Współczesne metody chromatograficzne: Chromatografia cienkowarstwowa

Transkrypt

1 Ćwiczenie 2: Chromatografia dwuwymiarowa (TLC 2D) 1. Celem ćwiczenia jest zaobserwowanie rozdziału mieszaniny aminokwasów w dwóch układach rozwijających. Aminokwasy: Asp, Cys, His, Leu, Ala, Val (1% roztwory wodne) Eluent 1: n-butanol: kwas octowy: woda (4:1:1) Eluent 2: fenol: woda (3:1) Wizualizacja UV, następnie roztwór ninhydryny Próbkę nanosimy w narożniku płytki. Po rozwinięciu w eluencie 1 suszymy starannie płytkę, ponownie nanosimy próbkę w narożniku i rozwijamy płytkę w eluencie 2 tak, aby ścieżka rozwinięcia 1 stanowiła teraz linię startową. Płytkę suszymy (ostrożnie! fenol) i, po obejrzeniu w UV, wywołujemy roztworem ninhydryny. Obliczmy współczynniki R f (dla obu układów). Po porównaniu z płytka wzorcową i uwzględnieniu danych literaturowych wskazujemy, którego aminokwasu nie zawierała badana mieszanina.

2 Ćwiczenie 3: Metody wizualizacji 1. Celem ćwiczenia jest zaobserwowanie selektywności wizualizacji w zależności od stosowanego odczynnika. Leki przeciwbólowe i substancje czyste: aspiryna, kwas salicylowy, paracetamol, kofeina, witamina C (roztwory metanolowe) Eluent 1: octan butylu: chloroform: 85% HCOOH (60:40:20) Eluent 2: octan butylu: aceton: butanol: woda amoniakalna (50:40:30:10) Wizualizacja UV, wybrany odczynnik W1 UV 254 W2 pary jodu W3 1% wodny roztwór KMnO 4 W4 1% roztwór KMnO 4 w stężonym kwasie siarkowym W5 dwuchromian potasu W6 1% alkoholowy roztwór FeCl 3 W7 kwas siarkowy z aldehydem anyżowym (1 ml H 2 SO 4, 0,5 ml aldehydu w 50 ml kwasu octowego, ogrzewanie po spryskaniu) W 8 kwas siarkowy z waniliną (1 g w 100 ml stężonego kwasu, ogrzewanie) W9 stężony kwas azotowy Na 2 płytki nanosimy wzorce i analizę (X, środkowy tor), rozwijamy we wskazanych układach. Wysuszone płytki po obejrzeniu w UV wywołujemy wybranym odczynnikiem. Obliczmy współczynniki R f. Identyfikujemy X. Dodatkowo porównujemy metody wizualizacji (czułość, skuteczność).

3 Ćwiczenie 4a: Ekstrakcja flawonoidów 1. Celem ćwiczenia jest zaobserwowanie wpływu metody przygotowania próbki na wynik analizy. Analiza: suszone owoce aronii Ekstrakcja (wybór 3 różnych rozpuszczalników): X1 woda X2 5% HCl X3 5% NaOH X4 metanol X5 chloroform X6 toluen X7 octan etylu X8?? Eluent 1: octan etylu: HCOOH: CH 3 COOH: woda (75:2:3:20) Dwa suszone owoce macerujemy w probówce bagietką w ok. 1 ml wybranego rozpuszczalnika. Uzyskany roztwór nanosimy na płytkę. Po rozwinięciu oglądamy płytkę w świetle UV, zaznaczamy plamki. Umieszczamy płytkę w oparach amoniaku, obserwujemy zmiany barw. Proszę ocenić skuteczność ekstrakcji i wyjaśnić powód zmiany zabarwienia plamek po zastosowaniu amoniaku.

4 Ćwiczenie 4b: Nasycenie komory chromatograficznej (barwniki) 1. Celem ćwiczenia jest zaobserwowanie wpływu przygotowania komory chromatograficznej na wynik analizy. Analizowane substancje: barwniki według listy. Eluent (wybrany): metanol, eter dietylowy: metanol (9:1), chloroform: metanol (9:1) Warianty: zlewka + szalka, zlewka z paskiem bibuły (poniżej kontaktu z płytką) i szalką, zlewka zabezpieczona folią, otwarta zlewka. Proszę zaobserwować zmiany szybkości rozwijania płytek i maksymalne osiągane zwilżenie płytki w zależności od zastosowanej metody.

5 Ćwiczenie 4c: Analiza związku czynnego optycznie na impregnowanej płytce 1. Celem ćwiczenia jest zaobserwowanie rozdziału izomerów ibuprofenu. Płytka: standardowa płytka nasycona przez 10 minut roztworem chlorowodorku L-argininy (630 mg w 100 ml mieszaniny metanol-woda (9:1)), wysuszona i aktywowana Eluent: acetonitryl: metanol: woda (5:1:1), kropla kwasu octowego Na płytkę nanosimy różne ilości ekstraktu metanolowego ibuprofenu (roztwór nasycony). Wykonujemy analizę porównawczą na nieimpregnowanej płytce. Po rozwinięciu oglądamy płytkę w UV i wywołujemy ninhydryną. Oceniamy intensywnośc zabarwienia i efekt 8.

6 Ćwiczenie 4d: Dodatki do eluentów zwiększające selektywnośc. 1. Celem ćwiczenia jest zaobserwowanie rozdziału aminokwasów w obecności fruktozy. Eluent: 40% roztwór fruktozy w wodzie. Eluent kontrolny 1: woda Eluent kontrolny 2: n-butanol: kwas octowy: woda (4:1:1) Analizowane aminokwasy: Ala, Leu, Tyr, Val Po rozwinięciu płytek (różna szybkość!) i wywołaniu ninhydryną oceniamy wpływ fruktozy na rozdzielczość.

7 Ćwiczenie 4e: Zastosowanie wskaźników ph w wizualizacji. 1. Celem ćwiczenia jest zaobserwowanie wizualizacji kwasów karboksylowych z wykorzystaniem wskaźników ph. Kwasy karboksylowe: benzoesowy, ftalowy, 4-metylobenzoesowy, 4-hydroksynbenzoesowy, octowy. Eluent: toluen: pirydyna (85:15) Wskaźniki: zieleń bromokrezolowa, błękit bromotymolowy, czerwień metylowa. Po rozwinięciu płytki i ostrożnym wysuszeniu (wyciąg!!) nanosimy roztwór wybranego wskaźnika i oceniamy efekt. Zmianę zabarwienia barwników w zależności od ph warto sprawdzić na płytkach do analizy kroplowej.

8 Ćwiczenie 4f: Wpływ zakwaszenia eluentów na kształt plamek substancji o charakterze kwasowym. 1. Celem ćwiczenia jest zaobserwowanie wpływu obecności kwasów w eleuencie na kształt plamek analizowanych substancji. Substancje: kwas salicylowy, aspiryna, dowolny inny kwas aromatyczny Eluent 1: chlorofom: metanol (9:1) Eluent 2: chlorofom: metanol (9:1) + 1 kropla kwasu octowego Jak wyjaśnić różnice w kształcie plamek?