RPR

RPR 100 72515 500 72516 ZESTAWY DO ILOŚCIOWYCH I PÓŁILOŚCIOWYCH TESTÓW KARTOWYCH JEDNORAZOWEGO UŻYTKU, DO WYKRYWANIA NIEKRĘTKOWYCH PRZECIWCIAŁ KIŁOWYCH W SUROWICY LUDZKIEJ I OSOCZU METODĄ AGLUTYNACJI MIKROSKOPOWEJ 883684-2014/12

SPIS TREŚCI 1. PRZEZNACZENIE... 3 2. PODSUMOWANIE I OBJAŚNIENIE TESTU... 3 3. PODSTAWY PROCEDURY... 3 4. ODCZYNNIKI... 4 5. OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI... 4 6. PRÓBKI... 6 7. PROCEDURA... 6 8. OGRANICZENIE TESTU... 8 9. CHARAKTERYSTYKA DZIAŁANIA... 8 10. BIBLIOGRAFIA.... 10 [PL] 2

1. PRZEZNACZENIE Zestawy RPR przeznaczone są do ilościowego i półilościowego wykrywania niekrętkowych przeciwciał (reaginów) kiłowych w surowicy ludzkiej i osoczu jako pomoc w diagnozowaniu zakażenia kiłą. 2. PODSUMOWANIE I OBJAŚNIENIE TESTU Kiła jest przewlekłą choroba zakaźną, mającą wyraźne postaci: pierwotna, wtórna, późna (trzeciorzędowa) i czwartorzędowa. Postaci te mają odmienne objawy kliniczne, zazwyczaj są to początkowe owrzodzenia, znane jako wykwity pierwotne, następnie powstaje osutka i w końcu pojawiają się długie okresy uśpienia choroby. Nieleczone zakażenia mogą w końcu powodować problemy sercowo-naczyniowe i kiłę układu nerwowego. Zakażenie powodują krętkitreponema pallidum i zazwyczaj kontakty seksualne, chociaż chorobę może przenosić transfuzja zakażonej krwi. Występuje też zakażenie śródmaciczne. Udowodniono, że w zasadzie nie można hodować tych drobnoustrojów na sztucznej pożywce i rozpoznanie zakażenia zazwyczaj zależy od obecności przeciwciał we krwi, które pojawiają się tuż po zakażeniu i mogą się utrzymywać przez wiele lat. Testy kiłowe dzielą się na cztery kategorie: bezpośrednie badanie mikroskopowe, testy przeciwciał krętkowych, testy na obecność przeciwciał niekrętkowych i bezpośrednie testy na obecność antygenu. RPR (Rapid Plasma Reagin) to test na obecność przeciwciał niekrętkowych, w którym wykrywane przeciwciała nie są specyficzne dla T pallidum, chociaż ich obecność w surowicy i osoczu pacjenta jest ściśle związana z infekcją organizmu wywołaną przez te bakterię. Ten rodzaj testu mierzy poziom przeciwciał (IgG i IgM) wytworzonych w odpowiedzi na materiał lipidowy uwolniony z uszkodzonych komórek organizmu oraz materiał lipoproteinowy pochodzący od krętek. Przeciwciała te znikają po pomyślnym wyleczeniu infekcji. 3. PODSTAWY PROCEDURY W zestawach RPR wykorzystywane są cząsteczki węgla pokryte mieszaniną antygenów lipidowych, które wiążą się z przeciwciałem reaginowym obecnym w surowicy lub osoczu pacjenta. Cząsteczki te zawieszone są w substancji zawierającej składniki, które eliminują nieswoiste reakcje. Na dodatnie wyniki aglutynacji mikroskopowej wskazuje odczyn kłaczkowania z koagulacją cząsteczek. Mimo iż zestaw jest przeznaczony przede wszystkim do testu ilościowego, poziomy przeciwciał mogą być miareczkowane w podwójnych seriach rozcieńczenia. Wyniki testów przeprowadzonych metodą aglutynacji są widoczne gołym okiem. [PL] 3

4. ODCZYNNIKI 4.1. Opis Oznaczenia na etykiecie R1 RPR Antigen R2 Positive control R3 Negative control Opis Antygen RPR Cząsteczki węgla pokryte kardiolipiną, lecytynami i antygenami cholesterolu w roztworze buforowym fosforanu Dodatnia surowica kontrolna Surowica ludzka zawierająca przeciwciała T.pallidum, ujemne dla przeciwciał antygenu HBs, anty-hiv1/2 i anty-hcv, rozcieńczone w roztworze buforowym fosforanu Ujemna surowica kontrolna Surowica krwi króliczej w roztworze buforowym fosforanu Butelka dozująca (wielokrotnego użytku) Liczba sztuk/ilość 72515 72516 100 testów 500 testów 1 fiolka 2 ml 1 fiolka 1 ml 1 fiolka 1 ml 1 fiolka 10 ml 1 fiolka 2 ml 1 fiolka 2 ml 1 1 Igła dozująca (wielokrotnego użytku) 1 1 Karty kontrolne testu (10 z okrągłym polem reakcyjnym) 10 50 4.2. Przechowywanie i postępowanie z produktem Zestaw należy przechowywać w temperaturze od +2 do 8 C. Butelki przechowywać w pozycji pionowej. Nie zamrażać. Każdy element zestawu zakonserwowany w temperaturze od 2 do 8 C może być stosowany aż do daty ważności wskazanej na opakowaniu. Po otwarciu i przy braku skażenia, odczynniki R1, R2 i R3 konserwowane w temp. od +2 do 8 C, mogą być stosowane aż do daty ważności wskazanej na etykiecie. 5. OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI Do diagnostyki in vitro. Produkt przeznaczony wyłącznie do stosowania przez personel medyczny. 5.1. Instrukcje BHP: Ten zestaw przeznaczony jest wyłącznie do stosowania przez wykwalifikowany personel przeszkolony w zakresie procedur laboratoryjnych i zaznajomiony z wynikającymi z nich potencjalnymi zagrożeniami. Należy stosować odzież ochronną, rękawiczki, ochronę oczu i twarzy oraz posługiwać się zestawem zgodnie z zasadami dobrej praktyki laboratoryjnej. Załączone materiały kontrolne pochodzą z surowicy ludzkiej. Materiały dawców zostały przetestowane i uzyskano wyniki ujemne dla przeciwciał Antygenu HBs, anty- HIV1/2 i anty-hcv. Żadna znana metoda przeprowadzania testu nie gwarantuje [PL] 4

braku obecności czynników zakaźnych. Z tego powodu z materiałem pochodzenia ludzkiego, odczynnikami i próbkami pobranymi od pacjentów należy postępować jak z materiałem potencjalnie zakaźnym, stosując uniwersalne środki ostrożności związane z patogenami krwiopochodnymi zdefiniowane przez przepisy lokalne, regionalne i krajowe. Skażenie biologiczne: Rozlany materiał pochodzenia ludzkiego należy traktować jako materiał potencjalnie zakaźny. Rozlany materiał niezawierający kwasu należy niezwłocznie usunąć i odkazić skażony obszar, materiały oraz wszelkie skażone powierzchnie lub wyposażenie za pomocą odpowiedniego chemicznego środka dezynfekującego skutecznie eliminującego potencjalne zagrożenie biologiczne związane z daną próbką (zwykle w tym celu należy użyć roztworu 1:10 wybielacza, 70-80% roztworu etanolu lub izopropanolu, jodoforu [np. 0,5% Wescodyne Plus itd.] i wytrzeć do sucha). Rozlany materiał zawierający kwas należy usunąć (zetrzeć) w odpowiedni sposób lub zneutralizować, a skażony obszar przemyć wodą i wytrzeć do sucha. Materiał użyty do zebrania rozlanego materiału należy zutylizować, jako odpad potencjalnie niebezpieczny. Następnie należy odkazić skażony obszar za pomocą chemicznego środka dezynfekującego. UWAGA: Nie umieszczać w autoklawie roztworów zawierających wybielacz! Wszystkie próbki i materiał użyty do przeprowadzenia testu utylizować jak materiał potencjalnie zakaźny. Wszelkie odpady laboratoryjne, chemiczne i odpady stwarzające zagrożenie biologiczne należy przenosić i utylizować zgodnie z wszystkimi przepisami lokalnymi, regionalnymi i krajowymi. Karta charakterystyki substancji jest dostępna na stronie www.bio-rad.com. 5.2. Środki ostrożności związane z procedurą 5.2.1. Przygotowanie Wiarygodność wyników jest zależna od prawidłowego wdrożenia następujących zasad dobrej praktyki laboratoryjnej: Podczas danej serii testów nie mieszać ani nie łączyć odczynników pochodzących z różnych serii. Nie używać przeterminowanych odczynników. Przed przystąpieniem do użytkowania należy zaczekać 30 minut, aby odczynniki ustabilizowały się w temperaturze pokojowej (18 30 C). 5.2.2. Proces Nie wprowadzać zmian w procedurze oznaczania. Do każdej próbki należy użyć nowej końcówki do dystrybucji. Nie dotyka powierzchni kart, na których zachodzi reakcja aglutynacji. [PL] 5

6. PRÓBKI Próbki surowicy i osocza (EDTA, cytrynian sodu, heparyna sodowa i ACD) nie powinny zawierać komórek krwi. Mogą być przechowywane w temperaturze od 2 do 8 C, do 7 dni przed wykonaniem testu. Próbki wymagające dłuższego przechowywania powinny być zamrożone i przechowywane w temperaturze -20 C lub niższej. Przed przystąpieniem do wykonywania testu, zamrożone próbki powinny być rozmrożone i dobrze wymieszane. Nie wykonywać cykli zamrażania/rozmrażania więcej niż 5 razy. Próbki podgrzane do temperatury 56 C w czasie 1 godziny, nie wpływają na wyniki testu. Próbki zawierające do 120 g/l albuminy, 200 mg/l bilirubiny, 33 g/l trioleiny oraz 2 g/l hemoglobiny nie wpływają na wyniki. Nie zaleca się jednak stosowania próbek hiperlipemicznych lub hiperhemolizowanych. Jeśli próbki będą transportowane, należy zapakować je zgodnie z obowiązującymi regulacjami dotyczącymi transportu czynników etiologicznych i najlepiej transportować w stanie zamrożonym. 7. PROCEDURA 7.1. Wymagane materiały 7.1.1. Dostarczany materiał Odpowiednio skalibrowany zakraplacz i igła do dozowania cząsteczek węgla. 7.1.2. Wymagane materiały, które nie wchodzą w skład zestawu Obrotomierz do obracania kart z prędkością 100 obr./min, o średnicy około 1 cm. Odpowiednio skalibrowana i zakonserwowana pipeta oraz końcówki do nanoszenia o objętości 50 µl. 0,9% roztworu soli fizjologicznej (do testu półilościowego) 7.2. Procedura oznaczania Test kontrolny wskaźników dodatnich (R2) i ujemnych (R3) musi być przeprowadzany dla każdego przebiegu wykonywanych testów. 7.2.1. Test ilościowy 1. Umieścić 50 μl próbki lub surowicy kontrolnej w polu reakcyjnym karty do testu. 2. Równo rozmieścić próbkę i surowicę kontrolną w polu reakcyjnym testu. 3. Przed użyciem potrząsnąć fiolką z antygenem RPR, w celu dokładnego wymieszania, aby uniknąć osadzania. 4. Przymocować igłę do zakraplacza i pobrać antygen RPR poprzez zassanie. 5. Odwrócić zakraplacz i delikatnie ścisnąć, aby usunąć powietrze z igły. 6. Trzymając zakraplacz pionowo nad próbką, zaaplikować jedną kroplę antygenu RPR. 7. Umieścić kartę testu na obrotomierzu i obracać z prędkością 100 obr./min przez 8 minut. 8. Natychmiast odczytać i zinterpretować wyniki przy dobrym oświetleniu. (Patrz 7.4). [PL] 6

Uwaga: Jeśli nie jest możliwe natychmiastowe odczytanie wyników, karta musi być pozostawiona na obrotomierzu przez czas do 15 minut. 9. Niewykorzystany antygen z zakraplacza, należy przenieść do szklanej fiolki. 10. Przed ponownym zastosowaniem, zakraplacz i igłę należy oczyścić wodą destylowaną i pozostawić do wyschnięcia. 7.2.2. Test półilościowy 1. Sporządzić podwójne serie rozcieńczenia roztworu z nierozcieńczonego w stosunku 1:16, w 0,9% soli fizjologicznej. 2. Umieścić 50 μl każdego roztworu i surowicy kontrolnej w odrębnym polu reakcyjnym karty do testu. 3. Równo rozprowadzić każdy roztwór w polu reakcyjnym karty. 4. Następnie postępować tak, jak w przypadku testu ilościowego w części 3. Miano próbki jest wyrażone jako odwrotność najbardziej rozcieńczonego roztworu, przedstawiające aglutynację cząsteczek węgla. Jeśli najbardziej rozcieńczony roztwór (1:16) okaże się reaktywny, należy kontynuować, przygotowując podwójne serie rozcieńczenia próbki od 1:32 do 1:512, z zastosowaniem 0,9% roztworu soli fizjologicznej. Dokładnie wymieszać i kontynuować od czynności 2, jak w teście półilościowym. 7.3. Kontrola jakości W każdym przebiegu testu użyć wskaźnika dodatniego (R2) i wskaźnika ujemnego (R3) w celu zweryfikowania testu 7.4. Analiza wyników i kryteria weryfikacji testu Silna reaktywność (SR): Silny odczyn kłaczkowania cząsteczek węgla z przeźroczystym zabarwieniem tła. Reaktywność (R): Silny odczyn kłaczkowania cząsteczek węgla, z nieco bardziej rozproszonymi cząsteczkami niż przy silnej reaktywności. Słaba reaktywność (WR): Słaby odczyn kłaczkowania cząsteczek węgla z jasnoszarym zabarwieniem tła. Śladowa reaktywność (TR): Śladowe ilości odczynu kłaczkowania cząsteczek węgla, zwykle występujące jako skupisko zagregowanych cząsteczek w środku pola reaktywnego lub cząsteczek rozproszonych wokół krawędzi pola. [PL] 7

Niereaktywność (NR): Zwykle występuje jako jednolite szare tło; niezagregowane cząsteczki węgla w środku pola reaktywnego lub cząsteczki węgla pojawiające się na większym obszarze pola, bez kłaczkowania. Próbki reaktywne powinny być rejestrowane jako przeciwciała dodatnie i muszą (z uwagi na nieswoistą naturę wykrytych przeciwciał) być poddane dalszym testom, w celu określenia obecności lub braku swoistych przeciwciał bezkrętkowych. Aby zweryfikować test, dodatnia surowica kontrolna powinna wykazywać silna reaktywność, a ujemna surowica kontrolna wskazywać niereaktywność. 8. OGRANICZENIE TESTU Nie ma jednego testu lub ostatecznego standardu odniesienia dla każdego stadium choroby. Tak więc, diagnostyka kiły opiera się głównie na badaniach serologicznych, wymagających wyników z metod bezkrętkowych i krętkowych. Gdy odczyt nie zostanie dokonany natychmiast po przeprowadzeniu testu, może wskazywać fałszywie dodatni wynik. Test węglowy RPR nie jest specyficzny dla kiły. Wszystkie reaktywne próbki powinny być przetestowane ponownie metodą krętkową, taką jak TPHA, w celu potwierdzenia wyników. 9. CHARAKTERYSTYKA DZIAŁANIA 9.1. Badanie dokładności Panel próbki stanowi jedną próbkę ujemną, 1 niska dodatnia próbka (miano 1:4) i 1 dodatnia próbka (miano 1:16) zostały przetestowane na powtarzalność, w 8 powtórzeniach podczas tego samego przebiegu. Próbki zostały przetestowane w 2 powtórzeniach na dzień, w czasie 5 dni (odczyt dokonany przez dwóch różnych laborantów) oraz na dwóch różnych seriach, pod kątem dokładności pośredniej i badań odtwarzalności między partiami. 9.1.1. Powtarzalność Wszystkie powtórzenia próbki ujemnej wykazują wyniki ujemne, a wszystkie powtórzenia próbki dodatniej wykazują wyniki dodatnie. 9.1.2. Dokładność pośrednia / Badanie powtarzalności między partiami Wszystkie powtórzenia próbki ujemnej wykazują wyniki ujemne, a wszystkie powtórzenia próbek dodatnich wskazują wyniki dodatnie, niezależnie od warunków. [PL] 8

9.2. Działanie kliniczne 9.2.1. Specyficzność Test swoistości był rutynowym badaniem retrospektywnym wykonanym na 102 zamrożonych próbkach surowicy, w laboratorium centrum chorób przenoszonych drogą płciową we Francji. Wyniki testu RPR kiły zostały porównane z testem przesiewowym RPR/VDRL z oznaczeniem CE. Łączna liczba próbek 102 Początkowo reaktywne (IR) 2 (niejednoznaczna) Powtarzalnie reaktywne (RR) 0 Swoistość RR (%) 100% 102/102 95% CI [96.4% - 100.0%] Na 102 próbki, znaleziono 2 próbki niejednoznaczne. Po wykonaniu ponownego testu wszystkie próbki były ujemne. Swoistość diagnostyczna na próbkach retrospektywnych wynosiła 102/102 = 100% z 95 % przedziałem ufności [96,4% 100,0%]. 9.2.2. Czułość Testu czułości był rutynowym badaniem retrospektywnym wykonanym na 101 zamrożonych próbkach z surowicą, w laboratorium centrum chorób przenoszonych drogą płciową we Francji. Wyniki testu RPR kiły zostały porównane z testem przesiewowym RPR/VDRL z oznaczeniem CE. Łączna liczba próbek 101 Początkowo reaktywne (IR) 100 (1 niejednoznaczna) Powtarzalnie reaktywne (RR) 101 Swoistość RR (%) 100% 101/101 95% CI [96,4% - 100,0%] Na 101 próbek, znaleziono 1 próbkę niejednoznaczną. Po wykonaniu ponownego testu, wszystkie próbki okazały się dodatnie. Ogólna czułość diagnostyczna na próbkach retrospektywnych jest równa 100% (101/101) z 95 % przedziałem ufności [96,4% z 100,0%]. 9.3. Swoistość analityczna - Badanie reaktywności krzyżowej Swoistość analityczna testu RPR kiły została oszacowana na całkowitą liczbę 65 próbek z reaktywnością krzyżową, wybranych z innych chorób zakaźnych i/lub stanów, które wykazują wyniki fałszywie dodatnie z powodu nieswoistości (czynnik reumatoidalny, borelioza, EBV, różyczka, leptospiroza, SLE (toczeń), wirusowe zapalenie wątroby typu B, wirusowe zapalenie wątroby typu C, HIV ½, kobiety w ciąży i kobiety wieloródki). Swoistość zaobserwowana na tej populacji wynosi 100,0% (65/65), z 95% przedziałem ufności [94,5% - 100,0%]. [PL] 9

9.4. Efekt prozony Trzy (3) dodatnie próbki z bardzo wysokim Ab kiły (>1:128) zostały przetestowane nierozcieńczone i rozcieńczone, w celu weryfikacji braku efektu prozony. Wszystkie nierozcieńczone dodatnie próbki są dodatnie Nie zaobserwowano efektu prozony z mianem do 1:256. 10. BIBLIOGRAFIA. 1. Larsen SA.,Pettit, et coll., EDTA treated plasma in the Rapid Plasma Reagin card test and the toluidine red unheated serum test for serodiagnosis of syphilis. J Clin Microbiology 1983;17;431-5 2. Larsen S.A., Pope V., et coll., A manual of Tests for Syphilis. 9th Edition ;1998; 193 207 3. Portnoy J. Modifications of the rapid plasma reagin (RPR) card test for syphilis, for use in large-scale testing.am J Clin Pathol;1963;40;473-9 4. Singh AE and Romanowski. Syphilis: Review with emphasis on clinical, epidemiological, and some biologic features. Clin Microbiol Rev. 1999 Apr; 12(2):187 209. 5. Stability of selected serum proteins after long-term storage in the Janus Serum Bank. Clin Chem Lab Med. 2009. 47:596-606. [PL] 10

[PL] 11

Bio-Rad 3, Boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette France Tel.: +33 (0) 1 47 95 60 00 Faks: +33 (0) 1 47 41 91 33 2014/12 www.bio-rad.com 883684 [PL] 12