QUANTA Flash β2gp1 IgM Reagents Do diagnostyki In Vitro

Transkrypt

1 QUANTA Flash β2gp1 IgM Reagents Do diagnostyki In Vitro Przeznaczenie W pełni zautomatyzowany test immunologiczny do półilościowego pomiaru przeciwciał IgM przeciwko β2 glikoproteinie-1 (β2gp1) w osoczu ludzkim z cytrynianem i surowicy w urządzeniu BIO-FLASH jako pomoc w diagnostyce zaburzeń płytkowych związanych z pierwotnym i wtórnym zespołem antyfosfolipidowym (APS), w przypadku wspólnego stosowania z innymi wynikami laboratoryjnymi i klinicznymi. Podsumowanie i wyjaśnienie testu Przeciwciała przeciwko β2 glikoproteinie-1 (ß2GP1) należą do heterogenicznej rodziny przeciwciał antyfosfolipidowych (apl), które są autoprzeciwciałami skierowanymi przeciwko fosfolipidom anionowym lub kompleksom białkowo-fosfolipidowym. Długotrwale podniesione poziomy przeciwciał apl wiążą się z poniesionym ryzykiem zakrzepicy naczyń oraz komplikacji położniczych. To powiązanie jest znane jako zespół antyfosfolipidowy (APS) wg klasyfikacji wprowadzonej przez Harrisa w 1987 r. 1. Badania mające na celu określenie przeciwciał IgM i IgG przeciwko ß2GP1, przeciwciał IgG i IgM przeciwko kardiolipinie (acl) oraz przeciwciał zwanych antykoagulantem tocznia są badaniami apl zdefiniowanymi w zaktualizowanej klasyfikacji przez Międzynarodowy komitet diagnostyki APS na zjeździe, który odbył się w 2006 r. w Sydney (Australia) 2,3. Badania przeciwko β2gp1 oraz acl zawierają ludzką β2 glikoproteinę- 1 (β2gp1) w fazie stałej. β2 glikoproteina-1, również nazywana apolipoproteiną H, jest występującą w osoczu glikoproteiną o ciężarze 44 kda o 5 domenach. Piąta domena zawiera zgrupowanie dodatnio naładowanych aminokwasów, które odpowiadają za wiązanie fosfolipidów anionowych. Mechanizm rozpoznawania przez przeciwciała antyfosfolipidów i-β2gp1 oraz acl przeciwciał β2gp1 jest nieznany. Powstały dwie główne teorie: pierwsza znana jako teoria dimeryzacji zakłada, że jedno przeciwciało musi wiązać dwa molekuły β2gp1, aby uzyskać podwyższoną awidność 4, a druga teoria ukrytych epitopów zakłada, że epitop wiążący antyfosfolipid przeciw β2gp1 i acl jest eksponowany tylko wtedy, gdy β2gp1 wiąże ujemnie naładowaną powierzchnię lub ujemne molekuły, takie jak kardiolipina 5,6. Ten epitop znajduje się w domenie I 7. Zasada badania Test QUANTA Flash β2 glikoproteiny-1 IgM jest chemiluminescencyjnym dwustopniowym testem immunologicznym z zastosowaniem cząstek magnetycznych pokrytych ludzką oczyszczoną β2gp1, która wychwytuje z próbki przeciwciała antyfosfolipidowe przeciwko β2gp1, jeśli w niej występują. Po inkubacji, magnetycznej separacji i etapie płukania, środek śledzący składający się z przeciwciała IgM przeciwludzkiego znakowanego izoluminolem, jest dodawany i może związać się z przechwyconymi cząstkami IgM przeciwko β2gp1. Po drugiej inkubacji, magnetycznej separacji oraz płukaniu, dodawane są odczynniki, które inicjują reakcję luminescencji, a wyemitowane światło jest mierzone jako względne jednostki światła (RLU) za pomocą systemu optycznego BIO-FLASH. Jednostki RLU są bezpośrednio proporcjonalne do stężenia anty-β2gp1 IgM w próbce. Test QUANTA Flash β2gp1 IgM wykorzystuje metodę redukcji danych dopasowania 4-parametrowej krzywej logistycznej (4PLC) w celu wygenerowania krzywej wzorcowej. Krzywa wzorcowa jest wstępnie zdefiniowana i uzależniona od serii oraz jest przechowywana w urządzeniu, wg kodu kreskowego wkładu. Dzięki pomiarowi kalibratorów wstępnie zdefiniowana krzywa wzorcowa jest przekształcana w nową, krzywą roboczą 4PLC zależną od urządzenia. Wartości stężenia kalibratorów są zawarte w kodach kreskowych probówki z kalibratorem. 1

2 Odczynniki Elementy składowe zestawu β2gp1 IgM: 1. Wkład z odczynnikiem QUANTA Flash β2gp1 IgM zawierający następujące odczynniki. Odczynniki znajdują się w buforze fosforanowym lub boranowym, zawierającym białko proste surowicy bydlęcej, ludzkie ß2GP1, mysie przeciwciała monoklonalne IgM, stabilizatory oraz konserwanty: a. 1 fiolka zawiesiny cząstki magnetycznej opłaszczonej oczyszczonym ludzkim ß2GP1. b. 1 fiolka buforu testowego. c. 1 fiolka środka śledzącego składającego się z ludzkiego przeciwciała IgM oznaczonego izoluminolem. d. 1 fiolka rozcieńczalnika do próbek używanego do regularnego wstępnego rozcieńczania próbki i automatycznego rozcieńczania w ponowieniu testu. 2. Fiolka z kalibratorem 1 ß2GP1 IgM, zawierająca: 1 x probówka 1 ml z kodem kreskowym i roztworem z przeciwciałami IgM przeciwko ß2GP1 w buforze fosforanowym zawierającym albuminę surowicy bydlęcej, stabilizatory i konserwanty. 3. Fiolka z kalibratorem 2 ß2GP1 IgM, zawierającym: 1 x probówka 1 ml z kodem kreskowym i roztworem z przeciwciałami IgM przeciwko ß2GP1 w buforze fosforanowym zawierającym albuminę surowicy bydlęcej, stabilizatory i konserwanty. Kalibratory są uzależnione od serii i nie można ich używać z innymi seriami odczynników. Ostrzeżenia i środki ostrożności 1. Materiał pochodzenia ludzkiego w tym produkcie został przetestowany zgodnie z metodami zatwierdzonymi przez FDA i stwierdzono brak reakcji dla antygenu powierzchniowego zapalenia wątroby typu B (HBsAg), przeciwciał przeciwko HCV oraz HIV1 i HIV2. Należy obchodzić się jak z potencjalnie zakaźnym materiałem Wszystkie odczynniki zawierają mniej niż 0,1% azydku sodu, który może tworzyć wybuchowe azydki w metalowych instalacjach kanalizacyjnych. Stosować odpowiednie procedury utylizacji. 3. Unikać kontaktu ze skórą i oczami (S 24/25). Nie wylewać do kanalizacji (S 29). Nosić odpowiednią odzież ochronną (S 36). 4. Środek szkodliwy w przypadku połknięcia (R 22). W razie połknięcia należy zwrócić się o pomoc medyczną (S 46). 5. Ten produkt jest przeznaczonych do zastosowań diagnostycznych in vitro. Warunki przechowywania Nieotwarte odczynniki oraz kalibratory są stabilne aż do daty ważności podanej na wkładzie i etykietach probówki, jeśli produkt jest przechowywany w temperaturze 2 8 C. Nie zamrażać. 1. Otwarte wkłady z odczynnikami należy przechowywać wewnątrz urządzenia. Oprogramowanie urządzenia BIO-FLASH monitoruje datę przydatności znajdującego się wewnątrz urządzenia wkładu oraz serii wkładu z odczynnikiem. System nie pozwala na użycie wkładu, którego termin ważności upłynął. 2. Kalibrator ß2GP1 IgM 1 i 2 stabilność w urządzeniu po otwarciu systemu BIO-FLASH wynosi 3,5 godziny. Aby zapewnić optymalną stabilność, należy wyjąć kalibratory z systemu od razu po kalibracji i przechowywać je w temperaturze 2 8 C, zamknięte, w oryginalnej fiolce. Pobieranie próbek Osocze: Dziewięć części świeżo pobranej krwi żylnej jest umieszczanych w jednej części trisodu cytrynianu. Więcej instrukcji dotyczących pobierania, obsługi i przechowywania próbek można znaleźć w dokumencie CLSI H21-A5 9. Rozmrażać próbki szybko w temperaturze 37 C. Po rozmrożeniu badanie musi być przeprowadzone w ciągu 2 godzin. Surowica: Po pobraniu surowica powinna być oddzielona od skrzepu. Należy postępować zgodnie z zaleceniami dokumentacji CLSI H18-A4 w zakresie warunków przechowywania próbek 10. Przed testowaniem wirować próbki zawierające widoczne cząstki. 2

3 Badanie Dostarczone materiały 1 Wkład z odczynnikiem QUANTA Flash β2gp1 IgM 1 Kalibrator QUANTA Flash β2gp1 IgM 1 1 Kalibrator QUANTA Flash β2gp1 IgM 2 Wymagane materiały nie dołączone do zestawu Urządzenie BIO-FLASH z obsługującym je komputerem Układ płuczący BIO-FLASH (nr części: ) Wyzwalacze BIO-FLASH (Numer części: ) Kuwetki BIO-FLASH (Numer części: ) Kontrole QUANTA Flash β2gp1 IgM (nr części: ) Stosowanie analizatora chemiluminescencyjnego BIO-FLASH 1. Szczegółowe instrukcje dotyczące pracy z analizatorem chemiluminescencyjnym i oprogramowaniem BIO-FLASH można znaleźć w podręczniku użytkownika dołączonym do systemu BIO-FLASH. Dodatkowe informacje i pomoc związaną z wykrywaniem i usuwaniem usterek w testach można uzyskać, kontaktując się z działem pomocy technicznej firmy INOVA Diagnostics, Inc. dostępnym pod adresem i numerem telefonu podanym na końcu tej instrukcji. 2. W celu opróżnienia zbiornika na odpady stałe należy otworzyć szufladkę na odpady. Wyjąć zbiornik na odpady stałe i zutylizować w odpowiedni sposób. Włożyć na powrót zbiornik na odpady stałe, zamknąć szufladkę na odpady i kliknąć Tak w oknie Opróżnij szufladkę na odpady. 3. Aby wymienić wyzwalacze, należy kliknąć przycisk Wykaz materiałów masowych F9 (na górze po prawej stronie). a. Na ekranie Materiały masowe wykaz kliknąć przycisk Wyzwalacze po lewej stronie. Pokaże się nowe okno zatytułowane Dodaj wyzwalacze Wyjmij stare butelki. b. Otworzyć i wyjąć szufladkę na odpady urządzenia BIO-FLASH. Zutylizować wszelkie kuwetki znajdujące się w szufladce na odpady. Kliknąć opcję Tak w oknie Opróżnij szufladkę na odpady. Wyjąć butelki z wyzwalaczami z uchwytów i kliknąć przycisk Dalej. Odkręcić stare butelki z wyzwalaczami i zastąpić je nowymi wyzwalaczami. Czynności należy wykonywać po kolei i odpowiednio dopasować oznaczone kolorem zakrętki (biały do białego, czerwony do czerwonego). c. Należy stosować się do instrukcji podanych w nowym oknie Dodaj wyzwalacze Dodaj butelkę z 2 wyzwalaczem. Po zaakceptowaniu kodu kreskowego, należy umieścić wyzwalacz 2 w uchwycie oznaczonym kolorem białym. Kliknąć przycisk Dalej. d. Należy stosować się do instrukcji podanych w oknie Dodaj wyzwalacze Dodaj butelkę z 1 wyzwalaczem. Po zaakceptowaniu kodu kreskowego należy umieścić wyzwalacz 1 w uchwycie oznaczonym kolorem czerwonym. Kliknąć Koniec. Włożyć z powrotem szufladkę na odpady i zamknąć ją. 4. Aby wymienić zbiornik układu płuczącego, należy kliknąć przycisk Wykaz materiałów masowych F9 (na górze po prawej stronie). Na ekranie Materiały masowe wykaz kliknąć przycisk układ płuczący. układ płuczący. W nowym oknie Dodaj układ płuczący Wyjmij butelki kliknąć Dalej. Należy stosować się do instrukcji podanych w owym oknie Dodaj układ płuczący Dodaj butelkę. Po zaakceptowaniu kodu kreskowego kliknąć Koniec, jeśli będzie to konieczne. 5. W celu opróżnienia pojemnika na odpady płynne, na ekranie Materiały masowe wykaz należy kliknąć przycisk Odpady płynne. Usunąć i zutylizować odpady płynne. Kliknąć przycisk Dalej. Po zaakceptowaniu kodu kreskowego należy kliknąć Koniec. 3

4 Sposób przygotowania Przygotowanie wkładu z odczynnikiem Za pierwszym razem, gdy ma być użyty wkład z odczynnikiem, należy wykonać poniższe czynności, aby prawidłowo zainstalować wkład w urządzeniu BIO-FLASH.Uwaga: Nie używać wkładu z odczynnikiem w przypadku zauważenia jakichkolwiek oznak uszkodzenia. Wkład QUANTA Flash β2gp1 IgM: Mikrocząstki osiadają podczas dostawy i przechowywania i wymagają wymieszania. 1. Za pierwszym razem, gdy używany jest wkład, należy delikatnie obrócić wkład 30 razy, unikając powstania piany. Sprawdzić, czy mikrocząstki utworzyły zawiesinę. Jeśli mikrocząstki nie utworzyły zawiesiny, należy kontynuować odwracanie wkładu, aż powstanie pełna zawiesina mikrocząstek. Jeśli nie uda się odtworzyć zawiesiny mikrocząstek, NIE WOLNO UŻYWAĆ WKŁADU. 2. Po utworzeniu zawiesiny mikrocząstek, umieścić wkład z odczynnikiem na stabilnej powierzchni, aby usunąć czerwony pasek zabezpieczający. Przytrzymać wkład z odczynnikiem w jednej dłoni. Drugą ręką zdecydowanym ruchem chwycić czerwony pasek zabezpieczający z tyłu wkładu z odczynnikiem i wyciągnąć go do końca. 3. Nacisnąć dwa paski po bokach przebijającej zatyczki (część szara) i nacisnąć w dół górną część wkładu z odczynnikiem, aż zatrzaśnie się we właściwej pozycji zablokowania. Paski nie powinny być widoczne. NIE WOLNO ODWRACAĆ OTWARTEGO WKŁADU.. 4. Umieścić ostrożnie wkład z odczynnikiem w dowolnym wolnym gnieździe karuzeli na odczynniki urządzenia BIO-FLASH. Po umieszczeniu wkładu w karuzeli na odczynniki w urządzeniu odbywa się dodatkowe okresowe mieszanie mikrocząsteczek. Kalibracja badania 1. Każda nowa seria wkładu z odczynnikiem musi musi byś skalibrowana przed pierwszym użyciem. Oprogramowanie nie zezwoli na wykorzystanie nowej serii, aż nie zostanie ona skalibrowana. Pełne instrukcje procedury można znaleźć w podręczniku użytkownika BIO-FLASH. 2. Kalibratory QUANTA Flash ß2GP1 IgM muszą być wymieszane przez delikatne wielokrotne odwracanie w celu zapewnienia homogeniczności kalibratora. Należy unikać powstawania piany. 3. Po zatwierdzeniu kalibracji skalibrowana seria wkładu z odczynnikiem jest gotowa do użycia. 4

5 Programowanie i badanie próbek 1. Nacisnąć przycisk Lista działań na górze ekranu i wybrać przycisk Statywy na dole. 2. Wybrać statyw z próbkami do badania, zaznaczając nazwę tego statywu na ekranie lub skanując kod kreskowy za pomocą ręcznego skanera kodów kreskowych. Zeskanować lub wpisać nazwę próbki, wybrać typ próbki, typ pojemnika (probówka/kubeczek) i wybrać IgM_β2GP1 z panelu testu. Powtórzyć te kroki dla wszystkich próbek. 3. Umieścić próbki w wybranych pozycjach na stojaku na próbki i umieścić stojak w karuzeli na próbki urządzenia. 4. Gdy wszystkie wymagane substancje znajdą się w urządzeniu, na górze ekranu pojawi się zielona ikona start. Aby rozpocząć badanie, należy nacisnąć ikonę start. Kontrola jakości Kontrole testu QUANTA Flash β2gp1 IgM (sprzedawane oddzielnie INOVA, nr produktu ) obejmują kontrole wysokiego i niskiego poziomu β2gp1 IgM. W broszurze z instrukcjami na temat QUANTA Flash β2gp1 IgM Controls znajdują się szczegółowe instrukcje dotyczące sposobu wprowadzania w oprogramowaniu wartości jednostek oraz standardowego odchylenia każdej kontroli, oraz informacje na temat procedury przeprowadzenia kontroli. Każde laboratorium powinno opracować własne średnie i standardowe odchylenie oraz powinno ustalić program kontroli jakości do monitorowania badań laboratoryjnych. Zaleca się przeprowadzanie kontroli raz na 8-godzinną zmianę, gdy używane jest badanie. W dokumencie Westgard et al można znaleźć informacje na temat identyfikacji i rozwiązywania problemów związanych z sytuacjami poza kontrolą 12. Identyfikowalność Zgłoszone wartości zostały ustalone na podstawie wielu serii badań z systemem BIO-FLASH, przy użyciu określonych serii odczynników oraz zgodnie z wewnętrznymi standardami. Zgodnie z zaleceniami Międzynarodowego komitetu diagnostyki APS, na zjeździe, który odbył się w Sydney 2, jednostki wewnętrznego standardu dla przeciwciał IgM przeciwko β2gp1 zostały zestawione z referencyjnym monoklonalne przeciwciałem EY2C9 13. Matryca próbek Dwadzieścia osiem próbek z cytrynianem/osoczem/surowicą zostało przeanalizowanych za pomocą badania β2gp1 IgG. Wartości stężenia zostały porównane przy pomocy regresji Passing i Bablok, przy użyciu wartości próbek osocza jako wartości referencyjnych (oś X) oraz współczynnika korelacji obliczonego za pomocą korelacji Pearsona. Nachylenie i przecięcie wyniosły odpowiednio 0,99 i 0,02, a korelacja (r) 0,996. Obliczanie wyników Dla każdej nowej serii testu QUANTA Flash β2gp1 IgM tworzona jest nowa 5-punktowa krzywa wzorcowa. Ta czteroparametryczna krzywa logarytmiczna zakodowana jest w kodzie paskowym każdego wkładu z odczynnikiem. Po skalibrowaniu wkładu z odczynnikiem do przekształcenia jednostek RLU na jednostki chemiluminescencji CU zostanie wykorzystana krzywa robocza właściwa dla urządzenia. Interpretacja wyników Test QUANTA Flash Assay może wykryć małe różnice w populacjach pacjentów. Każde laboratorium powinno ustalić własny normalny zakres na podstawie własnych kontroli i populacji pacjentów, zgodnie z indywidualnymi ustalonymi procedurami. Zalecane jest, aby wyniki raportowane przez laboratorium zawierały oświadczenie: Poniższe wyniki uzyskano przy zastosowaniu immunologicznego testu chemiluminescencji INOVA QUANTA Flash β2gp1 IgM. Nie można stosować zamiennie wartości uzyskanych przy zastosowaniu metod testowych innych producentów. Rzędu wielkości poziomów raportowanego autoprzeciwciała IgM nie można zawsze skorelować z mianem punktu końcowego. Uwaga: Urządzenie BIO-FLASH automatycznie uwzględnia różnice w roztworze pomiędzy próbkami osocza i surowicy. Zaraportowane wartości próbek surowicy nie muszą być poprawiane o współczynnik. Więcej informacji można znaleźć w podręczniku użytkownika BIO-FLASH. 5

6 Ograniczenia badania Ostatecznej diagnozy klinicznej nie można przygotować na podstawie pozytywnego wyniku β2gp1 IgM. Należy również uwzględnić wyniki kliniczne oraz historię pacjenta. Jeśli w przypadku obecności wskazań klinicznych zostanie stwierdzony wynik negatywny β2gp1 IgM, muszą zostać przeprowadzone inne badania apl, zgodnie z zaleceniami wg uaktualnionych kryteriów klasyfikacji Międzynarodowego komitetu w ramach diagnozy APS, na spotkaniu, które odbyło się w 2006 r 2. Wyniki ß2GP1 IgM w BIO-FLASH nie są modyfikowane przez hemoglobinę do 500 mg/dl, bilirubinę do 18 mg/dl, trójglicerydy do 1250 mg/dl, heparynę (LMW i niefrakcjonowaną) do 2 IU/ml oraz czynnik reumatoidalny (RF) do 500 IU/ml. W badaniach reaktywności krzyżowej 10 pozytywnych próbek każdego z następujących przypadków zostało przeprowadzonych przy użyciu badania QUANTA Flash ß2GP1 IgM: czynnik reumatoidalny, przeciwciała przeciwjądrowe (ANA) oraz kiła (wyniki pozytywne w przypadku szybkiego testu reaginowego w osoczu, RPR). To badanie nie zostało zatwierdzone do stosowania w przypadku populacji dziecięcej. Grupa pacjentów N n (pozytywne) % pozytywnych IgM przeciwko ß2GP1 RF ,0% ANA ,0% RPR ,0% Spodziewane wartości Badanie normalnego zakresu zostało przeprowadzone przy użyciu próbek dawców osocza z cytrynianem z banku krwi, od zdrowych dorosłych osób, które zostały wykonane przy użyciu odczynników QUANTA Flash ß2GP1 IgG oraz kalibratorów. Na podstawie zaleceń Międzynarodowego komitetu w Sydney 2, próg pozytywnych przeciwciał ß2GP1 IgM został ustanowiony na poziomie 99. percentyla. Układ N Normalny zakres górnego limitu (CU) BIO-FLASH ,0 W związku z występowaniem wielu zmiennych, które mogą wpływać na wyniki, każde laboratorium powinno ustanowić własny normalny zakres. Porównanie metody z zastosowaniem urządzenia predykatu Próbki używane w badaniach klinicznych, które mieściły się w porównywanym zakresie testowym metod, były mierzone w ramach badania Porównanie metody za pomocą dostępnego w handlu badania ELISA zatwierdzonego przez FDA. Procent pozytywnych, negatywnych i ogólna zgodność: Porównanie metody (N = 205) Badanie ELISA Procentowa zgodność (95% ufności) QUANTA Flash ß2GP1 IgM CIA Pozytywne Negatywne Łącznie Pozytywne Negatywne Łącznie Procentowa zgodność wyników pozytywnych = 63,3% (48,5%-77,3%) Procentowa zgodność wyników negatywnych = 96,8% (92,8%-99,0%) Procentowa zgodność wyników łącznie = 89,3% (84,2%-93,2%) Precyzja, korelacja i wyniki badania klinicznego zostały osiągnięte za pomocą swoistych serii odczynników i kontroli. 6

7 Swoistość i wrażliwość kliniczna Badanie wynikowe zostało przeprowadzone na 321 zamrożonych osoczach z cytrynianem. Te osocza pochodziły z 6 różnych grup, w tym również od wybranych osób zdiagnozowanych jako pierwotne APS (PAPS), wtórne APS (SAPS), toczeń rumieniowaty układowy (SLE), ale nie od APS ani SLE wg standardowych obiektywnych testów. Piątą grupą byli pacjenci ze schorzeniami sercowonaczyniowymiale nie zostali sklasyfikowani w poprzednich czterech grupach. Została również uwzględniona grupa zdrowych osób. Poniżej zsumowane wyniki opierają się na wartości granicznej 20 CU: Grupa pacjentów N n (pozytywne) % Pozytywne PAPS ,4% SAPS ,0% SLE ,7% Typu SLE 5 0 0,0% Inne ,7% Normalne ,0% Uwzględniając pozytywne wyniki w grupach pacjentów PAPS i SAPS jako rzeczywiście pozytywne czułość kliniczna, swoistość i ogólna zgodność procentowa wynosiły: Układ N Czułość (95% CI) Swoistość (95% CI) % Zgodność (95% CI) BIO-FLASH ,3% (20,3%-39,8%) 95,2% (91,6%-97,6%) 76,3% (71,3%-80,9%) Precyzja i powtarzalność Wszystkie przedstawione dane zostały uzyskane przy użyciu próbek osocza z cytrynianem. W ramach serii i łącznie (od serii do serii i od dnia do dnia) precyzja została ustalona w ramach wielu serii. BIO-FLASH Średnia (CU) CV% (w ramach serii) CV% (razem) Niska kontrola ß2GP1 IgM 4,32 3,4% 6,4% Wysoka kontrola ß2GP1 IgM 63,0 2,4% 4,3% Próbka osocza A β2gp1 IgM 11,0 3,6% 5,8% Próbka osocza B β2gp1 IgM 13,6 4,5% 8,3% Próbka osocza C β2gp1 IgM 16,3 2,7% 6,6% Próbka osocza D β2gp1 IgM 91,9 2,4% 5,7% Próbka osocza E β2gp1 IgM 302 3,0% 5,2% Próbka osocza F β2gp1 IgM 510 4,1% 6,0% Granice wykrywania, zakresy liniowe i raportowane Dolny limit wykrywania: Układ BIO-FLASH 1,1 CU Liniowość: Układ BIO-FLASH 1,1-841 CU Gdy zostanie uruchomiona funkcja ponownego przebiegu, urządzenie wykonuje automatyczne rozcieńczenie i koryguje końcowy rezultat przy współczynniku rozcieńczenia (20x), w ten sposób rozszerzając zakres testu do CU. Efekt prozone nie ma wpływu na badanie. Protokół badania obejmuje etap płukania po inkubacji próbki, który wyklucza efekt prozone. Próbki powyżej 841 CU przetestowane podczas badania klinicznego zainicjowały ponowny przebieg. 7

8 QUANTA Flash β2gp1 IgM Controls Do diagnostyki In Vitro Przeznaczenie Kontrole QUANTA Flash β2gp1 IgM są przeznaczone do celów kontroli jakości badań QUANTA Flash β2gp1 IgM przeprowadzanych przy użyciu urządzenia BIO-FLASH. Podsumowanie i zasada badania Przeciwciała przeciwko ß2 glikoproteinie-1 (ß2GP1) należą do heterogenicznej rodziny przeciwciał antyfosfolipidowych (apl), które są autoprzeciwciałami skierowanymi przeciwko fosfolipidom anionowym lub kompleksom białkowo-fosfolipidowym. Długotrwale podniesione poziomy przeciwciał apl wiążą się z poniesionym ryzykiem zakrzepicy naczyń oraz komplikacji położniczych. To powiązanie jest znane jako zespół antyfosfolipidowy (APS) wg klasyfikacji wprowadzonej przez Harrisa w 1987 r. 1. Badania mające na celu określenie przeciwciał IgM i IgG przeciwko ß2GP1, przeciwciał IgG i IgM przeciwko kardiolipinie (acl) oraz przeciwciał zwanych antykoagulantem tocznia są badaniami apl zdefiniowanymi w zaktualizowanej klasyfikacji przez Międzynarodowy komitet diagnostyki APS na zjeździe, który odbył się w 2006 r. w Sydney (Australia) 2,3. Niska i wysoka kontrola ß2GP1 IgM jest przygotowywana w ramach dedykowanego procesu i zawiera różne stężenia przeciwciał IgM przeciwko ludzkiej ß2glikoproteinie-1. Niska kontrola ß2GP1 IgM: Kontrola ma za zadanie posłużyć do oceny precyzji i dokładności testu przy normalnym poziomie przeciwciał IgM przeciwko ß2glikoproteinie-1 lub poziomie zbliżonym do poziomu granicznego. Wysoka kontrola ß2 GP1 IgM: Kontrola ma za zadanie ocenić precyzję i dokładność testu przy nieprawidłowych poziomach przeciwciał IgM przeciwko ß2GP1. W celu zapewnienia kompletnego programu kontroli jakości zalecane jest stosowanie obu kontroli. Odczynniki 1. iska kontrola przeciwciał IgM przeciwko ß2GP1 testu QUANTA Flash 3 x 1 ml, probówki z kodem kreskowym z roztworem z przeciwciałami IgM przeciwko ß2GP1 w buforze fosforanowym zawierającym albuminę surowicy bydlęcej, stabilizatory i konserwanty. 2. Wysoka kontrola przeciwciał IgM przeciwko ß2GP1 testu QUANTA Flash 3 x 1 ml, probówki z kodem kreskowym z roztworem z przeciwciałami IgM przeciwko ß2GP1 w buforze fosforanowym zawierającym albuminę surowicy bydlęcej, stabilizatory i konserwanty. Ostrzeżenia i środki ostrożności Materiał pochodzenia ludzkiego w tym produkcie został przetestowany zgodnie z metodami zatwierdzonymi przez FDA i stwierdzono brak reakcji dla antygenu powierzchniowego zapalenia wątroby typu B (HBsAg), przeciwciał przeciwko HCV oraz HIV1 i HIV2. Należy obchodzić się jak z potencjalnie zakaźnym materiałem 8. Unikać kontaktu ze skórą i oczami (S 24/25). Nie wylewać do kanalizacji (S 29). Nosić odpowiednią odzież ochronną (S 36). Ten produkt przeznaczony jest do zastosowań diagnostycznych in vitro. 8

9 Warunki przechowywania 1. Wszystkie nieotwarte kontrole przechowywać w temperaturze 2 8 C. Nie zamrażać. Odczynniki są stabilne do daty ważności, pod warunkiem, że są przechowywane i używane zgodnie z instrukcjami. 2. Te kontrole są przeznaczone do przeprowadzenia 15 kalibracji. Na etykiecie każdej probówki z kontrolą znajduje się szereg 15 pól, które można skreślać, aby śledzić ile razy kontrola została użyta. Całkowity czas przez jaki probówki z kontrolą mogą pozostawać otwarte w urządzeniu wynosi 2,5 godz. lub 10 minut na wykorzystanie. Jeśli kontrole pozostaną w urządzeniu otwarte dłużej niż 2,5 godz., wówczas należy je wyrzucić. Użytkowanie tej samej probówki z kontrolą ponad 15 razy i/lub przez czas dłuższy niż 2,5 godz. łącznie może doprowadzić do uzyskania błędnych wyników. 3. Aby zapewnić odpowiednią stabilność, należy usunąć kontrole z systemu natychmiast po zbadaniu próbki i należy przechowywać je w temperaturze 2-8 o C w zamkniętej oryginalnej fiolce. Badanie Tworzenie nowych materiałów QC do badania ß2GP1 IgM 1. Przed pierwszym użyciem kontroli QUANTA Flash badania ß2GP1 IgM w urządzeniu, do oprogramowania należy wprowadzić nazwę, serię, liczbę powieleń, datę przydatności do użycia, wartość (lub dawkę) oraz informację o docelowym odchyleniu standardowym. 2. Na ekranie Rejestr stanu urządzenia kliknąć przycisk strzałki Wybierz więcej opcji Ctrl-M ( ). Kliknąć przycisk Nowy materiał QC. 3. Do każdego zestawu kontroli dołączony jest arkusz z danymi dotyczącymi tej właśnie serii. W pierwszej kolejności należy wprowadzić do oprogramowania nazwę, numer serii i datę ważności. Następnie kliknąć przycisk Dodaj badanie. W nowym oknie należy zaznaczyć opcję Pokaż wszystkie badania. Wybrać badanie ß2GP1 IgM z listy i kliknąć opcję Dodaj. Na końcu należy wprowadzić docelową dawkę i docelowe odchylenie SD. Kliknąć opcję Zapisz. Procedurę tę należy przeprowadzić dla obu kontroli. Tworzenie nowej serii dla istniejących materiałów QC 1. Przed pierwszym użyciem nowej serii kontroli QUANTA Flash ß2GP1 IgM do oprogramowania należy wprowadzić imię, nazwisko, serię, datę przydatności do użycia, wartość (lub dawkę) oraz informację o docelowym odchyleniu standardowym. 2. Na ekranie Rejestr stanu urządzenia kliknąć przycisk strzałki Wybierz więcej opcji Ctrl-M ( ). Wybrać opcję QC Ctrl-F2. Zaznaczyć test IgM_ß2GP1 w kolumnie po lewej stronie. Następnie zaznaczyć odpowiedni materiał kontroli po prawej stronie ( ß2GP1ML, który odpowiada niskiej kontroli lub ß2GP1MH, który odpowiada wysokiej kontroli). Kliknąć przycisk Nowa seria QC. 3. Do każdego zestawu kontroli dołączony jest arkusz z danymi dotyczącymi tej właśnie serii. Wprowadzić informacje z tego arkusza do oprogramowania. Powinno to obejmować nazwę, numer serii, datę przydatności do użycia, docelową stężenie oraz docelowe odchylenie standardowe. W razie potrzeby kliknąć przycisk Dodaj badanie. W nowym oknie należy zaznaczyć opcję Pokaż wszystkie badania. Wybrać badanie ß2GP1 IgM z listy i kliknąć opcję Dodaj. Kliknąć opcję Zapisz. Procedurę tę należy przeprowadzić dla obu kontroli. 4. Zalecane jest, aby kontrole QUANTA Flash ß2GP1 IgM wykorzystywać jeden raz na każdą 8-godzinną zmianę, kiedy ma zostać użyty test. 5. Aby upewnić się, że kontrole są homogeniczne, należy każdą z nich wymieszać. Należy unikać powstawania piany, jako że pęcherzyki mogą zaburzać wykrywanie poziomu płynu przez urządzenie. Zdjąć zatyczkę z każdej probówki zawierającej kontrolę i umieścić obie z nich w stojaku na próbki, przy czym kody kreskowe muszą skierowane być przodem do szczelin w stojaku. Umieścić stojak na próbki w karuzeli na próbki urządzenia BIO-FLASH i zamknąć drzwi. Urządzenie odczyta kody kreskowe na probówkach zawierających kontrole i zidentyfikuje potrzebny wkład z odczynnikiem. Szczegółowe instrukcje dotyczące pracy z analizatorem chemiluminescencyjnym i oprogramowaniem BIO-FLASH można znaleźć w podręczniku użytkownika dołączonym do systemu BIO-FLASH. 9

10 Identyfikowalność Zgłoszone wartości zostały ustalone na podstawie wielu serii badań z systemem BIO-FLASH, przy użyciu określonych serii odczynników oraz zgodnie z wewnętrznymi standardami. Wyniki przeciwciał IgM przeciwko ß2GP1 są raportowane w jednostkach chemiluminescencji (CU). Te jednostki zostały określone przez przypisanie 20 CU do reakcji górnego limitu zakresu prawidłowości (ULNR) dla 250 osoczy z dodatkiem cytrynianu z banku krwi (99. percentyl). Zgodnie z zaleceniami Międzynarodowego komitetu diagnostyki APS, na zjeździe, który odbył się w Sydney 2, jednostki wewnętrznego standardu dla przeciwciał IgM przeciwko ß2GP1 zostały zestawione z referencyjnym monoklonalnym przeciwciałem EY2C9 13. Ograniczenia Te produkty są opracowywane jako kontrole do monitorowania działania badania QUANTA Flash przeciwciał IgM przeciwko ß2GP1. Te kontrole podlegają ograniczeniom systemu badań. Odchylenia mogą wskazywać na możliwe problemy z jednym lub kilkoma elementami w systemie testowym. 10

11 Piśmiennictwo 1. Harris EN: Syndrome in the black swan. Br.J. Rheumatol 1987, 26: Miyakis S, Lockshin MD, Atsumi T, Branch DW, Brey RL, Cervera R, Derksen RH, de Groot PG, Koike T, Meroni PL, Reber G, Shoenfeld Y, Tincani A, Vlachoyiannopoulos PG, Krilis SA : International consensus statement on an update of the classification criteria for definite antiphospholipid syndrome (APS). J Thromb Haemost 2006, 4: Swadźba J, Iwaniec T, Szczeklik A, Musiał J: Revised classification criteria for antiphospholipid syndrome and the thrombotic risk in patients with autoimmune diseases. J Thromb Haemost 2007, 5: Lutters BC, Meijers JC, Derksen RH, Arnout J, de Groot PG: Dimers of beta 2-glycoprotein I mimic the in vitro effects of beta 2-glycoprotein-anti-beta 2-glycoprotein antibody complexes. J Biol Chem 2001, 276: Kuwana M, Matsuura E, Kobayashi K, Okazaki Y, Kaburaki J, Ikeda Y, Kawakami Y: Binding of ß2- glycoprotein-i to anionic phospholipids facilitates processing and presentation of a cryptic epitope that activates pathogenic autoreactive T-cells. Blood 2005, 105: Wang SX, Sun YT, Sui SF: Membrane-induced conformational change in human apolipoprotein H. Biochem J 2000, 348: de Laat B, Derksen RHWM, van Lummel M, Pennings MTT, de Groot PG: Pathogenic anti-ß2- glycoprotein-i antibodies recognize domain I of ß2-glycoprotein-I only after a conformational change. Blood 2006, 107: Richmond JY, McKinney RW eds.: Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. U.S. Dept. of Health and Human Services, Public Health Service, 4th Edition; CLSI: Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation and Molecular Hemostasis Assays; Approved Guideline-Fifth Edition. CLSI Document H21-A5. Clinical and Laboratory Standards Institute, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19087, USA, CLSI: Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens; Approved Guideline- Third Edition. CLSI Document H18-A4. Clinical and Laboratory Standards Institute, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19087, USA, Zucker S, Cathey MH, West B: Preparation of Quality Control Specimens for Coagulation. Am J Clin Pathol 1970, 53: Westgard JO, Barry PL: Cost-Effective Quality Control: Managing the Quality and Productivity of Analytical Process. AACC Press; Ichicawa K, Khamashta MA, Koike T, Matsuura E, Hughes GR: ß2 Glycoprotein-I reactivity of monoclonal anticardiolipin antibodies from patients with the antiphospholipid syndrome. Arthritis and Rheumatism 1994, 37:

12 Zastosowane symbole Diagnostyczne urządzenia medyczne In vitro Przed użyciem należy zapoznać się z instrukcją Ograniczenia temperaturowe Nie wykorzystywać ponownie Zagrożenia biologiczne Kod serii Numer katalogowy Użyć do Producent Autoryzowany przedstawiciel Zawiera ilość wystarczającą do przeprowadzenia < n > testów Kontrola Kalibrator 1 Kalibrator 2 Papierowe pudełko nadaje się recyklingu Tą stroną do góry QUANTA Flash jest znakiem handlowym firmy INOVA Diagnostics Inc. BIO-FLASH jest zastrzeżonym znakiem handlowym firmy Biokit S.A

13 Dystrybutor: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA Stany Zjednoczone Ameryki Pomoc techniczna (tylko na terenie Stanów Zjednoczonych i Kanady) : Pomoc techniczna (poza terenem Stanów Zjednoczonych) : support@inovadx.com Autoryzowani przedstawiciele na terenie Unii Europejskiej: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Niemcy Tel.: Faks.: POL Luty 2014 Wersja 2 13