(12) TŁUMACZENIE PATENTU EUROPEJSKIEGO (19) PL (11) (96) Data i numer zgłoszenia patentu europejskiego:

Transkrypt

1 PL/EP T3 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) TŁUMACZENIE PATENTU EUROPEJSKIEGO (19) PL (11) PL/EP (13) T3 Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (96) Data i numer zgłoszenia patentu europejskiego: (97) O udzieleniu patentu europejskiego ogłoszono: Europejski Biuletyn Patentowy 2009/25 EP B1 (51) Int. Cl. A23L1/305 A23L1/29 A61K35/74 A61K31/202 A23L1/30 ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) (54) Tytuł wynalazku: Mleko modyfikowane niemowlęce lub następne (30) Pierwszeństwo: EP (43) Zgłoszenie ogłoszono: Europejski Biuletyn Patentowy 2006/13 (45) O złożeniu tłumaczenia patentu ogłoszono: Wiadomości Urzędu Patentowego 12/2009 (73) Uprawniony z patentu: Nestec S.A., Vevey, CH (72) Twórca (y) wynalazku: SECRETIN Marie-Cristine, Blonay, CH (74) Pełnomocnik: Przedsiębiorstwo Rzeczników Patentowych Patpol Sp. z o.o. rzecz. pat. Kossowska Janina Warszawa 130 skr. poczt. 37 Uwaga: W ciągu dziewięciu miesięcy od publikacji informacji o udzieleniu patentu europejskiego, każda osoba może wnieść do Europejsk iego Urzędu Patentowego sprzeciw dotyczący udzielonego patentu europejskiego. Sprzeciw wnosi się w formie uzasadnionego na piśmie oświadczenia. Uważa się go za wniesiony dopiero z chwilą wniesienia opłaty za sprzeciw (Art. 99 (1) Konwencji o udzielaniu patentów europejskich).

2 [0001] Niniejszy wynalazek dotyczy nowej i wynalazczej odżywczej kompozycji przeznaczonej dla niemowląt i/lub małych dzieci, jak również sposobu do nasilania naturalnej obrony odpornościowej i sposobu wspomagania zdrowego rozwoju umysłowego u niemowląt lub małych dzieci przez pełne lub częściowe karmienie ich wyżej wymienionym mlekiem modyfikowanym. Tło wynalazku [0002] Kompozycja mleka ludzkiego służy jako cenny wzorzec dla poprawiania modyfikowanego mleka dla niemowląt. Jednakże ludzkie mleko zawiera żyjące komórki, hormony, aktywne enzymy, immunoglobuliny i składniki o unikalnej strukturze cząsteczkowej, która nie może być odtworzona w mleku modyfikowanym dla niemowląt. W odróżnieniu od ludzkiego mleka, mleko modyfikowane dla niemowląt musi pozostać stabilne w trakcie przechowywania aż do trzydziestu sześciu (36) miesięcy. Te podstawowe różnice między ludzkim mlekiem i mlekiem modyfikowanym dla niemowląt zwykle uzasadniają różnice w składzie w celu osiągnięcia podobnego klinicznego wyniku. [0003] Badanie składników mleka ludzkiego stymuluje wiele badań nad składnikami jakie muszą być dodane do poprawionego mleka modyfikowanego dla niemowląt. Większa wiedza o składzie ludzkiego mleka dostarcza możliwości zaprojektowania mlek modyfikowanych dla niemowląt, których skład jest bliższy składowi ludzkiego mleka. Jednakże staje się to coraz widoczniejsze, że mleko modyfikowane dla niemowląt nigdy dokładnie nie będzie duplikatem ludzkiego mleka. Wiele składników w mleku ludzkim jest bioaktywnych i z powodu synergizmu między tymi składnikami istnieje niewielki powód, aby wierzyć, że ten sam związek miałby tę samą bioaktywność w mleku modyfikowanym dla niemowląt. Prawdopodobieństwo tej możliwości jest dalej zmniejszone, gdy rozważa się wpływ traktowania cieplnego na sterylizację i długotrwałe przechowywanie mleka modyfikowanego dla niemowląt. [0004] Skład ludzkiego mleka różni się znacząco od składu mleka z innych gatunków i wiele uwagi przywiązano do różnych składników. Wielu badaczy doniosło o zawartości nukleotydów w mleku ludzkim W wielu publikacjach omawiano również różne lipidy, oleje lub mieszanki tłuszczów do stosowania w sztucznym odżywianiu ludzkich niemowląt. [0005] Istnieje potrzeba nowego mleka modyfikowanego dostarczającego niemowlętom lub młodym dzieciom wkładu odżywczego o unikalnej kombinacji ochronnych składników pokarmowych, zwłaszcza zapewniających wzrost i wzory metaboliczne podobne do tych u karmionych piersią niemowląt, zatem dających podobne cechy zdrowotne w późniejszym dzieciństwie i dorosłości. [0006] W EP ujawniono nową mieszankę tłuszczową bogatą w długołańcuchowe wielonienasycone kwasy tłuszczowe, takie jak ARA i DHA i zastosowanie takich mieszanek tłuszczów do wytwarzania mleka modyfikowanego dla niemowląt. W patencie US Nr ujawniono zastosowanie pewnych mikroorganizmów do wytwarzania długołańcuchowych wielonienasyconych kwasów tłuszczowych, takich jak ARA i DHA i wbudowanie takich mikrobiologicznych olejów LC-PUFA do mleka modyfikowanego dla niemowląt. W zgłoszeniu patentowym US Nr 2003/ ujawniono sposób wytwarzania odżywczych kompozycji o przedłużonym czasie przechowywania gotowych do zastosowania, takich jak mleka dla niemowląt modyfikowane, które zawierają probiotyki. W EP ujawniono kompozycje odżywcze obejmujące minimum trzy różne szczepy probiotyczne z przeznaczeniem dostarczenia ochrony przeciwko zakażeniu patogennemu wszystkimi drogami wzdłuż przewodu żołądkowo-jelitowego likwidując potrzebę identyfikacji mikroorganizmów odpowiedzialnych za zakażenie. Kankaanpää i wsp. omawiają wpływ wielonienasyconych kwasów tłuszczowych na wzrost i przyleganie pewnych laktobacillusów i zauważają, że 1

3 wzrost i przyleganie probiotycznych Lactobacillus GG było zahamowane przy stężeniach PUFA między 10 a 40 µg/ml (Kankaanpää, Salminen, Isolauri i Lee The influence of polyunsaturated fatty AIDS on probiotics growth and adhesion, FEMS Microbiology Letters 194 (2001) ). Streszczenie wynalazku [0007] Niniejszy wynalazek dotyczy zatem mleka modyfikowanego przeznaczonego zarówno dla niemowląt jak i małych dzieci. Mleko modyfikowane według wynalazku zawiera źródło białek, źródło lipidów, źródło węglowodanów i probiotyk, przy czym źródło lipidów obejmuje ARA i DHA, a zawartość DHA jest między 0,2 a 0,5% całkowitych kwasów tłuszczowych w źródle lipidów. [0008] Ponadto wynalazek dostarcza sposobu zwiększania sił naturalnej obrony odpornościowej niemowląt i małych dzieci polegającego na pełnym lub częściowym karmieniu niemowląt lub dzieci tym mlekiem modyfikowanym. Szczegółowy opis wynalazku [0009] W niniejszym opisie podana jest definicja następujących słów, która musi być wzięta pod uwagę gdy czyta się i interpretuje opis, przykłady i zastrzeżenia. [0010] Niemowlęta: zgodnie z Dyrektywą Komisji 91/321/EEC z 14 maja 1991 dotyczące mleka modyfikowanego dla niemowląt i następnego mleka modyfikowanego artykuł 1,2(a), termin niemowlęta oznacza dzieci poniżej 12 miesięcy. Definicja ta jest zaadaptowana w niniejszym opisie. [0011] Małe dzieci: zgodnie z Dyrektywą Komisji 91/321/EEC z 14 maja 1991 dotyczy mleka modyfikowanego dla niemowląt i następnego mleka modyfikowanego artykuł 1,2(b), termin małe dzieci oznacza dzieci w wieku 1-3 lat.. Ta definicja jest zaadaptowana w niniejszym wynalazku. [0012] Mleko modyfikowane dla niemowląt: zgodnie z Dyrektywą Komisji 91/321/EEC z 14 maja 1991 dotyczy mleka modyfikowanego dla niemowląt i następnego mleka modyfikowanego artykuł 1,2(c), termin mleko modyfikowane dla niemowląt oznacza artykuł spożywczy przeznaczony dla konkretnego odżywczego zastosowania u dzieci podczas pierwszych czterech do sześciu miesięcy życia i zadawalający ich wymagania odżywcze dla tej kategorii osób. Ta definicja jest przyjęta w niniejszym opisie. Należy zrozumieć, że niemowlęta mogą być karmione wyłącznie mlekami modyfikowanymi dla niemowląt, lub mleko modyfikowane dla niemowląt może być stosowane przez opiekuna jako uzupełnienie mleka ludzkiego. Jest to synonim dla szeroko stosowanego wyrażenia mleko początkowe [0013] Mleko modyfikowane następne: zgodnie Dyrektywą Komisji 91/321/EEC z 14 maja 1991 dotyczącą mleka modyfikowanego dla niemowląt i następnego mleka modyfikowanego artykuł 1,2(d), termin mleko modyfikowane następne oznacza artykuł spożywczy przeznaczony dla konkretnego odżywczego zastosowania u niemowląt w wieku powyżej czterech miesięcy i zawierający główny element ciekły w postępująco zróżnicowanej diecie tej kategorii osób. Ta definicja jest przyjęta w niniejszym opisie. [0014] Probiotyk: zgodnie z czasopismem Probiotics in Man and Animals J.Appl. Bacteriol. 66: , probiotyk jest zdefiniowany jako żywy drobnoustrojowy suplement pożywienia, który korzystnie oddziałuje na zwierzęcego gospodarza przez poprawę jego jelitowej równowagi drobnoustrojowej. [0015] Zgodnie z pierwszym aspektem wynalazku dostarczone jest odżywcze mleko modyfikowane dla niemowląt (obejmujące kompozycję początkową) lub małych dzieci. Jak już wspomniano, celem wynalazku jest dostarczenie unikalnej kombinacji ochronnych substancji odżywczych zapewniających poprawę naturalnej odporności w porównaniu z karmionymi butelką niemowlętami i dziećmi. 2

4 [0016] Mleko ludzkie zawiera kwas dokozaheksanowy (DHA )i kwas arachidonowy (ARA), a zatem karmienie piersią dostarcza niemowlętom gotowe LC-PUFA. Zawartość DHA w ludzkim mleku zmienia się znacznie w populacjach i silnie wpływa na nie dieta matki. Globalnie zawartość DHA w mleku od matek spożywających diety zachodnie jest w zakresie od 0,1 do 0,4 %, ze średnią 0,25 %, podczas gdy u matek spożywających niezachodnie diety zawartość DHA w mleku jest większa, w zakresie od 0,1 do 1,4%, ze średnią 0,6%. Jednak ilości 0,2 do 0,3% są na ogół przyjęte jako reprezentatywne. Na zawartość ARA w mleku ludzkim mniej wpływa dieta niż na DHA. Globalnie zawartość ARA w mleku ludzkim od matek spożywających zachodnie diety jest w zakresie od 0,2 do 0,7% ze średnią 0,45%, podczas gdy u matek spożywających diety niezachodnie zawartość ARA jest w zakresie od 0,4 do 1,2%,ze średnią 0,6%. Zarówno na poziomy DHA jak i ARA ma wpływ czas trwania laktacji i tendencja do zmniejszania się od siary do przejściowego i dojrzałego mleka. [0017] Ponieważ występuje współzawodnictwo między szlakami kwasów tłuszczowych n-3 i n-6 w odniesieniu do wydłużenia i nienasycenia, jak również do wbudowania do fosfolipidów i konwersji do eikozanoidów, zrównoważyliśmy tłuszcz w mleku modyfikowanym dla niemowląt w odniesieniu do kwasów n-3 i n-6. Uzupełnienie mleka modyfikowanego dla niemowląt tylko kwasem alfa-linolenowym jako źródłem kwasów n-3, nawet w zalecanej równowadze z kwasem linolowym nie podtrzymuje statusu DHA równoważnego ze statusem u niemowląt karmionych piersią. Rzeczywiście, liczne badania wykazały wyższe poziomy DHA w krążących pulach lipidów, fosfolipidów osoczowych, lipidów czerwonych krwinek, fosfolipidów czerwonych krwinek, fosfatydyloetanolaminy czerwonych krwinek u niemowląt karmionych piersią w porównaniu z niemowlętami karmionymi mlekiem modyfikowanym. Status kwasu arachidonowego w większości przypadków nie został zmieniony i jest podobny do statusu u niemowląt karmionych piersią. Liczne badania wykazały, że jest możliwe osiągnięcie poziomów DHA w różnych pulach krwi niemowląt karmionych mlekiem modyfikowanym podobnych lub nawet wyższych niż poziomy u niemowląt karmionych piersią przez uzupełnienie mleka modyfikowanego o DHA. [0018] Mleko modyfikowane według wynalazku zatem zawierają DHA. Wysokie ilości samego DHA lub zastosowanie źródeł DHA dostarczających wysokich poziomów EPA, kwasu tłuszczowego prekursora DHA, może jednak prowadzić do wyczerpania statusu arachidonowego. Zatem DHA w mleku modyfikowanym według niniejszego wynalazku jest korzystnie dostarczone przez olej rybny z niskim EPA na poziomie, który jak wykazano, osiąga poziomy DHA w różnych pulach krwi u niemowląt karmionych mlekiem modyfikowanym dla niemowląt podobne do poziomów u niemowląt, które są karmione piersią. Zawartość DHA jest w zakresie między 0,2 a 0,5% całkowitych kwasów tłuszczowych w źródle lipidów. [0019] ARA jest powszechnie rozmieszczony we wszystkich błonach komórkowych; jest głównym LC-PUFA w większości tkanek obwodowych (np. sercu, wątrobie) i jest obecny w większych ilościach w tkance nerwowej. Jest również prekursorem substancji biologicznych znanych pod wspólną nazwą jako eikozanoidy: prostaglandyny, leukotrieny i tromboksany, które odgrywają rolę w regulacji odporności w procesach zapalnych i skurczu mięśni. Kwas arachidonowy jest uważany za ważny dla optymalnego wzrostu, ponieważ znaleziono istotną korelację między poziomami kwasu arachidonowego w osoczu i wzrostem ciała niemowląt. Zatem źródło lipidów mleka modyfikowanego według niniejszego wynalazku również obejmuje źródło ARA, który może być ze źródła grzybowego, takiego jak Mortierella Alpina. Stosunek ARA-DHA wynosi korzystnie między 0,8:1 i 1,2:1, bardziej korzystnie 1:1. [0020] W przeciwieństwie do ARA, DHA stanowi tylko mały procent zawartości kwasów tłuszczowych w większości tkanek, z wyjątkiem tkanek neuronalnych, takich jak siatkówka i mózg. W siatkówce jest 3

5 skoncentrowany w wyspecjalizowanych błonach zewnętrznych segmentów fotoreceptorów, które są strukturami dynamicznymi, których składniki są codziennie odnawiane i reprezentuje do 50 % kwasów tłuszczowych głównych fosfolipidów. Zwierzęta z niskimi poziomami DHA siatkówki wykazują nieprawidłowe elektroretynogramy. W mózgu całkowita ilość DHA zwiększa się dramatycznie w czasie przyspieszenia wzrostu mózgu zarówno z powodu wzrostu rozmiaru mózgu (od 100 g na początku trzeciego trymestru ciąży do około 1100g 18 miesięcy po porodzie), ale również z powodu zwiększenia się względnej zawartości DHA, która jak obliczono wzrasta w przybliżeniu 35 mg na tydzień od początku ostatniego trymestru ciąży aż do końca pierwszego roku życia. [0021] Korzystnie pozostałe tłuszcze w źródle lipidowym według wynalazku są ostrożnie dobierane, jak będzie to teraz opisane. Tłuszcz dostarcza około połowy energii żywieniowej i stanowi główną energię przechowywaną w organizmach niemowląt i małych dzieci. Obecnie, wzrasta zainteresowanie jakością dostarczania lipidu żywieniowego w czasie niemowlęctwa jako głównego czynnika determinującego wzrost, rozwój wzroku i układu nerwowego i długotrwałe zdrowie. Zatem wybór dostarczania lipidu z diety w czasie wczesnego życia jest uważany za bardzo ważny. [0022] Z powodu małego rozmiaru ich żołądków i ich ograniczonej tolerancji hipertonicznego pożywienia, niemowlęta wymagają skoncentrowanego źródła energii. Z trzech substancji odżywczych dostarczających energię tłuszcz dostarcza 9 kcal na gram tj. ponad dwukrotnie więcej energii niż obecna w węglowodanach lub białkach. Większość ekspertów zaleca, żeby w mleku modyfikowanym dla niemowląt i następnym mleku modyfikowanym tłuszcz dostarczał od 30 % do 55% całkowitej energii. Korzystnie, tłuszcze stosowane w mleku modyfikowanym według wynalazku są głównie tłuszczami roślinnymi. Jednak one i mleko odtłuszczone naturalnie zawierają ślady tłuszczu mlecznego i tak prawdopodobnie obecny bardzo mały procent tłuszczu mlecznego. [0023] Skład kwasów tłuszczowych w diecie określa skład kwasów tłuszczowych we wszystkich tkankach, w tym w tkankach magazynujących. Mieszanina tłuszczu stosowana w mleku modyfikowanym według wynalazku zatem korzystnie ma ogólny skład kwasów tłuszczowych możliwie najbardziej zbliżony do składu w mleku ludzkim w celu zapewnienia podobnej plastyczności błon i takiej samej mobilizacji energii w przypadku zwiększonych zapotrzebowań. Zatem, korzystna mieszanina tłuszczu dostarcza niezbędnych kwasów tłuszczowych (kwasów linolowego i α-linolenowego), jak również odpowiedniej jakości kwasu oleinowego, palmitynowego, laurynowego i mirystylowego. [0024] Jak wcześniej wspomniano, mleko modyfikowane według wynalazku zawiera co najmniej jeden probiotyk w celu zapewnienia wszystkim niemowlętom, niezależnie od sposobu podawania i warunków higienicznych niemowląt, korzyści z ochrony flory jelitowej. [0025] Korzystnymi probiotykami są te, które w całości są bezpieczne, są kulturami produkującymi L(+) kwas mlekowy i mają dopuszczalny okres przechowywania dla produktów, takich jak mleko modyfikowane dla niemowląt i następne, od których wymaga się, aby pozostały stabilne i skuteczne aż do 36 miesięcy. Korzystnymi przykładami probiotyków są: Bifidobacterium lactis, pierwszy sprzedawany przez Christian Company; Streptococcus thermophilus dostarczony pod nazwą TH4 przez Chr. Hansen Dania; Lactobacillus paracasei rhamnosus GG (ATCC 53103) dostarczony przez Valio Oy, Finlandia; Bifidobacterium longum BB536 dostarczony przez Morinaga Milk Industry Co. Ltd, Japonia. [0026] Probiotyki według obecnego aspektu wynalazku są korzystnie obecne w ilości 10 6 do 10 9 cfu/gramy suchego produktu, korzystnie 10 6 do 10 8, a nawet bardziej korzystnie 2x10 7 cfu/gramy suchego produktu. 4

6 [0027] Kompozycja według niniejszego wynalazku zawiera co najmniej jeden szczep probiotyczny ale kombinacje różnych szczepów mogą również być stosowane, szczególnie w następnym mleku modyfikowanym. Jeżeli taka kombinacja ma być stosowana, będzie korzystnie zawierać co najmniej jeden Bifidobacteria i co najmniej jeden Lactobacillus. Szczególnie korzystną kombinacją jest Bifidobacterium longum BB536 i Lactobacillus paracasei rhamnosus GG. [0028] Białko żywieniowe dostarcza istotnych aminokwasów niezbędnych do syntezy białka i wzrostu, a jakość białka jest równie ważna jak ilość białka. Aż dotąd uważano, że w celu dostarczenia wystarczającej ilości istotnych aminokwasów, mleko modyfikowane oparte na mleku krowim potrzebuje zawartości białka znacząco wyższej niż zawartość w referencyjnym mleku ludzkim. Zawartość białka mleka modyfikowanego opartego na zaadaptowanej serwatce jest w zakresie od 2,1 do 2,6 g na 100 kcal, podczas gdy zawartość w mleku ludzkim jest w zakresie od 1,4 do 1,8 g na 100 kcal. Nadmiar przyjmowanego białka może wywołać stres metaboliczny w narządach niemowlęcia, które nie są w pełni rozwinięte. W następstwie zaleceń pediatrycznych o obniżeniu gęstości białka mleka modyfikowanego dla niemowląt, doniesiono o próbach klinicznych w mleku modyfikowanym do karmienia niemowląt zawierającym gęstości białka między 1,6 a 2,0 g/100 kcal. Jednak te próby obniżenia zawartości białka w mleku modyfikowanym przy użyciu tradycyjnego źródła białka z mleka krowiego lub mieszaniny obecnie dostępnych frakcji kazeiny i serwatki aczkolwiek oparte na słusznej zasadzie, nie zdołały odtworzyć wszystkich wskaźników metabolizmu białek mleka ludzkiego lub zapewnić satysfakcjonujący wzrost niemowląt. Na przykład, wyniki pokazały, że globalny wzór osoczowych aminokwasów różni się od tego wzoru u niemowląt karmionych piersią, a obniżone poziomy tryptofanu w osoczu, podniesione poziomy treoniny w osoczu, opóźnienie we wzroście i wyższy pobór energii sugerują wzrost odkładania się tłuszczu, który może być odpowiedzialny za otyłość w późniejszym życiu. [0029] Frakcja białka w krowim mleku jest mieszanką kilku białek, z których wszystkie mają różny profil aminokwasowy. Kazeino-gliko-makropeptyd (CGMP) jest białkiem, które znaleziono w tej frakcji. Pochodzi on z kappa kazeiny, która jest rozszczepiona przez cięcie proteolityczne na 2/3 para-kappa kazeinę, nierozpuszczalną frakcję, która pozostaje we frakcji kazeiny i 1/3 CGMP, rozpuszczalną frakcję, która znajduje się we frakcji serwatki. Opracowano oryginalny proces frakcjonowania białek serwatki i opisano w EP ; proces ten umożliwia usunięcie praktycznie całego CGMP (frakcji bogatej w treoninę i ubogiej w tryptofan) z bydlęcej serwatki, w ten sposób zwiększając ilości alfa-laktoalbuminy (frakcji bardzo bogatej w tryptofan). Przez kombinację tej zmodyfikowanej frakcji słodkiej serwatki (MSW) z odtłuszczonym mlekiem i z dodatkiem pewnej ilości wolnej L-histydyny i L-argininy ( w celu osiągnięcia minimalnych ilości tych aminokwasów wymaganej przez Dyrektywę IE) źródło białka mleka modyfikowanego według wynalazku ma profil aminokwasowy znacznie bliższy do profilu mleka ludzkiego, scharakteryzowanego w szczególności przez porównywalne poziomy tryptofanu i treoniny, co umożliwia adaptację zawartości w nim białka do zawartości w mleku ludzkim. [0030] Wartość odżywczą tej mieszanki białek zmierzono u szczurów. Wyniki pokazują (patrz tabela 1), że ta formulacja ma wydajność wzrostową białka (PER) strawialność azotu, Wartość Biologiczną (BV) i wykorzystanie białka netto (WBN) porównywalne ze standardowym mlekiem modyfikowanym z zaadaptowaną serwatką. 5

7 Tabela 1 Parametry środka Kazeina Standardowe mleko Mleko modyfikowane odżywczego modyfikowane z zaadaptowaną według wynalazku serwatką PER 1,36 2,49 2,70 Względna PER (kazeina+100%) ,8 198,3 Strawialność ( %) 96,7 92,8 91,4 BV 0,88 0,96 0,96 NPU (%) 85,4 88,8 87,5 [0031] Ponadto szczury karmione mlekiem modyfikowanym według wynalazku wykazały istotnie obniżone poziomy treoniny w osoczu i zwiększone poziomy tryptofanu w osoczu, w porównaniu ze szczurami karmionymi standardowym mlekiem modyfikowanym z zaadaptowaną serwatka. [0032] Zawartość białka w mleku modyfikowanym według niniejszego wynalazku jest korzystnie nie większa niż 2 g/100 kcal, bardziej korzystnie mniejsza niż 1,85, najbardziej korzystnie między 1,8 a 1,85 g/100 kcal. Ten poziom jest zgodny z ostatnimi danymi oceniającymi wymagania białkowe w czasie wczesnego życia, które wykazują, że zalecenia optymalnego przyjmowania białka są niższe niż donoszono poprzednio. [0033] W celu zapewnienia optymalnej syntezy białka, a zatem optymalnego wzrostu, niezbędne i i pół niezbędne (tj. niezbędne tylko w czasie niemowlęctwa) aminokwasy muszą być podawane w tych samych ilościach jak w ludzkim mleku. Mleka modyfikowane według niniejszego wynalazku są korzystnie albo wzbogacone serwatką (kazeina/ serwatka w stosunku nastawionym na około 40/60) albo bardziej korzystnie przeważającą serwatką (stosunek kazeina/serwatka korzystnie zbliża się do 30/70 lub nawet więcej, tak jak 20/80) Korzystny profil aminokwasowy dla mleka modyfikowanego według wynalazku jest porównywalny z profilem mleka ludzkiego (patrz tabela 2) Tabela2 Aminokwas (g/16 Mleko ludzkie Wynalazek g N) Średnia Najniższa wartość Najwyższa wartość ( reprezentacyjne wartości) Izoleucyna* 6,4 5,7 6,8 5,8 Leucyna* 11,5 11,0 11,9 11,9 Lizyna* 7,9 7,4 8,4 10,0 Metionina* 1,7 1,3 2,1 2,5 Cysteina** 2,3 1,7 2,9 2,4 Fenyloalanina* 4,6 4,2 5,1 4,6 Tyrozyna** 4,7 3,3 6,3 4,0 Treonina* 5,6 5,3 6,6 5,4 Tryptofan* 2,3 1,8 2,6 2,1 Valina* 6,8 5,9 8,0 5,9 6

8 Arginina** 4,2 3,5 4,9 4,5 Histydyna** 2,8 2,4 3,8 2,5 Alanina 4,8 4,5 5,3 5,1 Kwas 10,4 10,1 10,8 11,1 asparaginowy Kwas 19,6 17,6 22,7 19,7 glutaminowy Glicyna 3,2 2,8 3,6 2,7 Prolina 10,2 8,9 11,2 7,8 Seryna 5,6 5,0 5,9 5,3 Wszystkie wartości skorygowane do 40% NH 3 * niezbędne aminokwasy **pół-niezbędne aminokwasy [0034] Białka mogą być albo nienaruszone albo częściowo zhydrolizowane przez proces, taki jak ten opisany w Europejskim Patencie nr [0035] Korzystnie jedynym źródłem węglowodanów w kompozycji według niniejszego wynalazku jest laktoza. Węglowodany stanowią ważne źródło energii w diecie nowonarodzonych niemowląt. Laktoza jest naturalnym węglowodanem w mleku ludzkim. Większość niemowląt o dobrym zdrowiu może odpowiednio trawić laktozę. Dalej, laktoza jest związana z kwasowością stolca i rozwojem w jelicie grubym Bifidobacteria i mającej przewagę mikroflory laktobacillusów o cechach rozwoju u małych dzieci karmionych piersią. Uważa się, że jest to ważne w tłumieniu wzrostu niepożądanych bakterii w jelicie grubym. Ponadto wykazano, że laktoza zwiększa absorpcję i retencję wapnia i prawdopodobnie innych minerałów. W ostatnim badaniu wykazano, że absorpcja wapnia jest o 10% większa z mleka modyfikowanego zawierającego laktozę w porównaniu z takim samym mlekiem modyfikowanym, w którym laktozę zastąpiono polimerami glukozy. [0036] Mleko modyfikowane według wynalazku może również dostarczać pół niezbędnych substancji odżywczych, które mogą być konieczne w konkretnych warunkach (np. tauryna, nukleotydy, karnityna, selen). [0037] Tauryna jest wolnym aminokwasem, który nie jest wykorzystany do budowy cząsteczek białek. Wykazano, że jest włączona w wiele funkcji fizjologicznych np. jako czynnik troficzny w rozwój ośrodkowego układu nerwowego utrzymując integralność strukturalną błony, regulując homeostazę wapnia, jako osmolit, neuromodulator i neuroprzekaźnik. Sprzęga się również z kwasami żółciowymi, tworząc sole żółciowe (niezbędne dla tworzenia się micelli i absorpcji tłuszczu). [0038] Nukleotydy są niebiałkowymi związkami azotu, które zawierają trzy charakterystyczne składniki: zasadę azotową, cukier (rybozę lub deoksyrybozę ) i jedną lub więcej grup fosforanowych. Całkowita zawartość nukleotydów w ludzkim mleku stanowi 2 do 5% niebiałkowego azotu. Mleko krowie zawiera niższe stężenia nukleotydów niż mleko ludzkie, a jego profil nukleotydowy różni się znacznie od mleka ludzkiego. Dodatek nukleotydów w niniejszym mleku modyfikowanym dla niemowląt naśladuje fizjologiczny wzór poziomów nukleotydów w mleku ludzkim z przewagą łatwo metabolizowanych pirymidyn nad mniej pożądanymi purynami; dodatek nukleotydów do mleka modyfikowanego dla niemowląt jest bezpieczny. Poziomy dodatku są w zakresie dopuszczonym przez European Scientific Committee for Food i Dyrektywę Europejską. 7

9 [0039] Karnityna jest szczególnym związkiem azotowym, który należy do grupy czynników pokarmowych znanych jako substancje odżywcze podobne do witamin. Odgrywa zasadniczo ważną rolę w dostarczaniu energii tkankom w czasie życia płodowego i w okresie noworodkowym przez ułatwianie transportu kwasów tłuszczowych o długim łańcuchu do mitochondriów, gdzie zachodzi beta-oksydacja. Kwasy tłuszczowe są rzeczywiście niezdolne do przejścia w wolnej postaci przez ścianę mitochondrialną; przejściem do mitochondriów rządzą co najmniej trzy układy enzymatyczne, mianowicie: karnityna- transferaza palmitoilowa I i II i karnityna-translokaza, w których karnityna uczestniczy. Zatem karnityna jest wymagana do właściwego utleniania lipidu, a niedobór karnityny lub niski wychwyt karnityny może prowadzić do pogorszonego wykorzystania tłuszczu i zmienionego metabolizmu lipidów. Karnityna pełni również rolę w innych procesach metabolicznych, takich jak ketogeneza, lipoliza i utrzymywanie termogenezy i metabolizmu azotu. Ponadto, karnityna poprawia u niemowląt wykorzystanie triglicerydów o średnim łańcuchu. Noworodki mają stosunkowo niskie rezerwy karnityny i bardzo niską aktywność enzymu katalizującego ostatni etap w syntezie karnityny. Zatem noworodki są szczególnie narażone na ryzyko braku karnityny przy nieobecności odpowiedniego dostarczania egzogennej karnityny. Karnityna jest korzystnie dodawana do mleka modyfikowanego dla niemowląt w celu osiągnięcia poziomu zbliżonego do poziomu w mleku ludzkim. [0040] Mleko modyfikowane według wynalazku może być w postaci proszku lub gotowej do picia cieczy. W przypadku proszkowego mleka modyfikowanego jako poradnik może być stosowana następująca tabela (tabela 4) karmienia. Jednak ilości mogą być zmienione zgodnie z poradą lekarza. Wprowadzenie mleka modyfikowanego dla niemowląt powinno być przeprowadzone pod kontrolą lekarza. Standardowa rekonstytucja mleka modyfikowanego według wynalazku stanowi 12,9% tj. 12,9 g proszku na 90 ml wody, co daje gęstość kaloryczną 67kcal/100 ml. Tabela 4 Ilość na podanie Liczba podań na dzień Wiek niemowlęcia Wcześniej Liczba miarek Mleko modyfikowane Inne przegotowana woda (ml) 1-szy i 2-gi tydzień 3-ci i 4 ty tydzień miesiąc ci i 4-ty miesiąc ty i 6-ty miesiąc Od 7-mego miesiąca dalej [0041] W przypadku cieczy gotowej do picia, należy zwrócić specjalną uwagę, aby zapewnić, że probiotyki nie wejdą przypadkowo w kontakt z cieczą. Korzystnie, probiotyk jest przechowywany w postaci proszku oddzielnie niż płyn i jest włączany i homogenizowany z cieczą przed spożyciem np. do dwóch godzin przed spożyciem. 8

10 [0042] Niniejszy wynalazek dotyczy również sposobu wzmacniania naturalnej obrony odpornościowej niemowlęcia lub małego dziecka polegającego na całkowitym lub częściowym karmieniu niemowlęcia lub małego dziecka mlekiem modyfikowanymi według wynalazku. [0043] Śluzówka jelit jest ważnym miejscem dla układu odpornościowego, a flora żołądkowo- jelitowa odgrywa dominującą rolę w rozwoju związanej z jelitem tkanki limfoidalnej (GALT). Ten wysoce uorganizowany układ odpornościowy składa się z limfoidalnych grudek, które mogą być albo izolowane albo grupują się w kępki Peyera obecne w głębokiej części śluzówki lub podśluzówki jelita cienkiego. GALT ma zdolność do odróżniania mikroorganizmów patogennych, na które gwałtownie odpowiada, od olbrzymiej matrycy antygenów z diety i mikroflory komensali, w stosunku do której pozostaje tolerancyjny. Probiotyki oddziałują z układem odpornościowym na wielu poziomach, włączając w to wytwarzanie cytokin, proliferację komórek jednojądrzastych, fagocytozę makrofagów i zabijanie, modulowanie autoodporności i odporności na patogeny bakteryjne i pierwotniakowe. Te właściwości odpornościowe mogą być swoiste szczepowo. Bifidobacterium lactis wykazał dodatni wpływ na odporność śluzówkową : u dorosłych osobników, B. lactis zwiększa stymulację fagocytozy przez limfocyty krwi obwodowej, podczas gdy u niemowląt B. lactis zwiększa wydzielanie kałowej IgA, immunoglobulin, które odgrywają ważną rolę w eliminacji patogenów. Ważniejsze jest to, że ta immunostymulacja daje jasne korzyści zdrowotne tj. zmniejszenie ryzyka biegunki u niemowląt z wysokim ryzykiem zakażenia w środowisku szpitalnym i w bardziej zwykłych warunkach dziennych centrów opieki. Podobny trend stwierdzono ostatnio w badaniu porównującym początkowe mleko modyfikowane z hydrolizowaną serwatką z różnymi poziomami białek i dodatkiem B. lactis. Miana w ślinie IgA swoistych dla rotawirusa są dobrym wskaźnikiem infekcji rotawirusowych. Podczas gdy nie są wykrywane u zdrowych noworodków, wzrastają u zakażonych niemowląt. Niemowlęta i dzieci karmione mlekiem modyfikowanym wzbogaconym B. lactis rzadziej mają wzrost ślinowych mian przeciwrotawirusowych, gdy są eksponowane na zanieczyszczone środowisko, co podtrzymuje hipotezę, że suplementacja B lactis chroni przed zakażeniem rota wirusowym. Zapalenie (zwykle charakteryzujące się zaczerwienieniem, poceniem się, obrzękiem, ciepłem i bólem) jest normalną natychmiastową odpowiedzią organizmu na infekcję. Jest częścią normalnego wrodzonego układu odpornościowego. Zbyt silna reakcja odpornościowa może zatem prowadzić do nadmiernej reakcji zapalnej. Alergia jest również wynikiem nasilenia reakcji odpornościowej z powodu niewłaściwego rozpoznania i odpowiedzi na antygeny. Odpowiednia stymulacja układu odpornościowego powinna zatem dawać odpowiednią ochronną odporność śluzówki bez nadmiernego zapalenia i rozwijać doustną tolerancję układową. U noworodków wzór odpowiedzi odpornościowej skłania się w kierunku odpowiedzi typu Th-2 prowadząc do reakcji alergicznych i będzie ewoluował w czasie ponoworodkowego dojrzewania w kierunku zrównoważenia odpowiedzi Th-1/Th-2. Flora jelitowa równoważy aktywność Th-2 i ma wpływ na rozwój wielu innych parametrów odpornościowych. Różnice w składzie flory jelitowej istniejące między noworodkami rozwijającymi alergie i niemowlętami zdrowymi: niemowlęta z atopowymi zmianami skórnymi są rzadziej kolonizowane przez bifidobacteria w porównaniu z niemowlętami zdrowymi. Probiotyki są zatem uważane za potencjalne modulatory reakcji alergicznych, ale podobnie do ochrony immunologicznej, ta aktywność jest szczepowo swoista. Właściwości przeciwzapalne B. lactis wykazano po raz pierwszy w modelach in vitro hodowli komórkowych i potwierdzono u wysoce wrażliwych niemowląt, które nie reagowały na karmienie ekstensywnie hydrolizowanym mlekiem modyfikowanym dla niemowląt. U takich niemowląt B. lactis zmniejsza objawy atopowego zapalenia skóry. Dalej, suplementacja B. lactis zapobiega zwiększeniu liczby 9

11 Bacteroides i E. coli w czasie odstawienia od piersi, a duża liczba Bacteroides i E. coli jest związana z atopowym uczuleniem u niemowląt, z atopową egzemą. Te tzw. hipotezy higieniczne sugerują, że wzrost choroby alergicznej może być spowodowany brakiem stymulacji układu odpornościowego przez ekspozycję mikrobiologiczną i skutkuje przedłużeniem wzoru niedojrzałości noworodkowej odpowiedzi prawie przez pierwsze lata życia. Ponieważ wzór odpowiedzi związanej z pierwszym kontaktem z antygenem jest prawdopodobnie zaprogramowany w długoterminowej pamięci odpornościowej niewinna wczesna ekspozycja życiowa, jaka jest realizowana przez wybrane probiotyki, takie jak. B. lactis,może mieć dalszy wkład w optymalny stan zdrowia w późniejszym życiu. [0044] Ilość i jakość lipidów żywieniowych i ich metabolizm mają główne znaczenie dla wzrostu, składu organizmu, rozwoju i długotrwałego zdrowia dzieci, zarówno w zdrowiu jak i chorobie. Lipidy są głównym źródłem energii we wczesnym dzieciństwie i dostarczają istotnych witamin rozpuszczalnych w lipidach i wielonienasyconych kwasach tłuszczowych, które są wymagane w stosunkowo wysokich ilościach w czasie wczesnego wzrostu. Lipidy wpływają na skład struktur błonowych i modulują funkcje błony, jak również rozwój funkcjonalny ośrodkowego układu nerwowego. Niektóre LC-PUFA służą jako prekursory dla bioaktywnych mediatorów lipidowych obejmujących prostaglandyny, tromboksany i leukotrieny, które są silnymi regulatorami licznych funkcji komórkowych, takich jak. agregacje trombocytów, reakcje zapalne i funkcje odpornościowe. [0045] Skład kwasów tłuszczowych komórek zapalnych i odpornościowych jest wrażliwy na zmiany zgodnie ze składem kwasu tłuszczowego diety. W szczególności proporcja różnych typów PUFA w tych komórkach szybko się zmienia, a to prowadzi do związku między przyjęciem PUFA z diety, zapaleniem i odpornością. n- 6 PUFA ARA jest prekursorem prostaglandyn, leukotrienów i pokrewnych związków, które mają ważne role w zapaleniu i regulacji odporności. Wśród innych związków lipidy, zwłaszcza kwasy wielonienasycone n-3 wykazywały wpływ na odpowiedź odpornościową. Olej rybny zawiera n-3 PUFA EPA i DHA. Karmienie olejem rybnym daje częściowe zastąpienie ARA w błonach komórkowych przez EPA. To prowadzi do zmniejszenia produkcji mediatorów pochodzących od ARA. W dodatku EPA jest substratem dla cyklooksygenazy i lipoksygenazy i prowadzi do mediatorów, które często mają różne działania biologiczne lub siłę działania niż mediatory tworzone z ARA. Badania zwierzęce wykazały, że olej roślinny z diety daje zmienione działanie limfocytu i stłumione wytwarzanie pozapalnych cytokin przez makrofagi. Suplementacja diety zdrowych ludzkich ochotników n-3 PUFA pochodzących z oleju rybnego daje zmniejszenie monocytów i chemotaksji neutrofili i zmniejsza wytwarzanie prozapalnych cytokin. Cykloksygenaza i lipooksygenaza katalizują syntezę eikozanoidów z prekursorów LCPUFA (ARA, EPA). Eikozanoidy są C-20 pochodnymi PUFA, które obejmują prostaglandyny, tromboksany i leukotrieny. Wśród ich wszechobecnych biologicznych działań, takich jak działanie na funkcje komórek odpornościowych, są one włączone w prawidłową regulację wydzielania żołądkowego i motoryki żołądka, jak również w obronę śluzówkową żołądka. Kwasy tłuszczowe n-3 wpływają na procesy aktywacji komórek zapalnych od sygnałowej transdukcji do ekspresji białek, nawet z włączeniem działań na poziomie genomowym. Mechanizmy za pośrednictwem kwasów tłuszczowych n-3 obniżały indukowaną cytokinami ekspresję cząsteczek adhezyjnych, tym samym zmniejszając interakcje zapalne leukocyty-śródbłonek i modyfikowały syntezę za pośrednictwem lipidów, zatem wpływając na migrację trans-śródbłonkową leukocytów i ogólne gromadzenie się leukocytów. Nawet repertuar metaboliczny swoistych komórek immunokompetentnych, taki jak uwalnianie cytokin lub proliferacja jest modyfikowany przez kwasy n-3. 10

12 PUFA mają wpływ na funkcję komórek T u noworodków. Przeżycie niemowląt zależy od zdolności do odpowiedzi skutecznej i właściwej na prowokacje środowiskowe. Niemowlęta rodzą się z poziomem niedojrzałości odpornościowej, który czyni je podatnymi na zakażenia i nieprawidłowe odpowiedzi dietetyczne (alergie). Funkcja limfocytów T jest słabo rozwinięta w momencie urodzin. Zmniejszona zdolność niemowląt do odpowiedzi na mitogeny może być wynikiem niskiej liczby CD45RO+ (pamięć/napiętnowany antygen) komórek T lub ich ograniczonej zdolności do wytwarzania cytokin, szczególnie interferonu-γ i interleukin IL-4 i IL-10. Było wiele ważnych zmian w optymalizowaniu substytutów mleka z piersi dla niemowląt, jednak kilka było nastawionych na zastępowanie czynników z mleka z piersi, które przekazują korzyści odpornościowe. [0046] W porównaniu ze standardowym mlekiem modyfikowanym dla niemowląt karmienie mlekiem modyfikowanym zawierającym DHA i ARA zwiększa ilość dojrzałych (CD45RO+) CD4+ komórek, poprawia produkcję IL-10 i zmniejsza wytwarzanie IL-2 do poziomów nie różniących się od poziomów u niemowląt karmionych ludzkim mlekiem. Po śluzówce ust śródbłonek jelitowy i jego związana z jelitem tkanka limfoidalna są głownymi celami dla składników żywieniowych. Błony osocza wielu typów komórek zawierają domeny wzbogacone w specyficzne lipidy (nasycone kwasy tłuszczone, sfingolipidy) i cholesterol, zwane raftami lipidowymi. Służą one jako miejsca wprowadzenia dla szeregu zdarzeń sygnalizacyjnych za pośrednictwem receptorów przez stabilizowanie interakcji receptor/kinaza, sugerując włączenie się w zapoczątkowanie kaskady sygnalizacyjnej. Usieciowanie receptorów powierzchniowych w komórkach hematopoetycznych daje wzbogacenie tych receptorów w raftach razem z innymi późniejszymi cząsteczkami sygnalizacyjnymi. Możliwe wytłumaczenie, jak sygnał jest przekazywany przez błonę plazmatyczną, nasunęło się z pomysłu raftów. Z badań nad odpowiedziami komórkowymi w błonie plazmatycznej, które wzbogacają członków rodziny Src kinazy tyrozynowej, rafty mogą działać jako centra transdukcji sygnału przez tworzenie łatek. W warunkach fizjologicznych te elementy działają synergistycznie, aby skutecznie przekazywać sygnał na błonie plazmatycznej. [0047] W limfocytach T kluczowe cząsteczki sygnalizacyjne antygenowego receptora komórek T (TCR) wiążą z raftami, przerywając połączenie raftów z pewnymi z tych anulowanych sygnalizacji TCR. Same TCR związane z lipidowymi raftami i usieciowanie TCR wywołuje agregację białek związanych z raftami. Ponadto, agregacja raftów promuje fosforylację tyrozyny i rekrutację białek sygnałowych, ale wyłącza fosfatazę tyrozynową CD45. Zatem sugeruje się, że rafty są ważne w kontrolowaniu odpowiednich interakcji białkowych w komórkach hematopoetycznych, a agregacja raftów z późniejszą ligacją receptora może być głównym mechanizmem do promowania sygnalizacji komórek odpornościowych. Aczkolwiek nie chcemy być związani z żadną teorią, uważamy, że na rafty bogate w nasycone kwasy tłuszczowe wpływają LC-PUFA z diety, co wyjaśnia część ich biologicznego wpływu na funkcje odpornościowe. Wykazano wyraźny wpływ LC-PUFA lub ich prekursorów na funkcje, takie jak odporność układowa lub metabolizm lipidów i węglowodanów, chociaż większość z nich przeprowadzono na dorosłych ludziach lub zwierzętach. [0048] Żywieniowe LC-PUFA są absorbowane i wbudowywane do błon enterocytów. Wydaje się, że modulują one miejscową odpowiedź zapalną i promują naprawę jelitową po stresie. Zatem żywieniowe LC- PUFA ulepszają naprawę jelita cienkiego np. u osobników, którzy byli wcześniej wyniszczeni. Możliwe 11

13 mechanizmy, dzięki którym LC-PUFA mogą mieć wpływ na kaskadę zapalną są zwielokrotnione. Jednakże rola LC-PUFA w specyficznej modulacji zapalenia jelita pozostaje niejasna. [0049] Szereg doniesień sugeruje regulację w górę nieswoistych funkcji barierowych przez produkty PUFA. Zatem eikozanoidy, szczególnie te pochodzące z ARA, miałyby wpływ na wydzielanie jelitowe, wydzielanie śluzówkowe i gęstość surfaktantów w śluzówce, syntezę fosfolipidów i dostarczenie cytoochrony dla śluzówki GI. Sugerowano również, że jelitowe glikotransferazy są modulowane przez ogólny wskaźnik nienasycenia kwasów tłuszczowych w diecie, podczas gdy ekspresja okludyny (główny składnik kompleksu szczelnego połączenia byłaby regulowana w górę przez kwas γ-linolenowy kwas (18:3n-6) i kwasy eikozapentaenowe i obniżany przez AA i kwas linolowy (18:2n-6). [0050] Ostatecznie PUFA i LC-PUFA mogą być zdolne do modulowania składu flory jelitowej. Kwasy linolowy i alfa-linolenowy hamują proliferację Stapchylococcus aureus. Podobnie stosunkowo wysokie stężenia, chociaż wciąż w zakresie fizjologicznym, wolnych kwasów: linolowego, gamma-linolenowego, arachidonowego, alfa-linolenowego i dekozaheksaenowego hamują wzrost i adhezję śluzówkową Lactobacillus GG casei i bulgaricus. Ponadto łagodniejsze stężenia kwasu gamma- linolenowego i ARA promują wzrost i adhezję śluzówkową L.casei. Ponadto adhezja tych bakterii do komórek Caco-2 rosnących w pożywce zawierającej PUFA jest modulowana przez typ i stężenie LC-PUFA. Przyjmując, że zdolność do przylegania do powierzchni jelitowej wydaje się być ważna dla funkcjonalności probiotyków i dla wirulencji bakterii patogennych, uważamy, że suplementacja LC-PUFA ma wpływ na efektywność probiotyków i zdolność inwazyjną patogenów. [0051] Chociaż nie chcemy wiązać się z teorią, uważamy, że korzystne działanie probiotyków jest poprawione przez ich kombinację z LC-PUFA, i że LC-PUFA promują działania probiotyków. Zatem mleko modyfikowane według wynalazku wykorzystuje synergistyczne działania tych dwóch składników. Przykłady [0052] Następujące przykłady ilustrują niektóre produkty i sposoby ich wytwarzania i są w zakresie niniejszego wynalazku. Nie mogą być rozważane w żaden sposób ograniczający wynalazek. Zmiany i modyfikacje mogą być przeprowadzone w odniesieniu do wynalazku. To znaczy, że specjalista uznai, że wiele zmian w tych przykładach pokrywa szeroki zakres mlek modyfikowanych, składników, obróbki i mieszanin do racjonalnego dostosowania naturalnie występujących poziomów związków według wynalazku do różnorodności zastosowań. Przykład 1. [0053] Następujący przykład korzystnego mleka modyfikowanego według wynalazku jest tylko ilustrujący. Substancja odżywcza Na 100 kcal Na litr Energia (kcal) Białko (g) Tłuszcz całkowity (g) w którym: Kwas linolowy (g) Kwas α-linolenowy (mg) DHA (mg)

14 ARA (mg) Laktoza (g) Minerały (g) Na (mg) K (mg) Cl (mg) Ca (mg) P (mg) Mg (mg) 7 50 Mn (µg) 8 50 Se (µg) 2 13 Witamina A (µg RE) Witamina D (µg) Witamina E (mg TE) Witamina K1 (µg) 8 54 Witamina C (mg) Witamina B1 (mg) Witamina B2 (mg) Niacyna (mg) Witamina B6 (mg) Kwas foliowy (µg) 9 60 Kwas pantotenowy (mg) Witamina B12 (µg) Biotyna (µg) Cholina (mg) Fe (mg) I (µg) Cu (mg) Zn (mg) Bifidobacterium longum BB536: 1x10 7 cfu/g suchego produktu Lactobacillus paracasei rhamnosus GG: 2x10 7 cfu/g suchego produktu Przykład 2 [0054] Ponad 300 zdrowych niemowląt o wadze urodzeniowej co najmniej 2500 g, których matki nie wybrały karmienia piersią po piątym dniu ich życia, i które brały udział w programie szczepień na zapalenie wątroby typu B, chorobę Heinego-Medina, błonicę, tężec, ksztusiec wpisano do dwóch grup równoległych w losowych kontrolowanych podwójnie ślepych próbach klinicznych. Pierwsza grupa jest karmiona mlekiem modyfikowanym z Przykładu 1, a druga grupa jest karmiona podobnym mlekiem modyfikowanym ale bez 13

15 probiotyków. Odpowiedzi niemowląt na programy szczepienia ocenia się wykorzystując miana IgG przyjęte jak następuje: zapalenie wątroby typu B Choroba Heinego-Medina DTP 7 miesięcy i 11miesięcy 6 miesięcy i 12 miesięcy 6 miesięcy i 12 miesięcy [0055] Również miana IgG i IgE przeciw bydlęcym β-laktoglobulinom oznacza się w wieku 2 i 4 miesięcy i określa się kolonizację bakterii przez analizę stolca dla wszystkich Lactobacillae, wszystkich Bifidobacteria, Clostridium perfringens, Enterobacteriacae, Bacteroides i probiotyków w drugim, czwartym i dwunastym miesiącu. Na końcu przeprowadza się ocenę funkcji barierowej jelita, jak wykazano przez poziomy IgA i kaloprotektyny w stolcach w 2 i 4 miesiącu. [0056] W dodatku, jak zwykle w badaniu tego typu, przeprowadza się pomiary antropometryczne (przybór wagi, długości, obwodu głowy) przy zapisywaniu na badania i każdego miesiąca potem i w tym samym czasie robi się te pomiary, czyni obserwacje tolerancji trawiennej (charakterystyki stolca, przypadki wymiotów i zarzucania, częstotliwości i trwania kolki) i notuje się częstotliwość epizodów śmierci (liczba przypadków obserwowanych przez specjalistów opieki otwartej plus epizody z opieki zamkniętej). [0057] Stwierdzono, że niemowlęta karmione mlekiem modyfikowanym według wynalazku na ogół wykazują zwiększoną obronę odpornościową, jak wykazano przez zwiększanie odpowiedzi na szczepienie i/lub poprawioną funkcję barierową jelita i niższe poziomy nietolerancji białka mleka krowiego związane z satysfakcjonującym rozwojem fizycznym), gdy porównuje się z grupą kontrolną. Zastrzeżenia 1. Mleko modyfikowane dla niemowląt lub mleko modyfikowane następne zawierające źródło białek, źródło lipidów, źródło węglowodanów i probiotyk, w których źródło lipidów obejmuje ARA i DHA, a zawartość DHA jest między 0,2 i 0,5% całkowitych kwasów tłuszczowych w źródle lipidów. 2. Mleko modyfikowane według zastrz. 1, w którym stosunek ARA:DHA jest między 0,8:1 i 1,2:1, korzystnie 1:1. 3. Mleko modyfikowane według dowolnego z poprzednich zastrz., w którym probiotykiem jest Bifidobacteria lub Lactobacillus. 4. Mleko modyfikowane według zastrz. 3, w którym Bifidobacteria jest Bifidobacterium longum BB Mleko modyfikowane według zastrz. 3, w którym Lactobacillus jest to Lactobacillus paracasei rhamnosus GG. 6. Mleko modyfikowane według dowolnego z poprzednich zastrzeżeń, które zawiera zarówno Bifidobacterium jak i Lactobacillus. 7. Mleko modyfikowane według zastrz. 6, w którym Bifidobacterium jest Bifidobacterium longum BB 536, a Lactobacillus jest to Lactobacillus paracasei rhamnosus GG. 8. Mleko modyfikowane według dowolnego z poprzednich zastrz., w którym co najmniej 40% białek stanowią modyfikowane białka słodkiej serwatki z brakiem CGMP lub zmniejszonym poziomem CGMP. 9. Mleko modyfikowane według zastrz. 8, w którym co najmniej 60% białek stanowią modyfikowane białka słodkiej serwatki z brakiem CGMP lub zmniejszonym poziomem CGMP. 14

16 10. Mleko według zastrz. 8 lub zastrz. 9, w którym białka są obecne w maksymalnej ilości 2g/100kcal korzystnie 1,85, bardziej korzystnie między 1,8, a 1,85 g/100kcal. 11. Zastosowanie probiotyku i źródła lipidów obejmującego DHA i ARA do wytwarzania kompozycji obejmującej źródło białek, źródło lipidów i źródło węglowodanów do zwiększania naturalnej obrony odpornościowej niemowląt lub dzieci przez pełne lub częściowe karmienie tych niemowląt lub dzieci tym mlekiem modyfikowanym, w którym zawartość DHA jest między 0,2 a 0,5% całkowitych kwasów tłuszczowych w źródle lipidowym. 15