BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX ) BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base)

Transkrypt

1 GOTOWE PODŁOŻA HODOWLANE NA PŁYTKACH INSTRUKCJE STOSOWANIA PA wer.: Sep 2011 BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX ) PRZEZNACZENIE BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) i są nieselektywnymi podłożami do izolacji i hodowli drobnoustrojów o wysokich wymaganiach odżywczych, zwłaszcza z rodzajów Neisseria i Haemophilus, z różnych próbek pochodzenia klinicznego. ZASADY I OBJAŚNIENIE PROCEDURY Metoda mikrobiologiczna. Carpenter i Morton opisali ulepszone podłoże do izolowania gonokoków w ciągu 24 godz. 1 Skuteczność tego podłoża, zawierającego GC Agar z dodatkiem hemoglobiny i wyciągu drożdżowego, została wykazana w badaniu dwunastu podłoży do izolowania tego drobnoustroju. 2 W późniejszym czasie podłoże to zostało kilkakrotnie udoskonalone. 3-5 W podłożu BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) składniki odżywcze pochodzą z bazy GC II, która zawiera kazeinę i wybrane peptony mięsne, będące źródłem azotu, fosforany w celu utrzymania ph oraz skrobię kukurydzianą neutralizującą toksyczne kwasy tłuszczowe, jakie mogą znajdować się w agarze. Hemoglobina dostarcza czynnika X (heminy). Dodatek wzbogacający BD IsoVitaleX jest źródłem czynnika V (dinukleotydu nikotynoamidoadeninowego, NAD), niezbędnego do wzrostu rodzaju Haemophilus, a także witamin, aminokwasów, koenzymów, glukozy, jonu żelaza (III) oraz innych czynników, które poprawiają wzrost patogennych bakterii z rodzaju Neisseria i innych drobnoustrojów o wysokich wymaganiach odżywczych. Podłoże zawiera także pirydoksal i specyficzne czynniki wzrostu, poprawiające wzrost bakterii Gram-dodatnich, a pirydoksal promuje wzrost rodzajów Granulicatella i Abiotrophia (=paciorkowce o zmiennych wymaganiach odżywczych). 6-9 Alternatywnym podłożem do izolowania drobnoustrojów o wysokich wymaganiach odżywczych z próbek pochodzenia klinicznego jest Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base). 7 BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) zawiera pepton Proteose, hydrolizat wątrobowy oraz wyciąg drożdżowy jako źródła azotu i witamin. Chlorek sodu utrzymuje stabilność osmotyczną. Podgrzana (denaturowana ciepłem) krew końska dostarcza zarówno czynnika X (hemu), jak i dzięki temu, że nie zawiera NADazy czynnika V (dinukleotydu nikotynoamidoadeninowego, NAD), niezbędnego do wzrostu Haemophilus influenzae, jak również dodatkowych czynników odżywczych. ODCZYNNIKI Skład* w przeliczeniu na jeden litr wody oczyszczonej BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) Trzustkowy hydrolizat kazeiny 7,5 g Pepton Proteose nr 3 15,0 g Wybrany pepton mięsny 7,5 Hydrolizat wątrobowy 2,5 Skrobia kukurydziana 1,0 Wyciąg drożdżowy 5,0 Wodorofosforan potasu 4,0 Chlorek sodu 5,0 Dwuwodorofosforan potasu 1,0 Krew końska (podgrzana) 7% Chlorek sodu 5,0 ph 7,4 ± 0,2 Agar 12,0 Hemoglobina 10,0 Dodatek wzbogacający IsoVitaleX 12,0 ml Pirydoksal 0,01 g Czynniki wzrostu 0,5 ph 7,2 ± 0,2 PA

2 *Skorygowany i (lub) uzupełniony zgodnie z wymaganiami mającymi na celu spełnienie kryteriów wydajności. Dodatek wzbogacający BD IsoVitalex zawiera następujące czynniki wzrostu (skład* w przeliczeniu na jeden litr wody oczyszczonej): Witamina B 12 0,01 g Pirofosforan tiaminy 0,1 g L-glutamina 10,0 Azotan (V) żelaza (III) 0,02 Adenina 1,0 Chlorowodorek tiaminy 0,003 Chlorowodorek guaniny 0,03 Chlorowodorek cysteiny 25,9 Kwas p-aminobenzoesowy 0,013 L-cystyna 1,1 Dinukleotyd nikotynoamidoadeninowy (NAD) 0,25 Glukoza 100,0 *Skorygowany i (lub) uzupełniony zgodnie z wymaganiami mającymi na celu spełnienie kryteriów wydajności. ŚRODKI OSTROŻNOŚCI. Wyłącznie do zastosowań profesjonalnych. Nie należy używać płytek, jeżeli są na nich widoczne oznaki skażenia mikrobiologicznego, odbarwienia, wyschnięcia, pęknięcia lub inne zjawiska wskazujące na pogorszenie jakości. Procedury aseptycznej techniki pracy z produktem, zagrożenia biologiczne oraz usuwanie zużytego produktu opisano w dokumencie OGÓLNE INSTRUKCJE DOTYCZĄCE STOSOWANIA. PRZECHOWYWANIE I DOPUSZCZALNY OKRES PRZECHOWYWANIA Po otrzymaniu, płytki należy przechowywać w ciemnym miejscu w temperaturze od 2 do 8 C, w ich oryginalnym opakowaniu izolującym do chwili użycia. Unikać zamrażania i przegrzewania. Posiewu na płytki można dokonywać aż do daty ważności (patrz etykieta na opakowaniu) i inkubować w zalecanych czasach inkubacji. Płytek z otwartych stosów zawierających po 10 płytek można używać przez okres jednego tygodnia, przechowując w czystym miejscu w temperaturze od 2 do 8 C. KONTROLA JAKOŚCI PRZEZ UŻYTKOWNIKA Na płytki posiewa się próbki reprezentatywne niżej wymienionych szczepów (szczegółowe informacje zobacz dokument OGÓLNE INSTRUKCJE DOTYCZĄCE STOSOWANIA). Płytki inkubuje się w temperaturze 35 ± 2 C w atmosferze tlenowej wzbogaconej dwutlenkiem węgla. Płytki odczytuje się po i po godzinach inkubacji. Szczepy bakteryjne* Haemophilus influenzae ATCC Neisseria gonorrhoeae ATCC Neisseria meningitidis ATCC Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Bez posiewu BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) i Wzrost dość dobry do bardzo dobrego. Zabarwienie czekoladowobrązowe, matowe, czasem nieco niejedorodne * Dodatkowo podłoże BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) można przetestować ze szczepem Granulicatella (Abiotrophia) adiacens DSM 9848 w celu ujawnienia wzrostu paciorkowców o zmiennych wymaganiach odżywczych. 8,9 PROCEDURA Dostarczane materiały Podłoża BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) lub BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base), oba na płytkach Stacker o śr. 90 mm. Sprawdzane pod kątem obecności mikroorganizmów. Materiały niedostarczane Pomocnicze pożywki hodowlane, odczynniki i wyposażenie laboratoryjne zgodnie z wymaganiami. PA

3 Typy próbek Opisywane podłoża nadają się w zasadzie do wszystkich typów próbek pobranych od pacjentów z podejrzeniem zakażenia bakteriami o wysokich wymaganiach odżywczych, przede wszystkim, choć nie tylko, do próbek z pierwotnie sterylnych miejsc anatomicznych (np. płynu mózgowordzeniowego, ropni). Ich głównym zastosowaniem jest nieselektywna izolacja Neisseria, Haemophilus i innych bakterii, które mogą nie wykazywać wzrostu na rutynowo stosowanych podłożach agarowych z krwią, takich jak Columbia Agar with 5% Sheep Blood. Dodatkowo, podłoże BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) można wykorzystać do izolowania rodzajów Abiotrophia i Globicatella (=paciorkowców o zmiennych wymaganiach odżywczych). 8,9 Opisywane podłoża są też używane jako podłoża do hodowli pochodnych z hodowli uzyskanych z próbek krwi. (zobacz także CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŚCI I OGRANICZENIA PROCEDURY). Pobieranie i transport próbek Neisseria gonorrhoeae, N. meningitidis, Haemophilus i inne drobnoustroje o wysokich wymaganiach odżywczych są wrażliwe na niekorzystne warunki środowiska. W związku z tym do wszystkich próbek należy stosować odpowiednie podłoża transportowe. Próbki należy jak najszybciej przesłać do laboratorium, najpóźniej w ciągu 24 godzin, nawet w przypadku stosowania podłoża transportowego. Optymalna temperatura transportu wynosi C. Nie należy zamrażać próbek! 10,11 Procedura testowa Jak najszybciej po dostarczeniu próbki do pracowni należy wykonać jej posiew na podłoże BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) lub BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base). Płytka do posiewu służy przede wszystkim do izolowania czystych kultur z próbek zawierających florę mieszaną. Ewentualnie, jeżeli materiał jest hodowany bezpośrednio z wymazówki, można przetoczyć wymazówkę po niewielkiej powierzchni na krawędzi płytki, a następnie wykonać posiew poprzez rozprowadzenie materiału po podłożu. W przypadku pobierania próbki, w której może znajdować się fizjologiczna flora bakteryjna, należy wykonać posiew także na odpowiednie podłoża selektywne, w zależności od patogenu, jaki ma zostać wyizolowany. W przypadku Neisseria gonorrhoeae należy wykonać posiew także na podłoże BD Martin-Lewis Agar, modified lub BD GC-Lect Agar, a w przypadku Haemophilus na podłoże BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin. Płytki inkubuje się w temperaturze 35 ± 2 C w atmosferze tlenowej wzbogaconej dwutlenkiem węgla. Płytki odczytuje się po i po godzinach inkubacji. Wyniki Typowa morfologia kolonii: Drobnoustroje Haemophilus influenzae Neisseria gonorrhoeae Neisseria meningitidis Streptococcus pneumoniae Granulicatella (Abiotrophia) adiacens* BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) i Małe (1 mm), wilgotne, perłowe, o charakterystycznym, mysim zapachu Małe, szarawobiałe do bezbarwnych, śluzowe Średnie lub duże, niebieskoszare, śluzowe Kolonie małe, płaskie lub większe, śluzowe, zielonkawe, podłoże otaczające kolonie może być zielonkawe Kolonie małe, szarozielonkawe, podłoże otaczające kolonie może być zielonkawe CHARAKTERYSTYKA WYNIKÓW I OGRANICZENIA DOTYCZĄCE PROCEDURY BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) i BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) są wzbogaconymi, nieselektywnymi podłożami, na których obserwuje się wzrost bakterii o niskich i wysokich wymaganiach odżywczych, w tym także należących do flory fizjologicznej. W związku z tym zaleca się wykonywanie posiewów próbek z okolic anatomicznych, w których występuje flora fizjologiczna, także na odpowiednie podłoża selektywne. Termin bakterie o wysokich wymaganiach odżywczych odnosi się do drobnoustrojów, których wzrost ulega zahamowaniu lub jest śladowy na rutynowo stosowanym podłożu do pierwszej PA

4 izolacji zawierającym krew owczą są to np. Haemophilus, patogenne szczepy Neisseria oraz szereg innych bakterii. Szczegółowe opisy typów próbek, które należy zaszczepiać na tych podłożach, a także typów drobnoustrojów, do których izolacji używane jest to podłoże, przedstawiono w piśmiennictwie. 8,9,11,12 Liczba gatunków bakterii występujących jako czynniki zakaźne jest bardzo duża. Dlatego też, przed rutynowym stosowaniem tych podłoży do hodowli rzadko izolowanych lub nowo odkrytych drobnoustrojów, użytkownik powinien najpierw sprawdzić ich przydatność, posiewając czyste hodowle tego typu mikroorganizmów. Podłoże nie było badane pod kątem promowania wzrostu rodzaju Abiotrophia ani innych paciorkowców o zmiennych wymaganiach odżywczych. Omówienie paciorkowców o zmiennych wymaganiach odżywczych znajduje się w piśmiennictwie. 6,8,9,13 PIŚMIENNICTWO 1. Carpenter, C.M., and H.E. Morton An improved medium for isolation of the gonococcus in 24 hours. Proc. N.Y. State Assoc. Public Health Labs. 27: Carpenter, C.M., M.A. Bucca, T.C. Buck, E.P. Casman, C.W. Christensen, E. Crowe, R. Drew, J. Hill, C.E. Lankford, H.E. Morton, L.R. Peizer, C.I. Shaw, and J.D. Thayer Evaluation of twelve media for the isolation of the gonococcus. Am. J. Syphil. Gonorrh. Venereal Diseases 33: Power, D.A. (ed.), and P.J. McCuen Manual of BBL products and laboratory procedures, 6th ed. Becton Dickinson Microbiology Systems, Cockeys ville, Md. 4. Martin, J.E., T.E. Billings, J.F. Hackney, and J.D. Thayer Primary isolation of N. gonorrhoeae with a new commercial medium. Public Health Rep. 82: Vastine, D.W., C.R. Dawson, I. Hoshiwara, C. Yonega, T. Daghfous, and M. Messadi Comparison of media for the isolation of Haemophilus species from cases of seasonal conjunctivitis associated with severe endemic trachoma. Appl. Microbiol. 28: Ruoff, L.R Aerococcus, Abiotrophia, and other infrequently isolated aerobic catalase-negative, gram-positive cocci. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Anonymous DIFCO Manual, 11th edition. DIFCO Laboratories, Division of Becton Dickinson and Co. Sparks, MD, USA. 8. Reimer, L.G., and L.B. Reller Growth of nutritionally variant streptococci on common laboratory and 10 commercial blood culture media. J. Clin. Microbiol. 14: Collins, M.D., and P.A. Lawson The genus Abiotrophia (Kawamura et al.) is not monophyletic: proposal of Granulicatella gen. nov., Granulicatella adiacens comb. nov., Granulicatella elegans comb. nov. and Granulicatella balaenopterae comb. nov. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 50: Thomson, R.B., and J.M. Miller Specimen collection, transport, and processing: bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. Forbes, B.A., and P.A. Granato Processing specimens for bacteria. In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 12. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.) Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 13. Ruoff, K.L Aerococcus, Abiotrophia, and other infrequently isolated aerobic catalase-negative, gram-positive cocci. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. PAKOWANIE / DOSTĘPNOŚĆ BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) Nr katalogowy Gotowe podłoża na płytkach hodowlanych, cpu 20 Nr katalogowy Gotowe podłoża na płytkach hodowlanych, cpu 120 Nr katalogowy Gotowe podłoża na płytkach hodowlanych, cpu 20 Nr katalogowy Gotowe podłoża na płytkach hodowlanych, cpu 120 PA

5 DODATKOWE INFORMACJE W celu uzyskania dodatkowych informacji należy się skontaktować z lokalnym przedstawicielem firmy BD. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company BD PA