Analityka mikrobiologia, zajęcia praktyczne.

Transkrypt

1 Analityka mikrobiologia, zajęcia praktyczne. 1. Podstawy różnicowania bakterii i grzybów Ocena morfologii bakterii i grzybów: a/ preparaty przyżyciowe (mokre, świeże) kropla wisząca Technika kropli wiszącej - na rogi szkiełka nakrywkowego namieść małe ilości wazeliny - na środku szkiełka umieścić 2 oczka zawiesiny bakterii/grzybów - na szkiełko nakrywkowe nałożyć szkiełko podstawowe z wgłębieniem tak, aby kropla znalazła się we wgłębieniu - oglądać w mikroskopie świetlnym b/ preparaty barwione A. Metody pozytywne (wybarwione bakterie) a/ barwienie proste, np. błękitem metylenowym wg Lőfflera Przygotowanie barwnika: 1. roztwór macierzysty (nasycony) trzymać w cieplarce ok. 2 tyg, mieszać codziennie 96% etanol 100 ml błękit metylenowy 5 g 2. roztwór barwiący wg Lőfflera roztwór macierzysty 30 ml KOH 1% 1 ml (1 g KOH rozpuszcza się w 100 ml wody destylowanej) Barwienie błękitem metylenowym wg Lőfflera: - przygotowanie preparatu: odtłuszczone szkiełko podstawowe, nałożenie bakterii (z hodowli płynnej -1-2 ezy, stałej kropla soli + zawiesina bakterii/grzybów, rozprowadzenie) - utrwalenie preparatu (nad płomieniem) - barwienie: błękit metylenowy 3 min. - spłukać wodą - po wyschnięciu oglądamy pod imersją: wszystkie bakterie, grzyby barwią się na niebiesko b/ barwienie złożone Metoda Grama Przygotowanie barwników: a. Fiolet krystaliczny (odczynnik Grama) 1. roztwór macierzysty (nasycony) trzymać w cieplarce ok. 2 tyg, wstrząsać codziennie 96% etanol 100 ml fiolet krystaliczny 10 g 2. roztwór barwiący roztwór macierzysty 30 ml woda destylowana (ciepła) 90 ml fenol 0,45 ml przesączyć przez bibułę b. Płyn Lugola (roztwór jodu w jodku potasowym) jod 1 g jodek potasowym 2 g woda destylowana 300 g najpierw rozpuszczamy jodek w ok. 5 ml H 2 O, potem dodajemy jod, wstrząsamy, dodajemy resztę wody, całość podgrzewamy na gazie (nie dopuszczając do wrzenia wstawić do garnka, 2-3 godz.) lub w aparacie Kocha, na drugi dzień przesączyć przez bibułę.

2 c. Fuksyna karbolowa 1. roztwór macierzysty (nasycony) trzymać w cieplarce ok. 2 tyg, wstrząsać codziennie 96% etanol 90 ml fuksyna karbolowa 10 g 2. roztwór barwiący roztwór macierzysty 30 ml woda destylowana (ciepła) 90 ml fenol 0,45 ml przesączyć przez watę i bibułę Barwienie metodą Grama - przygotowanie preparatu: odtłuszczone szkiełko podstawowe, nałożenie bakterii (z hodowli płynnej ezy, stałej kropla soli + zawiesina bakterii/grzybów, rozprowadzenie) - utrwalenie preparatu (nad płomieniem) - barwienie: 1. fiolet krystaliczny 3 min. spłukać niewielką ilością wody 2. płyn Lugola - 2 min. spłukać wodą 3. etanol kilka sekund spłukać wodą 4. fuksyna 30 sek. spłukać wodą - po wyschnięciu oglądamy pod imersją: drobnoustroje Gram-dodatnie granatowe, Gram-ujemne czerwone Barwienie metodą Ziehl-Neelsena Przygotowanie barwników/odczynników: a. Fuksyna karbolowa 1. roztwór macierzysty (nasycony) trzymać w cieplarce ok. 2 tyg, wstrząsać codziennie 96% etanol 90 ml fuksyna karbolowa 10 g 2. roztwór barwiący roztwór macierzysty 10 ml woda destylowana (ciepła) 100 ml karbol 5 ml przesączyć bibułę b. Kwaśny alkohol 96% etanol 100 ml kwas solny 3 ml c. błękit metylenowy jw. Barwienie metodą Ziehl-Neelsena - przygotowanie preparatu z hodowli - utrwalenie (nad płomieniem) - barwienie: 1. fuksyna karbolowa nalewamy, trzykrotnie podgrzewamy preparat nad palnikiem do pojawienia się pary spłukać wodą 2. kwaśny alkohol odbarwiać aż będzie spływał czysty alkohol spłukać wodą 3. błękit metylenowy 1-2 min. spłukać wodą - po wyschnięciu oglądamy pod imersją: bakterie kwasooporne są czerwone, inne składniki niebieskie

3 Barwienie metodą Neissera Barwniki: 1. Neisser I: błękit metylenowy 1 g 96% etanol 20 ml kwas octowy lodowaty 50 ml woda destylowana 1000 ml 2. Neisser II: fiolet krystaliczny 1 g 96% etanol 2 ml woda destylowana 300 ml 3. Chryzoidyna 1 g woda destylowana (ciepła) 300 ml Przed użyciem miesza się 2 części barwnika I i 1 część barwnika II. Barwienie metodą Neissera (do wybarwienia ziarnistości wolutyny) - przygotowanie preparatu z hodowli - utrwalenie (nad płomieniem) - barwienie: Neisser I + II 10 min spłukać wodą chryzoidyna 30 sek spłukać wodą - po wyschnięciu oglądamy pod imersją: ziarnistości granatowe, komórki żółte Metoda pozytywno- negatywna z czerwienią Kongo Przygotowanie czerwieni Kongo: Czerwień Kongo 2 g woda destylowana 98 ml podgrzać, przefiltrować przez bibułę Barwienie metodą z czerwienią Kongo (obecność otoczek) - przygotowanie preparatu z hodowli - utrwalenie (nad płomieniem) - barwienie: 1. fiolet krystaliczny 3 min. spłukać niewielką ilością wody 2. płyn Lugola - 2 min. spłukać wodą 3. czerwień Kongo 1 min. zlać, nie spłukiwać - po wyschnięciu oglądamy pod imersją: bakterie granatowe, tło czerwone, otoczki niezabarwione Warunkiem praktycznego zaliczenia ćwiczenia 1a i 1b jest wykonanie preparatów z różnych bakterii i grzybów, zabarwienie w/w metodami, analiza mikroskopowa preparatów własnych i pokazowych.

4 Analityka. Protokół 1ab 1. Wykonaj i obejrzyj preparat przyżyciowy bezpośredni lub z hodowli. 2. Wykonaj i oceń (zanotuj wyniki) preparaty (z hodowli) barwione: a/ metodą Grama b/ Ziehl-Neelsena, Lőfflera pozytywno-negatywną 3. Preparaty pokazowe: obejrzyj pod mikroskopem i narysuj to co widzisz: pałeczki Gram-ujemne pałeczki Gram-dodatnie ziarniaki Gram-ujemne ziarniaki Gram-dodatnie laseczki drożdżaki barwienie na otoczki 4. Obejrzyj i opisz 4 preparaty bezpośrednie z różnych materiałów klinicznych ( ropa, plwocina, krew, wymaz z pochwy): 5. Wykonaj posiew wybranych bakterii na podłoża półpłynne i stałe. Następnego dnia dokonaj odczytu i narysuj wynik.

5 Analityka. Protokół 2ab. Fizjologia 1. Agar krwawy agar z dodatkiem 5 % krwi baraniej (owczej) Obejrzyj rodzaje hemolizy paciorkowców na podłożu krwawym opisz wygląd Alfa Beta Gamma podaj przykłady podaj przykłady podaj przykłady 2. Wykonaj test na obecność katalazy z podłoża krwawego z kolonii wskazanych przez asystenta i oceń czy są to bakterie katalazo-dodatnie czy katalazo ujemne. Wpisz wynik. 3. Wykonaj test z 3% KOH z 2 bakteriami Gram-dodatnimi i Gram-ujemnymi. Podaj wynik. 4. Wykonaj test na oksydazę z kolonii wskazanych przez asystenta. Wpisz wynik 5. Uzupełnij tabelę: rodzaj podłoża czynnik wybiórczy czynnik różnicujący dla jakich drobnoustrojó w możliwa barwa kolonii z krwią owczą Chapmana (MSA) MacConke ya czekoladowe Coccosel Pyocyanos el Sabourauda 6. Scharakteryzuj jakie bakterie mogą rosnąć na wskazanym przez asystenta podłożu chromogennym kierując się kolorem kolonii posługując się wzorcem kolorów danego podłoża. 7. Wykonaj test biochemiczny typu API z bakterii wskazanych przez asystenta. Następnego dnia odczytaj test.

6 8. Hodowla drobnoustrojów w podłożu płynnym zaznacz na rysunku w której części probówki rosną bakterie wybitnie tlenowe, względnie beztlenowe i bezwzględnie beztlenowe. Podaj po 2 przykłady bakterii. 9. Wykonaj posiew z materiału biologicznego na podłoża stałe i płynne. Wykonaj przesiew dowolnych bakterii/drożdżaków na podłoże stałe. Następnego dnia oceń hodowlę. 10. Wykonanie testu na rozkład indolu i malonianu. Następnego dnia odczytaj test.

7 Analityka. Protokół 3ab. Wirusy i związki. 1. Wykonaj test hemaglutynacji szkiełkowej, opisz wynik 2. Odczytaj test zahamowania hemaglutynacji 3. W diagnostyce jakich zakażeń wirusowych stosowane są testy hem aglutynacyjne 4. Wykonanie i odczyt testu na obecność wirusa grypy typu A -i B pobranie materiału od przeziębionego studenta i demonstracja testu przez studenta z pomocą asystenta. Opisz pobranie materiału, sposób wykonania testu oraz przedstaw graficznie rezultat. 5. Obejrzyj w mikroskopie fluorescencyjnym wirusa wścieklizny (DIF) opisz preparat 6. Ocena efektu cytopatycznego w przygotowanych preparatach tkankowych. Przedstaw graficznie możliwe efekty cytopatyczne w komórkach po zakażeniu wirusowym. 7. Obejrzyj posiew z mamką i płytkę z biologiczną hodowlą beztlenowców. Zanotuj obserwacje. 8. Pobieranie wymazów z nosa, gardła, ucha, skóry, wykonanie posiewów redukcyjnych. Następnego dnia: ocena posiewów na poszczególnych podłożach, wykonanie preparatów z hodowli, wstępna identyfikacja za pomocą szybkich testów, przesiewy do ostateczne identyfikacji. Zanotuj wyniki.

8 Analityka. Protokół 4ab (pob. mat., dezynf.) 1. Obejrzyj i zapisz zastosowanie zestawów/przyborów do pobierania materiałów. 2. Wypełnij skierowania na badanie bakteriologiczne. 3. Pobranie materiałów z powierzchni nieożywionych, posiewów odciskowych palców przed i po umyciu i dezynfekcji, część wstępna badania czystości powietrza. Pobranie próbek z powierzchni metodą odciskową płytkami agarowymi z meniskiem wypukłym podłoża typu Count-Tact. Następnego dnia obejrzyj i zinterpretuj wykonane posiewy. Wykonaj preparaty z hodowli i szybkie testy różnicujące wyhodowane bakterie. Odczytaj płytkę z badaniem kontroli bakteriologicznej powietrza oblicz, napisz wynik i zinterpretuj. 4. Wysianie sporotestów A i S. Odczytanie posiewów następnego dnia. 5. Oglądanie płytki z przykładem działania promieniowania UV. Zanotuj obserwacje.

9 Analityka. Protokół 5ab (antyb. 1). 1. Wykonaj oznaczenie wrażliwości na antybiotyki metodą dyfuzyjno-krążkową szczepu bakterii wskazanego przez asystenta wg instrukcji. Uzupełnij: Badany szczep Rodzaj podłoża Gęstość inokulum.. Warunki inkubacji temp., czas Następnego dnia odczytaj własny antybiogram wg poniższego wzoru. 2. Odczytaj 3 różne przygotowane antybiogramy metodą dyfuzyjno-krążkową wg następującego schematu: Badany szczep -. Nazwa antybiotyku/chemioterapeutyku Strefa - mm Interpretacja S-wrażliwy I-średniowrażliwy R - oporny 3. Wykonaj oznaczenie wrażliwości na antybiotyki metodą paskową szczepu bakterii wskazanego przez asystenta. 4. Odczytaj 4 oznaczenia MIC wg schematu : badany szczep - wartość MIC - interpretacja wyniku 5. Oznaczenie wrażliwości Mycoplasma/Ureaplasma na wybrane antybiotyki/chemioterapeutyki - metoda półilościowa - odczytaj test i zapisz wynik. 6. Obejrzyj zestaw do badania lekowrażliwości prątków i uzupełnij. - metoda:. - podłoże - leki.. - zasada odczytu

10 Analityka. Protokół 6ab (oporność, wirus 2). 1. Wykrywaniu mechanizmu oporności typu ESBL wśród pałeczek Gram (-) : test dwóch krążków ESBL (-) ESBL (-) ESBL (+) Badany szczep: Oznacz kolejność ułożenia antybiotyków i narysuj charakterystyczne strefy zahamowania wzrostu dla szczepów ESBL(-) oraz szczepów ESBL(+). 2. Wykonaj test na obecność cefinazy dla szczepów Haemophilus influenzae lub Moraxella catarrhalis wg instrukcji podanej przez asystenta. Zapisz wynik 3. Wykrywanie metycylinooporności szczepów S. aureus. Wymień metody badania na podstawie przygotowanych testów na ćwiczenia : a/ b/ c/ 4. Narysuj i opisz metodę krążkową wyrywania Amp C: 5. Narysuj i opisz metodę krążkową wykrywania KPC: 6. Narysuj i opisz metodę krążkową wykrywania MBL: 7. Narysuj i opisz metodę krążkową wyrywania oporności na makrolidy/linkozamidy/ streptograminy. 8. Narysuj i opisz metodę krążkową wyrywania oporności HLAR.

11 9. Odczytaj miano przeciwciał w odczynie zahamowania hemaglutynacji. Podaj zastosowanie tego odczynu. 10. Obejrzyj w mikroskopie fluorescencyjnym preparaty z Adenowirusem, wirusem Parainfluenzae i Influenzae oraz RSV. 11. Zinterpretuj podane w tabeli markery WZW typu B serologicznym pod kątem aktualna infekcja, reinfekcji, przewlekłej postaci wzw typu B itd. Wynik testu HBsAg (-) Przeciwciała anty-hbc(-) Anty-HBs(-) HBsAg (-) Przeciwciała anty-hbc(+) Anty-HBs(+) HBsAg (-) Przeciwciała anty-hbc(-) Anty-HBs(+) HBsAg (+) Przeciwciała anty-hbc(+) IgM anty-hbc (+) Anty-HBs(+) HBsAg (+) Przeciwciała anty-hbc(+) IgM anty-hbc (-) Anty-HBs(-) HBsAg (-) Przeciwciała anty-hbc(+) Anty-HBs(-) interpretacja 10. Zinterpretuj wyniki badań w kierunku różnych zakażeń wirusowych zgodnie z tabelą: Rodzaj wirusa Rodzaj badania Co wykrywamy Przydatność kliniczna Nazwa choroby Leczenie czy przyczynowe (podaj rodzaj leku), czy objawowe HPV CMV Influenza virus EBV RSV Rotawirusy

12 BK

13 Analityka. Protokół 7ab (grzyby) 1. Wykonaj preparaty z hodowli i testy filamentacji oraz biochemiczne (API, Candifast) ze wskazanych przez asystenta hodowli drożdżaków. Następnego dnia odczytaj wykonane testy. Zanotuj wyniki swoich badań. 2. Odczytaj dostępne testy wrażliwości drożdżaków na leki (Candifast, R14). Podaj zastosowanie obu zestawów. 3. Diagnostyka dermatofitów wypełnij tabelę na podstawie dyskusji z Asystentem oraz za pomocą dostępnych testów: Rodzaje materiału pobieranego do badań Preparat bezpośredni jak wykonujemy i oceniamy Hodowla : Podłoża: Czas wzrostu Warunki temperatura inkubacji Identyfikacja gatunku Określenie wrażliwości na leki p/grzybicze Opisz wybrane gatunki dermatofitów na podłożach co najmniej 2 a/ Nazwa gatunku. Wygląd kolonii (awers, rewers).. b/ Nazwa gatunku. Wygląd kolonii (awers, rewers).. 4. Obejrzyj wszystkie dostępne preparaty z dermatofitami i pleśniami (w laktofenolu). Znajdź i narysuj charakterystyczne dla danego grzyba elementy. 5. Obejrzyj i oceń (opisz) 5 preparatów bezpośrednich z różnych materiałów klinicznych (plwocina, BAL, wymaz z pochwy, itd.)

14 6. Diagnostyka zakażeń Candida wypełnij tabelę na podstawie dyskusji z asystentem oraz za pomocą dostępnych testów: Rodzaje materiału pobieranego do badań Preparat bezpośredni wykonaj i oceń Hodowla : Podłoża: Czas wzrostu Warunki temperatura inkubacji Identyfikacja gatunku ocena testu filamentacji i testu biochemicznego Określenie wrażliwości na leki p/grzybicze metody, ocena testu Oznaczenie antygenów mannanowych, wyniki + interpretacja 7. Obejrzyj dostępne hodowle szkiełkowej i narysuj charakterystyczne cechy morfologii grzybów 8. Obejrzyj wyniki badań w kierunku antygenu galaktomannanowego we krwi pacjenta i z niektórych materiałów klinicznych. Podaj możliwą interpretację i zastosowanie testu.

15 Analityka: ćwiczenie nr 8 Oceń badania mikrobiologiczne z przygotowanego materiału klinicznego - do oceny: preparat bezpośredni ( do samodzielnego przygotowania lub przygotowany wcześniej, wzrost na podłożach z wykonaniem preparatu z hodowli, testy różnicujące typu lateksowe, API lub wydruk z Vitek, antybiogram, serotypowanie lub inne. 1. Różnicowanie gronkowców Rodzaj materiału klinicznego Preparat bezpośredni Hodowla na agarze krwawym Hodowla na podłożu Chapmana Hodowla na Agarze prostym Katalaza CF, koagulaza Badanie biochemiczne Antybiogram- metoda Inne testy 2. Różnicowanie paciorkowców Rodzaj materiału klinicznego Preparat bezpośredni Hodowla na agarze krwawym typ hemolizy Hodowla na podłożu Granada lub innych podł. chromogennych Hodowla na Agarze prostym Katalaza Test na optochinę Badanie biochemiczne Antybiogram

16 3. Różnicowanie enterokoków: Rodzaj materiału klinicznego Preparat bezpośredni Hodowla na agarze krwawym typ hemolizy Hodowla na podłożu Granada lub innych podł. chromogennych Hodowla na Agarze prostym Podloże z eskuliną/ tellurynem potasu Katalaza Test na ruch Badanie biochemiczne Antybiogram- metoda Inne testy 4. Identyfikacja Moraxella i Neisseria spp. Rodzaj materiału klinicznego Preparat z hodowli Hodowla na agarze krwawym Hodowla na podłożu VCA3 Test na oksydazę Badanie biochemiczne Antybiogram- metoda Inne testy

17 Analityka: ćwiczenie nr 9 PAŁECZKI GRAM- UJEMNE 1. Wykonaj posiew z płytki nazębnej, kału lub skóry twarzy w kierunku bezwzględnych beztlenowców. 2. Odszukaj na przygotowanych płytkach i opisz kolonie poszczególnych drobnoustrojów, w opisie stosuj cechy różnicujące na podłożach, np. laktozo+. Drobnoustroje/ rodzaj podłoża E. coli Agar z krwią McConkey a SS agar CPS podłoże chromogenne Proteus sp. Klebsiella sp. Serratia sp. Citrobacter sp. Enterobacter sp. Salmonella sp. Pseudomonas aeruginosa Acinetobacter baumannii Stenotrophomonas maltophilia 3. Wykonaj oznaczenie wytwarzania oksydazy dla szczepów wskazanych przez asystenta wpisz wynik Szczep oksydaza 4. Ocena wyglądu kolonii Helicobacter pylori i Campylobacter jejuni wykonanie testu ureazowego. 5. Narysuj test Hodge a dodatni i ujemny - jakie znaczenie ma wykrywanie KPC?- uzasadnij Jakie bakterie produkują KPC wymień.

18 PAŁECZKI GRAM- DODATNIE 1. Corynebacterium sp. Narysuj co widzisz w obu preparatach oraz napisz w jakim celu stosuje 2. Obejrzyj i porównaj preparaty z hodowli prątków wykonane metodą Ziehl-Neelsena oraz fluorescencji. Opisz preparaty 3. Wymień podłoża do hodowli prątków: 4. Wzrost prątków na podłożach stałych- po obejrzeniu opisz wygląd kolonii prątków: 5. Badanie lekooporności prątków wskaż w punktach podstawowe różnice w porównaniu do innych bakterii Jakie znaczenie ma wykrywanie DNA prątków w materiałach klinicznych?- opisz w punktach; zastosowanie metody, jej ograniczenia, przykłady wyników, dyskusja.

19 ANALITYKA PROTOKÓŁ (ćwiczenie 10b/11a, beztlenowce) 1. Oceń posiewy wykonane na poprzednim ćwiczeniu. Ile rodzajów kolonii widzisz na poszczególnych podłożach? Określ ich morfologię. COS: SCS: GAS: 2. Wykonaj odpowiedni/e przesiewy (na ½ takich samych podłóż) w celu wyizolowania i namnożenia bakterii bezwzględnie beztlenowych oraz na ¼ COS (kontrole tlenowe). Z tych samych kolonii wykonaj preparaty barwione metoda Grama. W jak najkrótszym czasie umieść płytki z przesiewami beztlenowymi w anaerostacie, kontrole tlenowe na anaerostacie. 3. Przygotuj szkiełko wg wzoru poniżej. Pobierz materiał z płytki nazębnej (za pomocą zgłębnika) i rozetrzyj na kółeczku (w razie potrzeby odrobiną NaCl). Następnie zeskrob końcem szpatułki materiał z języka i nanieś na półokrąg. Wybarw preparat metodą Grama i porównaj oba obrazy. Czy są takie same? Jakie formy bakterii dominują w płytce, a jakie na języku? 4. Obejrzyj co najmniej 5 preparatów z hodowli bakterii beztlenowych (wykonanych samodzielnie i przygotowanych przez personel Zakładu)- wpisz nazwę szczepu i co widzisz, narysuj kształt obejrzanych komórek bakteryjnych. 5. Wykonaj API A z własnych lub przygotowanych hodowli. Przed otwarciem anaerostatu zapoznaj się z instrukcją do testu. 6. Odczytaj kilka antybiogramów dla beztlenowców. Zanotuj nazwę szczepu i wynik odczytu wraz z interpretacją.

20 Analityka: ćwiczenie nr 10 b 1. Wykonaj preparat bezpośredni z kieszonki dziąsłowej lub z płytki nazębnej technikę prezentuje asystent narysuj i opisz wykonany przez siebie preparat.

21 Analityka: protokół do ćwiczenia 11 b 1. Przygotuj podłoże MCK i SS oraz szkiełko podstawowe z narysowanym półokręgiem. Przygotuj przyniesiony kał lub pobierz wymaz z własnego odbytu tak, aby wymazówka została pokryta kałem. Nanieś niewielką ilość pobranego materiału na podłoże MCK i SS (chwilowo nie rozsiewaj). Na szkiełko podstawowe nanieś kroplę NaCl i zawieś w niej resztę materiału z wymazówki. Oceń preparat przyżyciowy w ciemnym polu widzenia. Określ kształty bakterii, liczbę widzianych form bakterii, ewentualną zdolność ruchu, inne elementy. Po obejrzeniu pozostaw preparat do wyschnięcia, a w międzyczasie wykonaj posiew redukcyjny naniesionego kału. Wyschnięty preparat zabarw metodą Grama i oceń ponownie. 2. Obejrzyj wybrane podłoża z posiewem kału wg następującego schematu: Nazwa podłoża Ocena wzrostu po jakim czasie Jakie bakterie identyfikujemy Wygląd kolonii Jednostka kliniczna Leczenie empiryczne/celowane/- podaj leki Agar krwawy McConkeya SS Sabourauda CCDA COS z C. difficile YER 3. Diagnostyka zakażeń Clostridium difficile obejrzyj wskazane testy, wpisz metodę badania, przydatność kliniczną oraz zapoznaj się z wynikami dodatnimi i ujemnymi Test na obecność dehydrogenazy w kale - Wykrycie toksyny A/B oraz szczepu hiperwirulentnego

22 4. Odczyn Widala opisz metodykę, zastosowanie testu 5. Wykrycie Rota/Adenowirusów w kale zasada testu, przykładowe wyniki badań opisz i oceń 6. Obejrzyj i narysuj preparat z hodowli Campylobacter 7. Odczytaj i wpisz na pasku poniżej przykładowy wynik badania metodą Western blot oznaczania swoistych przeciwciał IgG przeciwko Helicobacter pylori omów znaczenie testu w klinice. 8. Przeprowadź serotypowanie E. coli kierunku szczepu EPEC wynik zaznacz na rysunku: szczep + NaCl szczep + sur. A szczep + sur. B szczep + sur. C

23 Analityka Ćwiczenie 12 a, b 1. Wykonaj własny preparat bezpośredni z plwociny, śliny lub wymazu z gardła. Zinterpretuj i podkreśl to co widzisz: komórki nabłonkowe, leukocyty, pałeczki Gram(+), pałeczek Gram (-), ziarniaki Gram(+), ziarniaki Gram(-), drożdżaki chlamydospory / blastospory, inne.. 2. Wykonaj preparat bezpośredni z materiałów klinicznych BAL-u lub plwociny pobranych od pacjentów z podejrzeniem zapalenia płuc. Podobnie jak w ćw. 1 zinterpretuj: komórki nabłonkowe, leukocyty, pałeczki Gram(+), pałeczek Gram (- ), ziarniaki Gram(+), ziarniaki Gram(-), drożdżaki chlamydospory / blastospory, inne.. 3. Analogicznie jak wyżej oceń przynajmniej 5 gotowych preparatów z materiałów klinicznych z dróg oddechowych. 4. Pacjent z podejrzeniem zakażeń górnych, dolnych dróg oddechowych lub oka :zaproponuj schemat badania mikrobiologicznego, na podstawie gotowych podłoży z posiewem opisz drobnoustroje, zaproponuj identyfikację i na podstawie wykonanego antybiogramu, po jego ocenie wskaż najkorzystniejszą terapię dla pacjenta Rodzaj pobieranego materiału ANGINA Zapalenie zatok Zapalenie spojówek Zapalenie płuc Zapalenie kanału słuchowego zewnętrznego Schemat badania mikrobiologicznego (rodzaj podłoży, czas inkubacji) Różnicowanie drobnoustrojów rodzaje testów Interpretacja antybiogramu Antybiotykoterapia celowana ustal najkorzystniejszą opcję terapeutyczną 5. Wstępnie zidentyfikuj otrzymany szczep, wykonaj odpowiednie badania w celu ostatecznej identyfikacji i oznaczenia wrażliwości na leki.

24 6. Immunofluorescencja pośrednia i ELISA w diagnostyce zakażeń wywołanych przez M. pneumoniae, C. pneumoniae, wirusami (adeno-, grypy, paragrypy, RSV). Podaj zasadę testu (IFA), obejrzyj preparaty i opisz je. 7. Diagnostyka krztuśca przykładowe wyniki, interpretacja 8. Szybkie testy w praktyce klinicznej, oznaczanie antygenów/kwasów nukleinowych drobnoustrojów w materiale od pacjenta z podejrzeniem zakażeń dróg oddechowych. Wymień drobnoustroje i rodzaj badanego materiału, omów z asystentem przydatność kliniczną tych testów. Antygen nazwa bakterii Rodzaj materiału Przydatność kliniczna S. pyogenes S. pneumoniae L. pneumophila w. grypy EBV

25 Analityka, ćwiczenie 13a 1. Wykonaj posiew moczu (własnego lub z laboratorium) ezą kalibrowaną: Rodzaje podłoży: Czas i warunki inkubacji: 2. Pobierz materiał z pochwy/cewki moczowej. Wykonaj i oceń preparat bezpośredni wykonany z wymazu z cewki moczowej i/lub pochwy. Narysuj, wskaż elementy fizjologiczne i ewentualnie takie które wskazują na patologię 3. Oceń wybrane 3 posiewy moczu pod kątem ilościowym i jakościowym. W przypadku bioty mieszanej wykonaj preparaty (i oceń) z różnych kolonii. 4. Oceń 3 antybiogramy z wybranych drobnoustrojów izolowanych z zakażeń dróg moczowych: Gatunek:.. Antybiotyk/chemioterapeutyk strefa w mm R/S 5. Oceń 5 preparatów bezpośrednich z pochwy (wypełnij druczki) i cewki moczowej. Wskaż i narysuj charakterystyczne elementy preparatów bezpośrednich z pochwy klasyfikowanych jako: - waginoza - drożdżyca 6. Oceń 3 posiewy z pochwy/cewki moczowej. Jakie podłoża zastosowano? Określ ilość i morfologię kolonii na poszczególnych podłożach. Odczytaj ewentualne antybiogramy.

26 7. Przeanalizuj przygotowane wyniki posiewów z moczu i pochwy.

27 Analityka ćwiczenie 13b 1. Podaj wynik posiewu moczu wykonanego na poprzednim ćwiczeniu: 2. Narysuj charakterystyczne elementy preparatu bezpośredniego przy podejrzeniu rzeżączki: 3. Neisseria - wykonanie testu na oksydazę wynik 4. Odczyn FTA-ABS - opisz metodę, obejrzyj preparat opisz w zeszycie 5. Diagnostyka Mycoplasma/Ureaplasma - Metoda półilościowa jakościowa zasada testu, obejrzyj przykładowe testy i wyniki badań opisz 6. Chlamydia trachomatis opisz zasadę testu, obejrzyj przykładowe testy kasetkowe. 7. Oznaczanie DNA Chlamydia trachomatis (wyniki. 8. Wyniki badań w kierunku HPV: Wpisz typy wysokoonkogenne: Tzw. średniego ryzyka: Niskiego ryzyka:

28 Analityka, ćwiczenie 14a 1. Wykonaj i oceń preparat z płynnej hodowli krwi (lub innych naturalnie jałowych materiałów). 2. Obejrzyj przynajmniej 6 gotowych preparatów z płynnej hodowli krwi (lub innych naturalnie jałowych materiałów) i zaproponuj terapię empiryczną na podstawie preparatów bezpośrednich: a. ziarniaki/pałeczki/ Gram+/Gram-/blastospory - terapia. b. ziarniaki/pałeczki/ Gram+/Gram-/blastospory - terapia. c. ziarniaki/pałeczki/ Gram+/Gram-/blastospory - terapia. d. ziarniaki/pałeczki/ Gram+/Gram-/blastospory - terapia. e. ziarniaki/pałeczki/ Gram+/Gram-/blastospory - terapia. f. ziarniaki/pałeczki/ Gram+/Gram-/blastospory - terapia. 3. Wstępna identyfikacja szczepów z hodowli płynu mózgowo-rdzeniowego i krwi: 4. Interpretacja wyników posiewów krwi uzupełnij na podstawie analizowanego posiewu: Gatunek drobnoustroju: Terapia celowana: Określ prawdopodobne źródło zakażenia krwi: 5. Diagnostyka zgorzeli gazowej - obejrzyj przykładowe gotowe preparaty i narysuj charakterystyczne elementy Analityka, ćwiczenie 14b 1. Ostateczna identyfikacja szczepów z poprzedniego ćwiczenia. 2. Odczytaj 3 antybiogramy z zakażeń szpitalnych. Określ i przedstaw graficznie wykryte mechanizmy oporności. 3. Obejrzyj płytki z typowaniem fagowym przedstaw schemat badania.