Onclarity HPV Assay 8089899(04)

8089899(04) Onclarity HPV Assay 2014-10 442946 Polski PRZEZNACZENIE BD Onclarity HPV Assay (Test HPV BD Onclarity) to test amplifikacji kwasu DNA służący do jakościowego wykrywania ludzkiego wirusa brodawczaka (ang. human papillomavirus, HPV) należącego do typów wysokiego ryzyka. Test wykrywa wszystkie typy HPV wysokiego ryzyka (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, oraz 68) i zapewnia możliwość genotypowania sześciu typów wysokiego ryzyka (HPV 16, 18, 31, 45, 51 oraz 52). Próbki z kanału szyjki macicy badane za pomocą testu BD Onclarity HPV Assay uwzględniają zestaw BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit (Zestaw ze szczoteczką do pobierania próbek z kanału szyjki macicy do testu BD Onclarity HPV), płyn konserwujący BD SurePath Preservative Fluid (Płyn konserwujący BD SurePath) i roztwór PreservCyt Solution (Roztwór PreserveCyt) (przy użyciu porcji pobranej przed lub po przetwarzaniu w celu wykonania testów BD SurePath lub ThinPrep Pap). Test BD Onclarity HPV Assay jest wykonywany przy użyciu systemu BD Viper LT System. STRESZCZENIE I OBJAŚNIENIE Ludzki wirus brodawczaka (HPV) to najczęściej przenoszony drogą płciową wirus na świecie. 50% aktywnych seksualnie osób w pewnym okresie życia jest zakażonych wirusem HPV narządów płciowych. Ludzie często nie wiedzą, że są zakażeni i nie podejmują środków ostrożności zapobiegających rozprzestrzenianiu się wirusa na inne osoby. Istnieje ponad 40 typów wirusa HPV, które mogą powodować zakażenia narządów płciowych. 1 W wielu przypadkach zakażenia wirusem HPV są przemijające i organizm samodzielnie pokona wirusa. Jednak w niektórych przypadkach wirus utrzymuje się i powoduje, że komórki prawidłowe stają się nieprawidłowe, co prowadzi do raka. Te rakotwórcze typy wirusa HPV są klasyfikowane jako wysokiego ryzyka i obejmują typy 16 i 18. Inne typy są uznawane za należące do niskiego ryzyka, ponieważ nie wydaje się, aby były przyczyną zachorowań na raka. Według Światowej Organizacji Zdrowia (ang. World Health Organization, WHO) wirus HPV jest drugą w kolejności przyczyną śmiertelności z powodu raka u kobiet i każdego roku powoduje około 250 000 zgonów. W samej Europie choroba powoduje około 15 000 zgonów rocznie. 2 Szacuje się, że niemal 70% przypadków raka szyjki macicy jest spowodowanych przez typy 16 i 18 wirusa HPV. 3 Obecnie testy Pap pomagają lekarzowi stwierdzić zmiany w komórkach szyjki macicy. Jeżeli komórki te są nieprawidłowe, można wykonać test HPV w celu określenia, czy te zmiany szyjki macicy są spowodowane przez szczep HPV mogący doprowadzić do raka szyjki macicy. Nie wszystkie analizy molekularne umożliwiają rozróżnienie różnych typów wirusa HPV. Test BD Onclarity HPV Assay stosowany przy użyciu systemu BD Viper LT jest oznaczeniem amplifikacji DNA do jakościowego wykrywania ludzkiego wirusa brodawczaka (HPV) należącego do typów wysokiego ryzyka. Test wykrywa typy 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 oraz 68 wirusa HPV i umożliwia jednoczesną identyfikację typów wysokiego ryzyka tj. 16, 18, 31, 45, 51, 52 oraz innych genotypów wysokiego ryzyka zgłaszanych według grupy genotypu (P1: 33/58; P2: 56/59/66; P3: 35/39/68). Próbki z kanału szyjki macicy, które można zbadać za pomocą testu BD Onclarity HPV uwzględniają płyn konserwujący BD SurePath (przy użyciu porcji pobieranej przed lub po przetwarzaniu w celu wykonania testu BD SurePath Pap), roztwór PreservCyt Solution (przy użyciu porcji pobieranej przed lub po przetwarzaniu w celu wykonania testu PreservCyt Pap) i zestaw BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit. ZASADY PROCEDURY Test ludzkiego wirusa brodawczaka (HPV) BD SurePath jest przeznaczony do stosowania z płynem konserwującym BD SurePath (przy użyciu porcji pobieranej przed lub po przetwarzaniu w celu wykonania testu BD SurePath Pap), roztworem PreservCyt Solution (przy użyciu porcji pobieranej przed lub po przetwarzaniu w celu wykonania testu PreservCyt Pap) oraz zestawem BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit, odpowiednimi odczynnikami, systemem BD Viper LT i technologią ekstrakcji BD FOX. Próbki są poddawane etapowi wstępnego ogrzewania w urządzeniu BD Pre-warm Heater (Cieplarka do wstępnego ogrzewania firmy BD) w celu homogenizacji macierzy, lizy komórek i uwolnienia kwasu DNA, który można poddać ekstrakcji i amplifikacji. Po schłodzeniu próbki są ładowane do systemu BD Viper LT, który następnie wykonuje wszystkie etapy ekstrakcji i amplifikacji docelowego kwasu DNA bez dalszej interwencji użytkownika. Próbka jest przenoszona do probówki ekstrakcyjnej zawierającej cząstki stałe tlenku żelaza w rozpuszczalnym filmie. Następnie dodawany jest kwas w celu obniżenia ph i indukowania na tlenku żelaza ładunku ego, który wiąże naładowany ujemnie kwas DNA. Następnie cząstki stałe i związany kwas DNA są odciągane do brzegów probówki ekstrakcyjnej przez magnesy, a poddana obróbce próbka jest zasysana do odpadów. Cząstki stałe są wypłukiwane i dodawany jest bufor elucyjny o wysokim ph, aby przeprowadzić elucję oczyszczonego kwasu DNA. W końcu stosowany jest bufor zobojętniający w celu dostosowania ph eluatu do wartości optymalnej dla amplifikacji kwasu DNA. Test BD Onclarity HPV opiera się na jednoczesnej amplifikacji i detekcji docelowego kwasu DNA przy użyciu starterów amplifikacji i znakowanych fluorescencyjnie sond detekcyjnych z wykorzystaniem łańcuchowej reakcji polimerazy (PCR) w czasie rzeczywistym. Odczynniki są suszone w trzech probówkach (G1, G2 i G3) umożliwiających wykrywanie 14 genotypów wirusa HPV i pochodzącej z próbki kontroli wewnętrznej zawierającą fragment kwasu DNA z genu ludzkiej beta globiny. Każda probówka zawiera startery amplifikacji, znakowane fluorescencyjnie sondy detekcyjne, polimerazę DNA, nukleotydy i inne odczynniki niezbędne do amplifikacji w odpowiednich testach. System BD Viper LT pipetuje porcję roztworu oczyszczonego kwasu DNA z każdej probówki ekstrakcyjnej do trzech probówek BD Onclarity HPV PCR (G1, G2 i G3), które są następnie uszczelniane, aby zapobiec zanieczyszczeniu. Obecność lub brak kwasu DNA wirusa HPV jest określana za pomocą cyklu PCR, którego sygnał przekracza wstępnie ustaloną wartość progową. Ponadto w teście przeprowadzana jest ekstrakcja, amplifikacja i wykrywanie fragmentu genu ludzkiej beta globiny stanowiącego kontrolę wewnętrzną oceniającą przetwarzanie, ekstrakcję i amplifikację próbki. DOSTARCZONE ODCZYNNIKI I MATERIAŁY Każde opakowanie testu BD Onclarity HPV Assay Reagent Pack zawiera: Probówki BD Onclarity HPV G1 PCR, 2 x 96: każda probówka G1 PCR zawiera około 32,5 pmol oligonukleotydów, 20 pmol znakowanych fluorescencyjnie sond detekcyjnych, 80 nmol dntp i około 0,52 jednostki polimerazy DNA ze stabilizatorami i buforami. 1

Probówki BD Onclarity HPV G2 PCR, 2 x 96: każda probówka G2 PCR zawiera około 42,5 pmol oligonukleotydów, 30 pmol znakowanych fluorescencyjnie sond detekcyjnych, 80 nmol dntp i około 0,52 jednostki polimerazy DNA ze stabilizatorami i buforami. Probówki BD Onclarity HPV G3 PCR, 2 x 96: każda probówka G3 PCR zawiera około 42,5 pmol oligonukleotydów, 25 pmol znakowanych fluorescencyjnie sond detekcyjnych, 80 nmol dntp i około 0,52 jednostki polimerazy DNA ze stabilizatorami i buforami. UWAGA: Każda torebka zawiera jeden woreczek z substancją pochłaniającą wilgoć. Zestaw kontrolny do testów BD Onclarity HPV Assay: 24 probówki z kontrolą ą BD Onclarity HPV zawierające około 14 430 kopii linearyzowanych plazmidów HPV 16, 8325 kopii linearyzowanych plazmidów HPV 18, 8418 kopii linearyzowanych plazmidów HPV 56 i 3885 kopii linearyzowanych plazmidów zawierających sekwencję genu ludzkiej beta globuliny w nośnikowym kwasie nukleinowym oraz 24 probówki z kontrolą ujemną BD Onclarity HPV zawierające tylko nośnikowy kwas nukleinowy. Stężenia nośnika DNA i nośnikowego kwasu nukleinowego oznaczono spektrofotometrycznie. BD Onclarity HPV Liquid-Based Cytology Specimen (LBC) Diluent Tube (Probówki z rozcieńczalnikiem do badania cytologicznego na podłożu płynnym): 400 probówek, z których każda zawiera około 1,7 ml buforu z solą, detergentem i środkiem konserwującym. BD FOX PCR Extraction Tubes (Probówki ekstrakcyjne): 48 pasków po 8 probówek, z których każda zawiera około 10 mg tlenku żelaza w rozpuszczalnym filmie. BD Viper PCR Extraction Reagent Trough with Piercing Tool (Rynienka odczynnika ekstrakcyjnego z narzędziem do przebijania): każda 5-komorowa rynienka z odczynnikiem ekstrakcyjnym zawiera następujące odczynniki: około 16,5 ml kwasu wiążącego, 72,5 ml buforu przemywającego, 25,4 ml buforu elucyjnego, 19,4 ml buforu zobojętniającego ze środkiem konserwującym i 15,5 ml roztworu do zobojętniania odpadów. APARAT, SPRZĘT I MATERIAŁY Dostarczane materiały: Zestaw BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit, aparat BD Viper LT Instrument, BD Viper LT Instrument Plates (Płytki do aparatu BD Viper LT), BD Viper LT Pipette Tips (Końcówki do pipet BD Viper LT), BD Viper LT Solid Waste Liners (Worki na odpady stałe BD Viper LT), BD Viper LT System PCR Tube/Tray Kit (Zestaw probówka PCR/taca do systemu BD Viper LT), BD Viper LT System PCR Accessory Kit (Zestaw akcesoriów PCR do systemu BD Viper LT), BD Viper Pre-warm Heater, BD Viper LT Specimen Rack (Magazynek próbek BD Viper LT), BD Viper Neutralization Pouches (Torebki zobojętniające BD Viper), probówki na próbki i korki do stosowania w systemie BD Viper System (tryb ekstrakcji), test BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Amplified DNA Assay Endocervical Specimen Collection oraz zestaw DRY TRANSPORT Kit (Zestaw do transportu na sucho). Materiały wymagane, ale niedostarczane: Rękawiczki nitrylowe, pipety do przenoszenia, odporne na aerozol końcówki polipropylenowe zdolne do przenoszenia objętości 0,5 ± 0,05 ml, mieszadło wirowe, 0,5% (v/v) podchloryn sodu, 1% (v/v) podchloryn sodu, 3% (w/v) nadtlenek wodoru, alkohol izopropylowy, niezawierająca nukleaz woda o czystości do biologii molekularnej. Warunki przechowywania i użytkowania: Rozcieńczalnik BD Onclarity HPV LBC Diluent i rozcieńczalnik BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent powinny być przechowywane w temperaturze 2 25 C. Wszystkie inne odczynniki można przechowywać w temperaturze 2 33 C. Nieotwierane opakowania z odczynnikami zachowują stabilność do upływu terminu ważności. Po otwarciu torebki probówki PCR zachowują stabilność przez 4 tygodnie (pod warunkiem, że są odpowiednio zamknięte) lub do upływu daty ważności, jeżeli przypada ona wcześniej. Nie zamrażać. OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI 1. Do stosowania w diagnostyce in vitro. 2. W próbkach klinicznych mogą być obecne drobnoustroje patogenne, takie jak wirusy zapalenia wątroby i HIV. Podczas pracy z wszelkimi materiałami zanieczyszczonymi krwią i innymi płynami ustrojowymi należy stosować Standardowe środki ostrożności 4-7 oraz przestrzegać wytycznych obowiązujących w danym laboratorium. Dodatkowe specjalne ostrzeżenia, przestrogi i uwagi dotyczące systemu BD Viper LT, patrz podręcznik użytkownika aparatu BD Viper LT. Próbka: 3. Do badania cytologicznego próbek na podłożu płynnym należy używać tylko probówek z rozcieńczalnikiem BD Onclarity HPV LBC Diluent. 4. W przypadku próbek pobieranych za pomocą szczoteczki do pobierania próbek z kanału szyjki macicy należy stosować wyłącznie zestaw BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit. 5. Warunkiem uzyskania optymalnej wydajności testów BD Onclarity HPV jest właściwe pobranie, przetworzenie i transport próbki. 6. Aby zapobiec nadmiernemu krwawieniu, podczas pobierania próbki nie należy manipulować zbyt długo szczoteczką. 7. Każda próbka wysyłana do laboratorium powinna być prawidłowo oznaczona. 8. Przy przełamywaniu pręcika szczotki zachować ostrożność, by nie rozlać płynu ani nie uwolnić aerozoli. Nie dopuścić do zanieczyszczenia główki szczoteczki do pobierania próbek z kanału szyjki macicy. 9. W trakcie postępowania z próbką zachować ostrożność, by uniknąć skażenia krzyżowego. Upewnić się, że pojemniki z próbkami nie stykają się ze sobą i wyrzucić wszystkie użyte materiały bez przenoszenia ich nad otwartymi pojemnikami. W przypadku kontaktu rękawic z próbką należy je natychmiast zmienić, by uniknąć skażenia krzyżowego. 10. Na wydajność testu może mieć wpływ niedostateczne lub nadmierne dozowanie próbki LBC do probówki z rozcieńczalnikiem BD Onclarity HPV LBC Diluent. Nadmierne wypełnienie probówek może także spowodować przelanie płynu wewnątrz aparatu BD Viper LT powodując skażenie. 11. Próbki z szyjki macicy muszą być pobierane i badane przed upływem daty ważności probówki rozcieńczalnika BD Onclarity HPV LBC Diluent lub rozcieńczalnika BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent. 2

12. Do przenoszenia próbek do probówek rozcieńczalnika BD Onclarity HPV LBC Diluent należy stosować wyłącznie polipropylenowe końcówki do pipet odporne na aerozol. Test/Odczynnik: 13. Kontrole e i ujemne testu BD Onclarity HPV muszą być wstępnie ogrzane w ciągu 24 godzin przed nawodnieniem. 14. W systemie BD Viper LT należy stosować wyłącznie probówki na próbki i kontrole z przebijanymi korkami. Nie zdejmować przebijanych korków przed włączeniem aparatu. Przed uruchomieniem aparatu upewnić się, że przebite korki do przebijania są wymienione na nowe. 15. Nie należy wymieniać ani mieszać odczynników należących do zestawów o różnych numerach serii. 16. Nie należy badać probówki z rozcieńczalnikiem BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent, jeżeli został odebrany w laboratorium bez szczoteczki. Można uzyskać wynik fałszywie ujemny. 17. Należy stosować wyłącznie końcówki do pipet BD Viper LT dostarczone przez firmę BD z systemem BD Viper LT. 18. Rynienka odczynnika ekstrakcyjnego BD Viper PCR z narzędziem do przebijania NIEBEZPIECZEŃSTWO H314 Powoduje poważne oparzenia skóry oraz uszkodzenia oczu. H302 Działa szkodliwie po połknięciu. P260 Nie wdychać pyłu/dymu/gazu/mgły/par/rozpylonej cieczy. P280 Stosować rękawice ochronne/odzież ochronną/ochronę oczu/ochronę twarzy. P303/361/353 W PRZYPADKU DOSTANIA SIĘ NA SKÓRĘ (lub na włosy): natychmiast usunąć/zdjąć całą zanieczyszczoną odzież. Spłukać skórę pod strumieniem wody/prysznicem. P304/340 W PRZYPADKU DOSTANIA SIĘ DO DRÓG ODDECHOWYCH: wyprowadzić lub wynieść poszkodowanego na świeże powietrze i zapewnić warunki do odpoczynku w pozycji zapewniającej swobodne oddychanie. P405 Przechowywać pod zamknięciem. P501 Zawartość/ pojemnik usuwać zgodnie z lokalnymi/regionalnymi/krajowymi/międzynarodowymi przepisami. 19. Na probówkach PCR w systemie BD Viper LT należy stosować wyłącznie przezroczyste uszczelnienia do płytek BD Viper LT. 20. Otwarte opakowania z odczynnikami zawierające niewykorzystane probówki PCR MUSZĄ być ponownie starannie uszczelnione. Przed ponownym uszczelnieniem należy się upewnić, czy w opakowaniu z odczynnikiem znajduje się środek osuszający. 21. Przed wyjęciem płytki z systemu BD Viper LT probówki PCR MUSZĄ być prawidłowo uszczelnione przy użyciu przezroczystych uszczelnień BD Viper LT. Uszczelnienie zapewnia zamkniętą reakcję powielenia i detekcji oraz jest konieczne w celu uniknięcia skażenia aparatu i miejsca pracy produktami amplifikacji. W żadnym wypadku nie wolno usuwać z probówek PCR materiału uszczelniającego. 22. Aby uniknąć skażenia środowiska pracy produktami amplifikacji, w celu usunięcia zużytych probówek PCR należy stosować worki na śmieci dostarczone wraz z zestawem akcesoriów systemu BD Viper LT. Przed usunięciem należy upewnić się, czy worki na śmieci zostały prawidłowo zamknięte. 23. System BD Viper LT zaprojektowano tak, by zmniejszyć do minimum możliwość skażenia amplikonów; do pracy z systemem BD Viper LT nie są konieczne specjalne strefy robocze. Niemniej jednak w razie konieczności należy stosować inne środki ostrożności mające na celu zapobieganie skażeniu, zwłaszcza skażeniu próbek w czasie manipulowania nimi. 24. Jeżeli rękawiczki zetkną się z próbką lub wydają się mokre, NALEŻY JE ZMIENIĆ, żeby uniknąć skażenia pozostałych próbek. Należy zmieniać rękawiczki przed opuszczeniem strefy roboczej i po wejściu do strefy roboczej. 25. W przypadku skażenia, instrukcje czyszczenia znajdują się w podręczniku użytkownika systemu BD Viper LT. 26. W przypadku wystąpienia niecodziennych sytuacji, takich jak rozlanie płynu do wnętrza aparatu BD Viper LT lub skażenie DNA, którego nie można się pozbyć przez mycie, należy się skontaktować z obsługą i pomocą techniczną firmy BD. POBIERANIE I TRANSPORT PRÓBEK Próbki z kanału szyjki macicy, które można zbadać za pomocą testu BD Onclarity HPV uwzględniają zestaw BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit, płyn konserwujący BD SurePath Preservative Fluid (przy użyciu porcji pobieranej przed lub po przetwarzaniu w celu wykonania testu BD SurePath Pap i roztwór PreservCyt Solution (przy użyciu porcji pobieranej przed lub po przetwarzaniu w celu wykonania testu ThinPrep Pap). Przy przesyłaniu materiału na terenie USA lub w przypadku przesyłek międzynarodowych, próbki powinny być oznakowane zgodnie z mającymi zastosowanie przepisami prawa stanowego, federalnego i międzynarodowego, dotyczącymi transportu próbek klinicznych oraz czynników chorobotwórczych/substancji zakaźnych. W czasie transportu muszą być utrzymywane odpowiednie warunki dotyczące czasu i temperatury przechowywania. POBIERANIE PRÓBEK Z KANAŁU SZYJKI MACICY 1. Włożyć szczoteczkę do pobierania próbek z kanału szyjki macicy do testu BD Onclarity HPV do kanału szyjki macicy tak, by wystawały z niego jedynie włókna najbliżej uchwytu. Powoli obrócić o ¼ ½ obrotu w jednym kierunku. Aby zapobiec nadmiernemu krwawieniu, nie manipulować zbyt długo szczoteczką. 2. Zdjąć nakrętkę z probówki z rozcieńczalnikiem BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent i natychmiast umieścić w niej szczoteczkę. 3. Ostrożnie złamać pręcik wzdłuż naciętej linii. Zachować ostrożność, aby nie rozlać zawartości. 4. Dokładnie zakręcić z powrotem nakrętkę na probówce. 3

PRZECHOWYWANIE I TRANSPORT PRÓBEK POBRANYCH ZA POMOCĄ SZCZOTECZKI DO POBIERANIA Z KANAŁU SZYJKI MACICY Próbki pobrane za pomocą szczoteczki do pobierania z kanału szyjki macicy do probówek z rozcieńczalnikiem BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent muszą być przechowywane I transportowane do laboratorium i/lub ośrodka badania w ciągu 30 dni od pobrania (w przypadku przechowywania w temperaturze 2 30 C) lub w ciągu 30 dni od pobrania (w przypadku przechowywania w stanie zamrożenia w temperaturze -20 C). Nie przechowywać ani nie transportować próbek po upływie daty ważności probówek z rozcieńczalnikiem Cervical Brush Diluent. POBIERANIE PRÓBEK LBC Próbki BD SurePath lub PreservCyt należy pobierać za pomocą szczoteczki do pobierania próbek z kanału szyjki macicy lub szczoteczki/szpatułki zgodnie z opisem w ulotce dołączonej do produktu BD SurePath lub PreservCyt. Po pobraniu próbki BD SurePath lub PreservCyt mogą być przechowywane i transportowane w swoich oryginalnych fiolkach przez maksymalnie 30 dni w temperaturze 2 30 C lub do 30 dni zamrożone w temperaturze -20 C przed przeniesieniem do probówek z rozcieńczalnikiem BD Onclarity HPV LBC Specimen Diluent. PRZECHOWYWANIE I TRANSPORT PRÓBEK DO BADANIA CYTOLOGICZNEGO NA PODŁOŻU PŁYNNYM Przenoszenie próbek do badania cytologicznego na podłożu płynnym do probówek BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube przed lub po pobraniu porcji do przetwarzania w celu wykonania testu BD SurePath lub ThinPrep Porcja 0,5 ml próbki BD SurePath lub PreservCyt jest przenoszona ręcznie z fiolki pierwotnej do probówki BD Onclarity HPV LBC Specimen Diluent przed lub po przetwarzaniu w celu wykonania testu BD SurePath lub ThinPrep Pap. Podczas pracy z próbką BD Onclarity HPV LBC Specimen Diluent i fiolką próbki do testu BD SurePath lub PreservCyt należy nosić rękawice. Jeżeli rękawice zetkną się z próbką, należy natychmiast je zmienić, by uniknąć zanieczyszczenia innych próbek. Przenoszenie próbek BD SurePath przed przetworzeniem lub po nim w celu wykonania testu BD SurePath UWAGA: przeczytać w ulotce dołączonej do produktu BD PrepStain Slide Processor lub BD Totalys SlidePrep instrukcję pobierania porcji próbki z fiolki BD SurePath przed wykonaniem testu BD SurePath liquid-based Pap. UWAGA: próbki do przetwarzania należy przygotowywać pojedynczo. 1. Opatrzyć probówkę BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube informacjami umożliwiającymi identyfikację pacjentki. 2. Zdjąć nakrętkę z probówki BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube. 3. Aby uzyskać jednorodną mieszaninę, odwirowywać fiolkę z próbką BD SurePath przez 10 20 s. 4. Szybko przenieść porcję 0,5 ml z fiolki, używając końcówki odpornej na aerozol, do probówki BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube w ciągu jednej minuty od odwirowania. 5. Wyrzucić końcówkę pipety. UWAGA: do każdej próbki użyć nowej końcówki pipety. 6. Dokładnie zakręcić nakrętkę na probówce BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube. 7. Obrócić probówkę BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube 3 4 razy, aby dobrze wymieszać próbkę i rozcieńczalnik. Przenoszenie próbek PreservCyt przed lub po przetworzeniu w celu wykonania testu ThinPrep Pap UWAGA: przeczytać w dodatku do podręcznika operatora systemu ThinPrep 2000/3000 instrukcję pobierania porcji próbki z fiolki PreservCyt przed wykonaniem testu ThinPrep. UWAGA: próbki do przetwarzania należy przygotowywać pojedynczo. 1. Opatrzyć probówkę BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube informacjami umożliwiającymi identyfikację pacjentki. 2. Zdjąć nakrętkę z probówki BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube. 3. Aby uzyskać jednorodną mieszaninę, szybko odwirować fiolkę z próbką PreservCyt przez 8 12 s. 4. Natychmiast przenieść porcję 0,5 ml z fiolki, używając końcówki odpornej na aerozol, do probówki BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube. 5. Wyrzucić końcówkę pipety. UWAGA: do każdej próbki użyć nowej końcówki pipety. 6. Dokładnie zakręcić nakrętkę na probówce BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube. 7. Obrócić probówkę BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube 3 4 razy, aby dobrze wymieszać próbkę i rozcieńczalnik. Przechowywanie i transport próbek do badania cytologicznego na podłożu płynnym w probówkach BD HPV LBC Diluent Po ręcznym przeniesieniu do probówki BD Onclarity HPV LBC Diluent rozcieńczoną próbkę można przechowywać do 15 dni w temperaturze 2 30 C lub do 30 dni w temperaturze -20 C. PROCEDURA PRZETWARZANIA W PRZYPADKU WSZYSTKICH PRÓBEK UWAGA: jeżeli próbki są zamrożone, przed kontynuowaniem pracy należy się upewnić, czy są całkowicie rozmrożone w temperaturze pokojowej i wymieszane przez obracanie. 1. Wykorzystując raport o układzie probówek umieścić próbki w odpowiednim porządku w magazynku próbek BD Viper LT Specimen Rack i zablokować na miejscu. 2. Próbki są gotowe do poddania wstępnemu ogrzewaniu. 3. Przed przystąpieniem do dalszych etapów zmienić rękawiczki, aby uniknąć skażenia. 4

PRZYGOTOWANIE KONTROLI JAKOŚCI 1. Odkręcić nakrętki probówek z kontrolą ujemną BD Onclarity HPV i rozcieńczalnikiem BD Onclarity HPV LBC. 2. Wlać całą zawartość probówki z rozcieńczalnikiem BD Onclarity HPV LBC do probówki z kontrolą ujemną BD Onclarity HPV. 3. probówkę z uwodnioną kontrolą ujemną BD Onclarity HPV. Zakorkować i wyrzucić pustą probówkę po rozcieńczalniku BD Onclarity HPV LBC Diluent. 4. Odkręcić nakrętki probówek z kontrolą ą BD Onclarity HPV i rozcieńczalnikiem BD Onclarity HPV LBC Diluent. 5. Wlać całą zawartość probówki z rozcieńczalnikiem BD Onclarity HPV LBC Diluent do probówki z kontrolą ą BD Onclarity HPV. 6. Zakorkowa probówkę z uwodnioną kontrolą ą BD Onclarity HPV. Zakorkować i wyrzucić pustą probówkę po rozcieńczalniku BD Onclarity HPV LBC Diluent. 7. Korzystając z raportu układu probówki, ułożyć we właściwej pozycji uwodnioną kontrolę ujemną BD Onclarity HPV w magazynku próbek BD Onclarity LT Specimen Rack. 8. Korzystając z raportu układu probówki, ułożyć we właściwej pozycji uwodnioną kontrolę ą BD Onclarity HPV w magazynku probówek BD Onclarity LT Specimen Rack. 9. Kontrole są gotowe do wstępnego ogrzania wraz z próbkami. UWAGA: kontrole muszą być wstępnie ogrzane w ciągu 24 godzin przed nawodnieniem. PROCEDURA WSTĘPNEGO OGRZEWANIA UWAGA: Procedura wstępnego ogrzewania musi być zastosowana wobec wszystkich próbek w celu upewnienia się, że macierz próbki przed jej załadowaniem do systemu BD Viper LT jest jednorodna. Brak wstępnego ogrzania próbek może mieć negatywny wpływ na wydajność testu BD Onclarity HPV Assay i/lub systemu BD Viper LT. UWAGA: przed wstępnym ogrzaniem próbki schłodzone lub zamrożone należy całkowicie rozmrozić w temperaturze pokojowej. 1. Umieścić magazynek próbek BD Viper LT Specimen Rack w cieplarce BD Pre-warm Heater i wybrać w aparacie BD Viper LT protokół testu BD Onclarity HPV Assay. 2. Cieplarka BD Pre-warm Heater automatycznie dokona wstępnego ogrzewania próbek i kontroli zgodnie z protokołem wstępnego ogrzewania testu BD Onclarity HPV Assay. 3. Po zakończeniu protokołu wstępnego ogrzewania testu BD Onclarity HPV Assay wyjąć magazynek z cieplarki i załadować do aparatu BD Viper LT. 4. Badanie próbek i kontroli, patrz Procedura testowa. 5. Po wstępnym ogrzaniu próbki mogą być przechowywane przez maksymalnie 7 dni w temperaturze 2 30 C lub do 30 dni w temperaturze -20 C bez konieczności dodatkowego wstępnego ogrzewania przed badaniem w systemie BD Viper LT. 6. Po wstępnym ogrzaniu kontrole mogą być przechowywane przez maksymalnie 24 godziny w temperaturze 2 30 C bez konieczności dodatkowego wstępnego ogrzewania przed badaniem w systemie BD Viper LT. PROCEDURA TESTOWA Dokładne instrukcje posługiwania się elementami systemu i ich konserwacji można znaleźć w podręczniku użytkownika systemu BD Viper LT. Stwierdzono, że optymalnymi warunkami środowiskowymi do przeprowadzenia testu HPV są: temperatura 18 27 C przy wilgotności względnej 20 85%. KONTROLA JAKOŚCI Kontrolę jakości należy przeprowadzać zgodnie z odpowiednimi przepisami prawa lokalnego, stanowego i/lub federalnego, z wymaganiami akredytacji i standardowymi procedurami kontroli jakości danego laboratorium. Zaleca się skorzystanie z odpowiednich wytycznych CLSI lub przepisów CLIA w celu ustalenia właściwych zasad kontroli jakości. Zestaw kontrolny do testów BD Onclarity HPV Assay jest dostarczany oddzielnie: w ramach każdego cyklu, a także dla każdego nowego numeru seryjnego zestawu odczynników należy stosować jedną kontrolę ą i jedną ujemną. Kontrole muszą być umieszczane zgodnie z podręcznikiem użytkownika systemu. Kontrola a HPV monitoruje tylko istotne pogorszenie działania odczynników. Kontrola ujemna HPV służy do monitorowania kontaminacji odczynników i (lub) otoczenia. Dodatkowe kontrole mogą być testowane zgodnie z wytycznymi lub wymaganiami przepisów lokalnych, stanowych i/lub federalnych bądź organizacji akredytujących. Ogólne informacje na temat KJ w systemie BD Viper LT: Położenie probówek PCR przedstawiono na oznaczonym kolorami ekranie układu płytki na monitorze LCD. Symbol plus (+) wewnątrz probówki wskazuje, że jest to a próbka KJ. Symbol minus (-) wewnątrz probówki wskazuje, że jest to ujemna próbka KJ. Para KJ musi być zarejestrowana dla każdego numeru serii zestawu odczynnika. Jeżeli nie zarejestrowano poprawnie pary KJ, wyświetlane jest pole komunikatu, co uniemożliwia zapisanie magazynku i kontynuowanie cyklu do momentu zakończenia rejestracji. Można zarejestrować dodatkowe (opcjonalne) probówki KJ do badania. Probówki te są badane tak jak zwykłe próbki i nie wpływają na powodzenie/niepowodzenie cyklu. Instrukcje, patrz podręcznik użytkownika systemu BD Viper LT. UWAGA: kontrole BD Onclarity HPV należy ponownie ręcznie uwadniać przed załadowaniem do magazynku próbek BD Viper LT Specimen Rack. Interpretacja wyników kontroli jakości: Warunkiem uzyskania wyników badań u pacjentów jest uzyskanie wyniku ego i ujemnego odpowiednio przez kontrolę ą i ujemną BD Onclarity HPV. Jeżeli wyniki kontroli różnią się od spodziewanych, serię uważa się za nieważną i dlatego aparat nie poda wyników oznaczenia próbek pochodzących od pacjentów. Jeżeli wynik kontroli nie osiągnie spodziewanych wyników, należy powtórzyć całą serię z zastosowaniem nowego zestawu kontroli, nowych probówek ekstrakcyjnych, nowego pojemnika na odczynnik ekstrakcyjny oraz nowych probówek PCR. Jeżeli nie uda się rozwiązać problemu, należy się skontaktować z obsługą i pomocą techniczną firmy BD w celu uzyskania dalszych instrukcji. 5

Tabela 1: Interpretacja wyników kontroli jakości: Typ kontroli Symbol raportu wyniku testu Dyspozycja KJ Kontrola a BD Onclarity HPV OK QC Pass (KJ Pomyślna) Kontrola a BD Onclarity HPV Kontrola a BD Onclarity HPV Kontrola a BD Onclarity HPV QC Failure (KJ niepomyślna) QC Failure (KJ niepomyślna) QC Failure (KJ niepomyślna) Kontrola ujemna BD Onclarity HPV OK QC Pass (KJ Pomyślna) Kontrola ujemna BD Onclarity HPV Kontrola ujemna BD Onclarity HPV Kontrola ujemna BD Onclarity HPV Opis symboli raportu Tube Results Report (Raport wyników probówki), patrz Interpretacja wyników testu. QC Failure (KJ niepomyślna) QC Failure (KJ niepomyślna) QC Failure (KJ niepomyślna) INTERPRETACJA WYNIKÓW TESTU Test BD Onclarity HPV Assay wykorzystuje reakcję łańcuchową polimerazy w czasie rzeczywistym do wykrywania obecności ludzkiego wirusa brodawczaka (HPV) w próbkach klinicznych. Wszystkie obliczenia są wykonywane automatycznie przez oprogramowanie aparatu BD Viper LT. Obecność lub brak istotnego klinicznie kwasu DNA wirusa HPV jest określana za pomocą cyklu PCR (Ct), którego sygnał przekracza wstępnie ustaloną wartość progową. W teście przeprowadzana jest ekstrakcja, amplifikacja i wykrywanie fragmentu genu ludzkiej beta globiny stanowiącego kontrolę wewnętrzną oceniającą przetwarzanie, ekstrakcję i amplifikację próbki i wskazanie obecności inhibitorów reakcji PCR. Jeżeli sygnał swoisty dla wirusa HPV jest większy od wartości progowej cyklu, kontrola wewnętrzna jest wykorzystywana przez algorytm podczas interpretacji wyniku. Jeżeli sygnał swoisty dla wirusa HPV jest mniejszy lub równy wartości progowej cyklu, kontrola wewnętrzna jest ignorowana przez algorytm. W przypadku próbek HPV wynik HR na raporcie Tube Results Report (Raport wyników probówki) wyświetlany jest wynik HR (kombinacja wszystkich genotypów). Symbol w tej kolumnie wskazuje, że jeden lub więcej możliwych do wykrycia przez test HPV genotypów ma wynik. Kolumna GT służy do zgłaszania wyników dla genotypów, które nie są dostępne w danym regionie. Nie można zakupić tych wyników. Genotypy określone i połączone są wyświetlane w kolumnach. Jeżeli zakupiono wyniki dla genotypu, wyniki te są zgłaszane tak jak to wyjaśniono poniżej. Jeżeli dowolny genotyp nie został skonfigurowany do zakupu automatycznego, wyniki te są zamaskowane ikoną klucza. Aparat można skonfigurować do kupowania/zgłaszania określonych genotypów po zakończeniu cyklu. Instrukcje autoryzacji automatycznego zgłaszania genotypu, patrz podręcznik użytkownika systemu BD Viper LT. Jeśli test próbki kontrolnej nie powiódł się, nie są zgłaszane wyniki pacjentów. W celu zapoznania się z prawidłowymi wartościami próbek kontrolnych, zob. rozdział Kontrola jakości. Podawane wyniki określa się w następujący sposób. Tabela 2: Interpretacja wyników testu HPV genotypów wirusa HPV należących do wysokiego ryzyka dla testu BD Onclarity HPV Assay Wynik HPV wysokiego ryzyka Interpretacja Wynik HR Dodatni dla typów HPV wysokiego ryzyka HPV HR- HR Ujemny dla typów HPV wysokiego ryzyka HPV HR-ujemny DNA HPV, jeżeli obecne, jest niewykrywalne. Niepowodzenie kontroli wewnętrznej DNA HPV, jeżeli obecne, jest niewykrywalne. DNA HPV, jeżeli obecne, jest niewykrywalne. DNA HPV, jeżeli obecne, jest niewykrywalne. Niepowodzenie przenoszenia ekstrakcji Niepowodzenie poziomu płynu Błąd 6

Tabela 3: Interpretacja wyników określonego genotypu wirusa HPV dla testu BD Onclarity HPV Assay Wynik genotypu HPV Interpretacja Wynik 16 Wynik HPV typ 16 HPV typ 16 16 Wynik ujemny HPV typ 16 HPV typ 16 ujemny 18 Wynik HPV typ 18 HPV typ 18 18 Wynik ujemny HPV typ 18 HPV typ 18 ujemny 45 Wynik HPV typ 45 HPV typ 45 45 Wynik ujemny HPV typ 45 HPV typ 45 ujemny P1 Wynik HPV typ 33 i/lub 58 HPV typ 33 i/lub 58 P1 Wynik ujemny HPV typ 33 i/lub 58 HPV typ 33 i/lub 58 ujemny 31 Wynik HPV typ 31 HPV typ 31 31 Wynik ujemny HPV typ 31 HPV typ 31 ujemny P2 Wynik HPV typy 56, 59 i/lub 66 HPV typy 56, 59 i/lub 66 P2 Wynik ujemny HPV typy 56, 59 i/lub 66 HPV typy 56, 59 i/lub 66 ujemny 51 Wynik HPV typ 51 HPV typ 51 51 Wynik ujemny HPV typ 51 HPV typ 51 ujemny 52 Wynik HPV typ 52 HPV typ 52 52 Wynik ujemny HPV typ 52 HPV typ 52 ujemny P3 Wynik HPV typy 35, 39 i/lub 68 HPV typy 35, 39 i/lub 68 P3 Wynik ujemny HPV typy 35, 39 i/lub 68 HPV typy 35, 39 i/lub 68 ujemny GT GT Wynik(i) (e) genotypu(ów) HPV niedostępnego(ych) w danym regionie Wynik(i) ujemny(e) genotypu(ów) HPV niedostępnego(ych) w danym regionie Wynik genotypu HPV jest dostępny do zakupu Wynik genotypu HPV nie jest dostępny do zakupu Dodatni(e) wynik(i) genotypu(ów) HPV zastrzeżonego(ych) Ujemny(e) wynik(i) genotypu(ów) HPV zastrzeżonego(ych) Wynik genotypu jest zablokowany Wynik ujemny HPV, Niepowodzenie kontroli wewnętrznej, Niepowodzenie poziomu płynu lub przenoszenia ekstrakcji Monitorowanie występowania skażenia DNA Co najmniej raz w miesiącu należy przeprowadzić następującą procedurę testową służącą do monitorowania strefy roboczej i powierzchni oprzyrządowania pod kątem skażenia DNA. Monitorowanie otoczenia ma podstawowe znaczenie dla wykrycia zanieczyszczenia jeszcze przed pojawieniem się problemu. 1. W przypadku każdej badanej powierzchni należy użyć czystej wymazówki z zestawów BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Amplified DNA Assay Endocervical Specimen Collection oraz DRY TRANSPORT Kit. 2. Odlać trochę niezawierającej nukleaz wody o czystości do biologii molekularnej do małego, czystego pojemnika. 3. Zanurzyć wymazówkę w niezawierającej nukleaz wodzie o czystości do biologii molekularnej, a następnie szerokim ruchem przetrzeć pierwszą badaną powierzchnię. 4. Zdjąć zatyczkę z probówki rozcieńczalnika BD Onclarity HPV LBC Diluent i umieścić wymazówkę w rozcieńczalniku. Wymieszać obracając wymazówkę w rozcieńczalniku BD Onclarity HPV Diluent przez 5 10 s. 5. Wycisnąć wymazówkę o ściankę probówki tak, aby płyn spłynął na jej dno. 6. Ostrożnie wyjąć wymazówkę z probówki rozcieńczalnika BD Onclarity HPV LBC Diluent, aby uniknąć rozchlapywania. Wyrzucić wymazówkę. 7. Dokładnie zamknąć probówkę rozcieńczalnika BD Onclarity HPV LBC Diluent przebijalnym czarnym korkiem. 8. Powtarzać dla każdego miejsca, które ma być poddane testom. 9. Po zebraniu i wyciśnięciu wszystkich wymazówek przetwarzać je zgodnie z procedurą wstępnego ogrzewania, a następnie wykonać procedurę testową. Więcej informacji na temat procedur monitorowania środowiskowego i czyszczenia znajduje się w podręczniku użytkownika systemu BD Viper LT. Jeżeli nie uda się usunąć skażenia, należy skontaktować się z obsługą i pomocą techniczną firmy BD w celu uzyskania dalszych instrukcji. 7

OGRANICZENIA PROCEDURY 1. Osiągnięcie optymalnej wydajności oznaczenia wymaga odpowiedniego pobierania i obchodzenia się z próbką. Zobacz części Pobieranie i transport próbek niniejszej broszury. 2. Ujemny wynik testu nie wyklucza możliwości zakażenia, ponieważ na wynik testu wpływ może mieć niewłaściwe pobranie próbki, błąd techniczny, zmieszanie próbki lub to, że liczba drobnoustrojów w próbce jest poniżej progu czułości testu. 3. Oznaczenie BD Onclarity HPV Assay pozwala na uzyskanie wyników jakościowych. 4. Stosowanie oznaczenia BD Onclarity HPV Assay jest ograniczone do personelu przeszkolonego w zakresie procedury oznaczenia i systemu BD Viper LT. CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŚCIOWA Próbki BD Onclarity HPV Cervical Brush, BD SurePath i/lub PreservCyt pobierano od 836 kobiet zgodnych z protokołem, które skierowano na kontrolę z powodu nieprawidłowego wyniku testu Pap lub zakażenia wirusem HPV bądź, które przyszły na rutynową wizytę do kliniki w dwóch różnych geograficznie miejscach w Europie. Od każdej włączonej uczestniczki pobrano dwie próbki w następującej kolejności: próbkę BD SurePath (ośrodek A) lub próbkę PreservCyt (ośrodek B) oraz próbkę BD Onclarity HPV Cervical Brush (transportowaną w probówce rozcieńczalnika BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent). W przypadku każdej pobranej fiolki cytologicznej 0,5 ml przenoszono do probówki rozcieńczalnika BD Onclarity HPV LBC Diluent. W przypadku większości próbek dostępne były wyniki cytologii, HPV DNA (test digene Hybrid Capture 2 (hc2) High-Risk HPV DNA) i testu Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping (RLA). W przypadku większości uczestniczek wysokiego ryzyka z kliniki dostępne były wyniki histologiczne. Każdy ośrodek włączał także pozostałości próbek (BD SurePath lub PreservCyt ) z powiązanymi wynikami cytologii, wynikami HPV DNA (test digene Hybrid Capture 2 High-Risk HPV DNA), wynikami testu Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping i (jeżeli dotyczy) wynikami histologicznymi. W przypadku każdej włączonej próbki 0,5 ml przenoszono do probówki rozcieńczalnika BD Onclarity HPV LBC Diluent. Włączono 510 zgodnych próbek retrospektywnych z dostępnymi wynikami histologicznymi od 234 kobiet. Wszystkie próbki zbadano przy użyciu systemu BD Viper LT zgodnie z ulotką dołączoną do opakowania i podręcznikiem użytkownika. W przypadku każdego typu podłoża obliczono czułość i swoistość kliniczną wykrywania choroby, którą zdefiniowano jako (1) wynik histologiczny wewnątrznabłonkowa neoplazja szyjki macicy (CIN2) lub wyższy lub (2) wynik histologiczny wewnątrznabłonkowa neoplazja szyjki macicy (CIN3) lub wyższy. Końcowa analiza danych obejmowała wyniki testu BD Onclarity HPV pochodzące z 472 próbek BD SurePath, 361 próbek PreservCyt i łącznie 515 próbek BD Onclarity HPV Cervical Brush: 247 próbek BD Onclarity HPV Cervical Brush (w rozcieńczalniku BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent) w przypadku ośrodka A i 268 próbek BD Onclarity HPV Cervical Brush (w rozcieńczalniku BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent) w przypadku ośrodka B. Szacunki wydajności dotyczące wykrywania choroby szyjki macicy o wysokim stopniu dla testów BD Onclarity HPV i hc2 przedstawiono w tabelach 4 i 5 dla podłoża BD SurePath media, tabelach 8 i 9 dla podłoża PreservCyt oraz tabelach 12 i 13 dla próbek BD Onclarity HPV Cervical Brush. Wyniki testu BD Onclarity HPV porównano także z wynikami DNA HPV z testów digene Hybrid Capture 2 High-Risk HPV DNA i Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping (komparator złożony). Dodatni wynik testów hc2 i RLA (wysokiego ryzyka) jest definiowany jako komparator złożony, ujemny wynik testów hc2 i RLA (wysokiego ryzyka) jest definiowany jako ujemny komparator złożony, a niezgodność tych dwóch testów (lub gdy nie były dostępne wyniki obu testów) jest definiowany jako nierozstrzygnięty komparator złożony. Dla każdego typu podłoża wobec komparatora złożonego obliczono zgodność ą, ujemną i całkowity odsetek zgodności. Końcowa analiza danych obejmowała wyniki testu BD Onclarity HPV Assay i komparatora złożonego (niezależnie od statusu histologicznego) z 670 próbek BD SurePath i 674 próbek PreservCyt (Tabele 6 i 10). W badanej populacji dla każdego typu podłoża dla każdego genotypu lub grupy genotypów w teście BD Onclarity HPV obliczono bezwzględne ryzyko choroby (CIN2+ i CIN3+). Ryzyka bezwzględne obliczono, gdy genotyp (lub grupa genotypów) występowała samodzielnie i/lub w obecności innych genotypów. Dla każdego typu podłoża przedstawiono tabelę ryzyka bezwzględnego. Każde podłoże pobierano tylko w jednym ośrodku, dlatego można oczekiwać występowania różnic częstości występowania wyników ch wirusa HPV i jego genotypów w zależności od zmienności populacji (Tabele 7 i 11). Wydajność kliniczna próbek BD SurePath Tabela 4: Wydajność testu BD Onclarity HPV Assay z podłożem BD SurePath w porównaniu z wynikami histologicznymi (CIN2+) BD Onclarity HPV Assay Test hc2 HPV DNA Oszacowanie 95% przedział ufności Oszacowanie 95% przedział ufności Czułość 97,9% (190/194) (94,8%, 99,2%) 98,4% (190/193) (95,5%, 99,5%) Swoistość 22,7% (63/278) (18,1%, 27,9%) 17,0% (47/277) (13,0%, 21,8%) Tabela 5: Wydajność testu BD Onclarity HPV Assay z podłożem BD SurePath w porównaniu z wynikami histologicznymi (CIN3+) BD Onclarity HPV Assay Test hc2 HPV DNA Oszacowanie 95% przedział ufności Oszacowanie 95% przedział ufności Czułość 97,7% (126/129) (93,4%, 99,2%) 98,4% (126/128) (94,5%, 99,6%) Swoistość 18,7% (64/343) (14,9%, 23,1%) 14,0% (48/342) (10,8%, 18,1%) 8

Tabela 6: Wydajność testu BD Onclarity HPV Assay z podłożem BD SurePath w porównaniu z komparatorem złożonym Wynik komparatora złożonego BD Onclarity HPV Assay Wynik Wynik ujemny Wynik Wynik ujemny Nierozstrzygnięty* Razem 532 6 27 565 8 50 47 105 Razem 540 56 74 670 *Wyniki hc2 i RLA dla obu testów nie są zgodne lub nie są dostępne. Odsetek zgodności wyników ch (95% przedział ufności) 98,5% (97,1%, 99,2%) Odsetek zgodności wyników ujemnych (95% przedział ufności) 89,3% (78,5%, 95,0%) Tabela 7: Ryzyko bezwzględne CIN2+ i CIN3+ dla genotypów BD Onclarity HPV Assay na podłożu BD SurePath Genotyp w teście BD Onclarity HPV Assay HPV16 HPV18 HPV45 HPV33/58 HPV31 HPV56/59/66 HPV51 HPV52 HPV35/39/68 Zakażenie spowodowane jednym lub więcej genotypami Bezwzględne ryzyko CIN2+ 63,9% (99/155) 50,0% (24/48) 46,7% (21/45) 49,4% (42/85) 64,2% (52/81) 25,5% (25/98) 41,7% (15/36) 35,1% (20/57) 36,0% (27/75) 95% przedział ufności (56,1%, 71,0%) (36,4%, 63,6%) (32,9%, 60,9%) (39,0%, 59,8%) (53,3%, 73,8%) (17,9%, 35,0%) (27,1%, 57,8%) (24,0%, 48,1%) (26,1%, 47,3%) Wydajność kliniczna próbek PreservCyt Zakażenie spowodowane jednym genotypem lub grupą genotypów Bezwzględn e ryzyko CIN2+ 64,9% (48/74) 50,0% (7/14) 23,5% (4/17) 47,1% (16/34) 72,7% (16/22) 0,0% (0/29) 25,0% (2/8) 33,3% (4/12) 33,3% (7/21) 95% przedział ufności (53,5%, 74,8%) (26,8%, 73,2%) (9,6%, 47,3%) (31,5%, 63,3%) (51,8%, 86,8%) (0,0%, 11,7%) (7,1%, 59,1%) (13,8%, 60,9%) (17,2%, 54,6%) Zakażenie spowodowane jednym lub więcej genotypami Bezwzględ ne ryzyko CIN3+ 43,9% (68/155) 43,8% (21/48) 31,1% (14/45) 31,8% (27/85) 40,7% (33/81) 13,3% (13/98) 25,0% (9/36) 19,3% (11/57) 17,3% (13/75) 95% przedział ufności (36,3%, 51,7%) (30,7%, 57,7%) (19,5%, 45,7%) (22,8%, 42,3%) (30,7%, 51,6%) (7,9%, 21,4%) (13,8%, 41,1%) (11,1%, 31,3%) (10,4%, 27,4%) Odsetek zgodności całkowitej (95% przedział ufności) 97,7% (96,1%, 98,6%) Zakażenie spowodowane jednym genotypem lub grupą genotypów Bezwzględn e ryzyko CIN3+ 47,3% (35/74) 42,9% (6/14) 17,6% (3/17) 23,5% (8/34) 50,0% (11/22) 0,0% (0/29) 12,5% (1/8) 16,7% (2/12) 19,0% (4/21) 95% przedział ufności (36,3%, 58,5%) (21,4%, 67,4%) (6,2%, 41,0%) (12,4%, 40,0%) (30,7%, 69,3%) (0,0%, 11,7%) (2,2%, 47,1%) (4,7%, 44,8%) (7,7%, 40,0%) Tabela 8: Wydajność testu BD Onclarity HPV Assay z podłożem PreservCyt w porównaniu z wynikami histologicznymi (CIN2+) BD Onclarity HPV Assay Test hc2 HPV DNA Oszacowanie 95% przedział ufności Oszacowanie 95% przedział ufności Czułość 94,7% (160/169) (90,2%, 97,2%) 97,0% (160/165) (93,1%, 98,7%) Swoistość 50,5% (97/192) (43,5%, 57,5%) 40,8% (75/184) (33,9%, 48,0%) Tabela 9: Wydajność testu BD Onclarity HPV Assay z podłożem PreservCyt w porównaniu z wynikami histologicznymi (CIN3+) BD Onclarity HPV Assay Test hc2 HPV DNA Oszacowanie 95% przedział ufności Oszacowanie 95% przedział ufności Czułość 94,4% (85/90) (87,6%, 97,6%) 97,7% (85/87) (92,0%, 99,4%) Swoistość 37,3% (101/271) (31,7%, 43,2%) 29,8% (78/262) (24,6%, 35,6%) 9

Tabela 10: Wydajność testu BD Onclarity HPV Assay z podłożem PreservCyt w porównaniu z komparatorem złożonym BD Onclarity HPV Assay Wynik Wynik ujemny Wynik komparatora złożonego Wynik Wynik ujemny Nierozstrzygnięty* Razem 246 5 18 269 10 366 29 405 Razem 256 371 47 674 *Wyniki hc2 i RLA dla obu testów nie są zgodne lub nie są dostępne. Odsetek zgodności wyników ch (95% przedział ufności) 96,1% (93,0%, 97,9%) Odsetek zgodności wyników ujemnych (95% przedział ufności) 98,7% (96,9%, 99,4%) Tabela 11: Ryzyko bezwzględne CIN2+ i CIN3+ dla genotypów BD Onclarity HPV Assay na podłożu PreservCyt Genotyp w teście BD Onclarity HPV Assay HPV 16 HPV 18 HPV 45 HPV 33/58 HPV 31 HPV 56/59/66 HPV 51 HPV 52 HPV 35/39/68 Zakażenie spowodowane jednym lub więcej genotypami Bezwzględne ryzyko CIN2+ 77,1% (84/109) 50,0% (12/24) 50,0% (6/12) 70,0% (28/40) 67,7% (42/62) 34,0% (18/53) 48,0% (12/25) 73,9% (17/23) 38,5% (10/26) 95% przedział ufności (68,3%, 84,0%) (31,4%, 68,6%) (25,4%, 74.6%) (54,6%, 81,9%) (55,4%, 78,0%) (22,7%, 47,4%) (30,0%, 66,5%) (53,5%, 87,5%) (22,4%, 57,5%) Zakażenie spowodowane jednym genotypem lub grupą genotypów Bezwzględne ryzyko CIN2+ 81,4% (57/70) 45,5% (5/11) 25,0% (1/4) 75,0% (15/20) 71,0% (22/31) 11,1% (2/18) 27,3% (3/11) 85,7% (6/7) 40,0% (2/5) Wydajność kliniczna próbek BD Onclarity HPV Cervical Brush 95% przedział ufności (70,8%, 88,8%) (21,3%, 72,0%) (4,6%, 69,9%) (53,1%, 88,8%) (53,4%, 83,9%) (3,1%, 32,8%) (9,7%, 56,6%) (48,7%, 97,4%) (11,8%, 76,9%) Zakażenie spowodowane jednym lub więcej genotypami Bezwzględne ryzyko CIN3+ 44,0% (48/109) 29,2% (7/24) 16,7% (2/12) 35,0% (14/40) 30,6% (19/62) 9,4% (5/53) 16,0% (4/25) 26,1% (6/23) 15,4% (4/26) 95% przedział ufności (35,1%, 53,4%) (14,9%, 49,2%) (4,7%, 44,8%) (22,1%, 50,5%) (20,6%, 43,0%) (4,1%, 20,3%) (6,4%, 34,7%) (12,5%, 46,5%) (6,1%, 33,5%) Odsetek zgodności całkowitej (95% przedział ufności) 97,6% (96,1%, 98,5%) Zakażenie spowodowane jednym genotypem lub grupą genotypów Bezwzględne ryzyko CIN3+ 50,0% (35/70) 18,2% (2/11) 0,0% (0/4) 50,0% (10/20) 41,9% (13/31) 0,0% (0/18) 18,2% (2/11) 42,9% (3/7) 20,0% (1/5) Tabela 12: Wydajność testu BD Onclarity HPV Assay z próbką BD Onclarity HPV Cervical Brush w porównaniu z wynikami histologicznymi (CIN2+) 95% przedział ufności (38,6%, 61,4%) (5,1%, 47,7%) (0,0%, 49,0%) (29,9%, 70,1%) (26,4%, 59,2%) (0,0%, 17,6%) (5,1%, 47,7%) (15,8%, 75,0%) (3,6%, 62,4%) BD Onclarity HPV Assay Test hc2 HPV DNA Ośrodek A B Oszacowanie 95% przedział ufności Oszacowanie 95% przedział ufności Czułość 97,2% (104/107) (92,1%, 99,0%) 99,1% (106/107) (94,9%, 99,8%) Swoistość 17,9% (25/140) (12,4%, 25,0%) 21,4% (30/140) (15,4%, 28,9%) Czułość 100,0% (121/121) (96,9%, 100,0%) 97,5% (116/119) (92,8%, 99,1%) Swoistość 37,4% (55/147) (30,0%, 45,5%) 43,0% (61/142) (35,1%, 51,2%) Tabela 13: Wydajność testu BD Onclarity HPV Assay z próbką BD Onclarity HPV Cervical Brush w porównaniu z wynikami histologicznymi (CIN3+) Ośrodek A B BD Onclarity HPV Assay Test hc2 HPV DNA Oszacowanie 95% przedział ufności Oszacowanie 95% przedział ufności Czułość 97,3% (72/74) (90,7%, 99,3%) 98,6% (73/74) (92,7%, 99,8%) Swoistość 15,0% (26/173) (10,5%, 21,1%) 17,3% (30/173) (12,4%, 23,7%) Czułość 100,0% (60/60) (94,0%, 100,0%) 98,3% (57/58) (90,9%, 99,7%) Swoistość 26,4% (55/208) (20,9%, 32,8%) 31,0% (63/203) (25,1%, 37,7%) 10

Badania analityczne Czułość analityczna przy klinicznej wartości odcięcia: Granica wykrywalności (LOD) przy klinicznej wartości odcięcia wirusa HPV została określona dla testu BD Onclarity HPV Assay przy użyciu linii komórek HPV-ch: SiHa (HPV 16), HeLa (HPV 18) i MS751 (HPV 45) oraz klonowane DNA plazmidu zawierające sekwencje dla następujących genotypów HPV: HPV 31, 33, 35, 39, 51, 52, 56, 58, 59, 66 i 68 w płynie konserwującym BD SurePath Preservative Fluid, roztworze PreservCyt Solution oraz rozcieńczalniku BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent zawierającym linię komórek HPV-ujemnych (C33A). Linie komórek HPV były badane indywidualnie, natomiast plazmidy HPV były badane zbiorczo w trzech grupach: 1) HPV 31, 33, 51, 52 i 59; 2) HPV 56, 58, 68; oraz 3) HPV 35 i 66. Zbadano przynajmniej czterdzieści pięć powtórzeń każdego z sześciu stężeń docelowych dla linii komórek HPV i dwadzieścia powtórzeń każdego z sześciu stężeń docelowych dla plazmidów HPV przy użyciu przynajmniej trzech serii odczynników i przynajmniej trzech systemów BD Viper LT. Wartość LOD to stężenie DNA HPV w nierozcieńczonej próbce, które miało wyniki e powyżej klinicznej wartości odcięcia w przynajmniej 95% przypadków. Maksymalna wartość LOD dla każdego genotypu HPV i podłoża jest opisana w Tabeli 14. Tabela 14: Czułość analityczna Element docelowy Podłoże BD SurePath (95% przedział ufności) Podłoże PreservCyt (95% przedział ufności) Rozcieńczalnik BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent (95% przedział ufności) SiHa (HPV 16) komórek/ml 1584 (1276 1962) 1835 (1426 2358) 137 (131 144) HeLa (HPV 18) komórek/ml 915 (739 1131) 1786 (1175 2715) 51 (46 56) MS751 (HPV 45) komórek/ml 3793 (2944 4888) 5425 (4167 7066) 305 (284 343) HPV 31 kopii/ml 3652 (3159 3868) 4118 (3898 4228) 692 (650 817) HPV 33 kopii/ml 7326 (6578 8932) 8272 (7946 8743) 1376 (1272 1451) HPV 35 kopii/ml 6820 (6477 7282) 7282 (6895 7674) 1552 (1317 1780) HPV 39 kopii/ml 7894 (7115 8193) 8272 (7810 9398) 1531 (1419 1685) HPV 51 kopii/ml 6697 (5796 7097) 5909 (5553 6824) 1229 (1155 1353) HPV 52 kopii/ml 3582 (3414 4184) 4184 (3740 4761) 833 (744 934) HPV 56 kopii/ml 4976 (4140 5698) 4774 (4479 5997) 836 (737 911) HPV 58 kopii/ml 10094 (9403 11180) 11488 (8989 12360) 2990 (2656 7819) HPV 59 kopii/ml 4400 (4145 5069) 4374 (4105 5482) 772 (722 899) HPV 66 kopii/ml 3793 (3621 4030) 4462 (4008 4844) 701 (646 767) HPV 68 kopii/ml 10415 (9799 11642) 10481 (9816 12082) 2079 (1995 2125) Reaktywność krzyżowa: Do oceny swoistości analitycznej testu BD Onclarity HPV Assay w systemie BD Viper LT użyto panelu bakterii, drożdży i wirusów hodowanych z klonowanym DNA plazmidowym zawierającym sekwencje docelowe wirusa HPV wysokiego i niskiego ryzyka. Każdy potencjalny odczynnik reagujący krzyżowo był badany pojedynczo w płynie konserwacyjnym BD SurePath Preservative Fluid i roztworze PreservCyt Solution zawierającym linię komórek HPV-ujemnych (C33A). Drobnoustroje opisano w Tabelach 15 i 16. Test BD Onclarity HPV Assay nie reagował krzyżowo z żadnym spośród badanych drobnoustrojów. 11

Tabela 15: Drobnoustroje badane pod względem swoistości analitycznej Bakterie* Wirusy** Actinomyces israelii Adenowirus, typ 5 Atopobium vaginae EBV-1, szczep B95-8 Bacteroides fragilis Bacteroides ureolyticus HCMV, szczep AD169 HIV-1 Bifidobacterium adolescentis HSV1 Bifidobacterium breve HSV2 Bifidobacterium longum ssp. longum HPV wysokiego ryzyka*** Chlamydia trachomatis HPV 16 Clostridium perfringens HPV 18 Corynebacterium genitalium HPV 31 Enterobacter cloacae ssp. cloacae HPV 33 Enterococcus faecalis HPV 35 Enterococcus faecium HPV 39 Escherichia coli HPV 45 Fusobacterium nucleatum ssp. nucleatum HPV 51 Gardnerella vaginalis HPV 52 Klebsiella pneumonia ssp. ozaenae HPV 56 Lactobacillus acidophilus HPV 58 Mycobacterium smegmatis HPV 59 Mycoplasma genitalium HPV 66 Neisseria gonorrhoeae HPV 68 Peptostreptococcus anaerobius Prevotella bivia Prevotella disiens Proteus mirabilis Proteus vulgaris Providencia stuartii Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Streptococcus agalactiae Streptococcus pyogenes Ureaplasma urealyticum Drożdże/pierwotniaki**** Candida albicans Trichomonas vaginalis *Bakterie badano przy około 1,0 x 10 7 CFU/mL z wyjątkiem następujących: Chlamydia trachomatis (1,0 x 10 7 EB/mL), Mycobacterium smegmatis (2,5 x 10 6 CFU/mL) i Ureaplasma urealyticum (8,0 x 10 6 CFU/mL). **Wirusy badano przy 1,0 x 10 6 VP/mL. ***DNA plazmidów HPV wysokiego ryzyka badano przy 1,0 x 10 6 kopii/ml. ****Drożdże (Candida albicans) badano przy około 1,0 x 10 7 CFU/mL; pierwotniaki (Trichomonas vaginalis) badano przy 1,4 x 10 6 CFU/mL. Tabela 16: Plazmidy HPV niskiego ryzyka badane pod względem swoistości analitycznej HPV 6 HPV 69 HPV 11 HPV 70 HPV 26 HPV 73 HPV 30 HPV 82 HPV 34 HPV 97 HPV 53 HPV 67 HPV c85 *DNA plazmidów HPV niskiego ryzyka badano przy 1,0 x 10 6 kopii/ml. 12