SF śółć TSB INKUBACJA 24 GODZ. POSIEW Z 3 PRÓBEK NA 1/3 PŁYTKI: CA, MC, SS, S IZOLACJA, IDENTYFIKACJA

Transkrypt

1 POSIEW śółci SF śółć TSB INKUBACJA 24 GODZ. POSIEW Z 3 PRÓBEK NA 1/3 PŁYTKI: CA, MC, SS, S IZOLACJA, IDENTYFIKACJA Created by Neevia Document Converter trial version

2 POSIEW PŁYNÓW USTROJOWYCH ( OPŁUCNOWY, OTRZEWNOWY, STAWOWY, WYSIĘKOWE, I INNE ) PREP. GRAM POSIEW NA : ½ CA, ½ MC, ¼ S TG*-INK. DO 10 DNI LUB TSB* WYBÓR PODŁOśA PŁYNNEGO ZALEśY OD KIERUNKU BADANIA NA SKIEROWANIU ( BADANIE TLENOWE=TSB, BADANIE BEZTLENOWE = TG)

3 POSIEW ROPY- BEZTLENOWY POJEMNIK, ZEST. TRANSP.NR 1* PROBÓWKA PREP. GRAM POSIEW NA ½ SCH-Ab, ½ SCH inkub. JAR 3 doby TG ** - inkubacja do 10 dni DWUKROTNE IZOLACJE TYCH SAMYCH KOLONII NA 2XCA I INKUBACJA 48 h : 1 CA tlenowo ( eksykator) 1 CA beztlenowo (JAR ) IDENTYFIKACJA BEZTLENOWCÓW *JEśELI JEST DRUGA ZWYKŁA WYMAZÓWKA TO WYKONAĆ PREPARAT BEZPOŚREDNI NALEśY ** BEZWZGLĘDNY POSIEW Z TG PO 10 DNIACH

4 POSIEW KRWI VITAL AER VITAL ANA ½ CA, ¼ CZ ½ MC, ¼ S ½ CA, ¼ CZ ½ MC, 1/2 SCH CO2 CO2 JAR 3 doby IZOLACJA IDENTYFIKACJA W PRZYPADKU WZROSTU NA SCH POSTĘPOWAĆ JAK W IDENTYFIKACJI BEZTLENOWCÓW (patrz posiew ropy)

5 POSIEW ROPY TLENOWY POJEMNIK ZESTAW TRANSPORTOWY PROBÓWKA ZWYKŁA WYMAZÓWKA PREPARAT GRAMA POSIEW NA PODŁOśA: ½ CA, ½ MC, TSB* IZOLACJA, IDENTYFIKACJA *TSB INKUBACJA DO 5 DNI, WYSIEW TYLKO W PRZYPADKU JAŁOWEGO POSIEWU BEZPOŚREDNIEGO

6 CEWNIKI NACZYNIOWE TSB WYTRZĄSANIE 2 h DALSZA INKUBACJA DO 24h POSIEW NA: * ½ CA, ½ MC, ¼ S IZOLACJA IDENTYFIKACJA JEśELI POSIEW PO 2 h WYTRZĄSANIA JEST DODATNI TO NIE WYSIEWAMY PO 24h INKUBACJI Z TSB

7 POSIEW WYMAZÓW Z OKA POSIEW NA: ½ CA, ½ MC, CZ, TSB* CO 2 IZOLACJA IDENTYFIKACJA * POSIEW Z TSB NA W/W PODŁOśA TYLKO W PRZYPADKU UJEMNEGO POSIEWU BEZPOŚREDNIEGO

8 POSIEW WYMAZU Z GARDŁA, NOSA, UCHA POSIEW NA: ½ CA, ¼ CZ CO2 ½ MC, ¼ S, TSB* inkubacja 24h POSIEW NA W/W PODŁOśA IZOLACJA IDENTYFIKACJA POSIEW NA TSB TYLKO OD PACJENTÓW Z HEMATOLOGII I PO PRZESZCZEPACH

9 POSIEW MATERIAŁÓW Z DOLNYCH DRÓG ODDECHOWYCH (wydz. oskrz., aspirat, plwocina, Bal, Lavage) POSIEW WYMAZÓWKĄ NA: ½ CA, ¼ CZ CO2 ½ MC, ¼ S, TSB* inkubacja 24h POSIEW NA W/W PODŁOśA IZOLACJA IDENTYFIKACJA POSIEW NA TSB TYLKO OD PACJENTÓW Z HEMATOLOGII I PRZESZCZEPÓW

10 KOŃCÓWKI CEWNIKÓW Z DRÓG ODDECHOWYCH (rurki tracheotomijne, końc. cewników do odsysania, końc. rurek bronchoskopowych) TSB wytrząsanie 2h 37 o C DALSZA INKUBACJA DO 24h ** POSIEW NA: ½ CA, ½ MC, ¼ S, ¼ CZ* IZOLACJA IDENTYFIKACJA *MATERIAŁÓW OD PACJENTÓW OIT NIE WYSIEWAMY NA CZ ** JEśELI POSIEW PO 2h WYTRZĄSANIA JEST DODATNI TO NIE WYSIEWAMY Z TSB PO INKUBACJI

11 POSIEW ILOŚCIOWY MOCZU URILINE CIEPLARKA POJEMNIK LODÓWKA ODCZYT WG WZORCA POSIEW NA: MC, CA 10-2 liczba 10-3 kom./ml moczu IZOLACJA IDENTYFIKACJA 1. WYKONAĆ TEST GOLDA W PRZYPADKU MOCZU W POJEMNIKU RODZAJE BAKTERII = ZANIECZYSZCZENIE (WSKAZANE BADANIE POWTÓRNE)

12 POSIEW Z DRÓG PŁCIOWYCH ( wymazy z pochwy, szyjki macicy) + rozmaz na szkiełku ** POSIEW NA: GRAM: - leukocyty - liczba bakterii w tym Lactobacillus, grzyby - nabłonki ½ G*, ½ CA ½ MC, ¼ S CO2 IZOLACJA I IDENTYFIKACJA OCENA POSIEWU NA PLUSY: + do 10 koloni jednego rodzaju koloni jednego rodzaju +++ powyŝej 20 koloni robić antybiogram *SIAĆ PO OBEJRZENIU PREPARATU ** INTERPRETACJA PREPARATU W ZAŁĄCZENIU

13 POSIEW PŁYNU MÓZG- RDZENIOWEGO PODŁOśE TRANSPORTOWE PILOTÓWKA VITALaer Meningomedium wirowanie gotowanie Inkubacja 3000/20 szybki test VITAL cieplarka do 7 dni zmętnienie prep Grama (+) POSIEW NA: ½ CA, ¼ CZ ½ MC, ¼ S CO2 IZOLACJA IDENTYFIKACJA JEśELI PŁYN JEST PRZYSŁANY TYLKO W PILOTÓWCE NALEśY WYKONAĆ POSIEW Z OSADU LUB WSIAĆ DO PODŁOśA VITALaer

14 POSIEW KAŁU WYMAZ Z ODBYTU CL,TG **** POSIEW NA: MC***, SS, ¼ M, SF, CA*, ¼ S - INKUBACJA 24h MC izolacja lac+ MC/MC, AO**, 4-6 Kliglery z lac- SS po 4 Kliglery z kolonii lac - /H 2 S - i lac - /H 2 S + SF wysiew na ½ SS, ½ MC IDENTYFIKACJA 1.Kliglery H 2 S + /lac - - 2x mocznik +ONPG 3h - ONPG (+), mocznik (+) = Citrobacter - ONPG (-), mocznik (-) = identyfikacja w kier. Salmonella (szereg + AO do serologii) - ONPG (-), mocznik (+) = identyfikacja w kier. Proteus 2. Kligler H 2 S - /lac - = identyfikacja w kier. Shigella +AO 3. MC lac + identyfikacja w kier. E.coli, Enterobacter, Klebsiella *POSIEW OD PACJENTÓW Z HEMATOLOGII I PO PRZESZCZEPACH ** 6 IZOLACJI Z LAC + Z MC NA AO + INDOL U DZIECI DO 3-go ROKU śycia (E.coli enteropatogenne) *** W KIERUNKU YERSINIA POSIEW NA 2MC, 1- DO LODÓWKI NA 3 DNI ****WG SKIEROWANIA BADANIE TYLKO W KIERUNKU CLOSTRIDIUM DIFFICILE

15 POSIEW KAŁU cd. 1.W KIERUNKU CAMPYLOBACTER POSIEW NA: ½ CAMP MC, SS, SF 42 o C/48h JAR + gasbox KAT (+), OX (+), PREP. Camp. sp. (API Campy) 2.W KIERUNKU ROTAWIRUSÓW KAŁ PRZECHOWYWAĆ W LODÓWCE DO 2 DNI, BADANIE WYKONYWAĆ WG INSTRUKCJI TESTU Slidex Rota Kit 2

16 POSIEW MYKOLOGICZNY Plwocina *Mocz Płyny z j. ciała *zeskrobiny Kał duŝa eza na ½ S PMR z rogówki + SB popłuczyny gardło, ropa nos, w. z oka odbyt Wymaz zew. z w. z ucha pochwa zmian na preparat bezpośredni języku, prz bł. przyŝyciowy i Grama śluzowych j. z płynów ustnej: posiew na S i SB Wysiew na: 2x ½ S, SB* (posiew bez redukcji) Posiew na: S + SB Posiew na S bez posiewu redukcyjnego Preparat Grama Inkubacja 24h w tem. 37 o C Do 10 dni w tem. 28 o C (min. 5 dni) Płytki i podłoŝe płynne przegląda się co 2 dzień wymaz z ucha inkubacja do 3 tygodni wymaz z oka inkubacja do 14 dni ODCZYT WYNIKÓW: - pojedyncze (do 10 dni) kolonie na płytce koloni +2 - powyŝej 100 koloni +3 - wzrost zlewny +4 * NA SB WYSIEWAĆ MATERIAŁY PO PRZESZCZEPACH

17 IDENTYFIKACJA CANDIDA Posiew na podłoŝe Chrom Agar: *kolonie zielone = Candida albicans *kolonie róŝowe = Candida glabrata *kolonie róŝowe szorstkie = Candida krusei *kolonie niebieskie = Candida tropicalis *kolonie bezbarwne = Candida sp. Nastawić ID32C OPORNOŚĆ : metoda Fungitest: Nastawiamy przy wzroście Candida +3, +4 ( z plw., kału, wym. z gardła, nosa) lub na Ŝyczenie lekarza Jałową H 2 O destylowaną wlać do probówek: 3 ml 1,9ml Kolonię Candida zawiesić w 3 ml H 2 O i przenieść 100µl do 1,9 ml H 2 O. Do buteleczki z podłoŝem dodać 20µl uzyskanej zawiesiny, dobrze wymieszać i nanieść po100 µl do dołków - płytkę zalepić parafilmem - inkubacja 37 o C / 48h Odczyt - kolor róŝowy = wzrost - kolor niebieski = brak wzrostu ++ = R +/- = I - - = S

18 WYKRYWANIE ANTYGENÓW CANDIDA I ASPERGILLUS W SUROWICY KRWI Gdy materiał został dostarczony późno- SUROWICĘ PRZECHOWYWAĆ W LODÓWCE DO NASTĘPNEGO DNIA Próbkę surowicy o objętości 150µl dajemy do probówki Eppendorff i dodajemy 50 µl reagentu (treatment solution, czerwona zakrętka), wytrząsamy i wstawiamy do łaźni wodnej 100 o C / 3 Wirujemy 10 / 10 tyś obr.. Na papierek nakrapiamy 20µl supernatantu i 5µl latexu (Candida lub Aspergillus), mieszamy i wytrząsamy 10, odczytujemy aglutynację. badana surowica 120µl 50µl Eppendorff treatment solution Wymieszać Łaźnia wodna 100 o C / 3 Wirowanie 10 / 10tyś obr. Po 20µl supernatantu Po 5µl latexu Wytrząsznie 10 Odczyt: + _

19 PODŁOśA STAŁE CA COLUMBIA AGAR MC MCCONKEY AGAR SCH SHAEADLER Z KRWIĄ SCH-AT SHEADLER Z KRWIĄ I Z ANTYBIOTYKIEM SS SHIGELLA, SALMONELLA AGAR S SABORAUND +ANTYBIOTYK CZ CZEKOLADOWY AGAR (HAEMOPHILUS) CAMP CAMPYLOBACTER AGAR TSA TRYPTOZOWO-SOJOWY AGAR G GARDNERELLA AGAR M-H MULLER-HINTON AGAR M-HK MULLER-HINTON AGAR Z KRWIĄ M AGAR Z MANNITOLEM (CHAPMAN) CZAS AGAR DO OZNACZANIA WRAśLIWOŚCI HAEMOPHILUS (Haemophilus test medium for susceptibility testing) CC CHROMAGAR CANDIDA AO AGAR ODśYWCZY CL AGAR DLA C.difficile PODŁOśA PŁYNNE BHI SF TG TSB BULION MÓZGOWO-SERCOWY BULION SELENINOWO FOSFORANOWY BULION TIOGLIKOLANOWY BULION TRYPTOZOWO-SOJOWY

20 IDENTYFIKACJA GRAM (+) ZIARNIAKI KATALAZA (+) (-) gronkowce paciorkowce mikrokoki β hem. α hem. γ(α,β) hem furazolidon (M-H) test serol. opt. test PYR. O W (+) (-) Micrococcus Staphylococcus EN-coccus APIStr. Test CF, koagulaza Enterococcus (gatunki) (+) (-) S.aureus CNS OX OX, IDStaph 1.IDStaph., APIStrep. nastawiamy dla CNS z krwi, cewników naczyniowych, płynów oraz dla wszystkich szczepów CNS z Hematologii i przeszczepów.

21 IDENTYFIKACJA PALECZEK GRAMUJEMNYCH Identyfikacja na paskach ID 32 GN, IDE WYJĄTKI: 1. ruch na CA, kligler (+) Proteus sp. indol indol (+) = P.vulgaris indol (-) = P.mirabilis 2. E.coli - indol 3. barwnik, zapach P.aeruginosa 4. wszystkie szczepy szorstkie wydajemy bez identyfikacji IDENTYFIKACJA Corynebacterium Haemophilus Gardnerella Grzyby DroŜdŜopodobne Beztlenowce API Coryne dla wybranych Klinik i materiałów TSA + krąŝki BX i BV, wyjatkowo API NH agar G (hemoliza β), preparat (kształt maczugowaty) prep. Gramm Candida, Geotrichum, ID32 C gatunki Chromagar prep. Gram G+ ziarniaki = Peptostreptococcus G- ziarniaki = Veilonella G- pałeczki API20A G + laseczki

22 BADANIA ŚRODOWISKOWE POWIETRZE 5 płytek CA rozłoŝonych na otwartej przestrzeni przez 30 inkubacja 37 o C / 48h określenie liczby komórek w 1m 3 powietrza wg wzoru Omeliańskiego X = a x 100 x 100 p x t x 1/5 a liczba kolonii na płytce (średnia z 5-ciu płytek) p powierzchnia płytki (πr 2 ) t czas ekspozycji dla płytki o średnicy 90mm 1 kolonia = 26kom/m 3 powietrza izolacja + identyfikacja UWAGI W przypadku gronkowców określana jest cecha metycylinooporności, w przypadku pałeczek (E.coli, Klebsiella) ESBL. W badaniach epidemiologicznych - identyfikacja do gatunku. W badaniach czystościowych identyfikacja tylko patogenów POWIERZCHNIE SUCHE Płytki Count-Tact (metoda odcisków) Inkubacja 30 o C / 72h Policzenie wyrosłych kolonii (1 kolonia = 1 kom. bakteryjna na badaną powierzchnię). Wynik podać jako liczbę kolonii / 100 cm 2 do uzgodniena z kliniką IZOLACJA + IDENTYFIKACJA

23 POWIERZCHNIE WILGOTNE Wymaz pobrany i przesłany do laboratorium w czasie 2h Posiew na CA, MC, TSB Izolacja identyfikacja ewentualny posiew na CA, MC, po48h izolacja, identyfikacja UWAGI W przypadku gronkowców musi być oznaczona metycylinooporność, w przypadku pałeczek (E.coli, Klebsiella) ESBL. W badaniach epidemiologicznych - identyfikacja do gatunku. W badaniach czystościowych identyfikacja tylko patogenów do uzgodniena z kliniką KONTROLA JAŁOWOŚCI Posiew na TSB TG S inkubacja 37 o C / 72h inkubacja 37 o C 10 dni inkubacja 37 o C / 24h + 28 o C / 10 dni SPORALE A posiew na TSB inkubacja 56 o C / 7 dni S posiew na TSB inkubacja 37 o C / 7 dni