(12) OPIS PATENTOWY. (54) Sposób izolacji pałeczek Salmonella z mieszanek paszowych i ich komponentów

Podobne dokumenty
(54)Pożywka do wykrywania i oznaczania liczby komórek Lactobacillus acidophilus

KALKULACJA CENY OFERTY Część I - podłoża i dodatki do podłoży. Jednostka miary. op. = 500g 4. op. = 500g 4. op. = 500g 7

zastosowanie do Yersinia enterocolitica 1 op.= 5 fiolek (fiolka wystarcza na 1000 ml podłoża) op. = 5 fiolek 5

KALKULACJA CENY OFERTY Część I Podłoża i dodatki do podłoży. Jednostka miary. op.= 250g 1

Jednostka Ilość miary zastosowanie do Yersinia enterocolitica 1 op.= 5 fiolek (fiolka wystarcza na 1000 ml podłoża) op.

op. = 500g 2 ampłka 100 ampułka 15

II. OZNACZANIE LICZBY BAKTERII Z GRUPY COLI I BAKTERII Z GRUPY COLI TYP FEKALNY METODĄ PŁYTKOWĄ W ŻYWNOŚCI I INNYCH PRODUKTACH wg PN-ISO 4832: 2007

Cena jednostkowa brutto [zł] ** 1. Podłoże BCYE z cysteiną gotowe na płytkach Producent:..*

Powiatowa Stacja Sanitarno-Epidemiologiczna w Wałbrzychu ul. Armii Krajowej 35c, Wałbrzych Tel.(74) do 70, Fax.

Załącznik A do siwz. OPIS PRZEDMIOTU ZAMÓWIENIA CZĘŚĆ I podłoża. Szczegółowy opis/zastosowanie

AGZ OPIS PRZEDMIOTU ZAMÓWIENIA Część I - Podłoża gotowe na płytkach do Legionella sp. Szczegółowy opis

woda do 1000 ml ph=6,9-7,1. Po sterylizacji dodać nystatynę (końcowe stężenie ok. 50 μg/ml). Agar z wyciągiem glebowym i ekstraktem drożdżowym (YS)

KALKULACJA CENY OFERTY Część I Podłoża i dodatki do podłoży. Jednostka miary. op. = 100g 1. op. = 500g 1. op. = 1g 1. op. = 50g 1

liczba godzin 2 MIKROBIOLOGIA KOSMETOLOGICZNA dla studentów II roku, studiów I st. kierunku KOSMETOLOGIA półpłynne stałe

Ćwiczenie 11. Temat: Wskaźniki higieniczne żywności.

Ćwiczenie 4-5 Mikrobiologiczne kryteria oceny sanitarnej wody

Odpowiedzi na zapytania

Szczegółowy opis. Do dostawy wymagany certyfikat jakości lub inny dokument potwierdzający spełnienie wymagań w języku polskim lub angielskim.

VIII. Pałeczki Gram-ujemne z rodziny Enterobacteriaceae

Cena jednostkowa brutto [zł] *** 1. Agar aloa Producent:..* Nr katalogowy:

Załącznik A do siwz. OPIS PRZEDMIOTU ZAMÓWIENIA CZĘŚĆ I podłoża granulaty. Jednostka miary. Ilość. Lp.

KALKULACJA CENY OFERTY Część I Podłoża i dodatki do podłoży. Jednostka miary. op. =500g 3. op.= 250g 1

XIX. Pałeczki Gram-ujemne część I - ćwiczenia praktyczne

ĆWICZENIE 5 MECHANIZMY PROMUJĄCE WZROST ROŚLIN

Do jednego litra medium dodać 10,0 g skrobi ziemniaczanej lub kukurydzianej i mieszać do uzyskania zawiesiny. Sterylizować w autoklawie.

E.coli Transformer Zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Escherichia coli

POWIATOWA STACJA SANITARNO-EPIDEMIOLOGICZNA W BIELSKU-BIAŁEJ ul. Broniewskiego 21, Bielsko-Biała

III. Fizjologia bakterii i zasady diagnostyki bakteriologicznej

PL B1. UNIWERSYTET EKONOMICZNY W POZNANIU, Poznań, PL BUP 26/15. RENATA DOBRUCKA, Poznań, PL JOLANTA DŁUGASZEWSKA, Poznań, PL

VII. Fizjologia bakterii - ćwiczenia praktyczne

Saccharomyces Transformer Kit zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Saccharomyces cerevisiae. Metoda chemiczna.

(21) Numer zgłoszenia: (54) Sposób wytwarzania preparatu barwników czerwonych buraka ćwikłowego

PL B1. UNIWERSYTET EKONOMICZNY W POZNANIU, Poznań, PL BUP 26/15. RENATA DOBRUCKA, Poznań, PL JOLANTA DŁUGASZEWSKA, Poznań, PL

(12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) (13) B1

E.coli Transformer Kit

KALKULACJA CENY OFERTY Część I - Podłoża gotowe

Interpretacja wyników analiz ilości i obecności drobnoustrojów zgodnie z zasadami badań mikrobiologicznych żywności i pasz?

Zestawienie cen jednostkowych poszczególnych elementów dostawy

Do dostawy wymagany certyfikat jakości lub inny dokument potwierdzający spełnienie wymagań w języku polskim lub angielskim.

FORMULARZ CENOWY. Data:... Nazwa wykonawcy:... Siedziba wykonawcy:... Przedstawia zestawienie cenowe dla oferowanego przedmiotu zamówienia:

II. Badanie lekowrażliwości drobnoustrojów ćwiczenia praktyczne. Ćwiczenie 1. Oznaczanie lekowrażliwości metodą dyfuzyjno-krążkową

Agar ALOA wg Ottaviani i Agosti. strona 1 / 5

Oznaczenie sprawy AE/ZP-27-41/13 Załącznik Nr 1 Formularz Cenowy

Ćwiczenie 4. Temat: Metody hodowli drobnoustrojów

(13) B1 PL B1. (57) 1. Sposób wytwarzania wieloważnej szczepionki przeciwko Pseudomonas aeruginosa

Sukcesywna dostawa w 2014 r. materiałów do badań laboratoryjnych. Podłoża mikrobiologiczne, gotowe i suplementy. ilość razem.

PL B1. ZACHODNIOPOMORSKI UNIWERSYTET TECHNOLOGICZNY W SZCZECINIE, Szczecin, PL BUP 08/12. EDYTA BALEJKO, Mierzyn, PL

Zestaw SIT Szybki Identyfikacyjny Test Szczepów Salmonella Enteritidis i Typhimurium

OPIS PRZEDMIOTU ZAMÓWIENIA Część I - Agar Aloa

PL B1. Sposób otrzymywania mieszanki spożywczej z kiełków roślin zawierającej organiczne związki selenu

X. Pałeczki Gram-dodatnie. Rodzaje: Corynebacterium, Listeria, Erysipelothtix, Lactobacillus

BRANŻOWA. i ciastkarskie. Mikrobiologiczne. bezpośrednio po pobraniu. Opakowanie próbki oraz protokół jej pobrania powlony

Kompozycja przyprawowa do wyrobów mięsnych, zwłaszcza pasztetu i sposób wytwarzania kompozycji przyprawowej do wyrobów mięsnych, zwłaszcza pasztetu

SEKCJA III: INFORMACJE O CHARAKTERZE PRAWNYM, EKONOMICZNYM, FINANSOWYM I TECHNICZNYM

IV. Streptococcus, Enterococcus ćwiczenia praktyczne

(86) Data i numer zgłoszenia międzynarodowego: , PCT/DE03/ (87) Data i numer publikacji zgłoszenia międzynarodowego:

Instrukcja do ćwiczeń

FORMULARZ CENOWY CZĘŚĆ I. Jedn. miary

MIKROBIOLOGIA KOSMETYKÓW

Temat: Analiza sanitarna wody

Kontrola pożywek mikrobiologicznych. Sekcja Badań Epidemiologicznych

SPRAWOZDANIE Z BADAŃ MIKROBIOLOGICZNYCH Nr 20006/11859/09

(12) OPIS PATENTOWY. (73) Uprawniony z patentu: ROLIMPEX Spółka Akcyjna, Warszawa, PL (43) Zgłoszenie ogłoszono:

Zestaw SIT InHaVi Szybki Identyfikacyjny Test Szczepów Salmonella Infantis, Hadar oraz Virchow

ĆWICZENIA Z MECHANIZMÓW DZIAŁANIA WYBRANYCH GRUP LEKÓW

(54) Sposób otrzymywania cykloheksanonu o wysokiej czystości

(12) OPIS PATENTOWY (19) PL

(12) OPIS PATENTOWY (19) PL

PL B1. SIWIEC ANNA, Krosno, PL BUP 05/12. ANNA SIWIEC, Krosno, PL WUP 02/14. rzecz. pat. Grażyna Tomaszewska

Mikrobiologia II rok Towaroznawstwo i Dietetyka. Ćwiczenie 1

STASTNIK POLSKA Sp. z o.o., (43) Zgłoszenie ogłoszono: Niepołomice, PL

Ćwiczenie 9. Temat: Metody ilościowe w mikrobiologicznych badaniach żywności Cz.1

SPECYFIKACJA ISTOTNYCH WARUNKÓW ZAMÓWIENIA

(19) PL (11) (13)B1

RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) (13) B1

(12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11)

Instrukcje do ćwiczeń oraz zakres materiału realizowanego na wykładach z przedmiotu Inżynieria bioprocesowa na kierunku biotechnologia

PL B1. AKADEMIA GÓRNICZO-HUTNICZA IM. STANISŁAWA STASZICA W KRAKOWIE, Kraków, PL BUP 12/13

(12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11)

PL B1. Sposób podziemnej eksploatacji pokładowych i pseudopokładowych złóż minerałów użytecznych BUP 07/04

(12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) (13) B1

2. Wykazywanie obecności bakterii nitryfikacyjnych w glebie

(12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) (13) B1

Instrukcje do ćwiczeń oraz zakres materiału realizowanego na wykładach z przedmiotu Mikrobiologia na kierunku chemia kosmetyczna

RAPORT Z BADAŃ 01369/2015/D/AGST. Blirt S.A Gdańsk, ul. Trzy Lipy 3/1.38. Dział DNA-Gdańsk. Nr zlecenia

AGZ Opis przedmiotu zamówienia Część I - Agar Aloa. Załącznik 1 a do siwz. Jednostka miary

Staphylococcus ćwiczenia praktyczne. a. agarze z dodatkiem 5% odwłóknionej krwi baraniej (AK)

PL B1 (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) (13) B1. (51) Int.Cl.5: G01R 27/02. (21) Numer zgłoszenia:

(5 7) 1. Sposób wytwarzania przyprawy, zwłaszcza do mięs i ryb, obejmujący mielenie warzyw

XIII. Staphylococcus, Micrococcus ćwiczenia praktyczne

fix RNA Roztwór do przechowywania i ochrony przed degradacją próbek przeznaczonych do izolacji RNA kat. nr. E0280 Sierpień 2018

Delegacje otrzymują w załączeniu dokument D043211/04 ANNEX 1.

INFORMATOR O PRODUKTACH

Laboratorium 7. Testy na genotoksyczność

(54)Układ stopniowego podgrzewania zanieczyszczonej wody technologicznej, zwłaszcza

1. Oznaczanie aktywności lipazy trzustkowej i jej zależności od stężenia enzymu oraz żółci jako modulatora reakcji enzymatycznej.

Sposób wytwarzania preparatu standaryzowanych krwinek wzorcowych opłaszczonych wystandaryzowaną ilością przeciwciał anty-d.

BD Yersinia Selective Agar (CIN Agar) BD Aeromonas Yersinia Agar

PL B1. AKZO NOBEL COATINGS Sp. z o.o., Włocławek,PL BUP 11/ WUP 07/08. Marek Pawlicki,Włocławek,PL

(57) (13) B1 (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) PL B1

Transkrypt:

RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 159622 (13) B1 Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (21) Numer zgłoszenia: 277792 (22) Data zgłoszenia: 17.02.1989 (51) IntCl5: C12N 1/20 C12R 1/42 (54) Sposób izolacji pałeczek Salmonella z mieszanek paszowych i ich komponentów (73) Uprawniony z patentu: (43) Zgłoszenie ogłoszono: Instytut Weterynarii, Puławy, PL 20.08.1990 BUP 17/90 (72) Twórcy wynalazku: Marian Truszczyński, Puławy, PL (45) O udzieleniu patentu ogłoszono: Andrzej Hoszowski, Puławy, PL 31.12.1992 WUP 12/92 PL 159622 B1 (57) 1. Sposób izolacji pałeczek Salmonella z mieszanek paszowych i ich kom ponentów przez kilku etapową hodow lę, znamienny tym, że badaną próbkę mieszanki paszowej lub jej komponentu homogenizuje się w wyjałowionej wodzie destylowanej i przetrzymuje przez 2-3 godzin w temperaturze pokojowej, po czym poddaje wstępnemu namnożeniu we wzbogaconym bulionie w temperaturze 37 C korzystnie przez 18 godzin, z kolei hodowlę przenosi się na podłoże wybiórczo-namnażające (MK) według Muellera-Kauffmanna i prowadzi inkubację korzystnie przez 24 godziny w temperaturze 43 C, po czym dokonuje się przesiewu na jedną płytkę zawierającą stałe podłoże różnicująco-selektywne z zielenią brylantową (BGE) według Edela i Kampelmachera i na jedną płytkę z podłożem różnicująco-selektywnym (BxLH) według Hoszowskiego i Truszczyńskiego, inkubuje je korzystnie przez 24 godziny w temperaturze 37 C i wybiera podejrzane kolonie do potwierdzających badań biochemicznych i serologicznych.

SPOSÓB IZOLACJI PAŁECZEK SALMONELLA Z MIESZANEK PASZOWYCH I ICH KOMPONENTÓW Z a s t r z e ż e n i a p a t e n t o w e 1. Sposób Izolacji pałeczek Salmonella z mieszanek paszowych I ich komponentów przez kllkuetapową hodowlę, z n a m i e n n y t y m, że badaną próbkę mieszanki paszowej lub jej komponentu homogenizuje się w wyjałowionej wodzie destylowanej i przetrzymuje przez 2-3 godziny w temperaturze pokojowej, po czym poddaje wstępnemu namnożeniu we wzbogaconym bulionie w temperaturze 37 c korzystnie przez 18 godzin, z kolei hodowlę przenosi się na podłoże wybiórczo-namnażające /MK/ według Muellera-Kauffmanna i prowadzi inkubację korzystnie przez 24 godziny w temperaturze 43 -C, po czym dokonują się przesiewu na jednę płytkę zawierającą stałe podłoże różnicująco-selektywne z zielenią brylantową /BGE/ według Edela i Kampelmachera i na jednę płytkę z podłożeń różnicująco-selektywnym /BxLH/ według Hoszowskiego i Truszczyńskiego, inkubuje je korzystnie przez 24 godziny w temperaturze 37 C i wybiera podejrzane kolonie do potwierdzających badań biochemicznych i serologicznych. 2. Sposób według zastrz.1, z n a m i e n n y tym, że podczas homogenizacji wzajemny stosunek wagowy badanego materiału do wody wynosi 1 : 1,5-2,5. 3. Sposób według zastrz.1, z n a m i e n n y tym, że materiał z wodę homogenizuje się przez co najmniej 1 minutę. 4. Sposób według zastrz.1, z n a m i e n n y tym, że homogenizat poddaje się wstępnemu namnożeniu w rozcieńczeniu korzystnie 1 : 10. 5. Sposób według zastrz.1, z n a m i e n n y tym, że wstępnie namnożonym materiałem posiewa się w ilości po 1 ml każdą z dwóch probówek zawierajęcych po 9 ml podłoża /MK/ dla selektywnego namnożenia pałeczek Salmonella, a następnie dokonuje się z nich posiewu na płytki z podłożem /BGE/ 1 /BxLH/ za pomocą czy o średnicy oczka 3 mm. * * * Przedmiotem wynalazku jest sposób izolacji pałeczek Salmonella z mieszanek paszowych i ich komponentów. Badania mikrobiologiczne przemysłowych mieszanek paszowych, jak też komponentów służących do ich otrzymywania na obecność w nich pałeczek Salmonella, są zagadnieniem aktualnym i ważnym z punktu widzenia epizootiologicznego. Stanowią one jeden z elementów działań profilaktycznych, zmierzających do ograniczenia zakażeń zwierzą t drobnoustrojami Salmonella, a pośrednio umożliwiają dostarczenie na rynek zdrowej żywności, wolnej od tych zarazków. Kontrola obejmuje wyizolowanie pałeczek Salmonella z badanej próbki paszy i późniejsze ich badanie biochemiczne i serologiczne. Pasza, w której stwierdzono obecność pałeczek Salmonella nie nadaje się bez dodatkowego uzdatniania do żywienia zwierząt. Znany sposób izolacji pałeczek Salmonella polega na zawieszeniu próbki paszy/komponentu w bulionie namnażającym z mannitolem i ich inkuboweniu w kolejno zmniejszających się rozcieńczeniach w temperaturze 37 C przy ciągłym wytrząsaniu. Skład bulionu z mannitolem: Bacto-beef extract - 3 g, Pepton bakteriologiczny - 5 g, Mannirol - 5 c, - 1000 ml. Po doprowadzeniu ph do wartości 6,8-7,2 podłoże sterylizuje się w temperaturze 121 C przez 15 minut. Następnie prowadzi się hodowlę w ściśle określonych warunkach kolejno: 1/ w bulionie Hottingera o składzie: Wyciąg Hottin-

159 622 3 gera - 100 ml, NaCl - 5 g, Na2HP04-0,2 g, - 900 ml. Po zagotowaniu powyższych składników ustalić ph na 7,6-7,8, przesączyć i wyjałowić w temperaturze 121 C w ciągu 20 minut; 2/ bulionie wybiórczo-namnażającym Muellera-Kauffmanna o składzie : A. podłoże podstawowe Bacto-Beef extract firmy :"Difco" Iub - 5 g Lab-Lemco beef extrect f-my Oxoid* Pepton bacto f-my D lifco" - 10 g Sodu chlorek - 3 g Wapnia węglan - 45 g Woda destylowana ad - 1000 ml Po doprowadzeniu wartości ph do 7,0 ± 0,1 podłoże sterylizuje się w temperaturze 121 C przez 20 minut. B. roztwór tiosiarczanu sodu tiosiarczan sodu - 50 g ad - 100 ml roztwór sterylizuje się w temperaturze 121 C przez 20 minut. C. roztwór jodu Jod - 20 g potasu jodek - 25 g ad - 100 m D. roztwór zieleni brylantowej zieleń brylantowa - 0,5 g ad - 100 ml E. roztwór żółci żółć wołowa odwodniona - 10 g ad - 100 ml roztwór sterylizuje się w temperaturze 121 C przez 20 minut. Podłoże kompletne : 900 ml A +100 ml B + 20 ml C + 2 ml D + 50 E. Po 24-godzinnej inkubacji wysiewa się na stałe podłoże różnicująco-w ybiórcze /8G/ o składzie : ekstrakt drożdżowy - 3 g chlorek sodu - 5 g pepton bakteriologiczny Iub - 10 g Pepton Proteose nr 3 firmy Difco" laktoza - 10 g sacharoza - 10 g zieleń brylantowa - 0,0125 g czerwień fenolowa - 0,08 g Agar bacto firmy "Difco/ - 20 g - 1000 ml Po doprowadzeniu ph do wartości 6,9-7,0 podłoże sterylizuje się w temperaturze 121 C przez 20 minut. Przykładowo 20 g badanej próbki paszy zawiesza się w 180 ml bulionu namnaża jącego z dodatkiem 0,5% mannitolu /rozcieńczenie 1 : 10/ i wytrząsa całość w te m p e r a t u r z e 37 C w ciągu 1 godziny /hodowla A/. Następnie 20 ml hodowli A przenosi się do 180 ml bulionu z mannito- lem, uzyskując rozcieńczenie 1 : 100 i ponownie wytrząsa całość w temperaturze 37 c w ciągu 1 godziny /hodowla B/. W przypadku badań kontrolnych n p. odwoławczych lub bardzo dużych ilości pasz, 20 ml hodowli B przenosi s ię do k o l e j n y c h i ponow-

4 159 622 nie wytrząsa w 37 C przez 1 godzinę /hodowla C, rozcieńczenie 1 : 1000/. Z każdej hodowli / A, B, C/ wysiewa się po 1 ml materiału do probówki zawierającej 9 m l bulionu Hottingera /podłoże namnażające/ i inkubuje w temperaturze 37 C, stosując wytrząsanie w ciągu 18 godzin, uzyskując hodowle A 1, B 1 i C 1. Z hodowli A 1, B 1 i C1 wysiewa się po 0,1 ml na stałe podłoże różnicująco-wybiórcze z zielenią brylantową /BG/ i inkubuje przez 48 godzin w temperaturze 37 C oraz po 1 ml do wybiórczo-namnażającego bulionu Muellera-Kauffmanna /MK/ w celu namnożenia pałeczek Salmonella przy jednoczesnym powstrzymaniu wzrostu niepożądanych bakterii. Z bulionu /MK/, po inkubacji prowadzonej w temperaturze 37 C przez 48 godzin, przenosi się 0,1 ml materiału na uprzednio wymienione stałe podłoże,/bg/. Z podłoża / B G /, po 48 godzinnym hodowaniu w temperaturze 37 C wybiera się do dalszych badań kolonie nie rozkładające laktozy /gładkie, barwy różowej/, wyglądem zbliżone do kolonii tworzonych przez pałeczki Salmonella i przesiewa na agar zwykły, z którego po 24 godzinach hodowania w 37 C pobiera się materiał do oznaczeń biochemicznych i serologicznych. Wyżej opisany sposób izolacji pałeczek Salmonella z pasz i ich komponentów jest czaso- i pracochłonny, wymaga użycia podłoży i dysponowania pomieszczeniem termoetatowym z wytrząsarką. Szczególnie kłopotliwym w realizacji tego sposobu j est przygotowanie bulionu Hottingera, dla otrzymania którego należy mięso wołowe poddać trawieniu świeżo uzyskaną zmieloną trzustkę wieprzową przez 48 godzin i wykonać szereg innych operacji. Ocena mikrobiologiczna paszy, bądź ich komponentów winna być dokonana w miarę szybko, a jednocześnie dokładnie. Zapewnia to sposób według wynalazku. Według wynalazku badaną próbkę mieszanki paszowej Iub jej komponentu homogenizuje się w wyjałowionej wodzie destylowanej i przetrzymuje przez 2-3 godziny w temperaturze pokojowej, po czym poddaje wstępnemu namnożeniu /preinkubacji/ we wzbogaconym bulionie w temperaturze 37 C korzystnie przez 18 godzin, z kolei hodowlę przenosi się na podłoże wy- biórczo-namnażające / MK-patrz str.2-3 niniejszego opracowania/ według Muellera-Kauffmanna i prowadzi inkubację korzystnie przez 24 godziny w temperaturze 43 C, po czym dokonuje się przesiewu na jedną płytkę zawierającą stałe podłoże różnicująco-selektywne z zielenią brylantową /BGE/ według Edela i Kampelmachera i na jedną płytkę z podłożem różnicująco-selek- tywnym /BxLH/ według Hoszowskiego i Truszczyńskiego. Skład podłoża z zielenią brylantową /BGE/ według Edela i Kampelmachera: A. podłoże podstawowe Lab-Lemco Powder firmy Oxoid ' - 5 g Pepton bacto L34 f- my "Oxoid'' - 10 g Extract drożdżowy f-my "Oxoid* - 3 g Na2HP04-1 g Na H2P04-0,6 g Agor bacto nr 1 f-my Oxoid" - 15 g 900 ml Po ustaleniu ph na 7,0-7,1 podłoże sterylizuje się w temperaturze 121 C przez 15 minut. B. roztwór cukrów i czerwieni fenolowej laktoza - 10 g sacharoza - 10 g czerwień fenolowa - 0,09 g roztwór ogrzać do 70 C i schłodzić. C. roztwór zieleni brylantowej Podłoże kompletne: 100 ml zieleń brylantowa - 0,5 g ad 100 ml 900 ml A + 100 ml B + 0,94 ml C. Skład podłoża różnicująco-selektywnego /BxLH/ według Hoszowskiego i Truszczyńskiego.

159 622 5 A. podłoże podstawowe Lab-Lemco Powder firm y "Oxoid'' - 5 g Soya pepton neutralized f-my "Oxoid'' 15 g Extract drożdżowy f-my "Oxoid" - 3 g L-lizyny chlorowodorek - 5 g Pabiamid - 0,75 g Agar bacto nr 1 f-my "Oxoid" - 15 g 900 ml Po doprowadzeniu ph do wartości 6,9 podłoże sterylizuje się przez gotowanie w ciągu 5 minut. B. roztwór cukrów i czerwieni fenolowej sacharoza - 10 g ksyloza - 3.8 g czerwień fenolowa - 0,09 g 100 m l roztwór ogrzać do 70 C i schłodzić C. roztwór zieleni brylantowej zieleń brylantowa - 0,5 g ad - 100 ml D. wskaźnik siarkowodorowy sodu tiosiarczan - 34 g cytrynian żelazowo-amonowy - 4 g ad 100 ml Podłoże kompletne: 900 ml A + 100 ml B + 1,2 ml C + 20 ml D. Płytki inkubuje się korzystnie przez 24 godziny w temperaturze 37 C i wybiera podejrzane kolonie do potwierdzających badań biochemicznych i serologicznych. Zaleca się, aby podczas homogenizacji wzajemny stosunek wagowy badanego materiału do wody wynosił 1:1,5-2,5, a czas homogenizacji wynosił co najmniej 1 minutę. Więcej wody /stosunek 1:2,5/ dodaje się do takiego materiału, który zawiera duże ilości białka, a przez to sam chłonie wodę. Pozostawienie homogenizatu na 2-3 godziny w temperaturze pokojowej powoduje podwyższenie wartości współczynnika aktywności wodnej badanego materiału, co wpływa korzystnie na metabolizm pałeczek Salmonella, w wyniku czego zwiększa się wyraźnie szansa ich izolacji. Homogenizat poddaje się wstępnemu namnożeniu w rozcieńczeniu korzystnie 1:10 np. 25 ml homogenizatu przenosi się do 225 ml wzbogaconego bulionu i dalej poddaje go preinkubacji /wstępnemu namnożeniu/. D la zwiększenia pewności izolacji należy wstępnie namnożony materiał w ilości 1 ml przenieść do każdej z dwóch probówek zawierających po 9 ml podłoża /MK/ w celu selek-- tywnego namnożenia, a następnie dokonać z nich posiewu na płytki z podłożem /BGE/ i podłożem /BxLH/ za pomocą ezy o średnicy oczka 3 mm. Można oczywiście dokonać posiewu tylko do jednej probówki z podłożem /MK/, ale wtedy zmniejsza się czułość metody. Prowadzenie namnażania w podłożu /MK/ w wyższej temperaturze /43 C/ niż w sposobie znanym /37 C/ ułatwia izolację pałeczek Salmonella, gdyż w przeciwieństwie do nich, przy tej temperaturze wzrost wielu nie pożądanych bakterii utrudniających ich wykrycie jest w dużym stopniu zahamowany. W efekcie znacznie łatwiej jest na stałych, różnicująco-selektywnych podłożach dokonać właściwego wyboru kolonii do dalszych badań potwierdzających obecność pałeczek Salmonella. Dokonywanie przesiewów równoległych z podłoża /MK/ na dwa różne podłoża stałe /BGE i BxLH/ j est również czynnikiem podnoszącym efektywność sposobu według wynalazku, gdyż nie wszystkie serotypy salmonel rosnę równie dobrze na wszystkich

6 159 622 podłożach, a większe liczba płytek na które są dokonywane posiewy /korzystnie 4 płytki/ w porównaniu do sposobu znanego / 1 płytka/ zwiększa czułość tej techniki. Końcowy wzrost pałeczek Salmonella prowadzi się na podłożu /BGE/ według Edela i Kampelmachera oraz na podłożu /BxLH/ według Hoszowskiego i Truszczyńskiego. To ostatnie bogate jest w różnego rodzaju peptony, aminokwasy i w it a miny, dz ięki czemu pałeczki Salmonella doskonale się na nim namnażają. Ponadto podłoże to zawiera para-amino-benzeno-sulfonamid i zieleń brylantowy, które to czynniki hamuję wzrost nie pożądanych bakterii, a zwłaszcza z rodzaju Proteus. Jednocześnie zastosowany w nim specyficzny system różnicujący /brak laktozy, wskaźnik produkcji siarkowodoru, obecność ksylozy i lizyny/ pozwala na wykrywanie nie tylko typowych ale i laktozododatnich wariantów pałeczek Salmonella, coraz częściej ostatnio stwierdzanych. Sposób według wynalazku jest prosty w realizacji. W porównaniu do sposobu znanego pozwala skrócić czas izolacji pałeczek Salmonella z badanej próbki mieszanki paszowej Iub jej komponentu o 1/3, przy jednoczesnym obniżeniu kosztów i zwiększeniu czułości metody. Sposób według wynalazku j est szczególnie przydatny do izolacji pałeczek Salmonella z przemysłowych mieszanek paszowych, jak mączki rybne i mięsno-kostne. Przykład. Do 90 g badanej próbki mączki mięsno-kostnej dodano jałową wodę destylowaną w Ilości 135 ml, uzyskując w ten sposób wzajemny stosunek składników 1 : 1,5. Całość homogenizowano przez 60 sekund i pozostawiono w temperaturze pokojowej przez 2-3 godziny. Następnie 25 ml homogenizatu przeniesiono do 225 ml wzbogaconego bulionu /bulion wzbogacony produkowany w Wytwórni Surowic i Szczepionek w Warszawie/ Iub bulionu odżywczego /Nutrient Broth firmy "D ifco"/ i inkubowano przez 28 godzin w temperaturze 37 C. Skład bulionu wzbogaconego /produkowanego w Wytwórni Surowic i Szczepionek w Warszawie/: wyciąg mięsny - 0,4 g enzymat hydrolizat kazeiny - 5,4 g hydrolizat drożdży - 1,7 g pepton - 4,0 g chlorek sodowy - 3,5 g 1000 ml ph końcowe 7,4 Skład bulionu odżywczego /Nutrient Broth firmy "D ifco"/: Bacto-Beef Extract - 3 g Pepton-Bacto - 5 g ph końcowe 6,8 Z tego bulionu przenoszono po 1 ml do każdej z 2 probówek zawierających bulion MK, sporządzony według opisu zawartego w normach ISO /patrz s tr.2-3 niniejszego opracowania/ i hodowano przez 24 godziny w temperaturze 43 C. Po tym okresie czasu z każdej hodowli, za pomocą ezy o średnicy oczka 3 mm posiewano jedną płytkę z agarem z zielenią brylantową według Edela i Kampelmachera /podłoże różnicująco-selektywne BGE - patrz str. 5-6 niniejszego opracowania/ sporządzonym według opisu zawartego w Bull.Wrld.Hlth.org. 1974,50,421 i jedną płytkę z podłożem BxLH według Hoszowskiego i Truszczyńskiego /patrz str.6-7 niniejszego opracowania/, sporządzonym według opisu zawartego w przykładzie zamieszczonym w polskim zgłoszeniu patentowym nr 277793 /BUP 17/90/. Wybrane po 24 godzinach hodowli w 37 C kolonie, przypominające swym wyglądem kolonie tworzone przez pałeczki Salmonella, przekazano do badań biochemicznych i serologicznych. Badania te potwierdziły obecność pałeczek Salmonella w próbce. Zakład Wydawnictw UP RP. Nakład 90 egz. Cena 10 000 zł