BACTEC MGIT 960 PZA Kit

Transkrypt

1 B BACTEC MGIT 960 PZA Kit do badania wra liwoœci Mycobacterium tuberculosis na dzia³anie czynników przeciwbakteryjnych L005486JAA(01) U Polski PRZEZNACZENIE Zestaw BACTEC MGIT 960 PZA jest to szybka jakoœciowa procedura do badania wra liwoœci Mycobacterium tuberculosis z hodowli na dzia³anie pirazynamidu (PZA). Zestaw BACTEC MGIT 960 PZA stosowany jest z systemem BACTEC MGIT. STRESZCZENIE I OBJAŒNIENIE Badanie wra liwoœci na dzia³anie czynników przeciwbakteryjnych jest cenne w celu odpowiedniego leczenia pacjentów choruj¹cych na gruÿlicê. GruŸlica leczona jest poprzez jednoczesne stosowanie wielu leków, do których zalicza siê równie lek przeciwpr¹tkowy pirazynamid. Istotne jest, aby przepisany antybiotyk wykazywa³ odpowiedni¹ aktywnoœæ przeciwko Mycobacterium tuberculosis, tzn., aby izolowana bakteria by³a wra liwa na dany lek. Mycobacterium tuberculosis wykazuj¹cy opornoœæ wielolekow¹ (MDR-TB, Multi-drug resistant) sta³ siê ostatnio powa nym problemem publicznej s³u by zdrowia 1. Opornoœæ na którykolwiek g³ówny lek, w tym równie na pirazynamid, sprawia, i choroba staje siê trudniejsza i dro sza w leczeniu. Szybkie wykrycie takich opornych szczepów ma krytyczne znaczenie dla skutecznego leczenia pacjenta. Do badania wra liwoœci na dzia³anie leków przeciwbakteryjnych stosowano powszechnie dwie metody. W pierwszej metodzie, znanej jako metoda proporcji 2, wykorzystuje siê pod³o e Middlebrook and Cohn 7H10 Agar. Porównuje siê liczbê kolonii drobnoustroju na pod³o u zawieraj¹cym lek i pod³o u bez leku. Testowanie wra liwoœci na pirazynamid wymaga pewnych modyfikacji metod ogólnych, poniewa lek dzia³a in vitro wy³¹cznie przy ni szych wartoœciach ph 3. Stworzona zosta³a modyfikacja metody proporcji, w której wykorzystuje siê pod³o e agarowe 7H10 o ph 5,5, ze stê eniem leku µg/ml 4. Ograniczenie metody stanowi fakt, e przy ph rzêdu 5,5 wiele szczepów M. tuberculosis nie wykazuje wzrostu lub wykazuje s³aby wzrost. Metody oparte na pod³o u agarowym, takie jak metoda proporcji, nie okaza³y siê skuteczne w wykrywaniu wra liwoœci na PZA, ze wzglêdu na brak wzrostu wielu szczepów po zakwaszeniu pod³o a do testu na PZA. Druga metoda, znana jako metoda wra liwoœci radiometrycznej BACTEC 460TB 5, polega na pomiarze wytwarzania radioaktywnego dwutlenku wêgla znakowanego 14 C przez wzrastaj¹ce pr¹tki, co manifestuje siê zwiêkszeniem wskaÿnika wzrostu (GI, Growth Index) w systemie. Powsta³a modyfikacja metody okreœlania wra liwoœci BACTEC 460TB, w której wykorzystuje siê zmodyfikowane pod³o e radiometryczne 7H12, BACTEC PZA Pod³o e testowe, w którym ph obni one jest do 6,0 6. Przy tym ph mo na okreœliæ aktywnoœæ PZA przeciwko pr¹tkom bez hamowania wzrostu wiêkszoœci szczepów M. tuberculosis. Test do okreœlania wra liwoœci BACTEC 460TB PZA wykorzystuje stê enie pirazynamidu rzêdu 100 µg/ml. Wykazano, i badanie wra liwoœci w systemie BACTEC 460TB jest skuteczne i obecnie traktowane jest ono jako metoda referencyjna do okreœlania wra liwoœci na PZA. Instytut Standardów Klinicznych i Laboratoryjnych (CLSI, Clinical and Laboratory Standards Institute, dawniej NCCLS, National Committee for Clinical Laboratory Standards) w dalszym ci¹gu zaleca, aby badanie za pomoc¹ MOP obejmowa³o dwa stê enia g³ównych leków z wyj¹tkiem rifampicyny. 2 Stosowanie urz¹dzenia BACTEC MGIT 960 ³¹cznie z zestawem BACTEC MGIT 960 PZA stanowi nieradiometryczn¹ metodê okreœlania wra liwoœci pr¹tków na PZA. Zestaw BACTEC MGIT 960 PZA powsta³ w celu okreœlania wra liwoœci na pirazynamid przy stê eniu 100 µg/ml. Stê enie to koreluje ze stê eniem stosowanym w systemie BACTEC 460TB. ZASADY PROCEDURY Pod³o e BACTEC MGIT 960 PZA jest to probówka zawieraj¹ca zmodyfikowany bulion Middlebrook 7H9, który wspomaga wzrost i wykrywanie pr¹tków. Na dnie pó³okr¹g³o zakoñczonej probówki BACTEC MGIT 960 PZA Medium (16 x 100 mm) znajduje siê osadzony w silikonie, fluorescencyjny komponent. Jest on wra liwy na dzia³anie rozpuszczonego w po ywce bulionowej tlenu. Pocz¹tkowo pojawia siê tylko niewielka fluorescencja, poniewa wstêpna du a iloœæ rozpuszczonego tlenu absorbuje emisje pochodz¹ce z komponentu. PóŸniej aktywnie rosn¹ce i oddychaj¹ce drobnoustroje wykorzystuj¹ tlen, co prowadzi do zwiêkszenia fluorescencji komponentu. Zestaw BACTEC MGIT 960 PZA jest to 4 21-dniowy test jakoœciowy. Test polega na ocenie wzrostu szczepu M. tuberculosis w probówce zawieraj¹cej lek oraz w probówce bez leku (kontrola wzrostu). Urz¹dzenie BACTEC MGIT w sposób monitoruje wzrost fluorescencji w probówkach. Analiza fluorescencji w probówce zawieraj¹cej lek w porównaniu do fluorescencji w probówce z kontrol¹ wzrostu wykorzystywana jest przez urz¹dzenie do okreœlenia wyników wra liwoœci. Urz¹dzenie BACTEC MGIT automatycznie interpretuje te wyniki oraz podaje w wyniku czy dany szczep jest oporny czy wra liwy. ODCZYNNIKI Probówka BACTEC MGIT 960 PZA Medium zawiera 110 µl fluorescencyjnego wskaÿnika i 7 ml bulionu PZA. WskaŸnik zawiera trój 4,7-difenylo-1,10-fenantrolinorutenopiêciowodzian chlorkowy w bazie z kauczuku silikonowego. Probówki zamkniête s¹ zatyczkami z polipropylenu. Przybli ona formu³a* na litr wody oczyszczonej: Zmodyfikowany bulion Middlebrook 7H9... 5,9 g Pepton kazeinowy... 1,25 g Zestaw BACTEC MGIT 960 PZA zawiera dwie fiolki z liofilizowanym pirazynamidem i szeœæ fiolek zawieraj¹cych dodatek PZA. Przybli ona formu³a* na fiolkê liofilizowanego leku: Pirazinamid µg Dodatek BACTEC MGIT 960 PZA zawiera 15 ml œrodka wzbogacaj¹cego Przybli ona formu³a* na litr wody oczyszczonej: Albumina bydlêca... 50,0 g Katalaza...0,03 g Dekstroza... 20,0 g Kwas oleinowy...0,1 g Stearynian polioksyetylenu (POES) 1,1 g *Skorygowany i (lub) uzupe³niony zgodnie z wymaganiami maj¹cymi na celu spe³nienie kryteriów dzia³ania. Przechowywanie i przygotowanie odczynników: Pod³o e BACTEC MGIT 960 PZA Po otrzymaniu przechowywaæ w temperaturze 2 25 C. NIE ZAMRA AÆ. Bulion powinien byæ przejrzysty i bezbarwny. Nie stosowaæ, je eli po ywka jest mêtna. Chroniæ przed œwiat³em. Probówki przechowywane przed u yciem zgodnie z opisem mog¹ byæ inokulowane do czasu up³ywu daty przydatnoœci do u ytku. 1

2 Fiolki z lekiem BACTEC MGIT 960 PZA Po otrzymaniu fiolki z liofilizowanym lekiem przechowywaæ w temperaturze 2 8 C. Po rozpuszczeniu roztwór antybiotyku mo na zamroziæ i przechowywaæ w temperaturze -20 C lub ni szej przez okres do szeœciu miesiêcy lub do czasu up³ywu terminu przydatnoœci do u ytku. Po rozmro eniu natychmiast zu yæ. Wyrzuciæ niezu yte porcje. Dodatek BACTEC MGIT 960 PZA Po otrzymaniu przechowywaæ w ciemnym pomieszczeniu, w temperaturze 2 8 C. Unikaæ zamra ania oraz przegrzania. Otworzyæ i zu yæ przed up³ywem terminu przydatnoœci do u ytku. Chroniæ przed dzia³aniem œwiat³a. Zastosowanie: Rozpuœciæ ka d¹ fiolkê zestawu BACTEC MGIT 960 PZA zawieraj¹c¹ liofilizowany lek w 2,5 ml sterylnej destylowanej (dejonizowanej) wody, aby przygotowaæ roztwór wyjœciowy o stê eniu µg/ml. OSTRZE ENIA I UWAGI: Do diagnostyki in vitro. POTENCJALNIE ZAKAŸNA PRÓBKA BADANA: W próbkach klinicznych mog¹ byæ obecne patogenne mikroorganizmy jak wirus zapalenia w¹troby typu B i wirus HIV. Przy kontakcie z ka dym materia³em zanieczyszczonym krwi¹ lub innymi p³ynami ustrojowymi nale y przestrzegaæ Uniwersalnych œrodków ostro noœci 7-10 oraz instrukcji stosowanych w placówce. Praca z namna aj¹cymi siê hodowlami Mycobacterium tuberculosis wymaga stosowania metod dzia³ania oraz u ywania zabezpieczaj¹cego sprzêtu laboratoryjnego, zgodnych z wytycznymi praktyk bezpieczeñstwa biologicznego (BSL, Biosafety Level) poziomu 3. Nale y przeczytaæ wytyczne zawarte we wszystkich odpowiednich wk³adkach do produktów, w tym równie do probówki wskaÿnikowej wzrostu pr¹tków BBL MGIT 7 ml, i postêpowaæ zgodnie z nimi. Przed u yciem u ytkownik powinien sprawdziæ, czy probówki i fiolki nie s¹ zanieczyszczone lub uszkodzone. Wyrzuciæ wszelkie probówki lub fiolki, które wydaj¹ siê nieodpowiednie. Nale y dok³adnie sprawdziæ probówki, które zosta³y upuszczone. Jeœli widoczne s¹ jakiekolwiek uszkodzenia, probówkê nale y wyrzuciæ. W przypadku st³uczenia probówki: 1) Zamkn¹æ szuflady urz¹dzenia; 2) Wy³¹czyæ urz¹dzenie; 3) Niezw³ocznie opuœciæ miejsce; 4) Sprawdziæ wytyczne instytucji (CDC). Probówka, w której zachodzi wzrost bakterii, a przecieka lub zosta³a st³uczona, mo e doprowadziæ do powstawania aerozolu pr¹tków; nale y z ni¹ odpowiednio postêpowaæ. Przed wyrzuceniem nale y wysterylizowaæ w autoklawie wszystkie probówki MGIT, które poddano inokulacji. PRZYGOTOWANIE INOKULUM Wszystkie wymienione poni ej przygotowania nale y przeprowadzaæ z czystych hodowli M. tuberculosis. Laboratorium powinno potwierdziæ za pomoc¹ odpowiednich technik identyfikacyjnych, e wyizolowany szczep, który ma byæ badany, jest czyst¹ hodowl¹ M. tuberculosis. Inokulum mo na przygotowaæ z pod³o a sta³ego lub probówki BACTEC MGIT 7 ml, w której uzyskano wynik dodatni. Ponadto do przygotowania probówki MGIT mo na wykorzystywaæ hodowle tworzone na p³ynie lub na pod³o u sta³ym, przetwarzane nastêpnie na inokulum. Poni ej opisano ka d¹ z tych opcji. Przygotowanie inokulum z pod³o a sta³ego: UWAGA: Wa ne jest, aby przygotowywaæ inokulum zgodnie z poni szymi instrukcjami, w celu uzyskania odpowiedniego stê enia drobnoustroju do wykonania testu wra liwoœci. 1. Dodaæ 4 ml bulionu BBL Middlebrook 7H9 (lub bulionu BBL MGIT) do sterylnej probówki 16,5 x 128 mm z zatyczk¹, zawieraj¹cej 8 10 szklanych kulek. 2. Zeskrobaæ za pomoc¹ sterylnej ezy tyle kolonii, wzrastaj¹cych nie wiêcej ni 14 dni, ile siê uda, próbuj¹c nie naruszyæ pod³o a sta³ego. Wykonaæ zawiesinê kolonii w bulionie Middlebrook 7H9. 3. Mieszaæ zawiesinê przez 2 3 min, aby rozbiæ wiêksze skupiska bakterii. Zawiesina powinna przekraczaæ standard 1,0 McFarland pod wzglêdem stopnia zmêtnienia. 4. Odstawiæ zawiesinê na 20 min. 5. Przenieœæ nads¹cz do innej sterylnej probówki 16,5 x 128 mm z zatyczk¹ (unikaæ przenoszenia osadu) i odstawiæ na kolejne 15 min. 6. Przenieœæ nads¹cz (powinien byæ jednorodny, pozbawiony skupisk bakterii) do trzeciej sterylnej probówki 16,5 x 128 mm. UWAGA: Zawiesina powinna byæ na tym etapie bardziej mêtna ni standard 0,5 McFarland. 7. Doprowadziæ zawiesinê pod wzglêdem stopnia zmêtnienia do standardu 0,5 McFarland, porównuj¹c j¹ wzrokowo ze standardem 0,5 McFarland. Nie obni aæ stopnia zmêtnienia poni ej standardu 0,5 McFarland. 8. Rozcieñczyæ 1 ml dostosowanej zawiesiny w 4 ml sterylnego roztworu soli fizjologicznej (rozcieñczenie 1:5). Stosowaæ to jako inokulum AST i przejœæ do rozdzia³u Procedura inokulacji dla testu wra liwoœci dla zestawu BACTEC MGIT 960 PZA Przygotowanie inokulum z probówki BACTEC MGIT 7 ml, w której uzyskano dodatni wynik hodowli: 1. Pierwszy dzieñ, kiedy probówka BACTEC MGIT zostanie uznana za dodatni¹, traktuje siê jako Dzieñ Do przygotowania inokulum testowego nale y wykorzystywaæ probówkê 7 ml MGIT z wynikiem dodatnim w okresie od pierwszego (Dzieñ 1) do pi¹tego (Dzieñ 5) dnia po stwierdzeniu wyniku dodatniego za pomoc¹ urz¹dzenia BACTEC MGIT. Z probówki, w której wynik by³ dodatni przez okres d³u szy ni piêæ dni, nale y wykonaæ posiew do œwie ej probówki 7 ml MGIT zawieraj¹cej dodatek wzrostowy BACTEC MGlT, i badaæ na urz¹dzeniu BACTEC MGlT do czasu stwierdzenia wyniku dodatniego oraz wykorzystaæ w okresie od jednego do piêciu dni po stwierdzeniu wyniku dodatniego. Zob. Przygotowanie probówki Seed MGIT z pod³o a p³ynnego. 3. Je eli probówka wykorzystywana jest w Dniu 1 lub 2 po stwierdzeniu wyniku dodatniego, nie jest konieczne rozcieñczanie. Stosowaæ to jako inokulum AST i przejœæ do rozdzia³u Procedura inokulacji dla testu wra liwoœci dla zestawu BACTEC MGIT 960 PZA 4. Je eli jest to dzieñ 3, dzieñ 4 lub dzieñ 5 od chwili stwierdzenia wyniku dodatniego probówki, nale y rozcieñczyæ 1 ml bulionu wykazuj¹cego wynik dodatni w 4 ml sterylnej soli fizjologicznej (rozcieñczenie 1:5). Dok³adnie wymieszaæ zawartoœæ probówki. Stosowaæ to jako inokulum AST i przejœæ do rozdzia³u Procedura inokulacji dla testu wra liwoœci dla zestawu BACTEC MGIT 960 PZA. Przygotowanie probówki Seed MGIT z pod³o a p³ynnego 1. Wymieszaæ probówkê, odwracaj¹c j¹ lub odwirowuj¹c. 2. Wykonaæ rozcieñczenie 1:100, dodaj¹c 0,1 ml hodowli do 10 ml po ywki BBL Middlebrook 7H9 Broth lub BBL MGIT Broth. Dok³adnie wymieszaæ. 3. Dodaæ 0,5 ml tej zawiesiny do 7 ml probówki MGIT wzbogaconej 0,8 ml dodatku wzrostowego BACTEC MGIT. 4. Szczelnie zamkn¹æ probówkê i delikatnie zamieszaæ, odwracaj¹c j¹ 2 3 razy. 5. Wprowadziæ probówkê do urz¹dzenia BACTEC MGIT i sprawdzaæ, a do uzyskania dodatniego wyniku. UWAGA: Czas potrzebny do uzyskania dodatniego wyniku musi wynosiæ co najmniej 4 dni u ywania zawartoœci probówki jako inokulum AST. Je eli zawartoœæ probówki uzyska wynik dodatni przed up³ywem 4 dni, nale y przygotowaæ now¹ probówkê do posiewów, rozpoczynaj¹c procedurê od kroku 1. 2

3 6. Ta probówka mo e teraz byæ stosowana przez 1 5 dni od uzyskania dodatniego wyniku badania. Przejœæ do czêœci Przygotowanie inokulum z probówki BACTEC MGIT 7 ml, w której uzyskano dodatni wynik hodowli wy ej: Przygotowanie probówki Seed MGIT z pod³o a sta³ego 1. Stosuj¹c steryln¹ ezê, zebraæ wzrost posiewu z pod³o a skoœnego i dodaæ do 7 ml probówki MGIT wzbogaconej 0,8 ml dodatku wzrostowego BACTEC MGIT. 2. Szczelnie zamkn¹æ probówkê i delikatnie zamieszaæ, odwracaj¹c j¹ 2 3 razy. 3. Wprowadziæ probówkê do urz¹dzenia BACTEC MGIT i kontrolowaæ, a do uzyskania wyniku dodatniego. UWAGA: Czas uzyskania wyniku dodatniego musi wynosiæ co najmniej 4 dni u ywania zawartoœci probówki jako inokulum AST. Je eli zawartoœæ probówki uzyska wynik dodatni przed up³ywem 4 dni, nale y przygotowaæ now¹ probówkê do posiewów, rozpoczynaj¹c procedurê od kroku Ta probówka mo e teraz byæ stosowana przez 1 5 dni od uzyskania dodatniego wyniku badania. Przejœæ do czêœci Przygotowanie inokulum z probówki BACTEC MGIT 7 ml, w której uzyskano dodatni wynik hodowli wy ej: PROCEDURA Dostarczane materia³y: Zestaw BACTEC MGIT 960 PZA zawieraj¹cy dwie fiolki z liofilizowanym lekiem oraz szeœæ fiolek dodatku PZA (oko³o 50 testów na zestaw). Materia³y niezbêdne, ale niedostarczane: Pod³o e BACTEC MGIT 960 PZA (25 probówek na opakowanie), pomocnicze pod³o a hodowlane, odczynniki, drobnoustroje do kontroli jakoœci oraz sprzêt laboratoryjny wymagany w procedurze. Procedura inokulacji do testu wra liwoœci dla zestawu BACTEC MGIT 960 PZA: Podczas przygotowywania zestawu PZA AST wa ne jest odpowiednie rozpuszczenie liofilizowanych leków, stosowanie czystej hodowli oraz odpowiednie rozcieñczenie drobnoustroju QC do probówek z kontrol¹ wzrostu oraz probówki PZA. Wa ne jest, aby dodaæ lek wy³¹cznie do odpowiedniej probówki MGIT oznakowanej PZA. Podczas korzystania z zestawu PZA AST stosowaæ wy³¹cznie dodatek BACTEC MGIT 960 PZA dostarczony z zestawem oraz probówki z pod³o em BACTEC MGIT 960 PZA. 1. Oznakowaæ dwie 7 ml probówki z pod³o em BACTEC MGIT 960 PZA dla ka dego badanego szczepu. Oznakowaæ jedn¹ jako kontrola wzrostu (GC, Growth Control), jedn¹ jako PZA. Umieœciæ probówki w odpowiedniej kolejnoœci w stojaku zestawu AST przeznaczonym na dwie probówki (zobacz Podrêcznik U ytkownika urz¹dzenia BACTEC MGIT). 2. Zgodnie z zasadami aseptyki dodaæ 0,8 ml dodatku BACTEC MGlT 960 PZA do ka dej probówki. 3. Za pomoc¹ mikropipety dodaæ aseptycznie 100 µl roztworu BACTEC MGIT 960 PZA o stê eniu µg/ml do odpowiednio oznakowanej probówki MGIT PZA. Nie nale y dodawaæ roztworu leku do probówki oznakowanej MGIT GC. Stê enie Objêtoœæ dodana Koñcowe stê enie Lek leku po do probówek w probówkach rozpuszczeniu* MGIT MGIT MGIT PZA µg/ml 100 µl 100 µg/ml* *Aby osi¹gn¹æ wskazane stê enie, PZA nale y rozpuœciæ w 2,5 ml sterylnej (dejonizowanej) wody. 4. Przygotowanie i inokulacja probówki z kontrol¹ wzrostu: W sposób ja³owy nanieœæ 0,5 ml inokulum AST (zobacz czêœæ PRZYGOTOWANIE INOKULUM ) do 4,5 ml sterylnej soli fizjologicznej w celu przygotowania zawiesiny kontroli wzrostu 1:10. Wymieszaæ dok³adnie zawiesinê z kontrol¹ wzrostu. Nanieœæ 0,5 ml zawiesiny z kontrol¹ wzrostu 1:10 do probówki MGIT oznakowanej GC. UWAGA: Wa ne jest, aby do probówki GC wprowadziæ odpowiednio przygotowane rozcieñczenie 1:10, aby zapewniæ odpowiednie wyniki AST i unikn¹æ b³êdów zestawu PZA AST. 5. Inokulacja probówek zawieraj¹cych lek: W sposób aseptyczny przenieœæ 0,5 ml inokulum AST (patrz czêœæ PRZYGOTOWANIE INOKULUM ) do probówki MGIT oznakowanej PZA. 6. Dok³adnie zamkn¹æ probówki. Wymieszaæ dok³adnie zawartoœæ probówek, delikatnie odwracaj¹c trzy do czterech razy. 7. Wprowadziæ zestaw PZA do urz¹dzenia BACTEC MGIT, u ywaj¹c ustawieñ wejœciowych zestawu AST (zobacz Podrêcznik U ytkownika urz¹dzenia BACTEC MGIT). Upewniæ siê, e probówka z kontrol¹ wzrostu znajduje siê jako pierwsza od strony lewej. Wybraæ PZA jako lek przy okreœlaniu noœnika zestawu AST z dwoma probówkami podczas wprowadzania danych zestawu AST. 8. Nanieœæ 0,1 ml zawiesiny drobnoustrojów na p³ytkê zawieraj¹c¹ pod³o e Trypticase Soy Agar with 5% Sheep Blood (TSA II). Zamkn¹æ w plastikowym woreczku. Inkubowaæ w temperaturze C. 9. Sprawdziæ p³ytki z agarem z krwi¹ po 48 godzinach pod k¹tem zanieczyszczenia bakteryjnego. Je eli na p³ytce z agarem z krwi¹ nie stwierdza siê wzrostu, kontynuowaæ testowanie PZA. Je eli na p³ytce z agarem z krwi¹ stwierdza siê wzrost, wyrzuciæ zestaw PZA (zobacz Podrêcznik U ytkownika urz¹dzenia BACTEC MGIT) i powtórzyæ badanie przy u yciu czystej hodowli Mycobacterium tuberculosis. Kontrola jakoœci przez u ytkownika: Po otrzymaniu nowej dostawy lub fiolek zestawu BACTEC MGIT 960 PZA o nowym numerze serii lub pod³o a BACTEC MGIT 960 PZA zaleca siê przebadanie kontrolnych drobnoustrojów przedstawionych poni ej. Kontrolny drobnoustrój powinien pochodziæ z czystej hodowli, a hodowla powinna byæ przygotowana zgodnie z instrukcjami zawartymi w czêœci PRZYGOTOWANIE INOKULUM. Zestaw do kontroli jakoœci (QC) AST powinien zostaæ przygotowany zgodnie z instrukcjami Procedura inokulacji w celu przeprowadzenia testu wra liwoœci BACTEC MGIT 960 PZA. Podczas przygotowywania zestawu QC AST wa ne jest odpowiednie rozpuszczenie liofilizowanego leku, stosowanie czystej hodowli oraz odpowiednie rozcieñczenie drobnoustroju QC do probówek z kontrol¹ wzrostu oraz probówek PZA. Wa ne jest, aby dodaæ lek wy³¹cznie do odpowiedniej probówki MGIT oznakowanej PZA. Ten sam drobnoustrój kontrolny powinien byæ stosowany jako seria QC raz w tygodniu, kiedy prowadzi siê oznaczanie wra liwoœci. Jak pokazano poni ej, obserwacja odpowiednich wyników w ci¹gu 4 20 dni wskazuje, e odczynniki BACTEC MGIT 960 PZA s¹ gotowe do u ycia do badania szczepów izolowanych pobranych od pacjenta. 3

4 Je eli nie stwierdza siê odpowiednich wyników, nie podawaæ wyników badañ pacjenta. Powtórzyæ QC oraz badanie wszystkich szczepów izolowanych pobranych od pacjenta, na które wp³yw mia³a nieprawid³owa wstêpna QC. Je eli powtórzenie QC nie daje spodziewanych wyników, nie podawaæ wyników oznaczeñ próbek pochodz¹cych od pacjenta. Nie stosowaæ produktu do czasu skontaktowania siê z Dzia³em Technicznym. Szczepy bakteryjne GC MGIT PZA M. tuberculosis ATCC Wynik dodatni Wra liwe Podczas zewnêtrznej oceny zestawu BACTEC MGIT 960 PZA œredni czas do uzyskania wyniku dla drobnoustroju kontrolnego wynosi³ siedem dni przy zakresie od czterech do jedenastu dni. Najczêstszymi przyczynami z³ych wyników QC podczas oceny zewnêtrznej by³a zbyt du a inokulacja zestawów PZA oraz zanieczyszczenie hodowli QC. WYNIKI Urz¹dzenie BACTEC MGIT monitoruje zestawy AST do czasu stwierdzenia, czy dany szczep jest oporny czy wra liwy. Po zakoñczeniu testowania zestawu wyniki podawane s¹ przez urz¹dzenie BACTEC MGIT (zobacz Podrêcznik U ytkownika urz¹dzenia BACTEC MGIT). Urz¹dzenie BACTEC MGIT podaje wynik zestawu AST jako B³¹d ( X ) brak interpretacji wra liwoœci, kiedy zachodz¹ pewne warunki, które mog¹ wp³yn¹æ na wyniki testu. Warunki, które mog¹ dawaæ B³¹d ( X ), opisane s¹ w Czêœci 7 Rozwi¹zywanie problemów, w Podrêczniku U ytkownika urz¹dzenia BACTEC MGIT. Przy podawaniu wyników, jest wa ne, aby podaæ metodê badania, nazwê i stê enie leku. W celu ustalenia odpowiedniego schematu leczenia oraz dawek leków nale y skonsultowaæ siê ze specjalist¹ chorób p³uc i (lub) specjalist¹ chorób zakaÿnych zajmuj¹cymi siê leczeniem gruÿlicy. Izolowana opornoœæ na pirazynamid jest rzadko spotykana i dlatego w razie uzyskania niespodziewanych wyników opornoœci nale y zweryfikowaæ czystoœæ i identyfikacjê szczepu badanego jako M. tuberculosis. Wskazówki dotycz¹ce kontroli czystoœci pr¹tków znaleÿæ mo na w standardzie CLSI M24 2. Podawanie wyników dla BACTEC MGIT 960 PZA Lek (stê enie) PZA (100 µg/ml) System BACTEC MGIT Wynik Wra liwoœæ Opornoœæ Zalecany raport Postêpowanie Szczep badany za pomoc¹ sistemu Nie podejmowaæ adnego dzia³ania BACTEC MGIT [PZA/100 µg/ml] i jest wra liwy. Szczep badany za pomoc¹ sistemu BACTEC MGIT [PZA/100 µg/ml] i jest oporny. B³¹d X Nie podawaæ. Powtórzyæ test. Je eli szczep jest oporny wy³¹cznie na PZA potwierdziæ, e jest on czyst¹ hodowl¹ Mycobacterium tuberculosis. OGRANICZENIA PROCEDURY Test wra liwoœci BACTEC MGIT 960 PZA nie ocenia stopnia wra liwoœci badanego szczepu. Wyniki podawane s¹ jako wra liwoœæ lub opornoœæ. Testy wra liwoœci BACTEC MGIT 960 PZA mog¹ byæ wykonywane wy³¹cznie za pomoc¹ urz¹dzenia BACTEC MGIT. Zestawy PZA nie mog¹ byæ odczytywane rêcznie. Stosowaæ wy³¹cznie czyste hodowle M. tuberculosis. Hodowle zanieczyszczone lub zawieraj¹ce wiele ró nych gatunków pr¹tków mog¹ dawaæ b³êdne wyniki i nie powinny byæ oceniane. Bezpoœrednie badanie próbek klinicznych nie jest zalecane. Przy wykonywaniu zawiesin z pod³o a sta³ego nale y odczekaæ okreœlony czas przed dokonaniem standaryzacji. Inokulum przygotowywane z pod³o a sta³ego powinno byæ porównane wzrokowa ze standardem zmêtnienia 0,5 McFarland; niewykonanie takiego porównania mo e daæ niedok³adne wyniki i spowodowaæ b³¹d zestawu AST. Je eli do inokulacji probówek zawieraj¹cych lek nie zostanie wykorzystane rozcieñczenie zawiesiny drobnoustrojów 1:5, wyniki mog¹ byæ niedok³adne. Je eli do inokulacji probówki z kontrol¹ wzrostu nie jest stosowane rozcieñczenie 1:100 zawiesiny drobnoustrojów, wyniki mog¹ byæ niedok³adne lub mo e powstaæ b³¹d zestawu AST. Je eli PZA nie zostanie rozcieñczone w odpowiedniej objêtoœci sterylnej destylowanej (dejonizowanej) wody, wyniki mog¹ byæ niedok³adne. Istotne jest dok³adne wymieszanie probówek po inokulacji. Je eli zawartoœæ probówek nie zostanie dok³adnie wymieszana, mo na uzyskaæ wyniki œwiadcz¹ce o fa³szywej opornoœci. Je eli probówki zestawu AST nie zostan¹ wprowadzone do stojaka zestawu AST w odpowiedniej kolejnoœci, uzyskane wyniki mog¹ byæ niedok³adne. Je eli nie zostanie wybrany odpowiedni opis stojaka zestawu, wyniki mog¹ byæ b³êdne lub niedok³adne. Je eli zestaw AST nie zostanie prawid³owo za³adowany do urz¹dzenia, dochodzi do powstania warunków anonimowych, które nale y zmieniæ w ci¹gu oœmiu godzin. Je eli stan ten nie zostanie usuniêty w ci¹gu oœmiu godzin, zestaw AST nale y wyrzuciæ i ponownie skonfigurowaæ. Je eli do zestawu PZA AST nie zostanie wprowadzony dodatek BACTEC MGIT 960 PZA, uzyskane wyniki mog¹ byæ nieprawid³owe. NIE dodawaæ dodatku BACTEC MGIT 960 SIRE lub dodatku wzrostowego BACTEC MGIT do zestawu PZA AST. Je eli w zestawie PZA AST nie zostanie u yte pod³o e BACTEC MGIT 960 PZA, uzyskane wyniki mog¹ byæ nieprawid³owe. NIE stosowaæ probówek wskaÿnikowych wzrostu pr¹tków BBL MGIT 7 ml zamiast probówek z pod³o em BACTEC MGIT 960 PZA. OCZEKIWANE WARTOŒCI Przebadano 118 pochodz¹cych z próbek klinicznych szczepów M. tuberculosis za pomoc¹ testu wra liwoœci BACTEC MGIT 960 PZA w czterech ró nych oœrodkach oddalonych pod wzglêdem geograficznym. Testowanie obejmowa³o zarówno œwie e szczepy pochodz¹ce z próbek klinicznych, jak i szczepy zapasowe zarówno z hodowli p³ynnych, jak i z pod³o y sta³ych. Wykonano ³¹cznie 228 testów wra liwoœci na PZA (na pod³o ach p³ynnych i sta³ych). Podczas zewnêtrznej oceny zestawu BACTEC MGIT 960 PZA, dziewiêæ testów PZA ze szczepów pochodz¹cych z próbek klinicznych wymaga³o powtórzenia ze wzglêdu na zanieczyszczenie (szeœæ szczepów) lub zbyt du ¹ inokulacjê/b³êdy proceduralne (trzy szczepy). Œredni ca³kowity czas do uzyskania wyniku w teœcie wra liwoœci BACTEC MGIT 960 PZA wynosi siedem dni przy zakresie od czterech do siedemnastu dni. Dane przedstawiono na rysunku 1 (na koñcu ulotki). 4

5 CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŒCIOWA Badania analityczne Zakres inokulum AST dla pod³o y p³ynnych i sta³ych: Pod³o a p³ynne Wed³ug zalecanej procedury w celu przygotowania zestawu PZA z probówki MGIT 7 ml z wynikiem dodatnim wykorzystuje siê bezpoœrednie inokulum w Dniu 1 i Dniu 2 po uzyskaniu wyniku dodatniego oraz rozcieñczone (1:5) inokulum w dniach od 3 do 5 po uzyskaniu wyniku dodatniego. Badania wewnêtrzne wykazuj¹, e inokulum przygotowane w dniach od 1 do 5 z probówki MGIT 7 ml, w której uzyskano wynik dodatni, mieœci siê w zakresie 2,0 x 10 4 do 7,5 x 10 6 CFU/mL. Pod³o e sta³e Wed³ug zalecanej procedury do przygotowania zestawu PZA ze wzrostu na pod³o u sta³ym (do 14 dni po zaobserwowaniu wzrostu) wykorzystuje siê rozcieñczenie 1:5 zawiesiny drobnoustrojów, równowa ne standardowi 0,5 McFarland. Badania wewnêtrzne wykazuj¹, e inokulum przygotowane z hodowli na pod³o u sta³ym mieœci siê w zakresie 2,1 x 10 5 do 3,9 x 10 6 CFU/mL. Powtarzalnoœæ serii: Powtarzalnoœæ serii oceniana by³a przy zastosowaniu dwudziestu piêciu szczepów M. tuberculosis (w tym trzech szczepów ATCC ). Ka dy szczep by³ testowany trzykrotnie za pomoc¹ testu wra liwoœci BACTEC MGIT 960 PZA. Ka de powtórzenie dotyczy³o odmiennych wyników testu i ró ni³o siê numerem serii stosowanego leku PZA, dodatku PZA oraz pod³o a PZA (trzy ró ne serie dla ka dego). Obserwowane wyniki porównano z wynikami oczekiwanymi. Powtarzalnoœæ testu wra liwoœci BACTEC MGIT 960 PZA wynosi 96,8%. Testowanie zestawu CDC: Dzia³anie testu wra liwoœci BACTEC MGIT 960 PZA oceniono za pomoc¹ zestawu specjalnych szczepów uzyskanych z Oœrodków Zapobiegania i Zwalczania Chorób (CDC, Centers for Disease Control and Prevention), Atlanta, GA, USA. Zestaw sk³ada³ siê z dziewiêciu szczepów M. tuberculosis o znanej wra liwoœci (ocenionej za pomoc¹ BACTEC 460TB). Zestaw by³ testowany trzykrotnie za pomoc¹ testu wra liwoœci BACTEC MGIT 960 PZA. Wyniki uzyskane za pomoc¹ BACTEC MGIT 960 PZA porównano z oczekiwanymi wynikami CDC. Zgodnoœæ z oczekiwanymi wynikami CDC dla testu wra liwoœci BACTEC MGIT 960 PZA wynosi 98,7%. Ocena kliniczna Test wra liwoœci BACTEC MGIT 960 PZA oceniono w czterech oddalonych geograficznie oœrodkach, w sk³ad których wchodzi³y regionalne centra referencyjne oraz uniwersyteckie laboratoria przyszpitalne, w tym równie w dwóch oœrodkach poza USA. Test wra liwoœci BACTEC MGIT 960 PZA porównano z metod¹ BACTEC 460TB PZA oceny wra liwoœci. Badanie powtarzalnoœci: Powtarzalnoœæ testu wra liwoœci BACTEC MGIT 960 PZA oceniono w oœrodkach klinicznych za pomoc¹ zestawu piêciu kwalifikowanych szczepów. Wyniki uzyskane za pomoc¹ testu BACTEC MGIT 960 PZA porównano z oczekiwanymi wynikami. Ca³kowita powtarzalnoœæ testu wra liwoœci BACTEC MGIT 960 PZA wynosi 94%. Testowanie zestawu CDC: Dzia³anie testu wra liwoœci BACTEC MGIT 960 PZA oceniono w ka dym z czterech oœrodków klinicznych za pomoc¹ zestawu specjalnych szczepów uzyskanych z Oœrodków Zapobiegania i Zwalczania Chorób (CDC, Centers for Disease Control and Prevention), Atlanta, GA, USA. Zestaw sk³ada³ siê z dziewiêciu szczepów M. tuberculosis o znanej wra liwoœci (ocenionej za pomoc¹ BACTEC 460TB). Spoœród trzydziestu szeœciu wyników wra liwoœci na PZA uzyskanych za pomoc¹ testu wra liwoœci BACTEC MGIT 960 PZA, trzydzieœci trzy by³y zgodne z oczekiwanymi wynikami CDC. Obliczony odsetek zgodnoœci z oczekiwanymi wynikami CDC dla testu wra liwoœci BACTEC MGIT 960 PZA wynosi 91,7%. Badanie szczepów pochodz¹cych z próbek klinicznych: Przebadano 118 szczepów pochodz¹cych z próbek klinicznych M. tuberculosis za pomoc¹ testu wra liwoœci BACTEC MGIT 960 PZA oraz testu wra liwoœci BACTEC 460TB PZA. Badanie obejmowa³o zarówno œwie e szczepy kliniczne, jak i szczepy przesiane, zarówno z hodowli p³ynnych, jak i z pod³o y sta³ych. Da³o to ³¹cznie 228 wyników testu. Tabela 1 przedstawia wyniki badania szczepu pochodz¹cego z próbki klinicznej dla PZA przy stê eniu 100 µg/ml z hodowli na pod³o u p³ynnym, z hodowli na pod³o u sta³ym oraz z hodowli na obu pod³o ach. Tabela 1: Wyniki dla szczepu pochodz¹cego z próbki klinicznej porównanie testu wra liwoœci BACTEC MGIT 960 PZA z testem wra liwoœci BACTEC 460TB System BACTEC 460TB System BACTEC MGIT 960 Oczekiwane wyniki dla PZA Wyniki wra liwy Wyniki oporny Źród³o POD O E P YNNE POD O E STA E Liczba testów S R Liczba wyników zgodnych % zgodnoœci (95% CI) ,9% (93,9 100) 113* ,8% (92,2 99,7) RAZEM 225* ,3% (95,2 99,7) Liczba wyników zgodnych % zgodnoœci (95% CI) 22 95,7% (78,1 99,9) 20 87,0% (66,4 97,2) 42 91,3% (79,2 97,6) *Trzy wyniki graniczne dla BACTEC 460TB nie zosta³y uwzglêdnione w tabeli. Wszystkie szczepy, które wykazywa³y wyniki niezgodne w teœcie BACTEC MGIT 960 PZA zosta³y przetestowane za pomoc¹ testu wra liwoœci BACTEC 460TB PZA w dwóch niezale nych oœrodkach. Sformu³owanie wyniki niezgodne, oznacza, e szczepy te wykazywa³y inny wynik w teœcie BACTEC MGIT 960 PZA ni w teœcie BACTEC 460TB PZA. Wyniki graniczne nie s¹ uwzglêdnione w obliczeniach dzia³ania dla zestawu BACTEC MGIT 960 PZA. Spoœród czterech szczepów wykazuj¹cych niezgodnoœæ pod wzglêdem wra liwoœci na PZA (S-BACTEC MGIT 960, R-BACTEC 460 TB), jeden uzyska³ wyniki œwiadcz¹ce o wra liwoœci w obu niezale nych oœrodkach, a pozosta³e trzy uzyska³y w obu miejscach wyniki œwiadcz¹ce o opornoœci. Spoœród trzech szczepów wykazuj¹cych niezgodnoœæ pod wzglêdem opornoœci na PZA (R-BACTEC MGIT 960, S-BACTEC 460 TB), wszystkie trzy uzyska³y wyniki œwiadcz¹ce o wra liwoœci w obu niezale nych oœrodkach. Dwa spoœród trzech szczepów wykazuj¹cych wyniki graniczne wobec PZA w teœcie BACTEC 460 TB (S-BACTEC MGIT 960, B-BACTEC 460 TB) uzyska³y wyniki œwiadcz¹ce o wra liwoœci w obu niezale nych oœrodkach. Jeden z trzech szczepów wykazuj¹cych wyniki graniczne wobec PZA w teœcie BACTEC 460 TB (R-BACTEC MGIT 960, B-BACTEC 460 TB) uzyska³ wynik œwiadcz¹cy o wra liwoœci w jednym z niezale nych oœrodków. W drugim niezale nym oœrodku uzyskano wynik graniczny. 5

6 DOST PNOŒÆ Nr kat. Opis Zestaw BACTEC MGIT 960 PZA, opakowanie zawiera dwie fiolki z liofilizowanym lekiem i szeœæ fiolek z dodatkami PZA Pod³o e BACTEC MGIT 960 PZA, opakowanie zawiera 25 probówek. PIŒMIENNICTWO 1. Barenfanger, J Making your lab safe against multi-drug resistant Mycobacterium tuberculosis. Clin. Microbiol. Newsl.15: Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Standard M24-A. Susceptibility testing of mycobacteria, nocardiae, and other aerobic actinomycetes. CLSI, Wayne, Pa. 3. Butler, W.R. and Kilburn, Improved method for testing susceptibility of Mycobacterium tuberculosis to pyrazinamide. J.Clin.Microbiol. 16: Heifets, L.B. and Iseman, M.D Radiometric method for testing susceptibility of Mycobacterium tuberculosis to pyrazinamide in 7H12 broth. J.Clin.Microbiol. 21: BD Diagnostic Systems. BACTEC 460TB System Product and Procedure Manual. 6. Salfinger, M. et al Rapid radiometric method for pyrazinamide susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. Res. Microbiol. 140: Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, PA. 8. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC) 5 th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 10. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Dział Obsługi Technicznej firmy BD Diagnostics: poza terenem USA należy skontaktować się z lokalnym przedstawicielem BD lub odwiedzić stronę 6

7 Figure 1: Distribution of BACTEC MGIT 960 PZA AST Time to Result / Rysunek 1: Rozk³ad czasu w protokole urz¹dzenia BACTEC MGIT 960 PZA AST Frequency Distribution of PZA Time in Protocol (TIP) / Czêstoœæ rozk³adu czasu w protokole (TIP, Time in Protocol) PZA Number Interpreted by TIP / Liczba zestawów zinterpretowanych wed³ug TIP Cumulative % Interpreted by TIP / ¹czny odsetek zinterpretowanych zestawów wed³ug TIP Number of PZA Sets Interpreted by TIP / Liczba zestawów PZA zinterpretowanych wed³ug TIP Cumulative % Interpreted / ¹czny odsetek zinterpretowanych TIP in Days / TIP (liczba dni) 7

8 Do not reuse / Не използвайте отново / Nepoužívejte opakovaně / Ikke til genbrug / Nicht wiederverwenden / Μην επαναχρησιμοποιείτε / No reutilizar / Mitte kasutada korduvalt / Ne pas réutiliser / Ne koristiti ponovo / Egyszer használatos / Non riutilizzare / Пайдаланбаңыз / Tik vienkartiniam naudojimui / Nelietot atkārtoti / Niet opnieuw gebruiken / Kun til engangsbruk / Nie stosować powtórnie / Não reutilize / Nu refolosiţi / Не использовать повторно / Nepoužívajte opakovane / Ne upotrebljavajte ponovo / Får ej återanvändas / Tekrar kullanmayın / Не використовувати повторно Manufacturer / Производител / Výrobce / Fabrikant / Hersteller / Κατασκευαστής / Fabricante / Tootja / Fabricant / Proizvođać / Gyártó / Fabbricante / Атқарушы / Gamintojas / Ražotājs / Tilvirker / Producent / Producător / Производитель / Výrobca / Proizvođač / Tillverkare / Üretici / Виробник Use by / Използвайте до / Spotřebujte do / Brug før / Verwendbar bis / Χρήση έως / Usar antes de / Kasutada enne / Date de péremption / Upotrijebiti do / Felhasználhatóság dátuma / Usare entro / Дейін пайдалануға / Naudokite iki / Izlietot līdz / Houdbaar tot / Brukes for / Stosować do / Prazo de validade / A se utiliza până la / Использовать до / Použite do / Upotrebiti do / Använd före / Son kullanma tarihi / Використати до\line YYYY-MM-DD / YYYY-MM (MM = end of month) ГГГГ-ММ-ДД / ГГГГ-ММ (ММ = края на месеца) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = konec měsíce) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutning af måned) JJJJ-MM-TT / JJJJ-MM (MM = Monatsende) ΕΕΕΕ-MM-HH / ΕΕΕΕ-MM (MM = τέλος του μήνα) AAAA-MM-DD / AAAA-MM (MM = fin del mes) AAAA-KK-PP / AAAA-KK (KK = kuu lõpp) AAAA-MM-JJ / AAAA-MM (MM = fin du mois) GGGG-MM-DD / GGGG-MM (MM = kraj mjeseca) ÉÉÉÉ-HH-NN / ÉÉÉÉ-HH (HH = hónap utolsó napja) AAAA-MM-GG / AAAA-MM (MM = fine mese) ЖЖЖЖ-АА-КК / ЖЖЖЖ-АА / (АА = айдың соңы) MMMM-MM-DD / MMMM-MM (MM = mėnesio pabaiga) GGGG-MM-DD/GGGG-MM (MM = mēneša beigas) JJJJ-MM-DD / JJJJ-MM (MM = einde maand) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutten av måneden) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec miesiąca) AAAA-MM-DD / AAAA-MM (MM = fim do mês) AAAA-LL-ZZ / AAAA-LL (LL = sfârşitul lunii) ГГГГ-ММ-ДД / ГГГГ-ММ (ММ = конец месяца) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec mesiaca) GGGG-MM-DD / GGGG-MM (MM = kraj meseca) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutet av månaden) YYYY-AA-GG / YYYY-AA (AA = ayın sonu) РРРР-MM-ДД / РРРР-MM (MM = кінець місяця) Catalog number / Каталожен номер / Katalogové číslo / Katalognummer / Αριθμός καταλόγου / Número de catálogo / Katalooginumber / Numéro catalogue / Kataloški broj / Katalógusszám / Numero di catalogo / Каталог нөмірі / Katalogo numeris / Kataloga numurs / Catalogus nummer / Numer katalogowy / Număr de catalog / Номер по каталогу / Katalógové číslo / Kataloški broj / Katalog numarası / Номер за каталогом Authorized Representative in the European Community / Оторизиран представител в Европейската общност / Autorizovaný zástupce pro Evropském společenství / Autoriseret repræsentant i De Europæiske Fællesskaber / Autorisierter Vertreter in der Europäischen Gemeinschaft / Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα / Representante autorizado en la Comunidad Europea / Volitatud esindaja Euroopa Nõukogus / Représentant autorisé pour la Communauté européenne / Autorizuirani predstavnik u Europskoj uniji / Meghatalmazott képviselő az Európai Közösségben / Rappresentante autorizzato nella Comunità Europea / Европа қауымдастығындағы уәкілетті өкіл / Įgaliotasis atstovas Europos Bendrijoje / Pilnvarotais pārstāvis Eiropas Kopienā / Bevoegde vertegenwoordiger in de Europese Gemeenschap / Autorisert representant i EU / Autoryzowane przedstawicielstwo we Wspólnocie Europejskiej / Representante autorizado na Comunidade Europeia / Reprezentantul autorizat pentru Comunitatea Europeană / Уполномоченный представитель в Европейском сообществе / Autorizovaný zástupca v Európskom spoločenstve / Autorizovano predstavništvo u Evropskoj uniji / Auktoriserad representant i Europeiska gemenskapen / Avrupa Topluluğu Yetkili Temsilcisi / Уповноважений представник у країнах ЄС In vitro Diagnostic Medical Device / Медицински уред за диагностика ин витро / Lékařské zařízení určené pro diagnostiku in vitro / In vitro diagnostisk medicinsk anordning / Medizinisches In-vitro-Diagnostikum / In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / In vitro diagnostika meditsiiniaparatuur / Dispositif médical de diagnostic in vitro / Medicinska pomagala za In vitro Dijagnostiku / In vitro diagnosztikai orvosi eszköz / Dispositivo medicale per diagnostica in vitro / Жасанды жағдайда жүргізетін медициналық диагностика аспабы / In vitro diagnostikos prietaisas / Medicīnas ierīces, ko lieto in vitro diagnostikā / Medisch hulpmiddel voor in-vitro diagnostiek / In vitro diagnostisk medisinsk utstyr / Urządzenie medyczne do diagnostyki in vitro / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / Dispozitiv medical pentru diagnostic in vitro / Медицинский прибор для диагностики in vitro / Medicínska pomôcka na diagnostiku in vitro / Medicinski uređaj za in vitro dijagnostiku / Medicinteknisk produkt för in vitro-diagnostik / İn Vitro Diyagnostik Tıbbi Cihaz / Медичний пристрій для діагностики in vitro Temperature limitation / Температурни ограничения / Teplotní omezení / Temperaturbegrænsning / Temperaturbegrenzung / Περιορισμοί θερμοκρασίας / Limitación de temperatura / Temperatuuri piirang / Limites de température / Dozvoljena temperatura / Hőmérsékleti határ / Limiti di temperatura / Температураны шектеу / Laikymo temperatūra / Temperatūras ierobežojumi / Temperatuurlimiet / Temperaturbegrensning / Ograniczenie temperatury / Limites de temperatura / Limite de temperatură / Ограничение температуры / Ohraničenie teploty / Ograničenje temperature / Temperaturgräns / Sıcaklık sınırlaması / Обмеження температури Batch Code (Lot) / Код на партидата / Kód (číslo) šarže / Batch-kode (lot) / Batch-Code (Charge) / Κωδικός παρτίδας (παρτίδα) / Código de lote (lote) / Partii kood / Numéro de lot / Lot (kod) / Tétel száma (Lot) / Codice batch (lotto) / Топтама коды / Partijos numeris (LOT) / Partijas kods (laidiens) / Lot nummer / Batch-kode (parti) / Kod partii (seria) / Código do lote / Cod de serie (Lot) / Код партии (лот) / Kód série (šarža) / Kod serije / Partinummer (Lot) / Parti Kodu (Lot) / Код партії Contains sufficient for <n> tests / Съдържанието е достатъчно за <n> теста / Dostatečné množství pro <n> testů / Indeholder tilstrækkeligt til <n> tests / Ausreichend für <n> Tests / Περιέχει επαρκή ποσότητα για <n> εξετάσεις / Contenido suficiente para <n> pruebas / Küllaldane <n> testide jaoks / Contenu suffisant pour <n> tests / Sadržaj za <n> testova / <n> teszthez elegendő / Contenuto sufficiente per <n> test / <п> тесттері үшін жеткілікті / Pakankamas kiekis atlikti <n> testų / Satur pietiekami <n> pārbaudēm / Inhoud voldoende voor n testen / Innholder tilstrekkelig til <n> tester / Zawiera ilość wystarczającą do <n> testów / Conteúdo suficiente para <n> testes / Conţinut suficient pentru <n> teste / Достаточно для <n> тестов(а) / Obsah vystačí na <n> testov / Sadržaj dovoljan za <n> testova / Innehåller tillräckligt för <n> analyser / <n> test için yeterli malzeme içerir / Вистачить для аналізів: <n> Consult Instructions for Use / Направете справка в инструкциите за употреба / Prostudujte pokyny k použití / Se brugsanvisningen / Gebrauchsanweisung beachten / Συμβουλευτείτε τις οδηγίες χρήσης / Consultar las instrucciones de uso / Lugeda kasutusjuhendit / Consulter la notice d emploi / Koristi upute za upotrebu / Olvassa el a használati utasítást / Consultare le istruzioni per l uso / Пайдалану нұсқаулығымен танысып алыңыз / Skaitykite naudojimo instrukcijas / Skatīt lietošanas pamācību / Raadpleeg de gebruiksaanwijzing / Se i bruksanvisningen / Zobacz instrukcja użytkowania / Consultar as instruções de utilização / Consultaţi instrucţiunile de utilizare / См. руководство по эксплуатации / Pozri Pokyny na používanie / Pogledajte uputstvo za upotrebu / Se bruksanvisningen / Kullanım Talimatları na başvurun / Див. інструкції з використання Keep away from light / Пазете от светлина / Nevystavujte světlu / Må ikke udsættes for lys / Vor Licht schützen / Κρατήστε το μακριά από το φως / Mantener alejado de la luz / Hoida eemal valgusest / Conserver à l abri de la lumière / Držati dalje od svjetla / Fény nem érheti / Tenere al riparo dalla luce / Қараңғыланған жерде ұста / Laikyti atokiau nuo šilumos šaltinių / Sargāt no gaismas / Niet blootstellen aan zonlicht / Må ikke utsettes for lys / Przechowywać z dala od źródeł światła / Manter ao abrigo da luz / Feriţi de lumină / Хранить в темноте / Uchovávajte mimo dosahu svetla / Držite dalje od svetlosti / Får ej utsättas för ljus / Işıktan uzak tutun / Берегти від дії світла 8

9 Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, MD USA Benex Limited Pottery Road, Dun Laoghaire Co. Dublin, Ireland ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company BD 9