BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin

Transkrypt

1 GOTOWE PODŁOŻA HODOWLANE NA PŁYTKACH INSTRUKCJE STOSOWANIA PA wer.: Sep 2011 BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin PRZEZNACZENIE BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin i BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin są selektywnymi podłożami do izolowania Haemophilus influenzae z próbek pochodzenia klinicznego. ZASADY I OBJAŚNIENIE PROCEDURY Metoda mikrobiologiczna. Wprawdzie rodzaj Haemophilus należy do fizjologicznej flory bakteryjnej górnych dróg oddechowych u człowieka, jednak pewne serotypy H. influenzae, takie jak b i f (a o wiele rzadziej również c), są ważną przyczyną zapalenia opon mózgowych, sepsy, zapalenia nagłośni oraz wielu innych poważnych zakażeń. Do czasu wprowadzenia szczepień w wielu krajach, H. influenzae był jedną z trzech najczęstszych przyczyn bakteryjnego zapalenia opon mózgowych na świecie. 1 Na zwykłym podłożu agarowym z krwią owczą nie obserwuje się wzrostu H. influenzae i niektórych innych gatunków Haemophilus, gdyż wymagają one czynnika X (= hemu) oraz V (=NAD). Podłoże BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin zawiera hemoglobinę, która dostarcza hemu, oraz BD IsoVitaleX, który dostarcza NAD (=dinukleotyd nikotynoamidoadeninowy) oraz innych witamin. Podstawa GC II Chocolate Agar dostarcza ogólnych składników odżywczych. W podłożu BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin, ogólnych składników odżywczych dostarcza Brain Heart Infusion Agar, a krew końska jest źródłem hemu (czynnik X) i NAD (czynnik V), które promują wzrost H. influenzae. Wzrost tego drobnoustroju można dodatkowo wspomóc, umieszczając na podłożu po jego zaszczepieniu paski nasączone czynnikiem V (np. paski nasączone czynnikiem V BD Taxo). Do obu podłoży dodaje się bacytracynę, która hamuje większość flory fizjologicznej, podczas gdy H. influenzae jest oporny na ten antybiotyk. 1-4 Podłoża BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin i BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin są używane do izolowania Haemophilus influenzae z próbek pochodzenia klinicznego zawierających florę fizjologiczną. ODCZYNNIKI Skład* w przeliczeniu na jeden litr wody oczyszczonej BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Bacitracin Blood and Bacitracin Trzustkowy hydrolizat kazeiny 7,5 g Wyciąg z mózgów i serc 8,0 g Wybrany pepton mięsny 7,5 Hydrolizat pepsynowy tkanki 5,0 zwierzęcej Skrobia kukurydziana 1,0 Trzustkowy hydrolizat kazeiny 16,0 Wodorofosforan potasu 4,0 Chlorek sodu 5,0 Dwuwodorofosforan potasu 1,0 Glukoza 2,0 Chlorek sodu 5,0 Wodorofosforan sodu 2,5 Agar 14,0 Agar 13,5 Bacytracyna IU Bacytracyna IU Hemoglobina 10,0 Krew końska pozbawiona włóknika 50,0 ml IsoVitaleX 10,0 ml ph 7,4 ± 0,2 ph 7,2 ± 0,2 PA

2 *Skorygowany i (lub) uzupełniony zgodnie z wymaganiami mającymi na celu spełnienie kryteriów wydajności. Dodatek BD IsoVitalex Enrichment, dołączony do podłoża BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin, zawiera następujące czynniki wzrostu (skład* w przeliczeniu na jeden litr wody oczyszczonej): Witamina B 12 0,01 g L-glutamina 10,0 Adenina 1,0 Chlorowodorek guaniny 0,03 Kwas p-aminobenzoesowy 0,013 Dinukleotyd nikotynoamidoadeninowy (NAD) 0,25 Pirofosforan tiaminy 0,1 Azotan (V) żelaza (III) 0,02 Chlorowodorek tiaminy 0,003 Chlorowodorek cysteiny 25,9 L-cystyna 1,1 Glukoza 100,0 *Skorygowany i (lub) uzupełniony zgodnie z wymaganiami mającymi na celu spełnienie kryteriów wydajności. ŚRODKI OSTROŻNOŚCI. Wyłącznie do zastosowań profesjonalnych. Nie należy używać płytek, jeżeli są na nich widoczne oznaki skażenia mikrobiologicznego, odbarwienia, wyschnięcia, pęknięcia lub inne zjawiska wskazujące na pogorszenie jakości. Procedury aseptycznej techniki pracy z produktem, zagrożenia biologiczne oraz usuwanie zużytego produktu opisano w dokumencie OGÓLNE INSTRUKCJE DOTYCZĄCE STOSOWANIA. PRZECHOWYWANIE I DOPUSZCZALNY OKRES PRZECHOWYWANIA Po otrzymaniu, płytki należy przechowywać w ciemnym miejscu w temperaturze od 2 do 8 C, w ich oryginalnym opakowaniu izolującym do chwili użycia. Unikać zamrażania i przegrzewania. Posiewu na płytki można dokonywać aż do daty ważności (patrz etykieta na opakowaniu) i inkubować w zalecanych czasach inkubacji. Płytek z otwartych stosów zawierających po 10 płytek można używać przez okres jednego tygodnia, przechowując w czystym miejscu w temperaturze od 2 do 8 C. KONTROLA JAKOŚCI PRZEZ UŻYTKOWNIKA Na płytki posiewa się próbki reprezentatywne niżej wymienionych szczepów (szczegółowe informacje zobacz dokument OGÓLNE INSTRUKCJE DOTYCZĄCE STOSOWANIA). Płytki inkubuje się przez godzin w atmosferze tlenowej wzbogaconej dwutlenkiem węgla. Szczepy bakteryjne BD Chocolate Agar with BD Brain Heart Infusion Agar with Haemophilus influenzae ATCC Staphylococcus aureus ATCC Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Streptococcus pyogenes ATCC Streptococcus mitis ATCC 6249 Bez posiewu IsoVitaleX and Bacitracin Wzrost akceptowalny do dobrego; kolonie małe, przejrzyste do szarych Czekoladowobrązowe, przejrzyste PA % Horse Blood and Bacitracin Wzrost zadowalający, kolonie przejrzyste, małe; dobry lub bardzo dobry wzrost wokół umieszczonych na podłożu pasków nasączonych czynnikiem V Czerwone (kolor krwi)

3 PROCEDURA Dostarczane materiały BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin lub BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin (oba dostarczane na płytkach Stacker o śr. 90 mm). Sprawdzane pod kątem obecności mikroorganizmów. Materiały niedostarczane Pomocnicze pożywki hodowlane, odczynniki i wyposażenie laboratoryjne zgodnie z wymaganiami; paski nasączone czynnikiem V BD Taxo (tylko do BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin). Typy próbek Opisywane podłoża są przeznaczone do izolowania Haemophilus influenzae z materiałów pochodzących z układu oddechowego, np. wymazów z gardła, lub innych próbek zawierających florę fizjologiczną, np. wymazów ze spojówek (zobacz także CHARAKTERYSTYKA WYNIKÓW I OGRANICZENIA DOTYCZĄCE PROCEDURY). Pobieranie i transport próbek Haemophilus influenzae jest wrażliwa na niekorzystne warunki środowiska. W związku z tym do wszystkich próbek należy stosować odpowiednie podłoża transportowe. Próbki należy jak najszybciej przesłać do laboratorium, najpóźniej w ciągu 24 godzin, nawet w przypadku stosowania podłoża transportowego. Optymalna temperatura transportu wynosi C. Nie należy zamrażać próbek! Procedura testowa Wykonać posiew próbki możliwie jak najszybciej po dostarczeniu materiału do laboratorium. Płytka do posiewu służy przede wszystkim do izolowania czystych kultur z próbek zawierających florę mieszaną. Ewentualnie, jeżeli materiał jest hodowany bezpośrednio z wymazówki, można przetoczyć wymazówkę po niewielkiej powierzchni na krawędzi płytki, a następnie wykonać posiew poprzez rozprowadzenie materiału po podłożu. W celu poprawienia wzrostu, po wykonaniu posiewu na podłożu BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin można umieścić pasek nasączony czynnikiem V. Płytki inkubuje się przez godzin w środowisku wilgotnym. Wprawdzie wzrost H. influenzae nie jest uzależniony od podwyższonego stężenia CO 2, jednak inkubacja w pojemniku BD GasPak wyposażonym w pakiet do produkcji gazu BD GasPak może ułatwić wzrost tego drobnoustroju. W celu wyizolowania wszystkich drobnoustrojów występujących w próbce, należy także wykonać posiew na podłoże BD Chocolate Agar (GC Agar with IsoVitaleX) lub BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base). Wyniki BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin Po zakończeniu 48-godzinnego okresu inkubacji należy sprawdzić, czy na płytkach występują przejrzyste do szarych kolonie o średnicy poniżej 2 mm. Na podłożu tym czasem obserwuje się także wzrost gatunków Haemophilus innych niż H. influenzae. BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin Po zakończeniu 48-godzinnego okresu inkubacji należy sprawdzić, czy na płytkach występują małe, przejrzyste kolonie. Wzrost H. influenzae jest nasilony wokół pasków nasączonych czynnikiem V. Może także występować wzrost innych gatunków Haemophilus bez suplementacji czynnika V. H. influenzae nie ma właściwości hemolizujących, H. haemolyticus zazwyczaj ma zdolność hemolizy beta. Do ostatecznej identyfikacji szczepów wyizolowanych z tych podłoży konieczne jest wykonanie dodatkowych testów biochemicznych lub serologicznych. PA

4 CHARAKTERYSTYKA WYNIKÓW I OGRANICZENIA DOTYCZĄCE PROCEDURY Podłoża te służą do izolowania Haemophilus influenzae z próbek pochodzenia klinicznego pobranych z miejsc anatomicznych, w których występuje flora fizjologiczna. Podłoży tych nie należy używać do pierwszej izolacji bakterii z rodzaju Haemophilus z płynu mózgowordzeniowego lub próbek pochodzących z innych pierwotnie sterylnych miejsc anatomicznych. Do tego typu próbek należy stosować podłoża nieselektywne, takie jak BD Chocolate Agar (GC Agar with IsoVitaleX) lub BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base). Choć podłoża BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin i BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin mają charakter selektywny, to jednak czasem obserwuje się na nich wzrost drobnoustrojów innych niż Haemophilus influenzae. Podłoża te hamują wzrost większości gatunków bakterii należących do flory fizjologicznej jamy ustnej, lecz nie powodują całkowitego zahamowania wzrostu występujących w jamie ustnej Neisseria sp., Actinobacillus actinomycetemcomitans, Eikenella corrodens oraz niektórych gronkowców. W celu potwierdzenia izolacji H. influenzae lub innych gatunków Haemophilus konieczne jest wykonanie barwienia metodą Grama oraz inne testów biochemicznych i serologicznych. Niektóre szczepy i gatunki Haemophilus, w tym H. influenzae var. aegyptius (=H. aegyptius) i H. ducreyi ulegają zahamowaniu przez bacytracynę, w związku z czym na tych podłożach nie obserwuje się ich wzrostu. W celu pełnego wyizolowania wszystkich drobnoustrojów występujących w próbce, należy wykonać posiew także na podłoże nieselektywne, takie jak BD Chocolate Agar (GC Agar with IsoVitaleX) lub BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base). Ze względu na to, że gatunki z rodzaju Haemophilus należą do fizjologicznej flory bakteryjnej dróg oddechowych, ich obecność w próbkach z górnych dróg oddechowych, takich jak wymazy z gardła lub plwocina, niekoniecznie musi oznaczać, że drobnoustroje te są przyczyną zakażenia. Do wykazania, że wyizolowane szczepy należą do podtypów serologicznych, które często powodują zakażenia, konieczne jest wykonanie testów serologicznych. 1,2 PIŚMIENNICTWO 1. Kilian, M Haemophilus. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 2. Mannheim, W. et al.: Pasteurellaceae. In: Mikrobiologische Diagnostik (ed. F. Burkhardt). Thieme Verlag, Stuttgart Vastine, D.W., C.R. Dawson, I. Hoshiwara, C. Yonega, T. Daghfous, and M. Messadi Comparison of media for the isolation of Haemophilus species from cases of seasonal conjunctivitis associated with severe endemic trachoma. Appl. Microbiol. 28: Chapin, K., and G.V. Doern Selective media for recovery of Haemophilus influenzae from species contaminated with upper respiratory tract microbial flora. J. Clin. Microbiol. 17: PAKOWANIE / DOSTĘPNOŚĆ BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin Nr katalogowy Gotowe podłoża na płytkach hodowlanych, cpu 20 BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin Nr katalogowy Gotowe podłoża na płytkach hodowlanych, cpu 20 DODATKOWE INFORMACJE W celu uzyskania dodatkowych informacji należy skontaktować się z lokalnym przedstawicielem firmy BD. PA

5 Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company BD PA