(12) TŁUMACZENIE PATENTU EUROPEJSKIEGO (19) PL (11) PL/EP (96) Data i numer zgłoszenia patentu europejskiego:

Transkrypt

1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) TŁUMACZENIE PATENTU EUROPEJSKIEGO (19) PL (11) PL/EP (96) Data i numer zgłoszenia patentu europejskiego: (13) (51) T3 Int.Cl. A23L 1/29 ( ) A23L 1/305 ( ) Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (97) O udzieleniu patentu europejskiego ogłoszono: Europejski Biuletyn Patentowy 2011/07 EP B1 (54) Tytuł wynalazku: Zastosowanie mieszanki dla niemowląt o obniżonej zawartości białka (30) Pierwszeństwo: EP (43) Zgłoszenie ogłoszono: w Europejskim Biuletynie Patentowym nr 2007/41 (45) O złożeniu tłumaczenia patentu ogłoszono: Wiadomości Urzędu Patentowego 2011/07 (73) Uprawniony z patentu: Nestec S.A., Vevey, CH (72) Twórca(y) wynalazku: PL/EP T3 PHILIPPE STEENHOUT, La Tour-de-Peilz, CH (74) Pełnomocnik: rzecz. pat. Agnieszka Jakobsche PRZEDSIĘBIORSTWO RZECZNIKÓW PATENTOWYCH PATPOL SP. Z O.O. SKR. POCZT Warszawa 130 Uwaga: W ciągu dziewięciu miesięcy od publikacji informacji o udzieleniu patentu europejskiego, każda osoba może wnieść do Europejskiego Urzędu Patentowego sprzeciw dotyczący udzielonego patentu europejskiego. Sprzeciw wnosi się w formie uzasadnionego na piśmie oświadczenia. Uważa się go za wniesiony dopiero z chwilą wniesienia opłaty za sprzeciw (Art. 99 (1) Konwencji o udzielaniu patentów europejskich).

2 EP B1 Opis [0001] Niniejszy wynalazek odnosi się do mieszanki dla niemowląt o obniżonej zawartości białka. [0002] Mleko matki zaleca się wszystkim niemowlętom. Jednakże w pewnych przypadkach karmienie piersią jest nieodpowiednie lub nie udaje się albo jest niewskazane z powodów medycznych lub też matka decyduje się nie karmić piersią. Do takich sytuacji opracowano mieszanki dla niemowląt. Większa znajomość składu mleka ludzkiego umożliwia opracowanie mieszanek dla niemowląt zbliżonych składem do mleka ludzkiego. Szczególną uwagę zwrócono na opracowanie mieszanek, których spożycie skutkuje wzorcami wzrostu i metabolizmu podobnymi do występujących u niemowląt karmionych piersią, w nadziei, że spowoduje to rozwój podobnych cech zdrowotnych w późniejszym dzieciństwie i okresie dorosłości. [0003] Białko w diecie zapewnia podstawowe aminokwasy potrzebne do syntezy białka i wzrostu, a w mieszankach dla niemowląt jakość białka jest równie ważna co ilość białka. Mieszanki dla niemowląt zwykle opierają się na mleku krowim, ale profil aminokwasowy mleka krowiego jest dostrzegalnie różny od profilu mleka ludzkiego. W przeszłości, aby dostarczyć dostateczną ilość podstawowych aminokwasów, mieszanki dla niemowląt oparte na mleku krowim musiały posiadać znacznie wyższą zawartość białka niż w mleku ludzkim, które zresztą posiada najniższą zawartość białka stwierdzoną u jakiegokolwiek ssaka. Zawartość białka mieszanek na bazie serwatki znajduje się w zakresie od 2,1 do 2,6 g na 100 kcal, podczas gdy zawartość białka mleka ludzkiego znajduje się w zakresie od 1,4 do 1,8 g na 100 kcal. Przyjmowanie nadmiaru białka przez niemowlęta może skutkować stresem metabolicznym w niedojrzałych narządach. [0004] Ostatnio stwierdzono, że jeśli wzorzec aminokwasowy mieszanki dla niemowląt na bazie mleka krowiego zbliży się do wzorca mleka ludzkiego, można zredukować zawartość białka w takiej mieszance tak, aby przypominała mieszankę wzorcową. [0005] US-B ujawnia mieszankę dla niemowląt posiadającą 1,83 g/100 kcal zmodyfikowanej serwatki, co skutkuje poziomami aminokwasów w osoczu bliższymi poziomom stwierdzonym u niemowląt karmionych piersią. [0006] Wiadomo, że parametry wzrostu i metabolizmu niemowląt karmionych piersią i karmionych mieszanką nie są identyczne, ale różnice nie są obecnie dobrze poznane. Kluczowym punktem kontrolnym w żywieniowej regulacji wzrostu jest IGF-1, insulinopodobny peptyd wzrostu syntetyzowany przez wątrobę, znajdowany w ludzkim mleku. Wiadomo, że niemowlęta karmione mieszanką zwykle wykazują wyższe poziomy IGF-1 w osoczu niż niemowlęta karmione piersią. Przypuszcza się, że może to być kolejną konsekwencją przyjmowania nadmiaru białka przez niemowlęta karmione mieszanką. [0007] U małpich niemowląt wykazano, że obniżenie zawartości białka w mieszance skutkuje wzorcem wzrostu oraz metabolizmem insuliny i glukozy w młodym wieku bliższym temu w grupie kontrolnej karmionej piersią niż temu w grupie karmionej mieszanką o wysokiej zawartości białka. Ponadto u ludzkich niemowląt wykazano, że redukcja IGF-1 w osoczu uzyskana przez karmienie mieszanką niskobiałkową w pierwszych kilku miesiącach niemowlęctwa utrzymuje się nawet po rozpoczęciu karmienia mieszanego. Ponieważ podwyższone poziomy IGF-1 mogą skutkować odmienną kompozycją ciała i zwiększoną predyspozycją do otyłości w późniejszym życiu, regulacja poziomów IGF-1 u niemowląt karmionych mieszanką jest istotną kwestią wymagającą dalszych badań. Streszczenie Wynalazku

3 2 [0008] Obecnie stwierdzono nieoczekiwanie, że obniżenie zawartości białka w mieszance dla niemowląt skutkuje nie tylko obniżeniem poziomów IGF-1 w osoczu, ale skutkuje także poziomem IGF-1 w obiegu naśladującym w czasie poziomy obserwowane u niemowląt karmionych piersią. Innymi słowy, redukcja poziomów IGF-1 obserwowana na skutek obniżenia zawartości białka w mieszance dla niemowląt nie jest, jak sądzono wcześniej, prostą stopniową redukcją, ale obserwuje się ciągły spadek w czasie w przeciągu kilku pierwszych miesięcy życia. [0009] Odpowiednio, niniejszy wynalazek zapewnia sposób ciągłego obniżania insulinopodobnego czynnika wzrostowego 1 (IGF-1, insulin like growth factor 1) w krążeniu w pierwszych kilku miesiącach życia niemowlęcia poprzez podawanie wymagającemu tego niemowlęciu terapeutycznej ilości kompozycji żywieniowej zawierającej białka w takiej ilości, że kompozycja zawiera mniej niż 2,25 g białka na 100 kcal. [0010] Wynalazek obejmuje także na zastosowanie źródła białek do przygotowania mieszanki żywieniowej do podawania ludzkiemu niemowlęciu w taki sposób, aby w sposób ciągły obniżać poziom IGF-1 w krążeniu w pierwszych kilku miesiącach życia niemowlęcia, przy czym kompozycja zawiera mniej niż 2,25 g białka na 100 kcal. [0011] Wynalazek obejmuje ponadto na zastosowanie źródła białek do przygotowania kompozycji żywieniowej do podawania ludzkiemu niemowlęciu w pierwszych kilku miesiącach życia w taki sposób, aby obniżyć ryzyko wykształcenia się otyłości w późniejszym życiu, przy czym kompozycja zawiera mniej niż 2,25 g białka na 100 kcal. [0012] IGF1 jest niespecyficznym czynnikiem wzrostu, który stymuluje wzrost wielu tkanek. Nie chcąc być ograniczonym przez teorię, uważa się obecnie, że względnie wysoka konsumpcja białka we wczesnym życiu stymuluje wydzielanie IGF-1 i w ten sposób wywołuje namnażanie się komórek i przyspiesza dojrzewanie. Zwiększone stężenia IGF-1 mogą więc przyspieszać wzrost i zwiększać masę tkanki tłuszczowej i mięśni, wywołując tym samym wczesny skok otłuszczenia, który wiąże się z podwyższonym ryzykiem otyłości w późniejszym dzieciństwie, a nawet dorosłości. Co więcej, w ten sposób mitogeniczne efekty IGF-1 mogą oznaczać, że regulacja poziomów IGF-1 we wczesnym niemowlęctwie, taka jaką można uzyskać sposobem według wynalazku, może posiadać działanie ochronne w stosunku do rozwoju nowotworów w późniejszym życiu, w porównaniu z tą zapewnianą przez mleko matki. Figury [0013] Figura 1 pokazuje ewolucję poziomów IGF-1 w osoczu u szeregu dzieci od 28 dnia do 112 dnia życia dzieci. Szczegółowy Opis Wynalazku [0014] W opisie tym następujące wyrażenia posiadają znaczenia przypisane im przez Dyrektywę 91/321/EEC Komisji Europejskiej z 14 maja 1991 dotyczącą mieszanek dla niemowląt i dalszych mieszanek, jak następuje:- Niemowlę: dziecko w wieku poniżej 12 miesięcy (Artykuł 1.2(a)); Mieszanka dla niemowląt: artykuł spożywczy przeznaczony do określonego zastosowania żywieniowego u niemowląt w trakcie pierwszych czterech do sześciu miesięcy życia i zaspokajający samodzielnie wymagania żywieniowe tej kategorii osób (Artykuł 1.2(c)). [0015] Wyrażenie "pierwsze kilka miesięcy życia" oznacza pierwsze cztery do sześciu miesięcy życia. [0016] Uważa się, że źródło białka nie jest kluczowe dla niniejszego wynalazku, przy założeniu, że spełnione są minimalne wymagania wobec zawartości podstawowych aminokwasów i zapewniony jest

4 3 dostateczny wzrost. Zatem można stosować źródła białka oparte na białkach mleka krowiego, takie jak serwatka, kazeina i ich mieszaniny, jak również źródła białka oparte na soi. Gdy chodzi o białka serwatki, źródło białka może opierać się na kwaśnej serwatce lub słodkiej serwatce, oczyszczonych białkach serwatki lub ich mieszaninach i może zawierać alfa-laktalbuminę i beta-laktoglobulinę w dowolnych pożądanych proporcjach. [0017] Korzystnie jednak źródło białka jest oparte na zmodyfikowanej słodkiej serwatce. Słodka serwatka jest łatwo dostępnym produktem ubocznym produkcji sera i jest często używana do wytwarzania mieszanek dla niemowląt na bazie mleka krowiego. Jednakże słodka serwatka zawiera składnik, który jest niepożądanie bogaty w treoninę, a ubogi w tryptofan, nazywany kazeino-gliko-makropeptydem (CGMP). Usunięcie CGMP ze słodkiej serwatki daje białko o zawartości treoniny bliższej mleku ludzkiemu. Tę zmodyfikowaną słodką serwatkę można uzupełnić tymi aminokwasami, których zawartość jest niska (głównie histydyną, argininą i tryptofanem). Proces usuwania CGMP ze słodkiej serwatki opisano w EP , a mieszankę dla niemowląt opartą na tej zmodyfikowanej słodkiej serwatce opisano w WO 01/ Zastosowanie zmodyfikowanej słodkiej serwatki jako głównego białka w źródle białka umożliwia zapewnienie wszystkich podstawowych aminokwasów przy zawartości białka między 1,8 a 2,0 g/100 kcal. W badaniach nad zwierzętami i ludźmi wykazano, że takie źródła białka posiadają stosunek wydajności białka, strawności azotu, wartości biologicznej i wykorzystania białka netto porównywalne ze standardowymi źródłami białka opartymi na serwatce o dużo wyższej zawartości białka na 100 kcal i że skutkują dostatecznym wzrostem mimo ich obniżonej zawartości białka. Jeśli jako źródło białka stosuje się słodką serwatkę, korzystnie uzupełnia się ją wolną argininą w ilości od 0,1 do 3% wagowych i/lub wolną histydyną w ilości od 0,1 do 1,5% wagowych. [0018] Przykład odpowiedniego profilu aminokwasowego kompozycji żywieniowej wykorzystywanej w niniejszym wynalazku podano poniżej:- Aminokwas (g/16 g N) Ilość Izoleucyna 5,8 Leucyna 11,9 Lizyna 10,0 Metionina 2,5 Cystyna 2,4 Fenyloalanina 4,6 Tyrozyna 4,0 Treonina 5,4 Tryptofan 2,1 Walina 5,9 Arginina 4,5 Histydyna 2,5 Alanina 5,1 Kwas asparaginowy 11,1 Kwas glutaminowy 19,7

5 Aminokwas (g/16 g N) Ilość Glicyna 2,7 Prolina 7,8 Seryna 5,3 4 [0019] Białka mogą być w pierwotnej postaci lub zhydrolizowane albo być mieszaniną białek w pierwotnej postaci i zhydrolizowanych, chociaż korzystne na ogół są białka w pierwotnej postaci. Jednakże może być pożądane podawanie częściowo zhydrolizowanych białek (stopień hydrolizy między 2 a 20%), na przykład u niemowląt, o których uważa się, że zagraża im wykształcenie alergii na mleko krowie. Jeśli wymagane są zhydrolizowane białka, proces hydrolizy można przeprowadzać według potrzeby i zgodnie z wiedzą w stanie techniki. Na przykład hydrolizat białka serwatki można przygotować przez enzymatyczną hydrolizę frakcji serwatki w jednym lub kilku etapach. Dla białek zhydrolizowanych w dużym stopniu, białka serwatki można poddać trzykrotnej hydrolizie, stosując Alcalase 2.4L (EC ), następnie Neutrase 0.5L (dostępna od Novo Nordisk Ferment AG), a potem pankreatynę w 55 C. Alternatywnie, dla mniej zhydrolizowanych białek, serwatkę można poddać podwójnej hydrolizie z zastosowaniem NOVOZYMES, a następnie pankreatyny. Stwierdzono, że jeśli frakcja serwatki stosowana jako materiał wyjściowy jest zasadniczo wolna od laktozy, białko podlega blokowaniu lizyny w procesie hydrolizy w dużo mniejszym stopniu. To umożliwia redukcję blokowania lizyny z około 15% wagowych całkowitej lizyny do mniej niż około 10% wagowych lizyny; na przykład około 7% wagowych lizyny, co znacząco zwiększa jakość żywieniową źródła białka. [0020] Kompozycja żywieniowa zawiera korzystnie między 1,8 a 2,0 g białka/100 kcal, korzystniej między 1,82 a 1,92 g/100 kcal. [0021] Kompozycja żywieniowa jest korzystnie mieszanką dla niemowląt. Taka kompletna kompozycja żywieniowa będzie zawierać także inne składniki, w rodzaju występujących zwykle w mieszankach dla niemowląt, takie jak węglowodany, tłuszcze, witaminy i minerały, jak również pół-podstawowe składniki żywieniowe. [0022] Korzystnym źródłem węglowodanów jest laktoza, jakkolwiek można dodać inne węglowodany, takie jak sacharozę, malto-dekstrynę i skrobię. Źródła węglowodanów dostarczają korzystnie między 35 a 65% całkowitej energii mieszanki. [0023] Źródłem lipidów może być dowolny lipid lub tłuszcz, który jest odpowiedni do stosowania w mieszankach dla niemowląt. Korzystne źródła tłuszczu obejmują oleinę palmową, olej słonecznikowy o wysokiej zawartości kwasu oleinowego i olej z nasion krokosza barwierskiego o wysokiej zawartości kwasu oleinowego. Podstawowe kwasy tłuszczowe, kwas linolowy i α-linolowy, można dodać jako niewielkie ilości olejów zawierających duże ilości wcześniej wytworzonych kwasu arachidonowego i kwasu dokozaheksaenowego, takich jak oleje rybie i oleje mikrobialne. W sumie całkowita zawartość tłuszczu jest korzystnie taka, aby stanowić między 30 a 55% całkowitej energii mieszanki. Źródło tłuszczu ma korzystnie stosunek kwasów tłuszczowych n-6 do n-3 równy około 5:1 do około 15:1, na przykład około 8:1 do około 10:1. [0024] Mieszanka dla niemowląt będzie także zawierać wszystkie witaminy i minerały uważane za podstawowe w dziennej diecie, w ilościach istotnych pod kątem żywienia. Ustalono minimalne wymagania wobec pewnych witamin i minerałów. Przykłady minerałów, witamin i innych składników

6 5 pokarmowych występujących opcjonalnie w mieszance dla niemowląt obejmują witaminę A, witaminę B 1, witaminę B 2, witaminę B 6, witaminę B 12, witaminę E, witaminę K, witaminę C, witaminę D, kwas foliowy, inozytol, niacynę, biotynę, kwas pantotenowy, cholinę, wapń, fosfor, jod, żelazo, magnez, miedź, cynk, mangan, chlor, potas, sód, selen, chrom, molibden, taurynę i L-karnitynę. Minerały dodaje się zwykle pod postacią soli. Obecność i ilość określonych minerałów i innych witamin będzie się zmieniać w zależności od docelowej populacji niemowląt. [0025] Jeśli to konieczne, mieszanka dla niemowląt może zawierać emulgatory i stabilizatory, takie jak lecytynę sojową, estry kwasu cytrynowego mono- i diglicerydów i im podobne. Ma to miejsce w szczególności gdy mieszankę zapewnia się w postaci płynnej. [0026] Mieszanka dla niemowląt może opcjonalnie zawierać inne substancje, które mogą posiadać korzystne działanie, takie jak błonnik, laktoferryna, nukleotydy, nukleozydy i im podobne. Można także dodać probiotyczne bakterie takie jak Bifidobacterium longum BB 536 i Lactobacillus rhamnosus LGG. [0027] Mieszankę dla niemowląt można przygotować w dowolny odpowiedni sposób. Przykładowo mieszankę dla niemowląt można przygotować mieszając razem źródło białka, źródło węglowodanów i źródło tłuszczu w odpowiednich proporcjach. Emulgatory, jeśli są stosowane, można na tym etapie dołączyć do mieszaniny. W tym momencie można też dodać witaminy i minerały, ale zwykle dodaje się je później, aby uniknąć rozkładu termicznego. Wszelkie lipofilowe witaminy, emulgatory i im podobne można rozpuścić w źródle tłuszczu przed zmieszaniem. Można także dodać wodę, korzystnie wodę, którą poddano odwróconej osmozie, w celu utworzenia płynnej mieszaniny. [0028] Płynną mieszaninę można następnie poddać obróbce termicznej w celu obniżenia zawartości bakterii. Przykładowo płynną mieszaninę można szybko podgrzać do temperatury w zakresie od około 80 C do około 110 C na około 5 sekund do około 5 minut. Można to wykonać poprzez wdmuchanie pary wodnej lub poprzez wymiennik ciepła; na przykład płytowy wymiennik ciepła. [0029] Płynną mieszaninę można następnie ochłodzić do około 60 C do około 85 C; na przykład poprzez schładzanie typu "flash". Płynną mieszankę można wówczas zhomogenizować; na przykład w dwóch etapach przy około 7 MPa do około 40 MPa w pierwszym etapie i około 2 MPa do około 14 MPa w drugim etapie. Zhomogenizowaną mieszaninę można wówczas dalej ochładzać i dodać wszelkie wrażliwe na ciepło składniki, takie jak witaminy i minerały. Na tym etapie dogodnie standaryzuje się zawartość ciał stałych i ph zhomogenizowanej mieszaniny. [0030] Jeśli pożądana jest produkcja sproszkowanej mieszanki dla niemowląt, zhomogenizowaną mieszankę przenosi się do odpowiedniego aparatu suszącego, takiego jak suszarka rozpryskowa lub suszarka sublimacyjna, i przekształca w proszek. Proszek powinien posiadać zawartość wilgoci niższą niż około 5% wagowych. [0031] Jeśli pożądana jest produkcja płynnej mieszanki dla niemowląt, zhomogenizowaną mieszanką wypełnia się odpowiednie pojemniki; korzystnie w sposób aseptyczny. Jednakże płynną mieszankę dla niemowląt można także ogrzewać w pojemniku na zasadzie retorty. W handlu dostępny jest odpowiedni aparat do przeprowadzania tego rodzaju wypełniania. Płynna mieszanka dla niemowląt może mieć postać mieszanki gotowej do karmienia, posiadającej zawartość ciał stałych od około 10 do około 14% wagowych albo może mieć postać koncentratu; zwykle o zawartości ciał stałych od około 20 do około 26% wagowych.

7 6 [0032] Przykład składu odpowiedniej mieszanki żywieniowej wykorzystywanej w niniejszym wynalazku podano poniżej:- Składnik pokarmowy na 100 kcal na litr Energia (kcal) Białko (g) 1,83 12,3 Tłuszcz (g) 5,3 35,7 Kwas linolowy (g) 0,79 5,3 Kwas α-linolowy (mg) Laktoza (g) 11,2 74,7 Minerały (g) 0,37 2,5 Na (mg) K (mg) Cl (mg) Ca (mg) P (mg) Mg (mg) 7 50 Mn (µg) 8 50 Se (µg) 2 13 Witamina A (µg RE) Witamina D (µg) 1,5 10 Witamina E (mg TE) 0,8 5,4 Witamina K1 (µg) 8 54 Witamina C (mg) Witamina B1 (mg) 0,07 0,47 Witamina B2 (mg) 0,15 1,0 Niacyna (mg) 1 6,7 Witamina B6 (mg) 0,075 0,50 Kwas foliowy (µg) 9 60 Kwas pantotenowy (mg) 0,45 3 Witamina B12 (µg) 0,3 2 Biotyna (µg) 2,2 15 Cholina (mg) Fe (mg) 1,2 8 I (µg) Cu (mg) 0,06 0,4 Zn (mg) 0,75 5 [0033] Następujący przykład podano jedynie na zasadzie ilustracji i nie powinien być rozumiany jako ograniczający przedmiot niniejszego zgłoszenia.

8 7 Przykład Wpływ zawartości białka na poziomy IGF-1 w osoczu w pierwszych czterech miesiącach życia [0034] Przykład ten pokazuje wpływ zawartości białka mieszanki dla niemowląt stosowanej jako jedyne źródło pokarmu u grupy niemowląt przez pierwsze cztery miesiące ich życia na ich poziomy IGF-1 w osoczu. [0035] Prospektywne, zrandomizowane, ślepe badanie z kontrolą na trzech równoległych grupach prowadzono na University of Iowa (Lora N. Thomas Metabolism Ward) i w jego oddziale w Cedar Rapids, Iowa, w zgodzie z zasadami ustanowionymi w Deklaracji Helsińskiej z 1964 (z poprawkami) i za zgodą Komitetu ds. Badań Obejmujących Ludzkie Podmioty University of Iowa. Niemowlęta, których matki zdecydowały się nie karmić piersią, wytypowano w oddziałach położniczych dwóch szpitali w Iowa City i dwóch w Cedar Rapids oraz losowo przypisano do jednej z trzech grup. Grupę kontrolną karmiono częściowo zhydrolizowaną mieszanką dla niemowląt o zawartości białka wynoszącej 2,39 g/100 kcal handlowo dostępną w Stanach Zjednoczonych pod nazwą handlową Good Start. Z pozostałych dwóch grup jedną karmiono eksperymentalną częściowo zhydrolizowaną mieszanką o zawartości białka wynoszącej 1,92 g/100 kcal, a drugą karmiono podobną eksperymentalną mieszanką o zawartości białka wynoszącej 1,89 g/100 kcal, ale z dodatkiem probiotycznej bakterii Bifidobacterium lactis Bb12 (dostępnej od Christian Hansen, Dania) w ilości 3.6 x 10 7 jednostek tworzących kolonię na gram proszku mieszanki (równoważne z 4.8 x 10 9 CFU/litr). We wszystkich mieszankach białko składało się z częściowo zhydrolizowanych białek serwatki. Eksperymentalne mieszanki otrzymano ze słodkiej serwatki, a mieszankę kontrolną z kwaśnej serwatki. Mieszanki dostarczano zapakowane w metalowe puszki z zawartością oznaczoną kodem barwnym znanym tylko personelowi badawczemu. [0036] Składy mieszanek podsumowano w następującej tabeli:- Stężenia podano na litr, o ile nie zaznaczono inaczej Eksperymentalna Eksperymentalna z probiotykiem Kontrola Energia (kcal) Białko (g) 13,1 12,8 16,0 -g/100 kcal 1,92 1,89 2,39 Tłuszcz (g) 34,6 34,6 34,6 Laktoza (g) 55,3 55,3 55,3 Maltodekstryna (g) 23,7 23,7 21,5 Na (mmol) 8,7 8,7 7,0 K (mmol) 16,7 16,7 16,5 Cl (mmol) 13,0 13,0 11,0 Ca (mg) P (mg) Mg (mg) 48,1 48,3 50,2 Mn (µg) Se (µg) Fe (mg) 7,1 7,3 12,9 I (µg) Cu (mg) 0,645 0,643 0,733 Zn (mg) 7,3 7,35 6,75

9 8 [0037] Profile aminokwasowe mieszanek były następujące:- Aminokwasy (g/l) Eksperymentalna Kontrola Alanina 0,72 0,88 Arginina 0,65 0,43 Kwas asparaginowy 1,61 1,97 Cysteina 0,42 0,41 Kwas glutaminowy 2,42 3,16 Glicyna 0,25 0,35 Histydyna 0,40 0,32 Izoleucyna 0,80 1,10 Leucyna 1,73 1,90 Lizyna 1,40 1,54 Metionina 0,32 0,35 Fenyloalanina 0,47 0,56 Prolina 0,66 1,06 Seryna 0,57 0,89 Treonina 0,76 1,30 Tryptofan 0,31 0,29 Tyrozyna 0,42 0,40 Walina 0,77 1,05 Rozkład Wielkości Peptydów (%) >5000 Da 1,8 8, Da 6,9 8, Da 28,6 27,8 <1000 Da 62,8 64,5 [0038] Wytypowano140 niemowląt z takim zamiarem, że co najmniej 28 w każdej grupie ukończy badanie. Podmiotami były normalne, zdrowe, urodzone w terminie niemowlęta w wieku 6 do 9 dni. Wytypowano mniej więcej równe liczby dziewczynek i chłopców. Badanie na każdym niemowlęciu kończono po 112 dniach. Niemowlęta karmiono ad libitum przypisaną im mieszanką jako jedynym źródłem pokarmu. Dane zbierano z rejestrów urodzenia, w momencie rejestracji i przy okazji wizyt w dniach 14 (± 2), 28 (± 2), 42 (± 2), 56 (± 4), 84 (± 4) i 112 (± 4). [0039] Wykonywano i zachowywano wartości następujących pomiarów:- [0040] Wzrost oceniano pomiarami antropometrycznymi, obejmującymi masę, długość i obwód głowy. Rejestrowano przyjmowanie pokarmu, a tolerancję na mieszanki oceniano stosując rejestry tolerancji w przeciągu dwóch dni, rejestrując stolce i zachowania związane z jedzeniem. Kapilarne próbki krwi pobierano w Dniach 28, 56, 84 i 112, a laboratoryjne analizy próbek osocza przeprowadzano dla albuminy, całkowitego białka, azotu mocznikowego w osoczu, hemoglobiny, wolnych aminokwasów w osoczu (tylko dni 28 i 112), IGF-1 i leptyny. [0041] Nie stwierdzono znaczących różnic w średnim przyroście masy, średnim przyroście długości i średnim obwodzie głowy między trzema mieszankami. Nie było znacznych różnic w statusie białek z wyjątkiem azotu mocznikowego w osoczu, którego było więcej w przypadku mieszanki kontrolnej

10 9 (p<0,001). Nie stwierdzono znaczących różnic w poziomach leptyny w osoczu. Jednakże, odniesienie się do Figury 1 na rysunkach pokazuje, że w okresie badania zaobserwowano znaczną różnicę w rozwoju poziomów IGF-1 w osoczu u niemowląt karmionych mieszanką kontrolną, w porównaniu z niemowlętami karmionymi mieszankami eksperymentalnymi. [0042] U niemowląt karmionych eksperymentalnymi mieszankami poziomy IGF-1 znacznie spadły (p=0.013) między dniem 28 a dniem 112. Poziomy IGF-1 wynosiły średnio 79.3 ± 34.0 (średnia±sd, N=35) w 28 dniu i 58.9 ± 37.8 (N=41) w 112 dniu życia. Z drugiej strony, u niemowląt karmionych mieszanką kontrolną poziomy IGF-1 nie spadły. U tych niemowląt poziomy IGF-1 wynosiły średnio 77.5 ± 31.0 (N=21) w 28 dniu i 80.8 ± 37.8 (N=27) w 112 dniu życia. Dodanie probiotyku nie miało wpływu na poziomy IGF-1. Wyniki te są oparte na próbkach krwi pobranych od 88 niemowląt, co jest liczbą niemowląt, które ukończyły badanie i w okresie badania nie otrzymywały innych mieszanek dla niemowląt lub pokarmów stosowanych przy odstawianiu dziecka od piersi. [0043] Wyniki te przedstawiono graficznie na Figurze 1, która pokazuje poziomy IGF-1 w osoczu w µg/l oznaczone w próbkach krwi pobranych podczas wizyt w dniach 28, 56, 84 i 112. Widać, że przez większość okresu badania poziomy IGF-1 u niemowląt karmionych eksperymentalnymi mieszankami nie tylko były niższe niż u tych karmionych mieszanką kontrolną, ale także poziomy IGF-1 u niemowląt karmionych mieszankami eksperymentalnymi stale spadały przez okres badania i co więcej w tempie zasadniczo porównywalnym ze spadkiem poziomów IGF-1 w osoczu u niemowląt karmionych w tym samym okresie piersią (dane z wcześniejszego badania). Dla porównania, poziomy IGF-1 w osoczu u niemowląt karmionych mieszanką kontrolną niemal nie zmieniały się przez okres badania. Zważywszy na rolę odgrywaną przez IGF-1 w regulacji wzrostu, mogłoby to w dalszej kolejności zapewniać mechanizm ograniczania ryzyka otyłości w dalszym życiu u niemowląt karmionych mieszankami. Zastrzeżenia patentowe 1. Zastosowanie źródła białek do przygotowania kompozycji żywieniowej do podawania ludzkiemu niemowlęciu w taki sposób, aby w sposób ciągły obniżać poziom IGF-1 w krążeniu w pierwszych kilku miesiącach życia niemowlęcia, przy czym kompozycja zawiera mniej niż 2,25 g białka na 100 kcal. 2. Zastosowanie źródła białek do przygotowania kompozycji żywieniowej do podawania ludzkiemu niemowlęciu w pierwszych kilku miesiącach życia w taki sposób, aby obniżyć ryzyko wykształcenia się otyłości w późniejszym życiu, przy czym kompozycja zawiera mniej niż 2,25 g białka na 100 kcal. 3. Zastosowanie według zastrzeżenia 1 albo 2, w którym kompozycja zawiera między 1,8 a 2,0 g białka na 100 kcal. 4. Zastosowanie według któregokolwiek z wcześniejszych zastrzeżeń, w którym źródłem białek jest krowie mleko. 5. Zastosowanie według któregokolwiek z wcześniejszych zastrzeżeń, w którym źródłem białek jest białko słodkiej serwatki, z którego usunięto kazeino-gliko-makropeptyd. 6. Zastosowanie według zastrzeżenia 5, w którym kompozycja zawiera dodatkowo wolną argininę w ilości od 0,1 do 3,0 % wagowych i/lub wolną histydynę w ilości od 0,1 do 1,5 % wagowych.

11 10 7. Zastosowanie według któregokolwiek z wcześniejszych zastrzeżeń, w którym białka są nienaruszone. 8. Zastosowanie według któregokolwiek z zastrzeżeń od 1 do 7, w którym białka są częściowo zhydrolizowane. 9. Zastosowanie według zastrzeżenia 8, w którym stopień hydrolizy białek wynosi między 2 a 20%. 10. Zastosowanie według któregokolwiek z wcześniejszych zastrzeżeń, w którym kompozycja żywieniowa jest mieszanką dla niemowląt.

12 11

13 12 ODNOŚNIKI CYTOWANE W OPISIE Ta lista odnośników cytowanych przez zgłaszającego ma na celu wyłącznie pomoc dla czytającego i nie stanowi części dokumentu patentu europejskiego. Nawet jeżeli dołożono największej troski do jego ujęcia, nie można wykluczyć błędów i przeoczeń i OEB odrzuca wszelką odpowiedzialność pod tym względem. Dokumenty patentowe cytowane w opisie US B1 [0005] WO A [0017] EP A [0017] EC [0019]