2015/09/09 A93A01302CPL A11A01668 90 ml Pentra C400 Odczynnik diagnostyczny do oznaczania ilościowego in vitro stężenia glukozy w surowicy i osoczu krwi lub moczu metodą kolorymetryczną z zastosowaniem peroksydazy (PAP). QUAL-QA-TEMP-0846 Rev.9 Wersja aplikacji Surowica, osocze: GluP Mocz: GluP-U (do użytku poza Stanami Zjednoczonymi) Zastosowanie jest odczynnikiem diagnostycznym do ilościowego oznaczania in vitro stężenia glukozy w surowicy i osoczu krwi ludzkiej oraz w moczu przy zastosowaniu oksydazy glukozy metodą kolorymetryczną. Pomiary glukozy wykorzystuje się w diagnostyce i leczeniu zaburzeń metabolizmu węglowodanów, w tym cukrzycy, hipoglikemii noworodków oraz hipoglikemii samoistnej, jak również wyspiaków trzustki. Znaczenie kliniczne (1) Glukoza stanowi dla ludzkiego ciała główne źródło energii. Glukoza pochodzenia żywieniowego jest przekształcana w glikogen, w postaci którego organizm odkłada ją w wątrobie, lub w triglicerydy, by zostać odłożoną w tkance tłuszczowej. Za regulację poziomu glukozy we krwi odpowiadają różne hormony, między innymi dwa antagonistyczne: insulina i glukagon. W warunkach fizjologicznych, organizm nie wydala glukozy wraz z moczem. Dożylnie podawany cukier jest stosowany w diagnostyce metabolizmu węglowodanów w cukrzycy, hipoglikemii u noworodków lub hipoglikemii idiopatycznej oraz schorzeniach trzustki. Największe problemy fizjologiczne sprawia jednak hiperglikemia (cukrzyca typu 1 i typu 2). Cukrzyca typu 1 to cukrzyca insulinozależna, pojawiająca się z reguły przed 30 rokiem życia. Cukrzyca typu 2 to cukrzyca insulinoniezależna, pojawiająca się często po 40 roku życia. W przypadku otyłości może jednak występować wcześniej. Inne typy cukrzycy stanowią efekt różnego rodzaju schorzeń o podłożu endokrynnym i chorób wątroby. Metoda (1) Metoda enzymatyczna do oznaczania stężenia glukozy z zastosowaniem następującej reakcji (metoda Trindera): Oksydaza glukozy Glukoza + O 2 Kwas glukonowy + H 2 O 2 Peroksydaza 2H 2 O 2 + fenol + 4AAP Chinonoimina + 4H 2 O (4AAP = 4-aminoantypiryna) Odczynniki jest odczynnikiem gotowym do użycia. Odczynnik: Bufor fosforanowy, ph 7,40 Fenol 4-aminoantypiryna Oksydaza glukozy 13,8 10 0,3 10000 U/L 1 / 6
Odczynnik: Peroksydaza 700 U/L Azydek sodu < 0,1% należy używać zgodnie z niniejszą ulotką. Producent nie może zagwarantować właściwego działania produktu, jeśli zostanie on użyty w sposób inny od podanego. Postępowanie z preparatem 1. Wyjmij zatyczkę kasety. 2. Jeżeli odczynnik zawiera pianę, usuń ją za pomocą plastikowej pipety. 3. Umieść kasetę w chłodzonej komorze odczynnikowej analizatora Pentra C400. Kalibrator Do celów kalibracji należy używać: Multical, nr ref. A11A01652 (do oddzielnego zakupu) 10 x 3 ml (liofilizat) Kontrola Do wewnętrznej kontroli jakości należy używać: N Control, nr ref. A11A01653 (wymaga osobnego zakupu) 10 x 5 ml (liofilizat) P Control, nr ref. A11A01654 (wymaga osobnego zakupu) 10 x 5 ml (liofilizat) Urine Control L/H, nr ref. A11A01674 (wymaga osobnego zakupu) (do użytku poza Stanami Zjednoczonymi) 1 x 10 ml + 1 x 10 ml Oznaczenie kontroli powinno być przeprowadzane raz dziennie i/lub po wykonaniu kalibracji. Częstość przeprowadzania kontroli oraz przedziały ufności powinny być ustalone w oparciu o wytyczne laboratoryjne oraz przepisy obowiązujące w danym kraju. Należy przestrzegać krajowych, regionalnych i lokalnych wytycznych dotyczących materiałów do kontroli jakości. Wynik kontroli musi zawierać się w zdefiniowanych przedziałach ufności. Każde laboratorium powinno wypracować sposób postępowania w przypadku, gdy wyniki wykroczą poza wyznaczone przedziały. Wymagane wyposażenie niewchodzące w skład produktu Zautomatyzowany kliniczny analizator biochemiczny: Pentra C400 Kalibrator: Multical, nr ref. A11A01652 Kontrole: N Control, nr ref. A11A01653, oraz P Control, nr ref. A11A01654 Urine Control L/H, nr ref. A11A01674 (do użytku poza Stanami Zjednoczonymi) Standardowy sprzęt laboratoryjny. (2, 3) Surowica niehemolizowana. Osocze pobrane z heparyną litową. Mocz (do użytku poza Stanami Zjednoczonymi). Firma HORIBA Medical nie prowadziła testów dla antykoagulantów innych niż wymienione na liście i w związku z tym nie zaleca ich używania dla potrzeb tego oznaczenia. Stabilność: Stabilność glukozy w próbce zależy od temperatury jej przechowywania, skażenia bakteryjnego i glikolizy. Surowica, osocze: W wyizolowanej, niehemolizowanej, sterylnej surowicy (4): W temperaturze 25 C: 8 godz. W temperaturze 4 C: 72 godz. Próbkę osocza lub surowicy bez dodatku konserwantu należy oddzielić od komórek lub skrzepu krwi w ciągu pół godziny po jej pobraniu. W nieodwirowanej krwi, w temperaturze pokojowej, średni spadek poziomu glukozy w surowicy wynosi ok. 7% na godzinę (od 0,28 do 0,56 lub od 5 do 10 ). Dzieje się to w wyniku glikolizy. Mocz (do użytku poza Stanami Zjednoczonymi): W przypadku moczu zbieranego z 24 godzin, przed rozpoczęciem jego zbierania można wlać do pojemnika 5 ml lodowatego (stuprocentowego) kwasu octowego. Bez konserwantów, po 24 godzinach w temperaturze pokojowej utrata glukozy może wynieść -40% (3). 2 / 6
Zakres norm Każde laboratorium powinno wypracować swoje własne zakresy odniesienia. Wartości podane w niniejszej ulotce mają wyłącznie charakter orientacyjny. Surowica, osocze (5): 0,74-1,06 g/l 74-106 4,10-5,90 Mocz (6, 7): < 0,84 (< 15 ) < 2,8 mmol/24 godz. (0,5 g/24 godz.) Przechowywanie i stabilność Odczynniki, w nieotwieranych kasetach, zachowują stabilność do daty ważności podanej na etykiecie, o ile są przechowywane w temperaturze 2-8 C. Stabilność po otwarciu: patrz rozdział Wydajność przy użyciu w analizatorze Pentra C400. Postępowanie z odpadami Należy postępować zgodnie z lokalnie obowiązującymi przepisami. Opisywany odczynnik jest konserwowany azydkiem sodu, obecnym w stężeniu poniżej 0,1%. Azydek sodu może wchodzić w reakcje z ołowiem lub miedzią, tworząc wybuchowe azydki metali. Ogólne środki ostrożności a Niniejszy odczynnik jest przeznaczony wyłącznie do profesjonalnej diagnostyki in vitro. Wyłącznie do stosowania z przepisu lekarza. Ten odczynnik został sklasyfikowany jako nieszkodliwy w rozumieniu rozporządzenia (WE) nr 1272/2008. Nie połykać. Unikać zanieczyszczenia skóry i błon śluzowych. Przy pracy należy stosować standardowe laboratoryjne środki ostrożności. Kasety odczynnikowe są kasetami jednorazowego użytku, należy je utylizować zgodnie z lokalnymi przepisami. Należy uważnie zapoznać się z kartą charakterystyki (MSDS) dołączoną do odczynnika. Nie używać produktu, jeżeli można zaobserwować zmianę jego cech biologicznych, chemicznych lub fizycznych, co wskazuje na jego nieprzydatność do użytku. Użytkownik ma obowiązek sprawdzić, czy niniejszy dokument dotyczy używanego w danym przypadku odczynnika. Wydajność przy użyciu w analizatorze Pentra C400 Dane przedstawione poniżej to wartości uzyskiwane na analizatorach HORIBA Medical. Surowica, osocze Liczba oznaczeń: 295 Jeżeli liczba zleconych oznaczeń jest niewielka, a użytkownik analizatora Pentra C400 zamierza korzystać z tej kasety do końca okresu jej stabilności roboczej, HORIBA Medical zaleca użycie membrany XEC083, co pozwoli uzyskać podaną w tej ulotce liczbę oznaczeń. Stabilność robocza odczynników: Po otwarciu kaseta z odczynnikiem umieszczona w chłodzonej komorze analizatora Pentra C400 zachowuje stabilność przez 83 dni. Objętość próbki: 4 µl/oznaczenie Wykrywalność: Wykrywalność ustalono zgodnie z zaleceniami procedury Valtec (8) i wynosi ona 0,1 (1,8 ). Trafność i precyzja: Powtarzalność (precyzja w trakcie pracy urządzenia) Przeprowadzane jest 20 oznaczeń dla 3 próbek o niskim, średnim oraz wysokim stężeniu oraz dla 2 kontroli, zgodnie z zaleceniami procedury Valtec (8). kontrolna 2 4,96 89,36 0,41 12,81 230,53 0,40 a Modyfikacja: modyfikacja opisu ogólnych środków ostrożności. 3 / 6
1 2,38 42,76 0,62 2 6,19 111,47 0,30 3 16,46 296,22 0,49 Powtarzalność (precyzja całkowita) 2 próbki (o stężeniu niskim i wysokim) i 2 kontrole poddaje się podwójnym oznaczeniom przez 20 dni (2 serie dziennie) zgodnie z zaleceniami CLSI (NCCLS), procedura EP5-A (9). kontrolna 2 5,01 90,20 1,23 13,08 235,44 1,12 1 5,95 107,18 1,44 2 16,61 298,97 1,05 Zakres pomiaru: Oznaczenie potwierdziło zakres pomiaru od 0,10 do 24,00 (od 1,8 do 432,0 ), z automatycznym rozcieńczeniem następczym do 72,00 (1296,0 ). Liniowość odczynnika ustalono do wartości 24,00 (432,0 ), stosując zalecenia CLSI (NCCLS), procedura EP6-A (10). Korelacja: 103 pobrane od pacjenta próbki (surowicy i osocza) koreluje się z komercyjnie dostępnym odczynnikiem, służącym jako wzorzec, zgodnie z zaleceniami CLSI (NCCLS), procedura EP9-A2 (11). Równanie dla otrzymanej linii allometrycznej (12) jest następujące: Y = 0,98 X + 0,04 () Y = 0,98 X + 0,72 () przy współczynniku korelacji r 2 = 0,9974. Czynniki zakłócające b : Hemoglobina: Triglicerydy: Bilirubina całkowita: Bilirubina bezpośrednia: N-acetylocysteina (NAC): wpływu do 267 µmol/l (460 ). wpływu do 7 (612,5 ). wpływu do 140 µmol/l (8,19 ). wpływu do 90 µmol/l (5,63 ). U pacjentów, którzy przedawkowali paracetamol, leczonych N-acetylocysteiną (NAC) wartość wyniku może być bardzo niska, niezgodnie ze stanem rzeczywistym. Young podaje także inne ograniczenia, a w szczególności listę leków oraz zmiennych przedanalitycznych, które według obecnego stanu wiedzy wpływają na wyniki tej metody (13, 14). Stabilność kalibracji: Odczynnik jest kalibrowany w dniu 0. Stabilność kalibracji jest kontrolowana przez wykonanie testów na 2 próbkach kontrolnych. Stabilność kalibracji wynosi 11 dni. Uwaga: Ponowną kalibrację odczynnika zaleca się w przypadku zmiany jego serii oraz w przypadku, gdy wyniki kontroli jakości wykroczą poza założony zakres. Wersja aplikacji: Mocz (do użytku poza Stanami Zjednoczonymi) Liczba oznaczeń: 295 Jeżeli liczba zleconych oznaczeń jest niewielka, a użytkownik analizatora Pentra C400 zamierza korzystać z tej kasety do końca okresu jej stabilności roboczej, HORIBA Medical zaleca użycie membrany XEC083, co pozwoli uzyskać podaną w tej ulotce liczbę oznaczeń. Stabilność robocza odczynników: Po otwarciu kaseta z odczynnikiem umieszczona w chłodzonej komorze analizatora Pentra C400 zachowuje stabilność przez 83 dni. Objętość próbki: 3 µl/oznaczenie b Modyfikacja: modyfikacja zakłóceń. 4 / 6
Wykrywalność: Wykrywalność ustalono zgodnie z zaleceniami procedury Valtec (8) i wynosi ona 1,11 (20,0 ). Trafność i precyzja: Powtarzalność (precyzja w trakcie pracy urządzenia) 3 szt. próbek o niskim, średnim i wysoki stężeniu oraz i 1 kontrola poddaje się 20 oznaczeniom, zgodnie z zaleceniami procedury Valtec (8). 14,9 268 1,8 1 5,59 101 4,1 2 12,38 223 1,1 3 34,97 629 1,0 Powtarzalność (precyzja całkowita) 2 próbki (o stężeniu średnim i wysokim) i 1 kontroli poddaje się podwójnym oznaczeniom przez 20 dni (2 serie dziennie), zgodnie z zaleceniami CLSI (NCCLS), procedura EP5-A (9). 14,6 263 4,34 1 12,87 232 3,29 2 35,79 644 2,08 Zakres pomiaru: Oznaczenie potwierdziło zakres pomiaru od 1,11 do 111,00 (od 20,0 do 2000,0 ), a z automatycznym rozcieńczeniem następczym do 333 (5994 ). Liniowość odczynnika ustalono do wartości 111,00 (2000,0 ), stosując zalecenia CLSI (NCCLS), procedura EP6-A (10). Korelacja: 100 pobrane od pacjentów próbki (mocz) koreluje się z komercyjnie dostępnym odczynnikiem, służącym jako wzorzec, zgodnie z zaleceniami CLSI (NCCLS), procedura EP9-A2 (11). Y = 1,05 X - 1,11 () Y = 1,05 X - 20 () przy współczynniku korelacji r 2 = 0,999. Czynniki zakłócające: Hemoglobina: wpływu do 290 µmol/l (500 ). Lipemia: wpływu do stężenia Intralipid (świadczącego o lipemii)200. Bilirubina całkowita: wpływu do 171 µmol/l (10,0 ). Bilirubina bezpośrednia: wpływu do 320 µmol/l (18,7 ). Young podaje także inne ograniczenia, a w szczególności listę leków oraz zmiennych przedanalitycznych, które według obecnego stanu wiedzy wpływają na wyniki tej metody (13, 14). Stabilność kalibracji: Odczynnik jest kalibrowany w dniu 0. Stabilność kalibracji jest kontrolowana przez wykonanie testów na 2 próbkach kontrolnych. Stabilność kalibracji wynosi 15 dni. Uwaga: Ponowną kalibrację odczynnika zaleca się w przypadku zmiany jego serii oraz w przypadku, gdy wyniki kontroli jakości wykroczą poza założony zakres. Wersja aplikacji: Współczynnik konwersji: x 0,18 = g/l x 18 = Bibliografia 1. Siest G, Henny J, Schiele F, Références en biologie clinique, chap.18. 2. TIETZ, Fundamentals of Clinical Chemistry, Fith Edition, Edited by C.A. Burtis, E.R. Ashwood, Part IV Analytes, Chapter 23 Carbohydrates, Specimen Collection and Storage, Measurement of Glucose in Body Fluids, 444. 3. Sacks D.B, M.B., Ch.B., F.R.C. Path., Carbohydrates, TIETZ Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. 4 ème Ed., Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE (Elseviers Saunders eds., St Louis, USA), (2006): 869. 4. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1 st ed. Frankfurt: THBooks Verlagsgesellshaft (1998): 241-247. 5. TIETZ NW, Clinical guide to laboratory tests. 3 ème Ed., (W.B. Saunders Eds. Philadelphia USA), (1995): 268. 5 / 6
6. Thomas L. Ed. Clinical Laboratory Diagnostics. 1 st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellshaft, (1998): 192-202. 7. Roberts WL, McMillin GA, Burtis CA, Bruns DE, Reference Information for the the Clinical Laboratory, TIETZ Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. 4 ème Ed. Burtis C.A., Ashwood E.R., Bruns D.E., (Elsevier Saunders eds., St Louis, USA, (2006): 2270-2271. 8. Vassault A, Grafmeyer D, Naudin C et al. Protocole de validation de techniques (document B). Ann. Biol. Clin. (1986) 44: 686-745. 9. Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP5-A (1999) 19 (2). 10. Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP6-A (2003) 23 (16). 11. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples. Approved Guideline, 2 nd ed., CLSI (NCCLS) document EP9-A2 (2002) 22 (19). 12. Passing H, Bablock W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1983) 21: 709-20. 13. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4 th Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 143-163. 14. Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests. 2 nd Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 120-132. 6 / 6