18 18 naczyń, takiej jak miażdżyca naczyń lub restenoza, zawierający korzystny związek według niniejszego wynalazku lub jego farmaceutycznie dopuszczalną sól. [0048] Stosowany tu skrót godz. odnosi się do godziny lub godzin, min odnosi się do minuty lub minut, Cdk odnosi się do kinazy cyklinozależnej, prb odnosi się do białka glejaka siatkówki, MGL odnosi się do chłoniaka z komórek płaszcza, AML odnosi się do ostrej białaczki szpikowej, CML odnosi się do przewlekłej białaczki szpikowej, Boc odnosi się do N-tert-butoksykarbonylu, EA odnosi się do octanu etylu, DCM odnosi się do dichlorometanu, DMSO odnosi się do dimetylosulfotlenku, DMA odnosi się do dimetyloacetamidu, THF odnosi się do tetrahydrofuranu, MtBE odnosi się do eteru metylowo-tert-butylowego, TEA odnosi się do trietyloaminy, FBS odnosi się do płodowej surowicy bydlęcej, PBS odnosi się do fizjologicznego roztworu soli buforowanego fosforanem, BSA odnosi się do albuminy surowicy bydlęcej, RT odnosi się do temperatury pokojowej, mpk oznacza miligramy na kilogram, po oznacza doustnie (per os), qd oznacza dawkowanie raz na dobę, HPLC oznacza wysokociśnieniową chromatografię cieczową, q2d oznacza dawkę pojedynczą co 2 dni, q2dx10 oznacza dawkę pojedynczą co 2 dni razy 10, VSMC odnosi się do komórki mięśnia gładkiego naczyń, a XRD odnosi się do dyfrakcji promieniowania rentgenowskiego. [0049] Związki o wzorze I może wytworzyć osoba o przeciętnych umiejętnościach w dziedzinie, postępując zgodnie z uznanymi w dziedzinie technikami i procedurami. Dokładniej, związki o wzorze I można wytworzyć jak podano na schematach, w sposobach oraz w przykładach przedstawionych poniżej. Specjalista w

19 19 dziedzinie rozpozna, że poszczególne etapy w następujących schematach można zmieniać w celu uzyskania związków o wzorze I. Reagenty i substancje wyjściowe są łatwo dostępne dla osoby o przeciętnych umiejętnościach w dziedzinie. Wszystkie podstawniki, jeśli nie wyszczególniono inaczej, są takie, jak wcześniej określono. [0050] Nazwy związków w następujących sposobach wytwarzania i przykładach utworzono z zastosowaniem programu ChemDraw Ultra 5.0. Schematy [0051] Syntezę związków o wzorze I zilustrowano zarówno w sposobach wytwarzania, przykładach jak i na schematach, przy czym R 1, R 2, R 3, R 4, R 5, Q, W i Y mają powyżej zdefiniowane znaczenia. Schemat 1 Związki o wzorze I wytwarza się przy wykorzystaniu reakcji sprzęgania z użyciem palladu(0), jak przedstawiono na schemacie 1:

20 20 Z oznacza R 5 (Wzór I) Y-Z oznacza N-t-Boc odbezpieczenie redukcyjne alkilowanie (Wzór I) [0052] W górnej reakcji schematu 1 i gdy Z = R 5, chlorek pirymidynylobenzoimidazolu (A) poddaje się reakcji z pirydynyloaminą (B) w katalizowanej palladem reakcji sprzęgania z wytworzeniem bezpośrednio związków o wzorze I. [0053] W dolnej reakcji schematu 1 i gdy Y-Z oznacza N-tertbutoksykarbonyl (Boc), halogenek pirymidynylu (A) jest również sprzęgany z pirydynyloaminą (B), lecz grupę Boc usuwa się w silnym kwasie w celu uzyskania wolnej aminy (C). Na koniec, aminę (C) alkiluje się w warunkach redukujących w celu wytworzenia związków o wzorze I. Schemat 2 Wytwarzanie pirymidynylobenzoimidazoli (A)

21 21 [0054] Pirymidynylobenzoimidazole (A) wytwarza się przez katalizowane palladem(ii) reakcje sprzęgania dostępnych w handlu dichlorków pirymidynylu (D) i boronianów benzoimidazolu (E). Schemat 3 Wytwarzanie boronianów benzoimidazolu (E) [0055] Boroniany benzoimidazolu (E) wytwarza się poprzez katalizowane Pd(II) boronylowanie bromku w benzoimidazolach (H) z zastosowaniem bis(pinakolano)diboru. Benzoimidazole (H) z kolei wytwarza się przez cyklizację amidyn (F) z zastosowaniem t-butanolanu potasu, lub kondensację benzenodiamin (G) z zastosowaniem trietyloortooctanu/kwasu octowego. [0056] Amidyny (F) wytwarza się w sposób znany specjaliście w stanie techniki syntezy organicznej przez kondensację 4- bromo-2,6-difluorofenyloaminy z pochodną monoacetamidową amin

22 22 R1-NH 2 w obecności chlorku fosforylu. Benzenodiaminy (G) wytwarza się w dwóch etapach w sposób znany specjaliście w dziedzinie syntezy organicznej przez podstawienie bromu w pozycji 2 w 2,4-dibromonitrobenzenie przez aminy R1-NH 2, a następnie redukcję grupy nitrowej do grupy aminowej. Schemat 4 Wytwarzanie pirydynyloaminy (B), gdzie Q oznacza S lub O i W oznacza C SH lub OH H 2 N lub NO 2 F,Br lub I w razie potrzeby redukcja grupy nitrowej S lub O [0057] Syntezę pirydynyloamin (B), gdzie Q oznacza S lub O i W oznacza C, osiąga się przez podstawienie 5-halogenku w pirydynie (I) dostępnym w handlu tiolem lub alkoholem (J). Jeśli potrzebna jest nitropirydyna (I), produkt podstawienia poddawany jest następnie etapowi redukcji grupy nitrowej w celu wytworzenia (B). Należy zwrócić uwagę, że związki (I) są uniwersalnymi reagentami w tych schematach, lecz jedynie niektóre są dostępne w handlu jako pirydyloaminy, a niektóre jako nitropirydyny. Dostępne w handlu związki (I) są niemniej jednak przekształcalne poprzez reakcje utleniania amin lub redukcję grupy nitrowej znane w stanie techniki dla sekwencji opisanych tu i poniżej. Schemat 5 Wytwarzanie pirydynyloamin (B), gdzie Q oznacza CH 2

23 23 2. aminowanie Pd(0) lub ciekły NH 3, Cu 2 O 1. bromowodorowanie 2. sprzęganie Pd(II) [0058] Syntezę pirydynyloamin (B), gdzie Q oznacza CH 2, osiąga się dwoma sposobami: 1) dostępne w handlu karbaldehydy (K) poddaje się redukcyjnemu aminowaniu z zastosowaniem wolnej aminy (L), a następnie zastępuje bromek pirydyny przez katalizowane Pd(O) aminowanie z zastosowaniem 1,1,1,3,3,3- heksametylodisilazanu litu lub ciekłego amoniaku i tlenku miedzi(i); 2) dostępny w handlu ester 4-metyleno-1,1- dimetyloetylowy kwasu 1-piperydynokarboksylowego (M) poddaje się bromowodorowaniu, a następnie sprzęga z udziałem Pd(II) z pirydyloaminą (I). Schemat 6 Wytwarzanie pirydynyloamin (B), gdzie Q oznacza wiązanie bezpośrednie

24 24 2. redukcja wiązania podwójnego i grupy nitrowej 2. redukcja grupy nitrowej [0059] Syntezę pirydynyloamin (B), gdzie Q oznacza wiązanie bezpośrednie, osiąga się dwoma sposobami: 1) dostępny w handlu ester 3,6-dihydro-4-(4,4,5,5-tetrametylo-1,3,2- dioksaborolan-2-ylo)-1,1-dimetyloetylowy kwasu 1(2H)- pirydynokarboksylowego (N) sprzęga się z udziałem palladu(ii) z nitropirydyną (I), a następnie redukuje zarówno grupę nitrową jak i wiązanie podwójne; 2) bromek w nitropirydynie (I) podstawia się wolną aminą (L), a następnie przeprowadza się redukcję grupy nitrowej. Sposób wytwarzania 1 Ester tert-butylowy kwasu 4-(6-aminopirydyn-3-ylosulfanylo)piperydyno-1-karboksylowego [0060] Dodać osuszony toluen (6,06 ml) do mieszaniny 2,9- dimetylo-1,10-fenantroliny (76,52 mg), jodku miedzi(i) (69,27 mg), tert-butanolanu sodu (475,59 mg), estru tertbutylowego kwasu 4-merkaptopiperydyno-1-karboksylowego (583,5 mg), magnezu (49,10 mg) i 2-amino-5-jodopirydyny (550 mg). Barbotować mieszaninę azotem z jednoczesnym zastosowaniem ultradźwięków i mieszać zawiesinę w temperaturze 110 C w szczelnie zamkniętej probówce przez 24 godziny. Schłodzić i przefiltrować przez Celit. Przemyć toluenem i usunąć rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem. Dodać heksan/ea

25 25 (1/1) i przefiltrować przez warstwę Celitu/żelu krzemionkowego, przemyć dwukrotnie heksanem/ea (1/1), a następnie EA. Usunąć rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem. Oczyścić metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym, eluując heksanem/ea (50-75%) z wytworzeniem 630 mg tytułowego związku. MS (ES + ): m/z = 310 (M+H) + Sposób wytwarzania 2 5-fluoro-2-nitropirydyna [0061] Do kwasu siarkowego (46 ml) w temperaturze 0 C dodać, na otwartym powietrzu, 25% nadtlenek wodoru (26,98 ml). Po 5 minutach dodać kroplami za pomocą wkraplacza zimny roztwór 2- amino-5-fluoropirydyny (9 g) w stężonym kwasie siarkowym (46 ml). Mieszać uzyskany ciemny roztwór w temperaturze 0 C do temperatury pokojowej w łaźni przez noc. Wylać na 200 ml wody z lodem i ekstrahować z użyciem DCM. Przemyć połączone warstwy organiczne 5% wodnym roztworem wodorosiarczanu(iv) sodu i osuszyć nad bezwodnym siarczanem sodu. Usunąć rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem i oczyścić metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym, eluując z użyciem DCM z wytworzeniem 7,5 g tytułowego związku. MS (ES + ): m/z = 143 (M+H) +. [0062] Następujący związek wytworzyć w sposób zasadniczo taki sam, jak opisano dla 5-fluoro-2-nitropirydyny, stosując odpowiednią aminę: Sposób wytwarzania Związek MS (ES + ): m/z (M+H)+ 3 3-bromo-2-metylo-6-nitropirydyna 218 Sposób wytwarzania 4 1-izopropylo-4-(2-metylo-6-nitropirydyn-3-ylo)piperazyna

26 26 [0063] Zmieszać 3-bromo-2-metylo-6-nitropirydynę (2,46 g), 1- izopropylopiperazynę (2,74 g), jodek tetra-n-butyloamonu (418,69 mg) i węglan potasu (1,72 g) w dimetylosulfotlenku (DMSO, 20 ml) w temperaturze 65 C przez noc. Dodać EA i wodę, oddzielać fazy, osuszyć warstwę organiczną nad siarczanem magnezu i usunąć rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem. Oczyścić przy użyciu kolumny z silnie kationowymiennym wypełnieniem, eluując metanolem, a następnie metanolem-nh 3 2 N z wytworzeniem 2,58 g tytułowego związku. MS (ES + ): m/z = 265 (M+H) + [0064] Następujące związki pośrednie wytworzyć w sposób zasadniczo taki sam, jak opisano dla 1-izopropylo-4-(2-metylo- 6-nitropirydyn-3-ylo)piperazyny, stosując odpowiednią bromopochodną; Związek MS (ES + ): m/z (M+H) + 5 ester tert-butylowy kwasu ylo)karbaminowego 6 ester tert-butylowy kwasu 323 Sposób wytwarzania (2 -metylo-6 -nitro-3,4,5,6- tetrahydro-2h-[1,3 ]bipirydynylo- (6 -nitro-3,4,5,6-tetrahydro-2h- [1,3 ]bipirydynylo-4- ylo)karbaminowego Sposób wytwarzania 7 5-(4-izopropylopiperazyn-1-ylo)-6-metylopirydyn-2-yloamina [0065] Mieszać 1-izopropylo-4-(2-metylo-6-nitropirydyn-3- ylo)piperazynę (2,52 g) i 10% pallad na węglu (600 mg) w metanolu (38 ml) i EA (38 ml) w atmosferze H 2 (balon) przez noc. Przefiltrować przez warstwę celitu i usunąć rozpuszczal-

27 27 nik pod zmniejszonym ciśnieniem. Oczyścić metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną DCM/metanol (0-10%) z wytworzeniem 2,23 g tytułowego związku. MS (ES + ): m/z = 143 (M+H) +. [0066] Następujące związki pośrednie wytworzyć w sposób zasadniczo taki sam, jak opisano dla 5-(4-izopropylopiperazyn- 1-ylo)-6-metylopirydyn-2-yloaminy, stosując odpowiednią nitropochodną: Sposób wytwarzania Związek MS (ES + ): m/z (M+H) ester tert-butylowy kwasu (6 -amino- 2 -metylo-3,4,5,6-tetrahydro-2h- [1,3 ]bipirydynylo-4-ylo)karbaminowego ester tert-butylowy kwasu (6 -amino- 3,4,5,6-tetrahydro-2H- [1,3 ]bipirydynylo-4-ylo)karbaminowego Sposób wytwarzania 10 Ester tert-butylowy kwasu 4-(6-nitropirydyn-3-yloksy)piperydyno-1-karboksylowego [0067] Dodać tert-butanolan potasu (4,84 g) do roztworu 4- hydroksy-1-piperydynokarboksylanu tert-butylu (8,76 g) w dimetyloacetamidzie (DMA, 39 ml) w temperaturze 0 C w atmosferze azotu. Mieszać przez 1 godzinę i dodać kroplami roztwór 5-fluoro-2-nitropirydyny (5 g) w DMA (78 ml). Mieszać mieszaninę reakcyjną w temperaturze pokojowej przez noc. Dodać wodę i odstawić na 1 godzinę. Przefiltrować, przemyć wodą. Oczyścić metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną DCM/EA (0-15%) z wytworzeniem 5,65 g tytułowego związku. MS (ES + ): m/z = 324 (M+H) +. Sposób wytwarzania 11

28 28 Ester tert-butylowy kwasu 4-(6-aminopirydyn-3-yloksy)piperydyno-1-karboksylowego [0068] Dodać 10% pallad na węglu (0,6 g) do zawiesiny estru tert-butylowego kwasu 4-(6-nitropirydyn-3-yloksy)piperydyno- 1-karboksylowego (5,65 g) w mieszaninie tetrahydrofuran (THF)/metanol (30/30 ml/ml). Uwodorniać w aparacie Parra pod ciśnieniem 2 atm przez noc. Przefiltrować przez warstwę Celitu, przemyć DCM i metanolem. Oczyścić metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną DCM/metanol (10%)/amoniak (1%) z wytworzeniem 5 g tytułowego związku. MS (ES + ): m/z = 294 (M+H) +. Sposób wytwarzania 12 Ester tert-butylowy kwasu 6-amino-2-metylo-3,6 -dihydro-2 H- [3,4 ]bipirydynylo-1 -karboksylowego [0069] [0070] Barbotować azotem mieszaninę estru tert-butylowego kwasu 4-(4,4,5,5-tetrametylo-[1,3,2]dioksaborolan-2-ylo)-3,6- dihydro-2h-pirydyno-1-karboksylowego (2,46 g) i 5-bromo-6- metylopirydyn-2-yloaminy (1,49 g) w 1,4-dioksanie (31,82 ml) przez 5 minut, następnie dodać N-hydrat trizasadowego fosforanu potasu (5,07 g), octan palladu (35,72 mg), dicykloheksylo-(2,6 -dimetoksybifenylo-2-ylo)fosfan (134,69 mg), wodę (7,96 ml) i mieszać w temperaturze 90 C przez 3 godziny. Rozcieńczyć z użyciem DCM i przemyć wodą. Osuszyć nad siarczanem sodu i usunąć rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem. Oczyścić metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną DCM/etanol 5%/NH 3 0,1%, a następnie

29 29 na kolumnie z silnie kationowymiennym wypełnieniem (SCX), eluując metanolem, a następnie metanolem-nh 3 2 M z wytworzeniem 2,12 g tytułowego związku. MS (ES + ): m/z = 292 (M+H) +. Sposób wytwarzania 13 Ester tert-butylowy kwasu 6-amino-2-metylo-3,4,5,6 - tetrahydro-2 H-[3,4 ]bipirydynylo-1 -karboksylowego [0071] Mieszać mieszaninę estru tert-butylowego kwasu 6-amino-2-metylo-3,6 -dihydro-2 H-[3,4 ]bipirydynylo-1 - karboksylowego (2,12 g) i mokrego palladu na węglu 10% (330 mg) w metanolu (29,30 ml) w atmosferze H 2 (45 psi) przez 48 godz. Przesączyć przez warstwę Celitu i usunąć rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem z wytworzeniem 2,07 g tytułowego związku. MS (ES + ): m/z = 292 (M+H) +. Sposób wytwarzania 14 Ester tert-butylowy kwasu 6-nitro-3,6 -dihydro-2 H- [3,4 ]bipirydynylo-1 -karboksylowego [0072] Barbotować azotem mieszaninę estru tert-butylowego kwasu 4-(4,4,5,5-tetrametylo-[1,3,2]dioksaborolan-2-ylo)-3,6- dihydro-2h-pirydyno-1-karboksylowego (19,6 g), 5-bromo-2- nitropirydyny (12,87 g), węglanu sodu 2 M w wodzie (63,39 ml) i chlorku bis(trifenylofosfino)palladu(ii) (4,45 g) w 1,4- dioksanie (316,94 ml) przez 5 minut i mieszać w temperaturze 80 C przez 5 godzin. Rozcieńczyć z użyciem DCM i przemyć wodą. Osuszyć nad siarczanem magnezu i usunąć rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem. Oczyścić metodą chromatografii na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną DCM/EA (0-40%) z wytworzeniem 8,72 g tytułowego związku. MS (ES + ): m/z = 306 (M+H) +. Sposób wytwarzania 15

30 30 Ester tert-butylowy kwasu 6-amino-3,4,5,6 -tetrahydro-2 H- [3,4 ]bipirydynylo-1 -karboksylowego [0073] Rozpuścić ester tert-butylowy kwasu 6-nitro-3,6 - dihydro-2 H-[3,4 ]bipirydynylo-1 -karboksylowego (1,89 g) w etanolu (123,80 ml). Uwodorniać z palladem na węglu (aparat H-Cube, 70 barów, 50 C, 1 ml/min) z wytworzeniem 1,72 g tytułowego związku. MS (ES + ): m/z = 278 (M+H) +. Sposób wytwarzania 16 Ester tert-butylowy kwasu 4-(6-aminopirydyn-3-ylometylo)piperydyno-1-karboksylowego [0074] Mieszać przez 5 minut ester tert-butylowy kwasu 4- metylenopiperydyno-1-karboksylowego (5,10 g) w atmosferze azotu i dodać 0,5 M roztwór 9-borabicyklo[3.3.1]nonanu w THF (77,49 ml). Mieszać w temperaturze 75 C w atmosferze azotu przez 1 godzinę. Schłodzić i dodać 2-amino-5-bromopirydynę (3,8 g), węglan potasu (3,87 g) i chlorek 1,1 - bis(difenylofosfino)ferroceno)palladu(ii) (538,10 mg) i odgazowaną mieszaninę DMF (47,83 ml) i wody (4,78 ml). Mieszać w temperaturze 60 C przez 4 godziny, następnie w temperaturze pokojowej przez weekend. Dodać wodę i EA. Oddzielić i ekstrahować warstwę wodną z użyciem EA. Połączyć warstwy organiczne, osuszyć nad siarczanem sodu i usunąć rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem. Oczyścić metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną DCM/metanol (1%)/amoniak (0,1%) do DCM/metanol (3%)/amoniak (0,3%). Rozetrzeć resztę z EA z wytworzeniem 1,85 g tytułowego związku. MS (ES + ): m/z = 292 (M+H) +. [0075] Następujący związek wytworzyć w sposób zasadniczo taki sam, jak opisano dla estru tert-butylowego kwasu 4-(6-

31 31 aminopirydyn-3-ylometylo)piperydyno-1-karboksylowego, stosując odpowiednią bromopochodną: Sposób wytwarzania Związek MS (ES + ): m/z (M+H) ester tert-butylowy kwasu 4-(6-amino- 2-metylopirydyn-3-ylometylo)piperydyno-1-karboksylowego Sposób wytwarzania 18 1-(6-bromopirydyn-3-ylometylo)-4-etylopiperazyna [0076] Dodać czystą 1-etylopiperazynę (221,44 ml) do mieszaniny 6-bromopirydyno-3-karbaldehydu (300 g) i DCM (5000 ml). Następnie, dodać porcjami triacetoksyborowodorek sodu (372,09 g) i mieszać w temperaturze pokojowej przez 12 godz. Dodać DCM (1000 ml) i wodny 2 N roztwór wodorotlenku sodu (1500 ml). Oddzielić warstwy i ekstrahować dwukrotnie warstwę wodną z użyciem DCM (600 ml). Połączyć warstwy organiczne i usunąć rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem, dodać EA i odparować z wytworzeniem 451,3 g tytułowego związku. MS (ES + ): m/z = 285 (M+H) +. [0077] Następujący związek wytworzyć w sposób zasadniczo taki sam, jak opisano dla 1-(6-bromopirydyn-3-ylometylo)- 4-etylopiperazyny, stosując odpowiednią aminę: Sposób wytwarzania Związek MS (ES + ): m/z (M+H) + 19 ester tert-butylowy kwasu 4-(6-bromo- 357 pirydyn-3-ylometylo)piperazyn-1-karbo- ksylowego Sposób wytwarzania 20 5-(4-etylopiperazyn-1-ylometylo)pirydyn-2-yloamina

32 32 [0078] Dodać 1,1,1,3,3,3-heksametylodisilazan litu (1055 ml) powoli do odgazowanej mieszaniny 1-(6-bromopirydyn-3- ylometylo)-4-etylopiperazyny (250 g), (dicykloheksylofosfino)bifenylu (18,50 g), tris(dibenzylidenoacetono)dipalladu (24,17 g) i THF (250 ml) w temperaturze 50 C. Ogrzewać mieszaninę w temperaturze 65 C przez noc. Schłodzić do temperatury 37 C i dodać wodę (500 ml). Usunąć połowę rozpuszczalnika pod zmniejszonym ciśnieniem i dodać DCM (2,5 l). Przefiltrować przez warstwę Celitu i usunąć część rozpuszczalnika. Dodać metanol (300 ml) i eter metylowo-tert-butylowy (MtBE, 600 ml) do mieszaniny i schłodzić w łaźni lodowej. Następnie dodać kwas chlorowodorowy 2 M w eterze etylowym (800 ml) i 32% wodny roztwór kwasu chlorowodorowego (100 ml). Usunąć warstwę organiczną i dodać wodny roztwór wodorotlenku sodu 2 M (2500 ml). Ekstrahować fazę wodną trzy razy z użyciem DCM i usunąć rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem. Rozpuścić w 90 ml toluenu w temperaturze 50 C aż do zakończenia rozpuszczania, a następnie dodać 80 ml MtBE. Mieszać przez noc w temperaturze pokojowej. Dodać dodatkową porcję MtBE (100 ml) do całkowitego wytrącenia. Odfiltrować ciało stałe i wysuszyć z wytworzeniem 108,24 g tytułowego związku. MS (ES + ): m/z = 221 (M+H) +. [0079] Następujący związek wytworzyć w sposób zasadniczo taki sam, jak opisano dla 5-(4-etylopiperazyn-1-ylometylo)pirydyn- 2-yloaminy, stosując odpowiednią pochodną 2-bromopirydyny: Sposób wytwarzania Związek MS (ES + ): m/z (M+H) ester tert-butylowy kwasu 4-(6- aminopirydyn-3-ylometylo)piperazyn-1-karboksylowego

33 33 Sposób wytwarzania 22 2,4-dibromo-1-nitrobenzen [0080] Dodać kroplami dymiący kwas azotowy (101,40 ml) do roztworu 1,3-dibromobenzenu (102,51 ml) w stężonym kwasie siarkowym (322,79 ml) i wodzie (62,39 ml) w temperaturze 0 C. Ogrzać do temperatury pokojowej i mieszać przez 12 godzin. Wylać mieszaninę reakcyjną na wodę z lodem (1500 ml). Odfiltrować uzyskane żółte ciało stałe pod zmniejszonym ciśnieniem i osuszyć z wytworzeniem 178,46 g tytułowego związku. MS (ES + ): m/z = 281 (M+H) +. Sposób wytwarzania 23 (5-bromo-2-nitrofenylo)cyklopentyloamina [0081] Dodać cyklopentanoaminę (32 ml) do roztworu 2,4-dibromo-1-nitrobenzenu (20 g) w 1-butanolu (160 ml). Ogrzewać mieszaninę w temperaturze 100 C przez noc. Usunąć rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem, dodać wodę i ekstrahować z użyciem EA. Przemyć warstwę organiczną kolejno wodnym nasyconym roztworem wodorowęglanu sodu, a następnie wodą. Osuszyć nad siarczanem magnezu i usunąć rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem z wytworzeniem 22 g tytułowego związku. MS (ES + ): m/z = 286 (M+H) +. Sposób wytwarzania 24 4-bromo-N2-cyklopentylobenzeno-1,2-diamina [0082] Dodać ditionian(iii) sodu (107,47 g) do roztworu (5- bromo-2-nitrofenylo)cyklopentyloaminy (22 g), THF (150 ml), wody (150 ml) i wodorotlenku amonu (30 ml). Mieszać mieszaninę reakcyjną w temperaturze pokojowej przez noc. Ekstrahować dwukrotnie z użyciem EA, osuszyć nad siarczanem magnezu i usunąć rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem z wytworzeniem 14,80 g tytułowego związku. MS (ES + ): m/z = 256 (M+H) +.

34 34 Sposób wytwarzania 25 6-bromo-1-cyklopentylo-2-metylo-1H-benzoimidazol [0083] Ogrzewać mieszaninę 4-bromo-N2-cyklopentylobenzeno- 1,2-diaminy (10,6 g), ortooctanu trietylu (9,5 ml) i kwasu octowego (6,3 ml) w temperaturze 100 C przez 2,5 godziny. Rozcieńczyć z użyciem DCM i wylać na wodny nasycony roztwór wodorowęglanu sodu. Osuszyć nad siarczanem sodu i usunąć rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem. Oczyścić metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną DCM/etanol-10% NH 3 (0-3%) z wytworzeniem 10,67 g tytułowego związku. MS (ES + ): m/z = 280 (M+H) +. Sposób wytwarzania 26 N-izopropyloacetamid [0084] Dodać TEA (23,58 ml) do roztworu 2-propanoaminy (10 g) w DCM (100 ml) w temperaturze 0 C. Następnie ostrożnie dodać kroplami bezwodnik kwasu octowego (16,15 ml). Mieszać w temperaturze pokojowej przez noc. Usunąć rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem, rozcieńczyć eterem etylowym (eterem) i odfiltrować ciało stałe. Usunąć rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem. Rozcieńczyć olej eterem, dodać węglan potasu i mieszać przez noc w temperaturze pokojowej. Odfiltrować ciało stałe i usunąć rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem z wytworzeniem 15,62 g tytułowego związku. NMR (CDC13) 4,06 (m, 1H), 1,94 (s, 3H), 1,14 (d, 6H). [0085] Przygotowywać następujące amidy w sposób zasadniczo taki sam, jak opisano dla N-izopropyloacetamidu, stosując odpowiednią aminę: Związek Sposób wytwarzania 27 N-cyklopropyloacetamid

35 35 28 N-cyklopropylometyloacetamid 29 N-cyklopentyloacetamid Sposób wytwarzania 30 N-(4-bromo-2,6-difluorofenylo)-N -izopropyloacetamidyna [0086] Dodać TEA (10,05 ml) do mieszaniny 4-bromo-2,6- difluorofenyloaminy (10,0 g), N-izopropyloacetamidu (9,73 g), chlorku fosforylu (6,70 ml) w toluenie (150 ml). Ogrzewać mieszaninę do temperatury wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 3 godziny. Schłodzić mieszaninę i usunąć rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem. Rozpuścić nieoczyszczoną substancję w DCM, przemyć kilka razy wodnym nasyconym roztworem wodorowęglanu sodu w celu usunięcia wszystkich śladów kwasu. Osuszyć nad siarczanem sodu i usunąć rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem z wytworzeniem 14 g tytułowego związku. MS (ES + ): m/z = 292 (M+H) +. [0087] Następujące związki pośrednie wytworzyć w sposób zasadniczo taki sam, jak opisano dla N-(4-bromo-2,6-difluorofenylo)-N -izopropyloacetamidyny, stosując odpowiedni acetamid: Sposób wytwarzania Związek MS (ES + ): m/z (M+H) + 31 N-(4-bromo-2,6-difluorofenylo)-N cyklopropyloacetamidyna 32 N-(4-bromo-2,6-difluorofenylo)-N cyklopropylometyloacetamidyna 33 N-(4-bromo-2,6-difluorofenylo)-N Sposób wytwarzania 34 cyklopentyloacetamidyna 6-bromo-4-fluoro-1-izopropylo-2-metylo-1H-benzoimidazol

36 36 [0088] Dodać tert-butanolan potasu (811,43 mg) do roztworu N- (4-bromo-2,6-difluorofenylo)-N -izopropyloacetamidyny (2 g) w N-metyloformamidzie (20 ml). Ogrzewać mieszaninę w temperaturze 100 C przez 2 godziny. Schłodzić do temperatury pokojowej, dodać DCM (150 ml), przemyć trzy razy nasyconym wodnym roztworem chlorku sodu (solanka, 300 ml), osuszyć nad siarczanem magnezu i usunąć rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem. Dodać heksan i wytrząsać nad źródłem ultradźwięków przez kilka minut. Odfiltrować ciało stałe, dwukrotnie powtórzyć dodanie heksanu/filtrację, uzyskując 1,86 g tytułowego związku. MS (ES + ): m/z = 272 (M+H) +. [0089] Następujące związki pośrednie wytworzyć w sposób zasadniczo taki sam, jak opisano dla 6-bromo-4-fluoro-1- izopropylo-2-metylo-1h-benzoimidazolu, stosując odpowiednią acetamidynę: Sposób wytwarzania Związek MS (ES + ): m/z (M+H) bromo-1-cyklopropylo-4-fluoro metylo-1H-benzoimidazol 36 6-bromo-1-cyklopropylometylo fluoro-2-metylo-1H-benzoimidazol bromo-1-cyklopentylo-4-fluoro- 2-metylo-1H-benzoimidazol Sposób wytwarzania 38 4-fluoro-1-izopropylo-2-metylo-6-(4,4,5,5-tetrametylo- [1,3,2]dioksaborolan-2-ylo)-1H-benzoimidazol [0090] Barbotować azotem mieszaninę 6-bromo-4-fluoro- 1-izopropylo-2-metylo-1H-benzoimidazolu (30,0 g), bis(pinakolano)diboru (42,15 g), tricykloheksylofosfiny (5,43 g), octanu potasu (32,58 g) i DMSO (200 ml). Dodać octan palladu