QUANTA Lite ttg ELISA 708730 (transglutaminaza tkankowa) Do diagnostyki in vitro Złożoność CLIA: Wysoka

QUANTA Lite ttg ELISA 708730 (transglutaminaza tkankowa) Do diagnostyki in vitro Złożoność CLIA: Wysoka Przeznaczenie QUANTA Lite TM ttg to test immunoabsorpcji enzymatycznej (ELISA) do półilościowego wykrywania przeciwciał IgA przeciwko transglutaminazie tkankowej (endomysium) w surowicy człowieka. Wykrywanie tych przeciwciał stanowi pomoc w diagnozowaniu określonych enteropatii wrażliwości na gluten, takich jak celiakia i opryszczkowe zapalenie skóry. Podsumowanie i wyjaśnienie testu Celiakia i opryszczkowe zapalenie skóry, dwie rozpoznane formy enteropatii związanej z nadwrażliwością na gluten (GSE) charakteryzują się przewlekłym zapaleniem błony śluzowej przewodu pokarmowego oraz spłaszczenia nabłonka lub pozytywną atrofią mikrokosmków. 1,2 Nietolerowanie glutenu, białka pszenicy, żyta oraz jęczmienia wywołuje GSE. Pacjenci z celiakią mogą cierpieć na rozwolnienie, dolegliwości układu pokarmowego, anemię, zmęczenie, problemy psychiczne oraz mogą u nich występować inne skutki uboczne lub mogą mieć one formę bezobjawową. 2 Opryszczkowe zapalenie skóry jest chorobą skóry związaną z GSE. Wszyscy pacjenci GSE mają podwyższony poziom ryzyka zachorowania na chłoniaka. 3 Dieta bezglutenowa kontroluje GSE oraz powiązane ryzyka. Odkrycie w 1950 roku faktu, że gluten wywołuje celiakię umożliwiło leczenie, dzięki zastosowaniu w przypadku pacjentów diety bezglutenowej. Po opracowaniu metody polegającej na doustnym wykonywaniu biopsji jelita, lekarze byli w stanie określić, czy u pacjenta występuje atrofia mikrokosmków. Pozytywna atrofia mikrokosmków może występować w przypadku innych chorób, jednak GSE można wykazać na podstawie początkowych kryteriów Europejskiego Towarzystwa Gastroenterologii Pediatrycznej i Żywienia (ESPGAN). Te kryteria wymagają około roku żmudnych badań z: a) wstępnie pozytywną biopsją jelit, b) 6 miesiącami na diecie bezglutenowej, c) negatywną drugą biopsją jelit, d) testem prowokacji na gluten przez 6 miesięcy e) pozytywną trzecią biopsją jelit. Opracowanie testów surowicy dla trzech różnych przeciwciał izotypu IgA 3 umożliwiło wygenerowanie szybszych, poprawionych kryteriów ESPGAN dotyczących celiakii, zgodnie z opracowaniem z 1990 r. 2 Te testy obejmują przeciwciała endomysialne IgA (EMA), 4 przeciwciała przeciwko gliadynie IgA (AGA) oraz przeciwciała przeciwko retikulinie R1 (ARA). Zmodyfikowane kryteria ESPGAN wymagają: a) pojedynczej pozytywnej biopsji jelita oraz b) wykazania przynajmniej dwóch z trzech przeciwciał klasy IgA wymienionych powyżej. Od tamtego czasu wiele badań wykazało, że testy IgA EMA mają swoistość na poziomie powyżej 99% dla GSE oraz wyższą czułość niż badania ARA lub AGA. 5-13 W związku z tym, że przeciwciała IgA EMA znikają, gdy pacjenci z celiakią lub opryszczkowym zapaleniem skóry stosują się do diety bezglutenowej, testy na te przeciwciała również pomagają w sprawdzaniu przestrzeganiu diety przez pacjentów. 4,5,12 Ostatnio antygen endomysialny został zidentyfikowany jako enzym sieciujący białka, znany jako transglutaminaza tkankowa (ttg). 14.15 Badania ELISA pod kątem antygenów obejmujące ttg stanowią rzetelną i obiektywną metodę wobec tradycyjnych immunofluorescencyjnych badań obejmujących cienkie skrawki przełyku naczelnych jako substrat. Badanie ELISA może być przystosowane do dużych jak i małych ilości próbek pacjentów. Zasada badania Oczyszczony antygen z wątroby świnki morskiej wiąże się z dołkami płytek polistyrenowych w warunkach, które zabezpieczają antygen w jego natywnym stanie. Wstępnie rozcieńczone kontrole oraz surowice pacjentów są dodawane do oddzielnych dołków umożliwiając związanie wszelkich występujących przeciwciał przeciwko ttg z unieruchomionym antygenem. Niezwiązana próbka jest wypłukiwana i do każdego dołka dodawany jest koniugat znakowanego enzymem przeciwciała przeciw-ludzkiego IgA. Druga inkubacja umożliwia przeciwciałom przeciw-ludzkim IgA znakowanym enzymem związać się z dowolnymi przeciwciałami pacjenta, które zostały przytwierdzone do mikrodołków. Po wypłukaniu wszelkich niezwiązanych przeciwciał przeciw-ludzkich IgA znakowanych enzymem, aktywność pozostałego enzymu bada się dodając substrat chromogeniczny i mierząc intensywność powstałej barwy. Badanie może zostać ocenione spektrofotometrycznie, poprzez zmierzenie i porównanie intensywności barwy, która powstaje w dołkach z próbką od pacjenta z barwą dołków kontrolnych. Odczynniki 1. Polistyrenowa płytka z mikrodołkami ELISA pokryta oczyszczonym antygenem ttg (12-1 x 8 dołków), z uchwytem w torebce foliowej zawierającej osuszacze 2. Kontrola negatywna ELISA, 1 fiolka buforu zawiera konserwant i surowicę ludzką bez ludzkich przeciwciał przeciwko ttg, wstępnie rozcieńczona, 1,2 ml 3. Słabo pozytywne ttg ELISA, 1 fiolka buforu zawierającego konserwant i przeciwciała surowicy ludzkiej przeciwko ttg, wstępnie rozcieńczone, 1,2 ml 4. Wysoko pozytywne ttg ELISA, 1 fiolka buforu zawierającego konserwant i przeciwciała surowicy ludzkiej przeciwko ttg, wstępnie rozcieńczone, 1,2 ml 5. Rozcieńczalnik do próbek HRP, 1 fiolka zabarwienie różowe, zawiera sól fizjologiczną buforowaną TRIS, Tween 20, stabilizatory białka i konserwant, 50 ml 1

6. Koncentrat do płukania HRP, 1 fiolka koncentratu 40x zabarwienie czerwone, zawiera sól fizjologiczną buforowaną TRIS i Tween 20, 25 ml. Instrukcje dotyczące rozcieńczania można znaleźć w sekcji Metody. 7. Koniugat HRP IgA, (kozi), przeciwciała przeciw-ludzkie IgA, 1 fiolka zabarwienie żółte, zawiera bufor, stabilizatory białka i konserwant, 10 ml 8. Chromogen TMB, 1 fiolka zawierająca stabilizatory, 10 ml 9. Roztwór zatrzymujący HRP, kwas siarkowy 0,344M, 1 fiolka bezbarwny, 10 ml Ostrzeżenia 1. OSTRZEŻENIE: Ten produkt zawiera substancję chemiczną (chloramfenikol 0,02%) w rozcieńczalniku do próbek, kontrolach i koniugacie, która według stanu Kalifornii wywołuje raka. 2. Wszystkie materiały pochodzenia ludzkiego używane w przygotowywaniu kontroli dla tego produktu zostały przetestowane i na podstawie metod zatwierdzonych przez FDA stwierdzono że nie zawierają przeciwciał przeciwko HIV, HBsAg i HCV. Jednak żadna metoda testowania nie może całkowicie zagwarantować braku obecności HIV, HBV, HCV lub innych czynników zakaźnych. Z tego też względu słabo pozytywną kontrolę ttg ELISA, wysoko pozytywną kontrolę ttg ELISA oraz kontrolę negatywną ELISA należy użytkować w ten sam sposób, jak materiał potencjalnie zakaźny. 16 3. Jako konserwant stosowany jest azydek sodu. Azydek sodu jest trucizną i może być toksyczny w przypadku połknięcia lub wchłonięcia przez skórę lub oczy. Azydek sodu może wchodzić w reakcję z ołowianą lub miedzianą instalacją wodociągową, tworząc potencjalnie wybuchowe azydki metali. Jeśli do usuwania odczynników używane są zlewy, należy przepłukiwać je dużą ilością wody, aby nie dopuścić do gromadzenia się azydku. 4. Koniugat HRP zawiera rozcieńczoną trującą/korozyjną substancję chemiczną, która może być toksyczna w przypadku spożycia w dużej ilości. Aby uniknąć potencjalnych oparzeń chemicznych, należy unikać kontaktu ze skórą i oczami. 5. Chromogen TMB zawiera środek drażniący, w który może być szkodliwy w przypadku wdychania, spożycia lub wchłonięcia przez skórę. Aby uniknąć urazów, należy unikać wdychania, spożycia lub kontaktu ze skórą i oczami. 6. Roztwór zatrzymujący HRP składa się z rozcieńczonego roztworu kwasu siarkowego. Unikać wystawienia na działanie zasad, metali lub innych związków, które mogą wchodzić w reakcje z kwasami. Kwas siarkowy jest trucizną i ma właściwości korozyjne. W razie połknięcia może być toksyczny. Aby uniknąć oparzeń chemicznych, należy unikać kontaktu ze skórą i oczami. 7. Podczas pracy z dostarczonymi odczynnikami należy stosować odpowiednie środki ochrony osobistej. 8. Rozlane odczynniki należy natychmiast usunąć. Należy przestrzegać wszystkich krajowych i lokalnych przepisów w zakresie utylizacji odpadów. Środki ostrożności 1. Ten produkt jest przeznaczonych do zastosowań diagnostycznych in vitro. 2. Zastąpienie składników dostarczonych w tym systemie innymi składnikami może skutkować osiągnięciem niespójnych wyników. 3. Niepełne lub nieprawidłowe płukanie i niewystarczające usunięcie płynu z płytek z dołkami ELISA wpłynie negatywnie na precyzję badań i/lub spowoduje wysoki poziom tła. 4. Dostosowanie tego badania do stosowania ze zautomatyzowanymi analizatorami próbek oraz innymi urządzeniami do pracy z płynami, w całości lub w części, może skutkować rozbieżnością wyników w stosunku do badań przeprowadzanych ręcznie. Obowiązkiem każdego laboratorium jest potwierdzenie, że wyniki testów uzyskanych na podstawie zautomatyzowanych badań mieszczą się w akceptowalnych limitach. 5. Na wyniki analizy wpływa wiele różnych czynników. Obejmują one temperaturę początkową odczynników, temperaturę otoczenia, dokładność i powtarzalność techniki pipetowania, dokładność płukania i usuwania płynu z dołków płytek ELISA, fotometr użyty do analizy wyników oraz czasy trwania inkubacji podczas badania. Uzyskanie dokładnych i powtarzalnych wyników wymaga staranności i precyzji. 6. Zalecane jest ścisłe przestrzeganie procedury testowej. 7. Niedokładne zamknięcie torebki z zamknięciem strunowym, zawierającej płytki z mikrodołkami i osuszaczami, spowoduje degradację antygenu i brak precyzji badania. 8. Dwukrotne lub wielokrotne użycie koniugatu HRP z jednej butelki w pewnym okresie czasu może dać niedopuszczalnie niski poziom absorbancji. Aby nie dopuścić do takiej sytuacji istotne jest przestrzeganie wszystkich zaleceń dotyczących procedur pracy z koniugatem HRP. 9. Zanieczyszczenie chemiczne koniugatu HRP może być spowodowane nieprawidłowym czyszczeniem lub płukaniem sprzętu lub narzędzi. Pozostałości typowych laboratoryjnych substancji chemicznych, takich jak formalina, substancja wybielająca, etanol lub detergent, z czasem spowoduje degradację koniugatu HRP. Po użyciu chemicznych substancji czyszczących/dezynfekujących dokładnie wypłukać cały sprzęt i wszystkie narzędzia. Warunki przechowywania 1. Wszystkie odczynniki z zestawu przechowywać w temperaturze 2 8 C. Nie zamrażać. Odczynniki są trwałe do daty ważności, pod warunkiem, że są przechowywane i używane zgodnie z instrukcjami. 2. Nieużyte płytki z mikrodołkami pokrytymi antygenem powinny być starannie zamknięte w torebce foliowej z osuszaczami i przechowywane w temperaturze 2 8 C. 3. Rozcieńczony bufor do płukania zachowuje trwałość przez 1 tydzień w temperaturze 2 8 C. 2

Pobieranie próbek Ta procedura powinna być wykonana z próbką surowicy. Dodanie azydku lub innych konserwantów do próbek analitycznych może mieć negatywny wpływ na wyniki. Nie używać próbek zawierających widoczne zanieczyszczenia, skażonych bakteryjnie lub podgrzanych. Należy unikać całkowicie zhemolizowanej lub lipemicznej surowicy albo próbek. Po pobraniu surowica powinna być oddzielona od skrzepu. Dokument CLSI (NCCLS) H18-A zaleca następujące warunki przechowywania próbek: 1) Przechowywać próbki w temperaturze pokojowej nie dłużej niż 8 godzin. 2) Jeśli badanie nie zostanie zakończone w ciągu 8 godzin, schłodzić próbkę do temperatury 2-8 C. 3) Jeśli badanie nie zostanie ukończone w ciągu 48 godzin lub w przypadku transportu próbki, należy zamrozić ją w temperaturze -20 C lub niższej. Zamrożone próbki po rozmrożeniu i przed badaniem muszą zostać dobrze wymieszane. Badanie Dostarczone materiały 1 Płytka z mikrodołkami ttg ELISA (12-1 x 8 dołków), z uchwytem 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonej kontroli negatywnej ELISA 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonej słabo pozytywnej ttg ELISA 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonej wysoko pozytywnej ttg ELISA 1 50 ml rozcieńczalnika do próbek HRP 1 25 ml koncentratu do płukania HRP, koncentrat 40x 1 10 ml koniugatu przeciwciała IgA HRP, (kozie), przeciw-ludzkie IgA 1 10 ml chromogenu TMB 1 10 ml roztworu zatrzymującego HRP, kwas siarkowy 0,344M Wymagane materiały nie dołączone do zestawu Mikropipety na 5, 100, 200 300 i 500 µl Jednorazowe końcówki mikropipet Probówki do roztworów próbek pochodzących od pacjenta, 4 ml objętości Woda destylowana lub dejonizowana Naczynie o objętości 1 l do rozcieńczonego koncentratu HRP do płukania Czytnik płytek z mikrodołkami umożliwiający pomiar gęstości optycznej przy 450 nm (i przy 620 nm dla odczytów przy dwóch długościach fali) Sposób przygotowania Przed rozpoczęciem 1. Doprowadzić wszystkie odczynniki i próbki do temperatury pokojowej (20-26 o C) i dobrze wymieszać. 2. Rozcieńczyć koncentrat do płukania HRP w stosunku 1:40, dodając zawartość butelki koncentratu do płukania HRP do 975 ml wody destylowanej lub dejonizowanej. Jeśli cała płytka nie zostanie przetworzona w tym czasie, można przygotować mniejszą ilość. W tym celu należy dodać 2,0 ml koncentratu do 78 ml wody destylowanej lub dejonizowanej na każde 16 dołków, które będą użyte. Rozcieńczony bufor zachowuje trwałość przez 1 tydzień w temperaturze 2 8 o C. 3. Przygotować roztwór 1:101 każdej próbki pochodzącej od pacjenta, dodając 5 µl próbki do 500 µl rozcieńczalnika do próbek HRP. Rozcieńczone próbki muszą być użyte w ciągu 8 godzin od przygotowania. NIE ROZCIEŃCZAĆ słabo pozytywnej ttg ELISA, wysoko pozytywnej ttg ELISA i kontroli negatywnej ELISA. 4. Oznaczanie obecności lub braku ttg, stosując jednostki umowne wymaga dwóch dołków dla każdego z trzech kontroli i jednego lub dwóch dołków dla każdej próbki pacjenta. Zalecane jest wykonanie duplikatów próbek. Procedura badania 1. WSZYSTKIE ODCZYNNIKI PRZED ROZPOCZĘCIEM BADANIA MUSZĄ BYĆ DOPROWADZONE DO TEMPERATURY POKOJOWEJ (20 26 C). Umieścić wymaganą liczbę mikrodołków/pasków w uchwycie. Natychmiast umieścić nieużywane płytki w torebce foliowej zawierającej osuszacz i dobrze ją zamknąć, aby ograniczyć kontakt z parą wodną. 2. Do dołków dodać 100 µl wstępnie rozcieńczonej słabo pozytywnej ttg ELISA, wysoko pozytywnej ttg ELISA oraz kontroli negatywnej ELISA i rozcieńczonych próbek pochodzących od pacjentów. Przykryć dołki i inkubować przez 30 minut w temperaturze pokojowej na równej powierzchni. Czas inkubacji rozpoczyna się po dodaniu ostatniej próbki. 3. Etap płukania: Odessać całkowicie zawartość każdego dołka. Dodać 200 300 µl rozcieńczonego buforu do płukania HRP do wszystkich dołków, a następnie odessać. Powtórzyć tę sekwencję jeszcze dwukrotnie, aby łącznie przeprowadzić trzy płukania. Odwrócić płytkę i postukać w nią na materiale pochłaniającym w celu usunięcia pozostałości płynu po ostatnim płukaniu. Ważne jest, aby całkowicie opróżnić każdy dołek po każdym etapie płukania. Zachować tę samą sekwencję odsysania, jak w przypadku dodawania próbki. 4. Do każdego dołka dodać 100 μl koniugatu IgA HRP. Koniugat powinien być usunięty z butelek z zastosowaniem standardowych warunków aseptycznych oraz zalecanych technik laboratoryjnych. Pobrać z butelki jedynie wymaganą do analizy ilość koniugatu. ABY UNIKNĄĆ POTENCJALNEGO ZANIECZYSZCZENIA BAKTERYJNEGO I/LUB CHEMICZNEGO, NIE WOLNO WLEWAĆ NIEUŻYTEGO KONIUGATU Z POWROTEM DO BUTELKI. Inkubować dołki przez 30 minut jak w etapie 2. 3

5. Etap płukania: Powtórzyć etap 3. 4

6. Dodać 100 µl chromogenu TMB do każdego dołka i inkubować w ciemności przez 30 minut w temperaturze pokojowej. 7. Do każdego dołka dodać 100 µl roztworu zatrzymującego HRP. Zachować tę samą sekwencję i czas dodawania roztworu zatrzymującego HRP, jak w przypadku chromogenu TMB. Delikatnie postukać płytkę palcem, aby dokładnie wymieszać zawartość dołków. 8. Odczytać absorbancję (gęstość optyczną) każdego dołka przy długości fali 450 nm w ciągu jednej godziny od zatrzymania reakcji. Jeśli wymagane są pomiary bichromatyczne, referencyjną długością fali może być długość 620 nm. Kontrola jakości 1. Aby upewnić się, że wszystkie odczynniki i procedury funkcjonują prawidłowo, każdą serię próbek należy testować wraz ze słabo pozytywną ttg ELISA, wysoko pozytywną ttg ELISA i kontrolą negatywną ELISA. 2. Należy zauważyć, że ponieważ słabo pozytywna kontrola ttg ELISA, wysoko pozytywna kontrola ttg ELISA i kontrola negatywna ELISA są już wstępnie rozcieńczone, to nie będą one stanowić kontroli w przypadku procedur związanych z rozcieńczaniem próbek. 3. Dodatkowe kontrole mogą być przebadane zgodnie z wytycznymi lub wymaganiami lokalnych i/lub krajowych przepisów lub organów normalizacyjnych. Dodatkowe odpowiednie surowice kontrolne można przygotować, dzieląc połączone próbki surowicy ludzkiej i przechowując je w temperaturze - 20 C. 4. Aby wyniki badania mogły być uznane jako ważne, muszą zostać spełnione wszystkie poniższe kryteria. Jeśli jakiekolwiek kryterium nie będzie spełnione, badanie powinno być traktowane jako nieważne i powinno zostać powtórzone. a. Absorbancja wstępnie rozcieńczonej wysoko pozytywnej kontroli ttg ELISA musi być większa niż absorbancja wstępnie rozcieńczonej słabo pozytywnej kontroli ttg ELISA, która z kolei musi być większa niż absorbancja wstępnie rozcieńczonej kontroli negatywnej ELISA. b. Absorbancja wstępnie rozcieńczonej wysoko pozytywnej kontroli ttg ELISA musi być większa niż 1,0, natomiast absorbancja wstępnie rozcieńczonej kontroli negatywnej ELISA nie może przekroczyć 0,2. c. Absorbancja wstępnie rozcieńczonej słabo pozytywnej kontroli ttg ELISA musi być ponad dwukrotnie większa niż absorbancja kontroli negatywnej ELISA lub być większa niż 0,25. d. Kontrola negatywna ELISA i kontrola pozytywna ttg ELISA mają za zadanie wykazać ewentualne istotne nieprawidłowe działanie odczynnika. Wysoko pozytywna kontrola ttg ELISA nie zapewni dokładności przy wartości granicznej badania. e. Dodatkowe wytyczne dotyczące odpowiednich praktyk QC można znaleźć w dokumencie CLSI (NCCLS) C24-A. Obliczanie wyników W pierwszej kolejności jest określana średnia gęstość optyczna każdego zestawu duplikatów. Reaktywność każdej próbki można następnie wyliczyć, dzieląc średnią gęstość optyczną próbki przez średnią gęstość optyczną słabo pozytywnej ttg ELISA. Otrzymany wynik mnoży się przez liczbę jednostek przypisanych do słabo pozytywnej ttg ELISA, którą można znaleźć na etykiecie. Gęstość optyczna próbki Wartość próbki = x słabo pozytywna ttg ELISA (jednostki) gęstość optyczna słabo pozytywnej ttg ELISA (jednostki) Reaktywność w sposób nieliniowy zależy od ilości obecnych przeciwciał. Wzrosty i spadki stężeń przeciwciał u pacjenta będą odzwierciedlone w analogicznym wzroście lub spadku reaktywności, jednak zmiana ta nie jest proporcjonalna (tzn. podwojenie stężenia przeciwciał nie oznacza podwojenia reaktywności). Jeśli wymagane jest dokładniejsze oszacowanie ilości przeciwciał pacjenta, należy przeprowadzić badanie seryjnych rozcieńczeń próbek pochodzących od pacjenta i ostatnie rozcieńczenie w ramach badania z wynikiem pozytywnym powinno być zaraportowane jako miano przeciwciał pacjenta. Interpretacja wyników Badanie ELISA jest bardzo wrażliwe na technikę i jest w stanie wychwycić nawet najdrobniejsze różnice w populacjach pacjentów. Poniższe wartości są jedynie wartościami sugerowanymi. Każde laboratorium powinno ustalić własny normalny zakres na podstawie własnych technik, kontroli, sprzętu i populacji pacjentów, zgodnie z własnymi ustalonymi procedurami. Próbka następnie może być sklasyfikowana jako negatywna, słabo pozytywna, średnio pozytywna lub silnie pozytywna, zgodnie z poniższą tabelą. Jednostki Negatywny <20 Słabo pozytywna 20 30 Od średnio do silnie pozytywnego >30 1. Wynik pozytywny wskazuje na obecność przeciwciał IgG i sugeruje możliwość występowania pewnych enteropatii związanych z nadwrażliwością na gluten, takich jak celiakia i opryszczkowe zapalenie skóry. 5

2. Wynik negatywny wskazuje na brak przeciwciał ttg lub ich poziom poniżej wartości granicznej testu. 3. Zalecane jest, aby wyniki raportowane przez laboratorium zawierały oświadczenie: Poniższe wyniki zostały uzyskane przy użyciu zestawu INOVA QUANTA Lite ttg ELISA. Wartości ttg uzyskane przy użyciu analiz innych producentów nie mogą być używane zamiennie. Rząd wielkości poziomów raportowanego IgA nie może być skorelowany z mianem punktu końcowego. Ograniczenia badania 1. Obecność kompleksów immunologicznych lub innych agregatów immunoglobuliny w próbce pochodzącej od pacjenta może powodować podwyższony poziom nieswoistego wiązania i wytwarzać fałszywe pozytywne wyniki w tym badaniu. 2. Wynik negatywny ttg u nieleczonego pacjenta nie wyklucza całkowicie enteropatii związanej z nadwrażliwością na gluten. Ten wynik można często wyjaśnić występującym względnie często w celiakii selektywnym niedoborem IgA. Firma INOVA oferuje zestaw h-ttg IgG do badania takich pacjentów (QUANTA Lite h-ttg IgG ELISA). 3. Wyniki tego badania powinny być użyte w powiązaniu z wynikami klinicznymi i innymi badaniami serologicznymi. 4. Charakterystyka wyników badania nie została ustanowiona dla podłoża innego niż surowica. Spodziewane wartości Zdolność testu QUANTA Lite ttg ELISA do wykrywania przeciwciał IgA przeciwko transglutaminazie tkankowej został oceniony poprzez porównanie z testem immunofluorescencji na wykrywanie przeciwciał endomysialnych (EMA), jak również przez porównanie wyników z rzeczywistą diagnozą kliniczną w ramach trzech zewnętrznych badaniach klinicznych oraz jednego badania wewnętrznego. Normalny zakres Przeprowadzono badania na łącznie 202 losowo wybranych próbkach. Populacja składała się z 106 mężczyzn oraz 96 kobiet w wieku od 15 do 72 lat. Jedynie 2 próbki (1%) dały wynik pozytywny. Obie pozytywne próbki były słabo reakcyjne z wynikiem 21 i 24 jednostki. Wartość graniczna 20 jednostek odnosi się do populacji dzieci i dorosłych. Swoistość i wrażliwość względna Łącznie 99 próbek poddano badaniom QUANTA Lite ttg ELISA oraz niebezpośredniej immunofluorescencji na przeciwciała endomysialne. Poniżej zostały przedstawione wyniki: Endomysialne na podstawie immunofluorescencji + - + 64 2** Wrażliwość względna 98,5% QUANTA Lite ttg ELISA Swoistość względna 94,1% - 1* 32 Skuteczność względna 96,7% * Ten pacjent miał miano endomysialne 1:2, miał wynik negatywny na gliadynę IgA i słabo pozytywny na glaidynę IgG. Pacjent miał celiakię ale był na diecie bezglutenowej. ** Obie próbki były silnie dodatnie na gliadynę IgG i IgA. Swoistość i wrażliwość kliniczna Zestaw przeciwciał QUANTA Lite ttg ELISA został przebadany w ramach trzech zewnętrznych badań klinicznych i jednego wewnętrznego badania klinicznego. Poniższa tabela podsumowuje wnioski wewnętrznych i zewnętrznych badań klinicznych. Grupa pacjentów NrLiczba pozytywnych (%) Celiakia 41 41 (100) stosowana dieta 10 1* (10) Opryszczkowe zapalenie skóry 8 8 (100) stosowana dieta 1 0 Choroba zapalna jelit 9 1** (11) Zaburzenia GI bez celiakii 20 0 Dzieci 58 0 SLE 15 1 (6,6) Normalne 239 2*** (0,8) * Ten jeden pozytywny pacjent miał również wynik pozytywny na endomysium 1:10 i wiadomo było, że nie stosował się całkowicie do diety bezglutenowej. ** U tego pacjenta wynik był pozytywny na endomysium z mianem 1:40 i był również pozytywny na przeciwciała gliadyny IgA i IgG. *** Te 2 próbki były słabo pozytywne z wynikiem 21 i 24 jednostki. 6

Reaktywność krzyżowa Zestaw QUANTA Lite ttg ELISA został przetestowany z 25 próbkami z wysokim poziomem innych przeciwciał, takich jak ANA, dsdna, ENA oraz inne. Żadna z nich nie wchodziła w reakcje. Średnia wartość dla tej grupy wyniosła 5,2 jednostki z zakresem 2 13 jednostek. Precyzja i powtarzalność Precyzja i powtarzalność badania zostały przebadane przez przeprowadzenie sześciu powtórzeń każdej silnie pozytywnej, umiarkowanie pozytywnej i negatywnej próbki w sześciu oddzielnych badaniach. Średnia reakcyjność wyników silnie pozytywnych wyniosła 102,3, słabo pozytywnych wyniosła 50,1, a średnia wartość negatywnych wyników wyniosła 17,8 jednostki. Poniżej znajduje się podsumowanie odchylenia standardowego oraz współczynnika zmienności dla każdej próbki. Negatywny Silnie pozytywna Średnio pozytywna SD CV SD CV SD CV Łącznie 0,69 3,9% 2,47 2,4% 1,53 3,1% W ramach serii 0,60 3,3% 2,4 2,4% 1,34 2,7% Pomiędzy seriami 0,65 3,7% 1,78 1,7% 1,46 2,9% 7

Piśmiennictwo 1. Meuweisse GW. Diagnostic criteria in celac disease. Acta Paediatr Scand 59:461, 1970. 2. Walker-Smith JA, Guandalini S, Schmitz J, Shmerling DH, Visakorpi JK. Revised criteria for diagnosis of celiac disease: Report of working group of Euorpean Society of Pediatric Gastroenterology and Nutrition (ESPGAN). Arch Diseases of Childhood 65: 909-911, 1990. 3. Chorzelski TP, Beutner EH, Zalewski TK, et al. editors. Serologic diagnosis of celiac disease. Boca Raton (FL): CRC Press, 1990. 4. Chorzelski TP, Sulej J, Tcherzewska H, et al. IgA class endomysium antibodies in dermatitis herpetiformis and celiac disease. Ann NY Acad Sci 420: 325-334, 1983. 5. Volta U, Molinar N, De Franchis R, et al. Correlation between IgA antiendomysial antibodies and subtotal villous atrophy in dermatitis herpetiformis. J Clin Gastroenterol 14: 298-301, 1992. 6. Valdimarsson T, Franzen L, Grodzinsky E, Skogh T, Strom M. Is small bowel biopsy necessary in adults with suspected celiac disease and IgA anti-endomysial antibodies? 100% positive predictive value for celiac disease in adults. Digestive Diseases and Science 41: 83-87, 1996. 7. Unsworth FJ. Serologic diagnosis of gluten sensitive enteropathy. J Clin Path 49: 704-711, 1996. 8. Volta U, Molinaro M, Fusconi M, Cassani F, Bianchi FB. IgA antiendomysial antibody test: A step forward in celiac disease screening. Digestive Diseases and Science 36: 752-756, 1991. 9. Wilfang S, Knauss M, Stern M. IgA endomysiumantikorper. Montsschr Kinderkeilkd 140: 639-645, 1992. 10. Muscart-Lemone F, Van den Broek J, Cadranel S, Colombel JF. Serologic aspects of celiac disease. Acta Gastro-Enterologica Belgica 55:200-208, 1992. 11. Grodzinsky E, Hed J, Skogh T. IgA antiendomysium antibodies have a high predictive value for celiac disease in asymptomatic patients. Allergy 49: 593-597, 1994. 12. Sategna-Guidetti C, Pulitano R, Grosso S, Ferfoglia G. Serum IgA antiendomysium antibody titers as a marker of intestinal involvement and diet compliance in adult celiac sprue. J Clin Gastroenterol 17: 123-127, 1993. 13. Catassi C. Screening of coeliac disease. In: Maki M, Collin P, Visakorpi JK. editors. Coeliac disease. Tampere (Finland): Coeliac Disease Study Group; p. 23-33, 1997. 14. Dieterich W, Ehnis T, Bauer M, et al. Identification of tissue transglutaminase as the autoantigen of celiac disease. Nature Medicine 3: 797-801, 1997. 15. Sollid LM, Molberg O, McAdam S, Lundin K, et al. Autoantibodies in coeliac disease: tissue transglutaminase guilt by association? Gut 41: 851-852, 1997. 16. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Center for Disease Control/National Institute of Health, 1999, 2007, Fifth Edition. 8

QUANTA Lite i INOVA Diagnostics, Inc. są zastrzeżonym znakiem handlowym firmy Copyright 2011. Wszelkie prawa zastrzeżone Wyprodukowano przez: INOVA Diagnostics, Inc. 9900 Old Grove Road San Diego, CA 92131 Stany Zjednoczone Ameryki Pomoc techniczna (tylko na terenie Stanów Zjednoczonych i Kanady): 877-829-4745 Pomoc techniczna (poza terenem Stanów Zjednoczonych): 00+ 1 858-805-7950 support@inovadx.com Autoryzowani przedstawiciele na terenie Unii Europejskiej: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D-66386 St. Ingbert, Niemcy Tel.: +49-6894-581020 Faks.: +49-6894-581021 www.mt-procons.com 628730POL Sierpień 2011 Wersja 0 9