Paskowy test ilościowy do wykrywania Fumonizyn

Transkrypt

1 Paskowy test ilościowy do wykrywania Fumonizyn NEO 8885 Stosowany z czytnikiem Reveal AccuScan III wersja 4.22 lub nowsza Przechowywać w temperaturze o C Nie zamrażać

2 Toksyna Odkryte w 1989 roku Fumonizyny należą do rodziny mykotoksyn wytwarzanych przez różne formy pleśni z rodzaju Fusarium. Formy te najczęściej porażają zboża (są one uważane za wszechobecne w kukurydzy) i ryżu, a więc ryzyko obecności fumonizyn w paszach i produktach spożywczych jest wysokie. Fumonizyny wpływają na różne zwierzęta inaczej i są powiązane z powstawaniem raka przełyku u ludzi. Agencja Ochrony Środowiska sklasyfikowała fumonizyny jako kategoria II-B produkty rakotwórczych. Konie są bardzo wrażliwe nawet na niskie ilości fumonizyny, które mogą powodować leukoencephalomalcię (skraplanie mózgu). U świń, fumonizyna atakuje układ sercowy, powodując obrzęk płuc, wątroby, jak zmiany w trzustce. Limity dopuszczalnych poziomów Fumonizyn ustalone przez FDA: Do spożycia przez ludzi: Rodzaj Suche zmielone produkty kukurydziane Całe / rozdrobnione suche zmielone produkty kukurydziane, suche bielone otręby kukurydziane, oczyszczona kukurydza do produkcji masowej Oczyszczona kukurydza na popcorn Poziom 2 ppm 4 ppm 3 ppm Pasza dla zwierząt (kukurydza / produkty uboczne z kukurydzy, całkowita ilość fumonizyn) Zwierzę Konie i króliki Trzoda chlewna i sumy Hodowlane przeżuwacze, drób, norki Przeżuwacze powyżej 3 miesiąca przygotowywane do uboju, norki przygotowywane do skórowania Drób przygotowywany do uboju Wszystkie inne gatunki i klasy zwierząt gospodarskich i zwierząt domowych Poziom 5 ppm, 20% diety 20 ppm, 50% diety 30 ppm, 50% diety 60 ppm, 50% diety 100 ppm, 50% diety 10 ppm, 50% diety

3 Regulacje UE dla Fumonizyn (Razem B 1 i B 2 ) są następujące: Żywność Kukurydza nieprzetworzona Mąka kukurydziana, mąka, kasza, kiełki i olej Żywność na bazie kukurydzy przeznaczona do bezpośredniego spożycia przez ludzi, oprócz wyżej wymienionych Odżywki dla niemowląt na bazie kukurydzy Poziomy Maksymalne 2 ppm 1 ppm 0,4 ppm 0,2 ppm Zastosowanie testu Test Reveal Q+ Fumonizyny jest stosowany do szybkiej ilościowej analizy zawartości Fuminizyn w kukurydzy i produktach kukurydzianych. Kierowany jest do osób zajmujących się kontrolą Jakości produktów możliwie zanieczyszczonych Fumonizynami. Zasada działania testu Test jest jednostopniowym paskowym testem immunochromatograficznym działającym na zasadzie konkurencyjnej techniki immunologicznej. Ekstrakt przenika do strefy z reagentami zawierającymi przeciwciała specyficzne dla Fumonizyn skoniugowane z cząsteczkami złota. Jeżeli w badanej próbce obecne są Fumonizyny to w tej strefie wychwytywana jest przez przeciwciało na skutek czego tworzy się kompleks: Fumonizyna + przeciwciało. Z kolei ten kompleks przenika dalej do strefy membranowej, w której Fumonizyna skonjugowana jest z nośnikiem białkowym. W tej strefie wszystkie nie związane przeciwciała specyficzne dla Fumonizyn są wychwytywane, a cząstki barwne koncentrują się tworząc widoczną poprzeczną linię na pasku. Jeżeli w badanej próbce jest więcej Fumonizyn to w większym stopniu będzie tworzył kompleksy ze specyficznymi przeciwciałami i cząsteczkami barwnymi, skutkiem czego mniej przeciwciał Fumonizyn będzie wychwytywanych w strefie testowej paska. Z tego względu przy wyższej koncentracji Fumonizyn w badanej próbce intensywność koloru na poprzecznej linii tworzącej się na pasku jest słabsza. Alogorytmy zaprogramowane w czytniku Reveal AccuScan III przeliczają intensywność tej linii na ilościowy wynik wyrażany w częściach na milion ppm (parts per milion = ppm). Membrana zawiera także strefę kontrolną, w której immuno kompleks znajdujący się w strefie reagentowej jest wychwytywany przez przeciwciała tworząc widoczną poprzeczną linię kontrolną. Kontrolna linia formuje się zawsze, niezależnie od poziomu zawartości Fumonizyn w badanej próbce i wskazuje na prawidłowe działanie testu.

4 Przechowywanie Zestaw należy przechowywać w temperaturze pokojowej (18 30 C). Paski testowe należy przechowywać w oryginalnych zamkniętych pojemnikach, w celu zachowania ich optymalnych właściwości. Skład zestawu 25 pasków testowych Reveal Q+ 25 czerwonych probówek do rozcieńczeń 25 probówek na próbki 1 butelka z rozcieńczalnikiem do próbek Instrukcja użycia Materiały zalecane, nie znajdujące się w zestawie 65% roztwór etanolu (Neogen nr kat. 8071, 8072) Pojemniki do pobierania próbek z nakrywkami (Neogen nr kat. 9428) Młynek Agri Grind lub równorzędny (Neogen nr kat. 0401) Waga o możliwości odważenia 5-50 g 0,1g (Neogen nr kat. 9427) Stoper (Neogen nr kat.0426) Statyw na probówki Reveal Sample Cup Rack (Neogen nr kat. 9475) Czytnik Reveal AccuSan III (Neogen nr kat. 9590) Cylinder miarowy o pojemności 100 ml (Neogen nr kat.9447,9448) Strzykawka filtrująca lub filtr Whatman Nr.1 (Neogen nr kat. 9420) Pojemniki do zbierania ekstraktu z korkami (Neogen nr kat. 9421, 9421B) Pipeta 100 l (Neogen nr kat. 9272, 9278) Końcówki do pipety 100 l (Neogen nr kat.9410, 9417 lub 9407) Pipeta 500 l lub 1000 l (Neogen nr kat. 9336, 9342) Końcówki do pipety l (Neogen nr kat.9464, 9487)

5 Uwagi i zalecenia 1. Paski testowe muszą być przetrzymywane wewnątrz suchego oryginalnego opakowania. 2. Etanol jest łatwopalny. Przechowywać opakowanie szczelnie zamknięte, z dala od ciepła ognia i iskier oraz osób palących. Jest toksyczny po połknięciu lub po wchłonięciu oparów. Unikać kontaktu ze skórą. 3. Zestaw należy przechowywać w temperaturze pokojowej (18 30 C). Nie zamrażać. 4. Nie stosować testu po upływie jego terminu ważności. 5. Wszystkie stosowane w teście płyny, w tym ekstrakty próbek, jak również sprzęt laboratoryjny należy traktować, jako zanieczyszczone Fumonizyną. W czasie wykonywania testu należy stosować rękawiczki i odzież ochronną 6. W celu uniknięcia zanieczyszczenia krzyżowego, do każdej próbki należy stosować czysty sprzęt laboratoryjny i dokładnie myć szkło przed użyciem go do następnej próbki. Ustawienia czytnika AccuScan III Czytnik AccuScan III musi mieć wersję oprogramowania 4.22 lub nowszą. W celu uzyskania informacji na temat odpowiednich ustawień krzywej wzorcowej należy odnieść się do opakowania testu lub certyfikatu Jakości testu. 1. Uruchomić program AccuScan III w czytniku. 2. Wybrać kategorię: Mycotoxin Q+ i rodzaj testu Fumonisin. 3. Wprowadzić numer próbki ID (opcjonalne). 4. Wprowadzić numer serii testu (lot number), wartości A,B,C,D, z opakowania testu lub wybrać z historii (History) wcześniej wprowadzone dane. Uwaga: Aby uzyskać bardziej szczegółowe informacje należy skorzystać z instrukcji obsługi czytnika AccuScan III. Czytnik AccuScan III musi dopasować numer serii do analizowanego paska testowego. Czytnik AccuScan III należy zaktualizować przed przystąpieniem do wykonywania analiz. Przygotowanie i ekstrakcja próbek Badane próbki powinny być pobrane zgodnie z zasadami przy pobieraniu próbek reprezentatywnych. 1. Uzyskać próbkę reprezentatywną. Zmielić pobraną próbkę do takiego stopnia, aby co najmniej 75% zmielonego materiału przechodziło przez sito o 20 mesh, tj. miało wygląd dobrze zmielonej kawy instant.

6 2. Ekstrakcję prowadzić w stosunku: 1 część próbki do 5 części 65% roztworu etanolu. Na przykład, do 10 gramów próbki dodać 50 ml 65% roztworu etanolu. 3. Energicznie wytrząsać przez 3 minuty lub mieszać w mieszalniku szybkoobrotowym przez 1 minutę. Pozostawić próbkę do odstania, a następnie przefiltrować przez strzykawę filtrującą lub przez filtr papierowy. ALTERNATYWNIE: (W metodzie USDA/GIPSA) Zmieszać 50 gramów próbki ze 250 ml 65% roztworu etanolu i wytrząsać przez 3 minuty lub mieszać w mieszalniku szybkoobrotowym przez 1 minutę. 4. Pozostawić próbkę do odstania, a następnie przefiltrować co najmniej 5ml przez strzykawę filtrującą lub przez filtr papierowy Whatman Nr.1 i zebrać filtrat. Procedura wykonania testu 1. Wyjąć niezbędną ilość czerwonych probówek do rozcieńczeń i przezroczystych probówek na próbki. Umieścić je w stojaku. 2. Przy użyciu pipety i nowej końcówki wprowadzić po 200 l rozcieńczalnika do próbek do każdej probówki oznaczonej na czerwono. 3. Stosując nową końcówkę pipety do każdej próbki wprowadzić po 100 l przefiltrowanych ekstraktów badanych próbek do każdej czerwonej probówki z rozcieńczalnikiem. Mieszać poprzez 5 krotne pipetowanie w górę i w dół. 4. Przenieść po 100 l rozcieńczonego ekstraktu próbek do czystych przezroczystych probówek. 5. W każdej probówce umieścić pasek testowy Reveal Q+ Fumonisin, końcówką oznakowaną sample do dołu. Pozostawić pasek testowy w próbce przez 6 minut. 6. Wyjąć pasek z probówki po upływie czasu 6 minut. Przejść do odczytu wyników. Odczyt wyników na czytniku Reveal AccuScan Testy powinny być odczytane w ciągu 1 minuty od zakończenia 6 minutowej inkubacji. Aby uzyskać dodatkowe informacje na temat ustawień należy udać się do Reveal AccuScan III Set Up. 1. Umieścić dokładnie pasek testowy Reveal Q+ w czarnym adapterze, najpierw strona sample, stroną z rezultatami skierowanymi na zewnątrz.

7 2. Umieścić adapter z testem, górną stroną skierowany w dół, w czytniku (linie testowe będą skierowane w dół czytnika). Po włożeniu adaptera zaświeci się zielone światełko czytnik rozpocznie automatycznie analizę testu. UWAGA: usunięcie adaptera z czytnika w trakcie odczytu może prowadzić do niewłaściwych odczytów. 3. Czytnik AccuScan III przeanalizuje pasek testowy a uzyskane rezultaty zostaną wyświetlone na ekranie oraz zapisane w pamięci czytnika. Uwagi 1. Należy upewnić się, że pasek testowy jest właściwie (całkowicie) umieszczony w adapterze. 2. Odczyty powinny być wykonane pomiędzy 6 a 7 minutą. Odczyty dokonane po czasie przekraczającym 7 minut mogą być niedokładne z powodu nadmiernego rozwinięcia paska testowego. 3. Pasek testowy musi być odczytywany w czytniku Reveal AccuScan III Reader. Charakterystyka testu Test Reveal Q+ for Fumonisin został opracowany do ilościowej analizy Fumonizyn. 1. Limit detekcji: 1,3 ppm 2. Zakres pomiarowy: 0,3 6 ppm UWAGA: aby oznaczyć zawartość Fumonizyn na poziomie przekraczającym 6 ppm należy skontaktować się z serwisem technicznym. Zwalidowane matryce 1. Kukurydza

8 Serwis klienta Noack Polen Sp. z o.o., ul. Królowej Marysieńki 50, Warszawa, Tel , fax , Dostępne informacje MSDS Materiały dotyczące bezpieczeństwa dla tego testu i wszystkich testów Neogenu są dostępne na stronie Gwarancja Neogen nie daje żadnych gwarancji na żaden sposób, również wykorzystania lub wprowadzania, z wyjątkiem materiału, z którego produkty są wykonane, które mają standardową jakość. Jeżeli jakiekolwiek materiały są wadliwe, Neogen dostarczy produkt zastępczy. Kupujący ponosi całkowite ryzyko i odpowiedzialność za wyniki wynikające z użycia tego produktu. Nie ma gwarancji sprzedawalności tego produktu, zdolności użytkowej do różnych celów. Neogen nie powinien być odpowiedzialny za żadne uszkodzenia, włączając specjalne lub wynikające, lub koszty wynikające bezpośrednio lub pośrednio ze stosowania produktu.