Delvo-X-Press ßL-II Delvo-X-Press ßL-II jest jakościowym niekompetencyjnym testem immunoenzymatycznym przeznaczonym do badania pozostałości antybiotyków ß-laktamowych w surowym i pasteryzowanym mleku krowim. Producent: DSM FOOD Specialties B.V. Dairy Ingredients Group PO Box 1 2600 MA Delft Holandia Strona 1 z 6
Delvo-X-Press ßL-II Delvo-X-Press ßL-II jest szybkim testem wytwarzanym przez producenta powszechnie znanego Delvotestu. W czasie krótszym niż 7 minut wykrywa on szerokie spektrum pozostałości antybiotyków b-laktamowych. Aparatura niezbędna do wykonania testu również jest dostępna w DSM FOOD Specialties Poland. Delvo-X-Press ßL-II jest jakościowym testem immunoenzymatycznym zaprojektowanym dla potrzeb przemysłu mleczarskiego w celu badania pozostałości antybiotyków ß-laktamowych w mleku zbiorczym na poziomie czułości podanym w Tabeli 1. Zasada działania testu Ściśle określona ilość TRACERA (roztwór receptora białka) jest mieszana z ustaloną objętością próbki mleka w probówce specjalnie pokrytej ß-laktamem. TRACER może reagować zarówno ze związkami b-laktamowymi obecnymi w mleku, jak i w probówce. Zależnie od obecności związków ß-laktamowych w próbce mleka więcej bądź mniej TRACERA reaguje z ß-laktamem pokrywającym probówkę. Po usunięciu kompleksu TRACER/ß-laktam przez przemywanie probówki, dodawany jest wywoływacz barwy (COLOUR DEVELOPER) w celu oznaczenia TRACERA związanego wewnątrz probówki pokrytej ß-laktamem. Intensywność powstałej barwy w probówce jest odwrotnie proporcjonalna do stężenia antybiotyków ß-laktamowych w próbce. Takiej samej procedurze podlega standard. Przez porównanie intensywności barwy powstałej w probówce z próbką oraz probówce ze standardem za pomocą czytnika-spektrofotometru oznaczana jest obecność bądź nieobecność pozostałości związków ß-laktamowych w próbce mleka. Tabela 1 Minimalne wykrywalne stężenia antybiotyków ß-laktamowych : Antybiotyki poziom czułości ng/ml (ppb) penicylina G 2-4 ceftiofur 4-8 cefapiryna 4-8 ampicylina 4-8 amoksycylina 4-8 cloksacylina 30-60 Czułości testu dla innych antybiotyków -laktamowych dostępne na żądanie. Delvo-X-Press ßL został zaprojektowany jako test monitoringowy wykrywający pozostałości antybiotyków ß-laktamowych w mleku. Pozytywne wyniki testu winny być potwierdzone przez obowiązujące metody urzędowe. Strona 2 z 6
Składniki zestawu - PROBÓWKI POKRYTE [T] : 2 x 50 szt. Probówki pokryte antybiotykiem b-laktamowym. - STANDARD zliofilizowany [S] : 1 butelka Antybiotyk b-laktamowy w zbuforowanym roztworze mleka, zliofilizowany. - ROZCIENCZALNIK STANDARDU [D] (DILUENT) : 1 butelka Rozpuszczalnik do zliofilizowanego STANDARDu. Roztwór wodny konserwowany timerosalem. - TRACER [1] : 1 butelka Gotowy do użycia roztwór receptora białka. Zbuforowany roztwór serum krwi koziej zakonserwowany timerosalem. - ROZTWÓR PRZEMYWAJĄCY (50 x stęż.) [W] (WASH SOLUTION): 1 butelka 50-krotnie zagęszczony środek do przemywania probówek. Roztwór należy rozcieńczyć dejonizowaną lub destylowaną wodą. Zbuforowany roztwór z dodatkiem glicerolu konserwowany chlorkiem benzalkonowym. - WYWOŁYWACZ BARWY [2] (COLOUR DEVELOPER) : 1 butelka Substrat enzymu. Wodny roztwór wywoływacza. - INSTRUKCJA : 1 szt. Składniki zestawu aparatury 1 x zestaw pomiarowy ISRP parametry techniczne urządzenia: inkubator: 64 o C wstrząsarka: 700 rpm czytnik-spektrofotometr: 660 nm drukarka: 24 znaki w wierszu wyświetlacz: instrukcja wykonania testu i odczyt wyników 1 x zasilacz 12 V 1 x pipeta 0,2 ml 1 x pipeta 1,0 ml 2 x statyw do PROBÓWEK [T] 1 x tryskawka 250 ml 1 x zlewka pomiarowa 5 ml Strona 3 z 6
Szczegółowa instrukcja wykrywania pozostałości antybiotyków ß-laktamowych w mleku krowim za pomocą zestawu Delvo-X-Presss Przechowywanie i zalecenia : 1. Zestaw należy przechowywać w temperaturze 2-8 o C. Nie należy zamrażać. Nie używać zestawu po upływie czasu przydatności testu podanego na etykiecie. 2. Próbki mleka powinny być przechowywane w temp. 2-8 o C i analizowane w czasie 48 godzin od pozyskania (udoju). Próbki mleka mogą być także przechowywane w postaci mrożonej, lecz nie mogą być rozmrażane więcej niż dwa razy. 3. Po rekonstytucji, STANDARD (butelka "S") musi być zużyty w czasie 2 miesięcy pod warunkiem przechowywania w lodówce. 4. COLOUR DEVELOPER - wywoływacz barwy (butelka "2") powinien być przechowywany w ciemności i chroniony przed światłem. 5. Odczynniki i probówki nie mogą być zamieniane pomiędzy różnymi zestawami. 6. Odczynniki zawierają timerosal, chlorek benzalkonowy, fluorek sodowy i 4-aminoantypirydynę. Mogą one być szkodliwe, jeśli zostaną spożyte. W takim przypadku konieczna jest konsultacja lekarska. 7. Wykonanie testu winno odbywać się w temperaturze pokojowej (15-25 o C). 8. Należy zwrócić szczególną uwagę na zachowanie czystości czytnika aparatu i zabezpieczenie przed wlaniem cieczy do urządzenia. Zaleca się usunięcie kropel cieczy z "probówek pokrytych" za pomocą bibuły oraz nałożenie paska bibuły z otworami na rząd otworów czytnika. 9. W celu maksymalnego zwiększenia dokładności testu, pobieranie próbek, dodawanie odczynników i inkubacja winny być przeprowadzone w tej samej kolejności. Oznacza to, że probówki poddane inkubacji w pierwszej kolejności winny być również wyjęte z inkubatora w pierwszej kolejności, jako że czas inkubacji jest czynnikiem krytycznym testu. 10. W celu dodania wywoływacza barwy (COLOUR DEVELOPER) napełnić całkowicie pipetę wielokrotną (Combitip - 12,5 ml) odczynnikiem przed dodaniem do probówek pokrytych b-laktamem. Usunąć pierwszą porcję odczynnika do butelki z wywoływaczem. Dodać COLOUR DEVELOPER do wszystkich probówek pokrytych. Okres pomiędzy dodaniem wywoływacza do pierwszej i ostatniej probówki nie powinien przekraczać 10 sekund. Po dodaniu wywoływacza pozostały w pipecie odczynnik należy wlać z powrotem do butelki. 11. Ponieważ test jest bardzo czuły na antybiotyki, należy unikać jakiegokolwiek zanieczyszczenia takimi substancjami. Zaleca się umycie rąk i stołu laboratoryjnego, a następnie osuszenie za pomocą ręczników bibułowych przed rozpoczęciem wykonania testu. 12. Użytkownicy testu winni zwracać szczególną uwagę na możliwość krzyżowego zanieczyszczenia w czasie wstrząsania i mieszania. 13. Delvo-X-Press ßL-II został zaprojektowany jako test monitoringowy do wykrywania pozostałości antybiotyków b-laktamowych tylko w mleku krowim. Pozytywne wyniki testu powinny być potwierdzone przez obowiązujące metody urzędowe (mikrobiologiczne). 14. Gist-Brocades nie będzie ponosić odpowiedzialności za jakiekolwiek konsekwencje niewłaściwego użycia testu Delvo-X-Press ßL-II, za wyjątkiem wymiany testów uznanych w postępowaniu reklamacyjnym za wadliwe, jako że warunki i sposób użycia testu pozostają poza naszą kontrolą. Użytkownicy testu powinni być instruowani w zakresie wykonania testu przez przedstawiciela DSM FOOD Specialties. Strona 4 z 6
Przygotowanie Zestaw 1. 30 minut przed rozpoczęciem testu, wyjąć zestaw z lodówki. Wyjąć wszystkie potrzebne ampułki, odczynniki z pudełka i pozwolić im na podgrzanie do temperatury pokojowej (15-25 o C). Pozostałe materiały umieścić ponownie w lodówce. Zestaw pomiarowy ISRP-workstation 2. Włączyć zestaw i pozostawić włączony na około 15 minut celem osiągnięcia i ustalenia temperatury 64 o C (±2 o C). Objętość próbki i odczynników 3. Wszystkie odczynniki powinny być odmierzone z dokładnością co najmniej ±5%. Czas inkubacji 4. Wszystkie czasy inkubacji powinny być stosowane z dokładnością co najmniej ±10%. Zalecane jest użycie pipety wielokrotnej w celu zachowania właściwego czasu dodawania wywoływacza barwy. Roztwór przemywający 5. Przygotować ilość roztworu wystarczającą na jeden dzień przez rozcieńczenie 1 części koncentratu (butelka oznaczona "W") 49 częściami dejonizowanej lub destylowanej wody (na 10 probówek potrzeba około 250 ml). Napełnić tryskawkę rozcieńczonym roztworem. Standard 6. Usunąć aluminiowe zabezpieczenie z butelki zawierającej zliofilizowany STANDARD (butelka "S"). Ostrożnie podważyć korek w celu likwidacji próżni w butelce, następnie wyjąć korek i położyć go do góry nogami na stole. Unikać zanieczyszczenia korka przez kontakt z palcami, stołem, itp. Wlać całą zawartość rozpuszczalnika STANDARD (butelka "D") do butelki ze zliofilizowanym STANDARDEM (butelka "S"). Włożyć z powrotem korek do butelki. Przytrzymując korek delikatnie wymieszać zawartość przez odwracanie ( 20x ), unikając tworzenia piany. W celu osiągnięcia stanu równowagi STANDARD należy odstawić na 20 minut w temperaturze pokojowej; następnie delikatnie wymieszać 10 razy. Zaznaczyć na butelce datę przygotowania roztworu. Próbki mleka 7. Badać próbki mleka o temperaturze identycznej z temperaturą standardu. Wymieszać próbkę przez wstrząsanie, unikając pienienia. Odmierzając próbkę należy pobierać ją ze środka objętości próbki, stopniowo naciągając do pipety bez wprowadzania pęcherzy powietrza. Liczba próbek 8. Nie więcej niż 6 próbek może być badanych jednocześnie. Próbka STANDARD musi być badana jako pierwsza w każdej grupie 6 próbek mleka. Automatyczne przeprowadzanie testu 9. Wykonywać instrukcje wyświetlane na ekranie zestawu pomiarowego ISRP-workstation zgodnie z komendą "Automatic test". Strona 5 z 6
Sposób wykonania Wykonywać instrukcje wyświetlane na ekranie zestawu pomiarowego ISRP-workstation zgaodnie z komendą "Automatic Test" lub przejść do pkt. 1. 1. Przygotować odpowiednią ilość probówek pokrytych (COATED TUBES [T]) i oznakować je. 2. Odmierzyć pipetą 0.2ml roztworu STANDARDu [S] do PROBÓWKI [T]. Oznaczyć PROBÓWKĘ jako "Standard". 3. Odmierzyć pipetą 0.2ml badanej próbki mleka do odpowiednich PROBÓWEK [T]. Użyć nowej końcówki pipety dla każdej próbki mleka. 4. Dodać 0.2ml roztworu TRACERa [1] do wszystkich PROBÓWEK [T]. 5. PROBÓWKI [T] inkubować przez 3 minuty w inkubatorze (rząd A, 64 o C). Zawartość probówek musi być dobrze mieszana przez wstrząsanie. Natychmiast po zakończeniu inkubacji usunąć PROBÓWKI [T] z inkubatora. 6. Zawartość PROBÓWEK [T] wylać do zlewu, a odwrócone do góry dnem PROBÓWKI umieścić na bibule. Używając tryskawki wycisnąć roztwór przemywający WASH SOLUTION (rozcieńczony 50x) do PROBÓWEK [T] aż do ich całkowitego napełnienia. Wylać zawartość do zlewu. Powtórzyć tę czynność jeszcze dwukrotnie. Ustawić odwrócone do góry dnem PROBÓWKI [T] na bibule w celu usunięcia pozostałości płynu. 7. Do każdej PROBÓWKI [T] dodać 1.0ml wywoływacza barwy (COLOUR DEVELOPER [2]). Okres pomiędzy dodaniem wywoływacza do pierwszej i ostatniej PROBÓWKI nie powinien przekraczyć 10 sekund. 8. PROBÓWKI [T] inkubować przez 3 minuty w temperaturze pokojowej (rząd B). Zawartość PROBÓWEK musi być mieszana przez wstrząsanie. 9. Po 3 minutach wstrząsarka urządzenia zatrzyma się automatycznie i zostanie podany wynik. Odczyt 00 lub większy (+01, +02) powinien być interpretowany jako pozytywny (+), potwierdzający obecność pozostałości antybiotyków -laktamowych w próbkach mleka na poziomie czułości testu. Odczyt -01 i niższy (-02, -03) powinien być interpretowany jako wynik negatywny (-). Strona 6 z 6