6 SUPLEMENTY PROBIOTYKI A TECHNOLOGIA czy tylko jakość ma znaczenie? Probiotyki są to żywe mikroorganizmy, które podane w odpowiednich ilościach wywierają korzystne skutki zdrowotne [1]. Poza istotnością stosowania probiotykoterapii w sposób celowany, ważne jest również, aby ich dawka, forma i okoliczności podawania nie były przypadkowe. Bez wątpienia najistotniejszym aspektem probiotykoterapii jest dawka probiotyku. Niskie ph żołądka stanowi przyczynę, dla której dawka preparatu probiotycznego powinna być ustalona w taki sposób, aby dotarła do jelit w ilości pożądanej i wywołującej oczekiwany efekt zdrowotny [2]. FOOD FORUM 6(16)/2016
REKLAMA SUPLEMENTY 7 mgr inż. Dominika Jankowska Centrum Medyczne VitaImmun w Poznaniu dr n. biol. Patrycja Szachta Centrum Medyczne VitaImmun w Poznaniu Zawartość żywych komórek w probiotykach waha się od 105 do 109 jednostek tworzących kolonie (jtk)/g lub ml, a probiotyczne właściwości ustalone dzięki badaniom klinicznym związane są z gatunkiem, rodzajem i szczepem zastosowanego drobnoustroju [3]. Istotne jest to, aby preparat przygotowany został w sposób właściwy, gdyż proces technologiczny wpływa na aktywność i żywotność szczepów bakteryjnych. Warunki przechowywania, sposób podania i czas odgrywają równie istotną rolę w aspekcie aktywności i przeżywalności probiotyków. Skuteczność działania preparatu probiotycznego uzależniona jest także od tego, czy zastosowana została monokultura bakteryjna, czy też podany preparat jest preparatem wieloszczepowym [4]. Spośród czynników wpływających na przeżywalność bakterii probiotycznych wymienić można temperaturę, ph środowiska i formę podania preparatu probiotycznego. Temperatura jest głównym czynnikiem warunkującym procesy życiowe mikroorganizmów. Jej działanie może mieć charakter bezpośredni wpływa na aktywność enzymów, szybkość wzrostu, skład chemiczny komórek czy wymagania pokarmowe, albo też bezpośredni reguluje transport, dyfuzję substancji chemicznych, zmianę właściwości osmotycznych błon komórkowych czy rozpuszczalność związków wewnątrzkomórkowych. Ze względu na wymagania temperaturowe bakterie dzielimy na pięć grup: psychrofile, psychrotrofy, mezofile, termofile i hipertermofile. Różnorodne przystosowania fizjologiczne komórek gwarantują ich wzrost w odmiennych warunkach, a ponadto umożliwiają produkcję białek szoku zimna (CSP) oraz białek szoku termicznego (HSP) zabezpieczających przed letalnym wpływem temperatury na bakterie. Optymalną temperaturą wzrostu bakterii probiotycznych, szczególnie z rodzaju Lactobacillus, jest zakres 30 40 C, gdyż są to bakterie wyizolowane z przewodu pokarmowego człowieka i zwierząt [5]. Drobnoustroje probiotyczne są zdolne do przeżycia tylko w określonych warunkach ph środowiska. Probiotyczne bakterie fermentacji mlekowej należą do drobnoustrojów acidofilnych. Mają one zdolność do regulacji wewnątrzkomórkowego ph, co umożliwia im przeżycie w niskich wartościach tego czynnika. Bakterie niezdolne do utrzymania ph zbliżonego do neutralnego wewnątrz komórek w czasie wzrostu przy niskim ph tracą zdolność do życia i aktywności metabolicznej [6]. Forma podania www.food-forum.pl
8 SUPLEMENTY Temperatura jest głównym czynnikiem warunkującym probiotyku i jego immobilizacji jest równie istotna, gdyż to właśnie otoczka pozwala ochronić bakterie przed niekorzystnymi czynnikami, na które są narażone podczas przejścia przez przewód pokarmowy. Immobilizacja, czyli unieruchamianie komórek, jest procesem polegającym na wiązaniu drobnoustrojów z nośnikiem, tak aby ograniczyć ich swobodny ruch, a jednocześnie zapewnić dostęp do składników odżywczych i odprowadzania produktów przemiany. Do metod immobilizacji stosowanych powszechnie w przemyśle farmaceutycznym należą: unieruchomienie bez nośnika, unieruchomienie na powierzchni nośnika, unieruchomienie wewnątrz nośnika [7]. Unieruchomienie bez nośnika, czyli inaczej samoagregacja, może mieć miejsce gdy komórki tworzą skupiska czy też możliwy jest ich wzrost w postaci kłaczków lub granulek. Otrzymywane tą metodą preparaty charakteryzują się małą wytrzymałością i odpornością na czynniki zewnętrzne, co ogranicza możliwość ich zastosowania w tworzeniu preparatów probiotycznych. Unieruchomienie na powierzchni nośnika jest metodą wykorzystującą wiązania pomiędzy nośnikiem a materiałem immobilizowanym. Jak w przypadku unieruchomienia materiału biologicznego bez nośnika, metoda ta nie odnajduje zastosowania w tworzeniu preparatów probiotycznych ze względu na bezpośredni kontakt materiału biologicznego (bakterii probiotycznych) ze środowiskiem, do którego jest wprowadzony [8]. Do najpopularniejszych metod stosowanych przy przygotowywaniu preparatów biologicznych jest unieruchomienie wewnątrz nośnika. Unieruchomienie materiału wewnątrz nośnika polega na fizycznym zamknięciu komórek w matrycy. Drobnoustroje zamknąć można wewnątrz półprzepuszczalnej membrany w postaci kapsułki (nanokapsułkowanie i mikrokapsułkowanie) bądź kapilary (makrokapsułkowanie) lub pułapkować w porowatym nośniku. Metoda ta oddziela bakterie od środowiska zewnętrznego, gwarantując odporność na zmieniające się ph przewodu pokarmowego i w sposób ograniczony na temperaturę [9]. W terapii doustnej szerokie zastosowanie znajdują hydrożelowe kapsułki (np. których podstawę stanowi alginian, karagen, agaroza). Możliwość modyfikacji nośników gwarantuje dobranie odpowiedniego materiału do zaplanowanej terapii. Po doustnym podaniu kapsułki narażone są na nieprzyjazne czynniki, takie jak: aktywność różnego rodzaju enzymów, zachodzące w organizmie reakcje chemiczne, zmieniające się ph [10]. Powszechnie dostępne probiotyki stosowane w terapiach profilaktycznych i leczniczych są najczęściej przygotowywane w postaci wysuszonej sublimacyjnie (liofilizowanej) biomasy zamkniętej w szklanych ampułkach lub fiolkach, saszetkach lub kapsułkach twardych (celulozowych lub żelatynowych). Proces liofilizacji zapewnia najlepsze parametry jakościowe suchego preparatu bakteryjnego. Wyjątkowo korzystnym nośnikiem bakterii probiotycznych podczas suszenia jest mleko. Mleko jest naturalnym środowiskiem występowania bakterii kwasu mlekowego. Zapewnia buforowanie treści żołądka i lepsze przeżycie bakterii podczas lokacji przez przewód pokarmowy, a zawarta w mleku laktoza stanowi substrat wzrostowy dla bakterii [11, 12]. Przeżywalność podczas suszenia oraz stabilność podczas przechowywania udaje sie także poprawić, dodając substancje o charakterze ochronnym, m.in. kwas askorbinowy, maltodekstryny, skrobię czy nawet jogurt. Kapsułki i mikrokapsułki poza działaniem ochronnym pełnią funkcję maskowania smaku, koloru i zapachu, kontrolują reakcje oksydacyjne, zapewniając trwałe i kontrolowane uwalnianie oraz przedłużają termin ważności probiotyku [13]. FOOD FORUM 6(16)/2016
10 SUPLEMENTY Dodatek probiotyków do żywności Probiotyki występują na rynku nie tylko w postaci preparatów farmaceutycznych. Dużą popularnością cieszy się żywność wzbogacana bakteriami probiotycznymi. O ile dawka probiotycznych preparatów terapeutycznych musi zawierać co najmniej 1011 jtk, to w przypadku stosowania probiotyków w żywności dawka powinna być nie mniejsza od 108 jtk. Istnieją trzy możliwości suplementowania środków spożywczych probiotykami: dodawanie bakterii probiotycznych w formie liofilizatu czy wysuszonych metodą suszenia rozpyłowego, jako preparaty farmaceutyczne, w formie osłabionej szczepionki mikroorganizmów. Warto nadmienić, iż wzbogacanie żywności o probiotyki musi zostać poprzedzone szczegółowym sprawdzeniem, jakim procesom technologicznym będzie poddana żywność, do której dodano bakterie [4]. Kiedy przyjmować probiotyki? Przed posiłkiem, po posiłku czy w trakcie? Z uwagi na szereg czynników warunkujących przeżywalność bakterii w przewodzie pokarmowym zasadne wydaje się pytanie, jak zatem zwiększyć przeżywalność bakterii probiotycznych w przewodzie pokarmowym. Dowiedziono, iż bakterie probiotyczne najlepiej radzą sobie z przetrwaniem, kiedy podawane są wraz z pożywieniem. Na drugim miejscu znalazła się metoda podawania bakterii do 30 min po posiłku, a najgorzej wypadła przeżywalność bakterii, podczas gdy podano je tylko z wodą. Zależność ta wynika z silnie kwaśnego ph żołądka, które niszcząc osłonkę kapsułki, uszkadza bakterie w niej bytujące, natomiast posiłek buforując soki żołądkowe, stanowi pewnego rodzaju tarczę ochronną dla bakterii, dzięki czemu mogą one skuteczniej dotrzeć do jelita [14]. Ponadto istotnym aspektem jest forma przygotowania probiotyku. Jeśli preparat jest proszkiem wymagającym uprzednio uwodnienia, należy rozpuścić go w zimnym lub chłodnym napoju, NIGDY NIE GORĄCYM! Immobilizacja, czyli unieruchamianie komórek jest procesem FOOD FORUM 6(16)/2016
SUPLEMENTY 11 Jeśli preparat jest proszkiem NIGDY NIE REKLAMA www.food-forum.pl
12 SUPLEMENTY Preparat probiotyczny Przechowywanie preparatów probiotycznych Preparat probiotyczny musi pozostać stabilny przez cały okres przydatności do zastosowania. Producenci proponują rożne metody przechowywania probiotyków. Warto dodać, że dla odpowiedniej jakości, stabilności, a przede wszystkim żywotności preparatu probiotycznego (tabletki, proszek, kapsułki), korzystne jest zapewnienie warunków chłodniczych, niskiego poziomu aktywnej wody oraz stosunkowo krótkiego czasu trwałości (12 24 miesięcy). Probiotyki należy przechowywać w suchym i chłodnym miejscu. Wyjątek stanowi produkt konfekcjonowany z niską zawartością wody (< 0,20), który może być przechowywany w wyższej temperaturze (4 30 C). Oznakowanie probiotyków Warto zaznaczyć, iż nie każda bakteria kwasu mlekowego jest probiotykiem. Dopuszczone do sprzedaży preparaty probiotyczne muszą zostać odpowiednio oznakowane. Każda etykieta powinna zawierać skład opisujący rodzaj, gatunek i nazwę szczepu przygotowaną na podstawie aktualnego, naukowo rozpoznawalnego nazewnictwa oraz minimalną ilość żywych bakterii pod koniec terminu ważności preparatu. Wszystko powinno zostać przedstawione w jasny, klarowny sposób, tak aby pacjent po zapoznaniu się z etykietą wiedział, jak postępować, by zachować najwyższą jakość zakupionego preparatu [15, 16]. FOOD FORUM 6(16)/2016
SUPLEMENTY Bibliografia: 1. Probiotyki w żywności. Właściwości zdrowotne i żywieniowe oraz wytyczne do ich oceny. Publikacja wyd. przez Polskie Towarzystwo probiotyczne i probiotyczne, zawierająca wytyczne WHO i FAO z 2001 i 2002 roku. 2. Szajewska H., Mrukowicz J.Z. Probiotics in the treatment and prevention of acute infecftious diarrhea in infants and children: a systematic review of published randomized, double-bind, placebo- controlled trials, J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr., 2001, 33, 4, Suppl. 2, 17. 3. Siggers R.H., Thymann T., Siggers J.L., Schmidt M., Hansen A.K., Sangilda P.T. Bacterial colonization affects early organ and gastrointestinal growth in the neonate. LivestSci. 2007, 109, 14 18. 4. Steinka I. Wybrane aspekty stosowania probiotyków. Ann. Acad. Med. Gedan. 2011, 41, 97 108. 5. Libudzisz Z., Kowal K., Żakowska Z. Mikrobiologia techniczna, tom 1. Wydawnictwo Naukowe PWN Warszawa. 2009, 328 340. 6. Gajewska J., Błaszczyk M. K. Probiotyczne bakterie fermentacji mlekowej LAB. Podstawy Mikrobiologii. 2012, 51, (1), 55 65. 7. Tuszynski T. Immobilizacja drobnoustrojów. Możliwości ich przemysłowego wykorzystania. Laboratorium, 10, 34 39 (2008). 8. Bakuła Z., Stachowiak R., Wiśniewski R., Granicka L., Bielecki J. Immobilizacja komórek znaczenie biomedyczne. POST. MIKROBIOL., 2013, 52, 3, 233 245. 9. Uludag H., de Vos P., Tresco P.A. Technology of mammalian cell encapsulation, Adv. Drug Deliv. 42, 29 64 (2000). 10. Gao H., Yu Y., Cai B., Wang M. Preparation and properties of mi- 11. 12. 13. 14. 13 croencapsulated genetically engineered bacteria cells for oral therapy of uremia. Chin. Sci. Bull. 49, 1117 1121 (2004). Libudzisz Z., Klewicka E. Lactic Acid Bacteria in Probiotics Products. Zakażenia, zesz. 4, 57 62 (2006). Livney Y.D. Milk proteins as vehicles for bioactives. Curr. Opin.Colloid Interface Sci. 15, 73 83 (2010). Jach M., Łoś R., Maj M., Malm A. Probiotyki aspekty funkcjonalne i technologiczne. POST. MIKROBIOL., 2013, 52, 2, 161 170. Tompkins T, Mainville I, Arcand Y. The impact of meals on a probiotic during transit through a model of the human upper gastrointestinal tract. Benef Microbes. 2011;2(4): 295 303. *Pozostałe pozycje dostępne u autorek. REKLAMA www.food-forum.pl