BD CHROMagar Orientation Medium / Columbia CNA Agar (Biplate)



Podobne dokumenty
BD CHROMagar Orientation Medium

BD Mycosel Agar BD Sabouraud Agar with Chloramphenicol and Cycloheximide

BD Yersinia Selective Agar (CIN Agar) BD Aeromonas Yersinia Agar

BD CDC Anaerobe Agar + 5% Sheep Blood

BD BBL UROTUBE 2s BBL UROTUBE BBL UROTUBE M BBL UROTUBE E BBL UROTUBE E. coli BBL UROTUBE SXT

GOTOWE PODŁOŻA HODOWLANE NA PŁYTKACH INSTRUKCJE STOSOWANIA PA wer.: April 2013

XIX. Pałeczki Gram-ujemne część I - ćwiczenia praktyczne

BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood

BD DCLS Agar, Modified / Hektoen Enteric Agar (Biplate)

BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin

BBL Brain Heart Infusion BBL Brain Heart Infusion with 6.5% Sodium Chloride

IV. Streptococcus, Enterococcus ćwiczenia praktyczne

Przedmiot zamówienia -Specyfikacja cenowa

BD Group B Streptococcus Differential Agar (Granada Medium)

Dostawy

BD GC-Lect Agar. PODŁOŻE NA PŁYTKACH GOTOWE DO UŻYCIA INSTRUKCJA UŻYTKOWANIA PA Wersja: Sep 2011

Załącznik Nr 7 do SIWZ

BD Mueller Hinton Chocolate Agar

XIII. Staphylococcus, Micrococcus ćwiczenia praktyczne

VII. Pałeczki Gram-dodatnie: Corynebacterium, Listeria, Erysipelothtix, Lactobacillus - ćwiczenia praktyczne

BBL Trypticase Soy Agar with 5% Sheep Blood (TSA II) oraz BBL MacConkey II Agar - I Plate

SZCZEGÓŁOWY OPIS PRZEDMIOTU ZAMÓWIENIA

BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX ) BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base)

X. Pałeczki Gram-dodatnie. Rodzaje: Corynebacterium, Listeria, Erysipelothtix, Lactobacillus

VIII. Pałeczki Gram-ujemne z rodziny Enterobacteriaceae

GOTOWE PODŁOŻA DIPSLIDE NA PŁYTKACH INSTRUKCJE STOSOWANIA. BD BBL Dermatoslide

II. OZNACZANIE LICZBY BAKTERII Z GRUPY COLI I BAKTERII Z GRUPY COLI TYP FEKALNY METODĄ PŁYTKOWĄ W ŻYWNOŚCI I INNYCH PRODUKTACH wg PN-ISO 4832: 2007

Oznaczenie sprawy AE/ZP-27-49/14 Załącznik Nr 1 Formularz Cenowy

Ćwiczenie 1 Morfologia I fizjologia bakterii

Ćwiczenie 11. Temat: Wskaźniki higieniczne żywności.

GRUPA I Lp Nazwa Jm Ilość Cena jedn netto 1. Columbia agar z 5 %krwią baranią

BBL CHROMagar MRSAII*

III. Fizjologia bakterii i zasady diagnostyki bakteriologicznej

liczba godzin 2 MIKROBIOLOGIA KOSMETOLOGICZNA dla studentów II roku, studiów I st. kierunku KOSMETOLOGIA półpłynne stałe

XXV. Grzyby cz I. Ćwiczenie 1. Wykonanie i obserwacja preparatów mikroskopowych. a. Candida albicans preparat z hodowli barwiony metoda Grama

BD BBL CHROMagar O157

VII. Fizjologia bakterii - ćwiczenia praktyczne

Instrukcje do ćwiczeń oraz zakres materiału realizowanego na wykładach z przedmiotu Mikrobiologia na kierunku chemia kosmetyczna

- podłoża transportowo wzrostowe..

Ćwiczenie 4-5 Mikrobiologiczne kryteria oceny sanitarnej wody

Interpretacja wyników analiz ilości i obecności drobnoustrojów zgodnie z zasadami badań mikrobiologicznych żywności i pasz?

BD BBL CHROMagar MRSA*

BD Oxacillin Screen Agar

UriSelect g 64694

Staphylococcus ćwiczenia praktyczne. a. agarze z dodatkiem 5% odwłóknionej krwi baraniej (AK)

szt 5400 szt 1500 szt 2500 szt 4000 szt 1500 szt 400 szt 2000 szt 600 szt 500 szt 3000 szt 200

3. Szczepy wzorcowe TCS

woda do 1000 ml ph=6,9-7,1. Po sterylizacji dodać nystatynę (końcowe stężenie ok. 50 μg/ml). Agar z wyciągiem glebowym i ekstraktem drożdżowym (YS)

Polska-Łódź: Odczynniki i środki kontrastowe 2015/S

Kontrola pożywek mikrobiologicznych. Sekcja Badań Epidemiologicznych

BBL Middlebrook 7H9 Broth with Glycerol

Hodowlą nazywamy masę drobnoustrojów wyrosłych na podłożu o dowolnej konsystencji.

1276: (ATCC

II. Badanie lekowrażliwości drobnoustrojów ćwiczenia praktyczne. Ćwiczenie 1. Oznaczanie lekowrażliwości metodą dyfuzyjno-krążkową

Protokoły do zajęć praktycznych z mikrobiologii ogólnej i żywności dla studentów kierunku: Dietetyka

Oznaczenie sprawy AE/ZP-27-41/13 Załącznik Nr 1 Formularz Cenowy

Arkusz1. Nazwa artykułu opakowanie ilość opak. 1 Agar Columbia + 5% krew barania 20 płytek* 205

X. Diagnostyka mikrobiologiczna bakterii chorobotwórczych z rodzaju: Corynebacterium, Mycobacterium, Borrelia, Treponema, Neisseria

7/PNP/SW/2015 Załącznik nr 1 do SIWZ

SPRAWOZDANIE Z BADAŃ MIKROBIOLOGICZNYCH Nr 20005/11858/09

BBL Fluid Thioglycollate Medium

CZĘŚĆ 1 TEST KASETKOWY DO WYKRYWANIA KALPROTEKTYNY I LAKTOFERYNY W KALE. 73/PNP/SW/2018 Załącznik nr 1 do SIWZ formularz asortymentowo cenowy

III. Zapotrzebowanie roczne na odczynniki do bakteriologii ogólnej i gruźlicy. A. Gotowe podłoża hodowlane do diagnostyki. mikrobiologicznej.

Columbia Agar + 5% krew barania. Szt Sabouraud Dextrose Agar + chloramfenikol + gentamycyna. Szt. 800

BD BBL CHROMagar Staph aureus

Sekcja I: Instytucja zamawiająca/podmiot zamawiający

ODPOWIEDZI NA PYTANIA

Schaedler agar + 5% krwi 600 szt Podłoże z mannitolem i NaCl do hod. Staphylococcus

BBL Taxo Discs for Presumptive Identification of Gram-Negative Anaerobic Bacilli

RAPORT Z BADAŃ 164/Z/ /D/JOGA. Dostarczony materiał: próbki tworzyw sztucznych. Ilość próbek: 1. Rodzaj próbek: tworzywo

OFERTA MIKROBIOLOGICZNA

BBL CHROMagar MRSA II*

BD BBL GO Slide. GOTOWE PODŁOŻA NA PŁYTKACH ZANURZENIOWYCH INSTRUKCJE STOSOWANIA DA Wersja: wrzesień 2006

WYKRYWANIE OBECNOŚCI BAKTERII Z RODZAJU LISTERIA W ŻYWNOŚCI

== i=jáççäéäêççâ=tev=_êçíü=ïáíü=däóåéêçä==

1. Demonstracja preparatów bakteryjnych barwionych metodą negatywną ukazujących kształty komórek bakteryjnych.

KALKULACJA CENY OFERTY Część I - podłoża i dodatki do podłoży. Jednostka miary. op. = 500g 4. op. = 500g 4. op. = 500g 7

FORMULARZ ASORTYMENTOWO CENOWY załącznik nr 7

Sekcja I: Instytucja zamawiająca/podmiot zamawiający

RAPORT Z BADAŃ 01369/2015/D/AGST. Blirt S.A Gdańsk, ul. Trzy Lipy 3/1.38. Dział DNA-Gdańsk. Nr zlecenia

Szczegółowy opis. Do dostawy wymagany certyfikat jakości lub inny dokument potwierdzający spełnienie wymagań w języku polskim lub angielskim.

1. Wykonanie preparatów bezpośrednich i ich ocena: 1a. Wykonaj własny preparat bezpośredni ze śliny Zinterpretuj i podkreśl to co widzisz:

Załącznik nr 1 do SIWZ Pakiet nr 3 Formularz Szczegółowy Oferty. Oznaczenie postępowania: DA.ZP PAKIET NR 3

KONSPEKTY DO ĆWICZEN Z MIKROBIOLOGII LEKARSKIEJ WYDZIAŁ LEKARSKO-DENTYSTYCZNY II ROK 2019/2020 CZĘŚĆ PRAKTYCZNA

Zapotrzebowanie roczne na odczynniki do bakteriologii ogólnej i gruźlicy. A. Gotowe podłoża hodowlane do diagnostyki mikrobiologicznej.

Pracownia w Kaliszu Kalisz ul. Warszawska 63a tel: fax: zhw.kalisz@wiw.poznan.pl

ZAKRES AKREDYTACJI LABORATORIUM BADAWCZEGO Nr AB 1264

Formularz cenowy. przy pomocy aparatu Vidas Razem X X X X X X

Podstawy różnicowania bakterii i grzybów. Imię i nazwisko:

ZAKRES AKREDYTACJI LABORATORIUM BADAWCZEGO Nr AB 448

Ćwiczenie 1. Mikrobiologia ogólna - Pożywki bakteryjne. Techniki posiewów. Uzyskiwanie czystej hodowli.

Ocena skuteczności procesów sterylizacji za pomocą wskaźników biologicznych r.

ZAKRES AKREDYTACJI LABORATORIUM BADAWCZEGO Nr AB 1029 wydany przez POLSKIE CENTRUM AKREDYTACJI Warszawa ul. Szczotkarska 42

Nazwa i typ aparatu:.. Lp. Opis parametru Kryterium Parametr wymagany

SZCZEGÓŁOWY FORMULARZ OFERTY - Pakiet nr 3

BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood (150 mm) BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood, Square

Od Wykonawców wpłynęły następujące pytania :

KALKULACJA CENY OFERTY Część VII - Testy lateksowe. Jednostka miary. Ilość. zestaw 4

ĆWICZENIE 5 MECHANIZMY PROMUJĄCE WZROST ROŚLIN

RAPORT Z BADAŃ REALIZOWANYCH W RAMACH OCENY STĘŻENIA BIOAEROZOLU ZANIECZYSZCZAJĄCEGO POWIETRZE NA PODSTAWIE LICZEBNOŚCI WYBRANYCH GRUP DROBNOUSTROJÓW

Transkrypt:

PODŁOŻE NA PŁYTKACH GOTOWE DO UŻYCIA INSTRUKCJA UŻYTKOWANIA PA-254489.02 Wersja: czerwiec 2003 BD CHROMagar Orientation Medium / Columbia CNA Agar (Biplate) PRZEZNACZENIE Produkt BD CHROMagar Orientation Medium / Columbia CNA Agar (Biplate) (Podłoże BD CHROMagar Orientation Medium / Agar Columbia CNA [płytka podwójna]) stosuje się do izolowania bakterii często wywołujących zakażenia dróg moczowych. Podczas gdy CHROMagar Orientation Medium jest nieselektywnym podłożem przeznaczonym do izolowania, identyfikacji lub różnicowania patogenów występujących w układzie moczowym, Columbia CNA Agar jest podłożem selektywnym, służącym do izolowania bakterii Gramdodatnich. ZASADY I OBJAŚNIENIE PROCEDURY Metoda mikrobiologiczna. CHROMagar Orientation Medium: Escherichia coli, paciorkowce jelitowe oraz grupy Klebsiella-Enterobacter-Serratia i Proteus-Morganella-Providencia są najczęstszą przyczyną zakażeń układu moczowego (ZUM). 60 70% ZUM jest powodowanych przez E. coli w czystej hodowli lub w połączeniu z paciorkowcami jelitowymi. Staphylococcus saprophyticus i Streptococcus agalactiae spotyka się, choć rzadziej, w zakażeniach układu moczowego u kobiet. Niektóre z tych drobnoustrojów wytwarzają enzymy metabolizujące laktozę, glukozydy lub oba te związki jednocześnie, inne natomiast nie wytwarzają żadnego z tych enzymów. Na przykład E. coli wytwarza enzymy metabolizujące laktozę, lecz nie produkuje ß-glukozydazy. Inne bakterie z rodziny Enterobacteriaceae wytwarzają ß-glukozydazę, lecz nie zawierają enzymów niezbędnych do fermentacji laktozy, jeszcze inne natomiast mogą zawierać oba typy enzymów lub nie dysponować żadnym z nich. Beta-glukozydazy są także wytwarzane przez ziarenkowce Gram-dodatnie, takie jak Enterococcus spp. i Streptococcus agalactiae. Dezaminaza tryptofanu (TDA) jest charakterystycznym enzymem napotykanym w grupie bakterii Proteus-Morganella-Providencia. Podłoże CHROMagar Orientation Medium umożliwia identyfikację E. coli, paciorkowców jelitowych i większości szczepów Staphylococcus saprophyticus oraz S. simulans bezpośrednio na płytce do izolowania; co więcej, możliwe jest wykrywanie grup Klebsiella-Enterobacter- Serratia (=KES) i Proteus-Morganella-Providencia (=PMP) na podstawie zabarwienia kolonii I podłoża. 1-3 Ze względu na to, że podłoże CHROMagar Orientation Medium jest nieselektywne, obserwuje się na nim także wzrost innych patogenów ZUM, lecz do ich identyfikacji konieczne jest już wykonanie testów biochemicznych. Podłoże CHROMagar Orientation Medium zostało opracowane przez A. Rambacha i jest sprzedawane przez firmę BD Diagnostic Systems na podstawie licencji CHROMagar, Paryż, Francja. Źródłem składników odżywczych w podłożu CHROMagar Orientation Medium są specjalnie dobrane peptony. Mieszanka chromogenów składa się z substratów sztucznych (chromogenów), które w wyniku rozkładu przez określone enzymy bakteryjne tworzą związki o różnym zabarwieniu, co umożliwia bezpośrednie różnicowanie pewnych gatunków lub wykrywanie pewnych grup drobnoustrojów przy ograniczeniu testów potwierdzających do minimum. Columbia CNA Agar: Ellner i wsp. opublikowali recepturę agaru z krwią, określanego jako agar Columbia. 4 Pożywka pozwala uzyskać większe kolonie i obfitszy wzrost niż porównywalne podłoża agarowe z krwią; wykorzystuje się ją do produkcji podłoży zawierających krew i preparatów do hodowli selektywnych. Ellner i wsp. stwierdzili, że pożywka zawierająca 10 mg kolistyny i 15 mg kwasu nalidyksowego w przeliczeniu na jeden litr podłoża agarowego Columbia, wzbogacona krwią owczą w stężeniu 5%, umożliwia wzrost gronkowców, PA-254489.02-1 -

paciorkowców hemolizujących i enterokoków, hamując rozwój gatunków z rodzaju Proteus, Klebsiella i Pseudomonas. 4 Agar Columbia jest podłożem wysoce odżywczym. Dzięki obecności substancji o działaniu przeciwbakteryjnym kolistyny i kwasu nalidyksowego pożywka umożliwia selektywną hodowlę drobnoustrojów Gram-dodatnich, zwłaszcza paciorkowców i gronkowców. Dodatek krwi owczej umożliwia wykrywanie reakcji hemolizy. 4,5 ODCZYNNIKI BD CHROMagar Orientation Medium / Columbia CNA Agar (Biplate) Przybliżony skład* podłoży w przeliczeniu na 1 litr wody oczyszczonej Chromopeptony 16,1 g Mieszanka chromogenów 1,3 Agar 15,0 ph 6,9 ± 0,2 Trzustkowy hydrolizat kazeiny 12,0 g Chlorek sodu 5,0 g Hydrolizat pepsynowy tkanki zwierzęcej 5,0 Agar 13,5 Wyciąg z drożdży 3,0 Kolistyna 0,01 Wyciąg wołowy 3,0 Kwas nalidyksowy 0,015 Skrobia kukurydziana 1,0 Krew owcza pozbawiona włóknika 5% ph 7,3 ± 0,2 *Skorygowany lub uzupełniony zgodnie z wymaganiami kryteriów działania. ŚRODKI OSTROŻNOŚCI. Wyłącznie do zastosowań profesjonalnych. Nie należy używać płytek, jeżeli są na nich widoczne oznaki skażenia mikrobiologicznego, odbarwienia, wyschnięcia, pęknięcia lub inne oznaki pogorszenia jakości. Procedury aseptycznej techniki pracy z produktem, zagrożenia biologiczne oraz usuwanie zużytego produktu opisano w dokumencie OGÓLNA INSTRUKCJA DOTYCZĄCA STOSOWANIA. WARUNKI I OKRES PRZECHOWYWANIA Dostarczone płytki należy przechowywać w zaciemnionym pomieszczeniu, w temperaturze od 2 do 8 C, w oryginalnych opakowaniach w formie rękawa, aż do momentu bezpośrednio poprzedzającego użycie. Nie zamrażać i nie przegrzewać. Płytki należy wykorzystać do posiewu bakterii przed upływem daty ważności (zobacz etykietę na opakowaniu) i inkubować zgodnie z zalecanymi czasami inkubacji. Płytek z otwartego opakowania zawierającego 10 sztuk można używać w ciągu tygodnia, pod warunkiem przechowywania w czystym miejscu w temperaturze od 2 do 8 C. Przed inkubacją oraz podczas niej należy ograniczyć do minimum ekspozycję na światło, gdyż może ono zniszczyć układ chromogenów zawartych w podłożu CHROMagar Orientation Medium. KONTROLA JAKOŚCI PRZEZ UŻYTKOWNIKA Reprezentatywne próbki podłoża zaszczepia się hodowlami wymienionych niżej szczepów (szczegółowe informacje patrz dokument OGÓLNA INSTRUKCJA DOTYCZĄCA STOSOWANIA). Płytki inkubuje się w warunkach tlenowych, w temperaturze 35 37 C, przez okres nie krótszy niż 20 24 h. PA-254489.02-2 -

Badane szczepy CHROMagar Orientation Medium Columbia CNA Agar Enterococcus faecalis ATCC 29212 kolonie małe, barwy od niebieskozielonej do niebieskiej Streptococcus agalactiae ATCC 12386 Staphylococcus aureus ATCC 25923 Escherichia coli ATCC 25922 Klebsiella pneumoniae ATCC 27736 Proteus vulgaris ATCC 8427 Bez posiewu Wzrost dość dobry lub dobry; kolonie małe, niebieskie kolonie barwy od białej do żółtawej Wzrost od dość dobrego do bardzo dobrego; kolonie średnie, przezroczyste, barwy różowej kolonie średniej wielkości, ciemnoniebieskie, z niebieską obwódką lub bez niej Wzrost od dość dobrego do bardzo dobrego; kolonie niebieskozielone; otaczające podłoże barwy od bursztynowej do brązowej Od bezbarwnego do jasnobeżowego, przejrzyste kolonie szare; brak hemolizy kolonie barwy od białej do szarej; hemoliza typu beta kolonie białawe, hemoliza typu beta Całkowite zahamowanie wzrostu Częściowe lub całkowite zahamowanie wzrostu Częściowe lub całkowite zahamowanie wzrostu Czerwone (kolor krwi) PROCEDURA Dostarczane materiały BD CHROMagar Orientation Medium / Columbia CNA Agar (płytki podwójne Stacker o średnicy 90 mm). Sprawdzane pod względem obecności drobnoustrojów. Materiały niedostarczane Pomocnicze pożywki hodowlane, odczynniki i wyposażenie laboratoryjne zgodnie z wymaganiami. Typy próbek Podłoże BD CHROMagar Orientation Medium / Columbia CNA Agar służy wyłącznie do izolowania, analizy ilościowej i różnicowania bakterii obecnych w moczu. Można stosować mocz ze strumienia środkowego lub z cewnika bądź mocz pobrany drogą nakłucia nadłonowego (patrz także CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŚCIOWA I OGRANICZENIA PROCEDURY). Podczas pobierania próbek moczu należy przestrzegać zasad techniki aseptycznej. Mocz należy posiać bezpośrednio na podłożu nie później niż 2 godziny po pobraniu bądź przechowywać w lodówce (nie dłużej niż przez 24 godziny), aby uniknąć nadmiernego wzrostu czynników zakaźnych i zanieczyszczających przed wykonaniem posiewu. 6-8 Procedura testowa Pobrać próbkę nierozcieńczonego, dobrze wymieszanego moczu za pomocą ezy kalibrowanej (0,01 lub 0,001 ml). Do zaszczepiania podłoży na płytkach podwójnych zalecane są ezy skalibrowane do objętości 0,001 ml (1 µl). Należy dopilnować, by na ezie znajdowała się właściwa ilość próbki. Posiać najpierw próbkę na niewielkim obszarze powierzchni podłoża CHROMagar Orientation Medium; następnie zaszczepić pozostały obszar tej pożywki. W następnej kolejności zaczerpnąć nową próbkę moczu i postąpić w ten sam sposób z podłożem Columbia CNA Agar. Jeżeli stosuje się ezy zawierające 10 µl próbki, zaleca się dziesięciokrotne rozcieńczenie próbki moczu jałowym roztworem soli fizjologicznej. Zaszczepioną płytkę inkubuje się w położeniu odwróconym, w temperaturze 35 37 C, w warunkach tlenowych, przez okres 20 24 h. Nie zaleca się inkubowania omawianych płytek podwójnych w atmosferze wzbogaconej w dwutlenek węgla. Podczas inkubacji należy ograniczyć do minimum ekspozycję na światło, gdyż może ono zniszczyć układ chromogenów zawartych w podłożu CHROMagar Orientation Medium. Po wystąpieniu zabarwienia kolonii ekspozycja na światło jest dopuszczalna. PA-254489.02-3 -

Aby uzyskać izolowane kolonie o typowym zabarwieniu i kształcie należy obowiązkowo korzystać z kalibrowanych ez lub innych powszechnie stosowanych technik wykonywania posiewów z próbek moczu. Wyniki Po inkubacji na podłożach powinny pojawić się pojedyncze kolonie w miejscach posiewu odpowiedniego rozcieńczonego inokulum. Schemat 1 zawiera informacje na temat identyfikacji i różnicowania drobnoustrojów; należy je także traktować jako wytyczne dotyczące wykonywania na podłożu CHROMagar Orientation Medium dodatkowych reakcji potwierdzających. Wyniki można potwierdzić, wykonując barwienie metodą Grama lub badanie mikroskopowe. Wzrost na podłożu Columbia CNA Agar pojawi się wówczas, gdy w próbce będą obecne bakterie Gram-dodatnie. Szczegółowe informacje oraz sposób interpretacji wzrostu na tym podłożu znajdują się w odpowiednich pozycjach piśmiennictwa. 5,9 Testy potwierdzające W przypadku podłoża CHROMagar Orientation Medium przeprowadzić testy potwierdzające zgodnie z wymogami (Schemat 1). Nie nanosić żadnych odczynników wykrywających, takich jak odczynnik indolowy DMACA bądź inne odczynniki, bezpośrednio na kolonie na omawianym podłożu. Zamiast tego należy wykonywać testy na bibule filtracyjnej przy użyciu materiału pobranego z odpowiednich kolonii. W przypadku kolonii E. coli nie używać odczynnika indolowego Kovacsa, gdyż kolor kolonii może przeszkadzać w dostrzeżeniu czerwonego zabarwienia wskazującego na dodatni wynik testu indolowego; zamiast tego należy użyć odczynnika indolowego z aldehydem dimetyloaminocynamonowym (DMACA). Jeżeli stosuje się inne testy potwierdzające lub systemy identyfikacji biochemicznej, należy przestrzegać dołączonych do nich instrukcji. Obliczanie i interpretacja wyników 6-9 Obliczyć ilość kolonii (cfu) na każdym z podłoży. W przypadku użycia ezy zawierającej 0,001 ml próbki każda kolonia odpowiada stężeniu 1000 CFU/mL moczu. 7 Mocz ze środkowego strumienia i z cewnika: Według aktualnych wytycznych, pojedynczy wynik oznaczenia 10 5 cfu/ml wskazuje na występowanie zakażenia, wynik <10 5 cfu/ml wskazuje na skażenie cewki moczowej lub pochwy, a wynik z zakresu 10 4 10 5 CFU/mL wymaga ponownej oceny w oparciu o informacje kliniczne. Bakterie zanieczyszczające zwykle występują w niewielkich ilościach i wykazują zróżnicowaną morfologię kolonii. Mocz pobierany drogą nakłucia nadłonowego: Ze względu na to, że u osób bez zakażenia zawartość pęcherza moczowego jest sterylna, każda wykryta cfu oznacza zakażenie. Na opisywanym podłożu patogeny układu moczowego występują zwykle w dużych ilościach, wykazując jednolitą morfologię i zabarwienie kolonii. CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŚCIOWA I OGRANICZENIA PROCEDURY Podłoże BD CHROMagar Orientation Medium / Columbia CNA Agar (Biplate) stosuje się do izolowania, identyfikacji lub orientacyjnej identyfikacji bakterii często wywołujących zakażenia dróg moczowych. CHROMagar Orientation Medium jest podłożem chromogennym przeznaczonym do bezpośredniej identyfikacji, różnicowania i analizy ilościowej patogenów występujących często w układzie moczowym. Opisywane podłoże jest przeznaczone do izolowania wielu gatunków bakterii wykazujących wzrost w warunkach tlenowych, takich jak Enterobacteriaceae, Pseudomonas i inne niefermentujące pałeczki Gram-ujemne, paciorkowce jelitowe, gronkowce I wiele innych drobnoustrojów występujących w próbkach moczu. 1-3 Umożliwia bezpośrednią identyfikację Escherichia coli na podstawie zabarwienia kolonii oraz potwierdzającego testu indolowego, a także bezpośrednią identyfikację bakterii Enterococcus i Streptococcus agalactiae na podstawie zabarwienia kolonii oraz potwierdzającego testu PYR bądź serologicznego testu aglutynacji w celu określenia przynależności do grupy według Lancefield. Inne drobnoustroje można zidentyfikować na podstawie kilku testów potwierdzających albo mogą one wymagać pełnej identyfikacji biochemicznej, w zależności PA-254489.02-4 -

od gatunku. Jako że większość częstych zakażeń układu moczowego jest spowodowana przez E. coli i/lub paciorkowce jelitowe, zastosowanie opisywanego podłoża znacznie zmniejsza pracochłonność i czasochłonność posiewów i odczytu wskazań systemów identyfikacji, które są konieczne w przypadku stosowania do izolacji tradycyjnych podłoży. Columbia CNA Agar jest standardową pożywką służącą do izolowania i hodowli wielu gatunków tlenowych drobnoustrojów Gram-dodatnich, np. paciorkowców, gronkowców, maczugowców, pałeczek z rodzaju Listeria i innych. 5,7,9 Wyniki badań skuteczności 2,10 Przeprowadzono dwa niezależne badania oceniające skuteczność podłoża CHROMagar Orientation Medium. W obu badaniach podłoże chromogenne umożliwiło wykrycie większej liczby patogenów niż podłoża tradycyjne, zastosowane w celu porównania. Szczegółowe informacje na temat pierwszego z badań zostały opublikowane, natomiast wyniki pierwszego i drugiego badania udostępniono w dokumencie Instrukcja dotycząca stosowania, odnoszącym się do podłoża BD CHROMagar Orientation Medium (nr kat. 254102). 2 Ograniczenia procedury CHROMagar Orientation Medium: Kolonie o naturalnym zabarwieniu, które nie reagują z substratami chromogennymi, należy dalej różnicować za pomocą odpowiednich testów biochemicznych lub serologicznych. Należy zapoznać się z piśmiennictwem. 9,11 Pałeczki Gram-ujemne nienależące do grupy KES mogą tworzyć duże, niebieskie kolonie, w związku z czym ich identyfikacja także wymaga wykonania dodatkowych testów biochemicznych. 11 W bardzo rzadkich przypadkach w moczu może występować Listeria monocytogenes lub inne gatunki z rodzaju Listeria (np. po poronieniu spowodowanym przez te drobnoustroje). Listeria tworzy małe, niebieskie lub niebieskozielone kolonie, które dają ujemny wynik w teście PYR, przypominając Streptococcus agalactiae (patrz Schemat 1). W związku z tym może być wskazane wykonanie barwienia metodą Grama wszystkich szczepów, które na opisywanym podłożu tworzą małe, niebieskie lub niebieskozielone kolonie, dające ujemny wynik w teście PYR. Obecność pałeczek Gram-dodatnich może wskazywać na obecność gatunków z rodzaju Listeria. Potwierdzenie obecności tych drobnoustrojów wymaga dodatkowych testów biochemicznych. W bardzo rzadkich przypadkach obserwuje się różowe kolonie szczepów Aeromonas hydrophila. Drobnoustroje te można odróżnić od E. coli na podstawie reakcji oksydazowej (Aeromonas = dodatnia, E. coli = ujemna). Sporadycznie różowe zabarwienie kolonii mogą przybierać gronkowce koagulazoujemne inne niż S. saprophyticus, np. S. simulans, S. xylosus i S. intermedius. W związku z tym w przypadku tego typu izolatów konieczne jest wykonanie dodatkowych testów (patrz Schemat 1). Na podłożu CHROMagar Orientation Medium nie obserwuje się wzrostu drobnoustrojów o wysokich wymaganiach odżywczych, takich jak Neisseria, Haemophilus i Mycoplasma spp. Nie zatwierdzono zastosowania tego podłoża do próbek pochodzenia klinicznego i nieklinicznego innych niż próbki moczu. Przed pierwszym użyciem podłoża CHROMagar Orientation Medium zaleca się sprawdzenie typowego wyglądu kolonii przy użyciu określonych szczepów, np. szczepów wymienionych w części KONTROLA JAKOŚCI PRZEZ UŻYTKOWNIKA. Columbia CNA Agar: Na opisywanej pożywce może wystąpić wzrost bakterii wykazujących oporność na składniki powodujące wybiórczość podłoża. Pożywka nie hamuje wzrostu grzybów, w tym Candida spp. Mimo że bakterie tlenowe tworzące formy przetrwalnikowe, np. z rodzaju Bacillus, należą do organizmów Gram-dodatnich, na podłożu Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood może wystąpić hamowanie ich wzrostu. Wprawdzie pewne testy diagnostyczne można wykonywać bezpośrednio na opisywanym podłożu, jednak w celu przeprowadzenia pełnej identyfikacji konieczne jest wykonanie badania biochemicznego oraz, jeśli jest to wskazane, badania immunologicznego z użyciem czystych hodowli. Ponieważ podłoże agarowe Columbia charakteryzuje się względnie wysoką zawartością węglowodanów, paciorkowce beta-hemolizujące mogą powodować reakcję hemolityczną o zielonkawym zabarwieniu, niekiedy mylnie interpretowaną jako hemoliza typu alfa. PA-254489.02-5 -

PIŚMIENNICTWO 1. Merlino, J., S. Siarakas, G. J. Robertson, G. R. Funnell, T. Gottlieb, and R. Bradbury. 1996. Evaluation of CHROMagar Orientation for differentiation and presumptive identification of gram-negative bacilli and Enterococcus species. J. Clin. Microbiol. 34: 1788-1793. 2. Hengstler, K.A., R. Hammann, and A.-M. Fahr. 1997. Evaluation of BBL CHROMagar Orientation medium for detection and presumptive identification of urinary tract pathogens. J. Clin. Microbiol. 35: 2773-2777. 3. Samra, Z., M. Heifetz, J. Talmor, E. Bain, and J. Bahar. 1998. Evaluation of use of a new chromogenic agar in detection of urinary tract pathogens. J. Clin. Microbiol. 36: 990-994. 4. Ellner, P.D., C.J. Stoessel, E. Drakeford, and F. Vasi. 1966. A new culture medium for medical bacteriology. Am. J. Clin. Pathol. 45:502-504. 5. MacFaddin, J. F. 1985. Media for isolation-cultivation-identification-maintenance of medical bacteria, vol. 1, p. 269-275.Williams & Wilkins, Baltimore, MD. 6. Barry, A.L., P.B. Smith, and M. Turck. 1975. Cumitech 2, Laboratory diagnosis of urinary tract infections. Coordinating ed., T.L. Gavan. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Forbes, B.A., and P.A. Granato. Processing specimens for bacteria. 1995. In: Murray, P. R., E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 8. Clarridge, J.E., M.T. Pezzlo, and K.L. Vosti. 1987. Cumitech 2A, Laboratory diagnosis of urinary tract infections. Coordinating ed., A.S. Weissfeld. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 9. Isenberg, H. D. (ed.). 1992. Interpretation of aerobic bacterial growth on primary culture media, Clinical microbiology procedures handbook, vol.1, p. 1.6.1-1.6.7. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 10. Data on file. BD Diagnostic Systems Europe, Heidelberg, Germany. 11. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). 2003. Manual of clinical microbiology, 8 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. PAKOWANIE / DOSTĘPNOŚĆ BD CHROMagar Orientation Medium / Columbia CNA Agar (Biplate) Nr kat. 254489 Gotowe podłoża na płytkach hodowlanych, po 20 sztuk DODATKOWE INFORMACJE W celu uzyskania dodatkowych informacji należy skontaktować się z lokalnym przedstawicielem firmy BD. BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 12 D-69126 Heidelberg/Germany Tel.: +49-62 21-30 50 Faks: +49-62 21-30 52 16 Reception_Germany@europe.bd.com BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA 11 rue Aristide Bergès 38800 Le Pont de Claix/France Tel.: +33-476 68 3636 Faks: +33-476 68 3292 http://www.bd.com BD, BD logo and Stacker are trademarks of Becton, Dickinson and Company CHROMagar is a trademark of Dr. A. Rambach ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection 2003 Becton, Dickinson and Company PA-254489.02-6 -

Schemat 1: Wytyczne dotyczące interpretacji wyglądu kolonii, wykonywania testów potwierdzających oraz różnicowania lub identyfikacji na podstawie otrzymanych wyników drobnoustrojów rosnących na podłożu BD CHROMagar Orientation Medium Małe kolonie niebieskozielone lub niebieskie: Test PYR b czerwony (+) Enterococcus spp. bezbarwny (-) a Ziarniaki: Str. agalactiae Pałeczki: Gatunki z rodzaju Listeria : Duże, niebieskie kolonie: Grupa Klebsiella-Enterobacter-Serratia (KES) Zidentyfikować gatunki za pomocą systemu testów biochemicznych Duże, różowe, przezroczyste kolonie: Test indolowy DMACA c zielony (+) od bezbarwnego do czerwonego (-) E. Coli d Zidentyfikować gatunki za pomocą systemu testów biochemicznych Kolonie małe, nieprzejrzyste, różowe: Krążek z 5 µg nowobiocyny e oporne wrażliwe Staphylococcus saprophyticus f, S. xylosus f S. simulans f S. intermedius g Zidentyfikować gatunki za pomocą systemu testów biochemicznych Kolonie od bezbarwnych do beżowych na podłożu barwy od bursztynowej do brązowej h : Grupa Proteus-Morganella-Providencia (PMP) Test indolowy DMACA c zielony (+) od bezbarwnego do różowego (-) Proteus vulgaris H 2 S + i Proteus mirabilis (ODC +) j Providencia spp. H 2 S - Proteus penneri (ODC -) Morganella spp. H 2 S - a Zalecane barwienie metodą Grama. b Test z piroglutaminianem na arylamidazę pirolidonylu. W celu odróżnienia Enterococcus spp. od Streptococcus agalactiae zamiast testu PYR można zastosować testy serologiczne w celu określenia przynależności do grupy wg Lancefield. c DMACA= Odczynnik z aldehydem dimetyloaminocynamonowym do wykrywania zdolności drobnoustrojów do wytwarzania indolu. Nanieść odczynnik na bibułę filtracyjną i rozetrzeć jedną kolonię na obszarze bibuły filtracyjnej, gdzie znajduje się odczynnik. Odczekać 10 20 s. Zabarwienie zielone wskazuje na wytwarzanie indolu (czerwone lub bezbarwne = wynik ujemny). Nie używać odczynnika indolowego Kovacsa do testowania różowo zabarwionych kolonii! PA-254489.02-7 -

d Test oksydazowy można wykonywać ze wszystkimi indolododatnimi, dużymi koloniami różowej barwy w celu wykluczenia obecności bakterii z rodzaju Aeromonas (oksydazododatnie). e Należy wykonać posiew wyizolowanego szczepu na płytce z podłożem Mueller Hinton II Agar. Na zaszczepionej płytce należy umieścić nowobiocynę (krążek 5 µg). Płytki inkubuje się przez okres 18 24 h w temperaturze 35 37 C, a następnie mierzy się strefę zahamowania wzrostu (oporne: 16 mm, wrażliwe: > 16 mm). f Znany jako patogen ludzki, można także wyizolować go z moczu. g Nie jest znany przypadek wyizolowania go z moczu u człowieka. h Zabarwienie od bursztynowego do brązowego powstaje na skutek działania dezaminazy tryptofanu (TDA), którą wytwarzają wszystkie drobnoustroje z grupy PMP. Około 50% szczepów P. vulgaris wytwarza kolonie niebieskie na podłożu barwy od bursztynowej do brązowej. i Tradycyjny test na siarkowodór. j Tradycyjny test na dekarboksylazę ornityny. PA-254489.02-8 -