QUANTA Lite H. pylori IgA ELISA 708720 Do diagnostyki in vitro Złożoność CLIA: Wysoka

QUANTA Lite H. pylori IgA ELISA 708720 Do diagnostyki in vitro Złożoność CLIA: Wysoka Przeznaczenie Zestaw QUANTA Lite TM H. pylori IgA to test immunoabsorpcji enzymatycznej (ELISA) do ilościowego wykrywania przeciwciał IgA przeciwko H. pylori (Helicobacter pylori) w surowicy ludzkiej. Ten test jest przeznaczony do wspomagania diagnozy infekcji H. pylori u dorosłych pacjentów w wieku od 18 lat z klinicznymi oznakami choroby układu pokarmowego. Test QUANTA Lite TM H. pylori IgA powinien być przeprowadzany i interpretowany wraz z testem QUANTA Lite TM H. pylori IgG na obecność przeciwciał IgG przeciwko H. pylori. Podsumowanie i wyjaśnienie testu Przyczynowe relacje pomiędzy infekcją H. pylori oraz wrzodami żołądka zostały dobrze określone od chwili ich pierwszego zaproponowania w 1983 roku. 1 Infekcja H. pylori występuje u ponad 95% pacjentów z chorobą wrzodową dwunastnicy, 80% pacjentów z wrzodami żołądka i jest powiązana z gruczolakorakiem żołądka i chłoniakiem. 2-5 Wyeliminowanie infekcji H. pylori ogranicza nawroty wrzodów. 2-5 Leczenie infekcji H. pylori jest zalecane w przypadku pacjentów z wrzodami dwunastnicy lub żołądka, a ostatnio w przypadku dyspepsji czynnościowej. 5,6 Diagnoza infekcji H. pylori obejmuje metody inwazyjne oraz nieinwazyjne. Badania inwazyjne obejmują endoskopię umożliwiającą bezpośrednią obserwację gastrycznej śluzówki zatokowej oraz w celu uzyskania biopsji do badania ureazy, zabarwienia histologicznego (Warthin-Starry) oraz kultury 5,7. Kultura jest traktowana jako złoty standard, jest to najmniej czuły test (70-80% czułości). Badanie histologiczne i ureazowe charakteryzuje się czułością i swoistością na poziomie powyżej 90% 5. Podstawową wadą metod inwazyjnych jest ryzyko i dyskomfort pacjenta, wysokie koszty oraz fałszywe negatywne wyniki na skutek niejednolitego rozprowadzenia H. pylori w żołądku. Badania nieinwazyjne obejmują badania oddechu 14 C lub 13 testy mocznika z oznaczeniem C oraz serologiczne. Badanie oddechu jest czułe i swoiste, ale jest kosztowne. Serologia stanowi tanią alternatywę badań inwazyjnych, zapewniającą wysoką czułość i swoistość badań oraz wobec drogich badań, takich jak endoskopia oraz badania oddechowe 14 mocznika C. 2,3,5,8,9 W większości przypadków wykrycie przeciwciał klasy IgG przeciwko H. pylori zapewnia dokładne określenie infekcji H. pylori z czułością i swoistością powyżej 90%. Około 2-7% pacjentów przebadanych zarówno pod kątem przeciwciał IgG oraz IgA przeciwko H. pylori wykazało wyniki negatywny na H. pylori IgG ale pozytywny na H. pylori IgA 12,15,16,18. W związku z tym pomiar wyłącznie przeciwciał IgG może spowodować pominięcie niektórych prawdziwych przypadków infekcji H. pylori i w rezultacie zainfekowani pacjenci mogą nie otrzymać wymaganego leczenia lub mogą być poddani znacznie droższym i często inwazyjnym zabiegom testowym. Oprócz wykrywania pewnej grupy pacjentów, którzy mogą być pominięci w ramach badania IgG H. pylori, inne badania wspierające przydatność kliniczną pomiaru przeciwciał IgA H. pylori obejmują: 1) wnioski, które obrazują wysokie poziomy przeciwciał IgA H. pylori razem z niskimi poziomami pepsynogenu surowicy I stanowią czynnik ryzyka dla nowotworu żołądka 17, 2) po leczeniu, wartości przeciwciał IgA mogą spadać szybciej niż wartości IgG 15, 3) wykrywanie przeciwciał IgA przeciwko H. pylori może pomóc w diagnozowaniu osób z objawami z niejednoznacznymi lub niskimi poziomami H. pylori oraz 4) współczynnik wartości przeciwciał IgA/IgG H. pylori może być związany ze stopniem przewlekłego nieżytu żołądka powiązanego z H. pylori 19. Zasada badania Oczyszczony antygen H. pylori wiąże się z dołkami płytek polistyrenowych w warunkach, które zabezpieczają antygen w jego naturalnym stanie. Uprzednio wstępnie rozcieńczone kontrole i rozcieńczone surowice pacjenta są dodawane do oddzielnych dołków, dzięki czemu wszelkie przeciwciała H. pylori wiążą się z unieruchomionym antygenem. Niezwiązana próbka jest wypłukiwana i do każdego dołka dodawany jest koniugat znakowanego enzymem przeciwciała przeciw-ludzkiego IgA. Druga inkubacja umożliwia przeciwciałom przeciw-ludzkim IgA znakowanym enzymem związać się z dowolnymi przeciwciałami pacjenta, które zostały przytwierdzone do mikrodołków. Po wypłukaniu wszelkich niezwiązanych przeciwciał przeciw-ludzkich IgA znakowanych enzymem, aktywność pozostałego enzymu bada się dodając substrat chromogeniczny i mierząc intensywność powstałej barwy. Badanie może zostać ocenione spektrofotometrycznie, poprzez zmierzenie i porównanie intensywności barwy, która powstaje w dołkach z próbką od pacjenta z barwą dołków kontrolnych. Odczynniki 1. Polistyrenowa płytka z mikrodołkami ELISA pokryta oczyszczonym antygenem H. pylori (12-1 x 8 dołków), z uchwytem w torebce foliowej zawierającej osuszacze 2. Kontrola negatywna ELISA, 1 fiolka buforu zawiera konserwant i surowicę ludzką bez ludzkich przeciwciał przeciwkoh. pylori, wstępnie rozcieńczona, 1,2 ml 3. Słabo dodatnie IgA H. pylori ELISA, 1 fiolka buforu zawierająca środek konserwujący i ludzkie przeciwciała w surowicy przeciwko H. pylori, wstępnie rozcieńczone, 1,2 ml 4. Wysoko dodatnie IgA H. pylori ELISA, 1 fiolka buforu zawierająca środek konserwujący i ludzkie przeciwciała w surowicy przeciwko H. pylori, wstępnie rozcieńczone, 1,2 ml 5. Rozcieńczalnik do próbek HRP, 1 fiolka zabarwienie różowe, zawiera sól fizjologiczną buforowaną TRIS, Tween 20, stabilizatory białka i konserwant, 50 ml 1

6. Koncentrat do płukania HRP, 1 fiolka koncentratu 40x zabarwienie czerwone, zawiera sól fizjologiczną buforowaną TRIS i Tween 20, 25 ml. Instrukcje dotyczące rozcieńczania można znaleźć w sekcji Metody. 7. Koniugat HRP IgA, (kozi), przeciwciała przeciw-ludzkie IgA, 1 fiolka bezbarwne, zawiera bufor, stabilizatory białka i konserwant, 10 ml 8. Chromogen TMB, 1 fiolka zawierająca stabilizatory, 10 ml 9. Roztwór zatrzymujący HRP, kwas siarkowy 0,344M, 1 fiolka bezbarwny, 10 ml Ostrzeżenia 1. OSTRZEŻENIE: Ten produkt zawiera substancję chemiczną (chloramfenikol 0,02%) w rozcieńczalniku do próbek, kontrolach i koniugacie, która według stanu Kalifornii wywołuje raka. 2. Wszystkie materiały pochodzenia ludzkiego używane w przygotowywaniu kontroli dla tego produktu zostały przetestowane i na podstawie metod zatwierdzonych przez FDA stwierdzono że nie zawierają przeciwciał przeciwko HIV, HBsAg i HCV. Jednak żadna metoda testowania nie może całkowicie zagwarantować braku obecności HIV, HbsAg, HCV lub innych czynników zakaźnych. Dlatego słabo dodatnie H. pylori IgA ELISA, wysoko dodatnie H. pylori IgA ELISA oraz ujemna kontrola ELISA powinny być traktowane w taki sam sposób jak materiał potencjalnie zakaźny. 10 3. Jako konserwant stosowany jest azydek sodu. Azydek sodu jest trucizną i może być toksyczny w przypadku połknięcia lub wchłonięcia przez skórę lub oczy. Azydek sodu może wchodzić w reakcję z ołowianą lub miedzianą instalacją wodociągową, tworząc potencjalnie wybuchowe azydki metali. Jeśli do usuwania odczynników używane są zlewy, należy przepłukiwać je dużą ilością wody, aby nie dopuścić do gromadzenia się azydku. 4. Koniugat HRP zawiera rozcieńczoną trującą/korozyjną substancję chemiczną, która może być toksyczna w przypadku spożycia w dużej ilości. Aby uniknąć potencjalnych oparzeń chemicznych, należy unikać kontaktu ze skórą i oczami. 5. Chromogen TMB zawiera środek drażniący, w który może być szkodliwy w przypadku wdychania, spożycia lub wchłonięcia przez skórę. Aby uniknąć urazów, należy unikać wdychania, spożycia lub kontaktu ze skórą i oczami. 6. Roztwór zatrzymujący HRP składa się z rozcieńczonego roztworu kwasu siarkowego. Unikać wystawienia na działanie zasad, metali lub innych związków, które mogą wchodzić w reakcje z kwasami. Kwas siarkowy jest trucizną i ma właściwości korozyjne. W razie połknięcia może być toksyczny. Aby uniknąć oparzeń chemicznych, należy unikać kontaktu ze skórą i oczami. 7. Podczas pracy z dostarczonymi odczynnikami należy stosować odpowiednie środki ochrony osobistej. 8. Rozlane odczynniki należy natychmiast usunąć. Należy przestrzegać wszystkich krajowych i lokalnych przepisów w zakresie utylizacji odpadów. Środki ostrożności 1. Ten produkt jest przeznaczonych do zastosowań diagnostycznych in vitro. 2. Zastąpienie składników dostarczonych w tym systemie innymi składnikami może skutkować osiągnięciem niespójnych wyników. 3. Niepełne lub nieprawidłowe płukanie i niewystarczające usunięcie płynu z płytek z dołkami ELISA wpłynie negatywnie na precyzję badań i/lub spowoduje wysoki poziom tła. 4. Dostosowanie tego badania do stosowania ze zautomatyzowanymi analizatorami próbek oraz innymi urządzeniami do pracy z płynami, w całości lub w części, może skutkować rozbieżnością wyników w stosunku do badań przeprowadzanych ręcznie. Obowiązkiem każdego laboratorium jest potwierdzenie, że wyniki testów uzyskanych na podstawie zautomatyzowanych badań mieszczą się w akceptowalnych limitach. 5. Na wyniki analizy wpływa wiele różnych czynników. Obejmują one temperaturę początkową odczynników, temperaturę otoczenia, dokładność i powtarzalność techniki pipetowania, dokładność płukania i usuwania płynu z dołków płytek ELISA, fotometr użyty do analizy wyników oraz czasy trwania inkubacji podczas badania. Uzyskanie dokładnych i powtarzalnych wyników wymaga staranności i precyzji. 6. Zalecane jest ścisłe przestrzeganie procedury testowej. 7. Niedokładne zamknięcie torebki z zamknięciem strunowym, zawierającej płytki z mikrodołkami i osuszaczami, spowoduje degradację antygenu i brak precyzji badania. 8. Dwukrotne lub wielokrotne użycie koniugatu HRP z jednej butelki w pewnym okresie czasu może dać niedopuszczalnie niski poziom absorbancji. Aby nie dopuścić do takiej sytuacji istotne jest przestrzeganie wszystkich zaleceń dotyczących procedur pracy z koniugatem HRP. 9. Zanieczyszczenie chemiczne koniugatu HRP może być spowodowane nieprawidłowym czyszczeniem lub płukaniem sprzętu lub narzędzi. Pozostałości typowych laboratoryjnych substancji chemicznych, takich jak formalina, substancja wybielająca, etanol lub detergent, z czasem spowodują degradację koniugatu HRP. Po użyciu chemicznych substancji czyszczących/dezynfekujących dokładnie wypłukać cały sprzęt i wszystkie narzędzia. 2

Warunki przechowywania 1. Wszystkie odczynniki z zestawu przechowywać w temperaturze 2 8 C. Nie zamrażać. Odczynniki są trwałe do daty ważności, pod warunkiem, że są przechowywane i używane zgodnie z instrukcjami. 2. Nieużyte płytki z mikrodołkami pokrytymi antygenem powinny być starannie zamknięte w torebce foliowej z osuszaczami i przechowywane w temperaturze 2 8 C. 3. Rozcieńczony bufor do płukania zachowuje trwałość przez 1 tydzień w temperaturze 2 8 C. Pobieranie próbek Ta procedura powinna być wykonana z próbką surowicy. Dodanie azydku lub innych konserwantów do próbek analitycznych może mieć negatywny wpływ na wyniki. Nie używać próbek zawierających widoczne zanieczyszczenia, skażonych bakteryjnie lub podgrzanych. Należy unikać całkowicie zhemolizowanej lub lipemicznej surowicy albo próbek. Po pobraniu surowica powinna być oddzielona od skrzepu. Dokument CLSI (NCCLS) H18-A zaleca następujące warunki przechowywania próbek: 1) Przechowywać próbki w temperaturze pokojowej nie dłużej niż 8 godzin. 2) Jeśli badanie nie zostanie zakończone w ciągu 8 godzin, schłodzić próbkę do temperatury 2-8 C. 3) Jeśli badanie nie zostanie ukończone w ciągu 48 godzin lub w przypadku transportu próbki, należy zamrozić ją w temperaturze -20 C lub niższej. Zamrożone próbki po rozmrożeniu i przed badaniem muszą zostać dobrze wymieszane. Nie zalecamy wielokrotnego zamrażania i rozmrażania próbek. Badanie Dostarczone materiały 1 Płytka z mikrodołkami H. pylori IgA ELISA (12-1 x 8 dołków), z uchwytem 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonej kontroli negatywnej ELISA 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonej pozytywnej niskiej H. pylori IgA ELISA 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonej pozytywnej wysokiej H. pylori IgA ELISA 1 50 ml rozcieńczalnika do próbek HRP 1 25 ml koncentratu do płukania HRP, koncentrat 40x 1 10 ml koniugatu przeciwciała IgA HRP, (kozie), przeciw-ludzkie IgA 1 10 ml chromogenu TMB 1 10 ml roztworu zatrzymującego HRP, kwas siarkowy 0,344M Wymagane materiały nie dołączone do zestawu Mikropipety na 5, 100, 200 300 i 500 µl Jednorazowe końcówki mikropipet Probówki do roztworów próbek pochodzących od pacjenta, 4 ml objętości Woda destylowana lub dejonizowana Naczynie o objętości 1 l do rozcieńczonego koncentratu HRP do płukania Czytnik płytek z mikrodołkami umożliwiający pomiar gęstości optycznej przy 450 nm (i przy 620 nm dla odczytów przy dwóch długościach fali) Sposób przygotowania Przed rozpoczęciem 1. Doprowadzić wszystkie odczynniki i próbki do temperatury pokojowej (20-26 o C) i dobrze wymieszać. 2. Rozcieńczyć koncentrat do płukania HRP w stosunku 1:40, dodając zawartość butelki koncentratu do płukania HRP do 975 ml wody destylowanej lub dejonizowanej. Jeśli cała płytka nie zostanie przetworzona w tym czasie, można przygotować mniejszą ilość. W tym celu należy dodać 2,0 ml koncentratu do 78 ml wody destylowanej lub dejonizowanej na każde 16 dołków, które będą użyte. Rozcieńczony bufor zachowuje trwałość przez 1 tydzień w temperaturze 2 8 o C. 3. Przygotować roztwór 1:101 każdej próbki pochodzącej od pacjenta, dodając 5 µl próbki do 500 µl rozcieńczalnika do próbek HRP. Rozcieńczone próbki muszą być użyte w ciągu 8 godzin od przygotowania. NIE ROZCIEŃCZAĆ nisko pozytywnego testu H. pylori IgA ELISA, wysoko pozytywnego testu H. pylori IgA ELISA oraz negatywnej kontroli ELISA. 4. Oznaczanie obecności lub braku H. pylori, stosując jednostki umowne wymaga dwóch dołków dla każdego z trzech kontroli i jednego lub dwóch dołków dla każdej próbki pacjenta. Zalecane jest wykonanie duplikatów próbek. Procedura badania 1. WSZYSTKIE ODCZYNNIKI PRZED ROZPOCZĘCIEM BADANIA MUSZĄ BYĆ DOPROWADZONE DO TEMPERATURY POKOJOWEJ (20 26 C). Umieścić wymaganą liczbę mikrodołków/pasków w uchwycie. Natychmiast umieścić nieużywane płytki w torebce foliowej zawierającej osuszacz i dobrze ją zamknąć, aby ograniczyć kontakt z parą wodną. 2. Dodać do dołków 100 µl wstępnie rozcieńczonej niskiej pozytywnej H. pylori IgA ELISA, wysokiej pozytywnej H. pylori IgA ELISA, negatywnej kontroli ELISA oraz rozcieńczonych próbek pacjenta. Przykryć dołki i inkubować przez 30 minut w temperaturze pokojowej na równej powierzchni. Czas inkubacji rozpoczyna się po dodaniu ostatniej próbki. 3

3. Etap płukania: Odessać całkowicie zawartość każdego dołka. Wlać 200 300 µl rozcieńczonego buforu HRP do płukania do wszystkich dołków, a następnie go odessać. Powtórzyć tę sekwencję jeszcze dwukrotnie, aby łącznie przeprowadzić trzy płukania. Odwrócić płytkę i postukać w nią na materiale pochłaniającym w celu usunięcia pozostałości płynu po ostatnim płukaniu. Ważne jest, aby całkowicie opróżnić każdy dołek po każdym etapie płukania. Zachować tę samą sekwencję odsysania, jak w przypadku dodawania próbki. 4. Do każdego dołka dodać 100 μl koniugatu IgA HRP. Koniugat powinien być usunięty z butelek z zastosowaniem standardowych warunków aseptycznych oraz zalecanych technik laboratoryjnych. Pobrać z butelki jedynie wymaganą do analizy ilość koniugatu. ABY UNIKNĄĆ POTENCJALNEGO ZANIECZYSZCZENIA BAKTERYJNEGO I/LUB CHEMICZNEGO, NIE WOLNO Z POWROTEM WLEWAĆ NIEUŻYTEGO KONIUGATU DO BUTELKI. Inkubować dołki przez 30 minut jak w etapie 2. 5. Etap płukania: Powtórzyć etap 3. 6. Dodać 100 µl chromogenu TMB do każdego dołka i inkubować w ciemności przez 30 minut w temperaturze pokojowej. 7. do każdego dołka dodać 100 µl roztworu zatrzymującego HRP. Zachować tę samą sekwencję i czas dodawania roztworu zatrzymującego HRP, jak w przypadku chromogenu TMB. Delikatnie postukać płytkę palcem, aby dokładnie wymieszać zawartość dołków. 8. Odczytać absorbancję (gęstość optyczną) każdego dołka przy długości fali 450 nm w ciągu jednej godziny od zatrzymania reakcji. Jeśli wymagane są pomiary bichromatyczne, referencyjną długością fali może być długość 620 nm. Kontrola jakości 1. Słabo pozytywne H. pylori IgA ELISA, wysoko pozytywne H. pylori IgA ELISA oraz negatywna kontrola ELISA powinny być przeprowadzone wraz z każdą serią próbek, aby zapewnić, że wszystkie odczynniki i badania są zostały przeprowadzone prawidłowo. 2. W związku z tym, że słabo pozytywne H. pylori IgA ELISA, wysoko pozytywne H. pylori IgA ELISA oraz kontrola negatywna ELISA są wstępnie rozcieńczone, nie umożliwiają one kontroli metod badawczych związanych z rozcieńczaniem próbek. 3. Dodatkowe kontrole mogą być przebadane zgodnie z wytycznymi lub wymaganiami lokalnych i/lub krajowych przepisów lub organów normalizacyjnych. Dodatkowe odpowiednie surowice kontrolne można przygotować, dzieląc połączone próbki surowicy ludzkiej i przechowując je w temperaturze - 20 C. 4. Aby wyniki badania mogły być uznane jako ważne, muszą zostać spełnione wszystkie poniższe kryteria. Jeśli jakiekolwiek kryterium nie będzie spełnione, badanie powinno być traktowane jako nieważne i powinno zostać powtórzone. a. Absorbancja wstępnie rozcieńczonej silnie pozytywnej H. pylori IgA ELISA musi być wyższa od absorbancji wstępnie rozcieńczonej słabo pozytywnej H. pylori IgA ELISA, która musi być wyższa od absorbancji wstępnie rozcieńczonej kontroli negatywnej ELISA. b. Absorbancja wstępnie rozcieńczonej wysokiej pozytywnej H. pylori IgA ELISA musi być większa niż 1,0, a absorbancja wstępnie rozcieńczonej negatywnej kontroli ELISA nie może być większa niż 0,2. c. Absorbancja słabo dodatniej H. pylori IgA ELISA musi być większa niż dwukrotna wartość negatywnej kontroli ELISA lub powinna przekraczać 0,25. d. Kontrola negatywna testu ELISA oraz wysoko pozytywnah. pylori IgA ELISA mają monitorować występowanie poważnych nieprawidłowości związanych z odczynnikami. Wysoko pozytywna IgA H. pylori IgA ELISA nie zapewnia dokładności przy wartości granicznej testu. e. Dodatkowe wytyczne dotyczące odpowiednich praktyk QC można znaleźć w dokumencie CLSI (NCCLS) C24-A 11. Obliczanie wyników W pierwszej kolejności jest określana średnia gęstość optyczna każdego zestawu duplikatów. Reaktywność dla każdej próbki może być obliczona przez podzielenie średniej gęstości optycznej przez średnią słabo dodatniej gęstości optycznej H. pylori IgA ELISA. Wynik jest pomnożony przez liczbę jednostek przypisanych do słabo dodatniego H. pylori IgA ELISA znalezioną na etykiecie. Gęstość optyczna próbki Wartość próbki = x słabo pozytywna H. pylori IgA ELISA (jednostki) H. pylori IgA gęstość słabo pozytywnej ELISA (jednostki) Reaktywność w sposób nieliniowy zależy od ilości obecnych przeciwciał. Wzrosty i spadki stężeń przeciwciał u pacjenta będą odzwierciedlone w analogicznym wzroście lub spadku reaktywności, jednak zmiana ta nie jest proporcjonalna (tzn. podwojenie stężenia przeciwciał nie oznacza podwojenia reaktywności). Jeśli wymagane jest dokładniejsze oszacowanie ilości przeciwciał pacjenta, należy przeprowadzić badanie seryjnych rozcieńczeń próbek pochodzących od pacjenta i ostatnie rozcieńczenie w ramach badania z wynikiem pozytywnym powinno być zaraportowane jako miano przeciwciał pacjenta. 4

Interpretacja wyników Badanie ELISA jest bardzo wrażliwe na technikę i jest w stanie wychwycić nawet najdrobniejsze różnice w populacjach pacjentów. Poniższe wartości są jedynie wartościami sugerowanymi. Każde laboratorium powinno ustalić własny normalny zakres na podstawie własnych technik, kontroli, sprzętu i populacji pacjentów, zgodnie z własnymi ustalonymi procedurami. Próbki uznaje się za dające wynik negatywny (negatywny pod względem przeciwciała IgA przeciwko H. pylori), niejednoznaczny lub pozytywny (wykryte zostaje przeciwciało IgA przeciwko H. pylori) w oparciu o poniższą tabelę. Jednostki Negatywna 0,0-20,0 Niejednoznaczne 20,1-24,9 Pozytywne 25 Niejednoznaczne próbki powinny zostać ponownie przebadane przed przedstawieniem wyników. 1. Test QUANTA Lite H. pylori IgA ELISA powinien być przeprowadzany i interpretowany wraz z testem QUANTA Lite H. pylori IgG ELISA na obecność przeciwciał IgG przeciwko H. pylori. Niektóre próbki mogą dać wynik negatywny na przeciwciała H. pylori IgA oraz wynik pozytywny na przeciwciała H. pylori IgG, natomiast inne mogą dać wynik pozytywny na przeciwciała H. pylori IgA oraz negatywne na przeciwciała H. pylori IgG. Adekwatne dane wyników/interpretacje nie zostały opracowane dla próbek pozytywnych przeciwciał H. pylori IgG oraz negatywnych przeciwciał H. pylori IgG oraz może być zagwarantowane dodatkowe sprawdzenie. 2. Wynik pozytywny wskazuje wyłączenie na wcześniejsze immunologiczne wystawienie na działanie H. pylori. Nie może on rozróżnić aktywnej infekcji H. pylori od nieaktywnej. Infekcja aktywna jest oceniana na podstawie kultury materiału biopsji, za pomocą testu oddechowego mocznika 14 C lub przy użyciu metod wykrywania ureazy. 3. W przypadku próbek o niejednoznacznym poziomie H. pylori IgA nie można ustalić stanu przeciwciał. Jeśli wyniki nadal są niejednoznaczne po powtórzonym badaniu, wynik należy zaraportować jako niejednoznaczny i/lub pobrać dodatkową próbkę. 4. poziom jest poniżej granicy wykrywania dla tego testu. Próbki pobrane zbyt wcześnie podczas początkowego etapu infekcji mogą nie wykazać obecności przeciwciał IgA. Jeśli podejrzewany jest wstępny etap infekcji, należy pobrać kolejne próbki po 4-6 tygodniach i należy przebadać je przy użyciu tych samych testów, co początkowe próbki. 5. Zalecane jest, aby wyniki raportowane przez laboratorium zawierały stwierdzenie: Poniższe wyniki otrzymano przy wykorzystaniu zestawu INOVA QUANTA Lite TM H. pylori IgA ELISA. Nie można stosować zamiennie wartości IgA uzyskanych przy zastosowaniu metod testowych innych producentów. Rząd wielkości poziomów raportowanego IgA nie może być skorelowany z mianem punktu końcowego. Ograniczenia badania 1. Obecność kompleksów immunologicznych lub innych agregatów immunoglobuliny w próbce pochodzącej od pacjenta może powodować podwyższony poziom nieswoistego wiązania i wytwarzać fałszywe pozytywne wyniki w tym badaniu. 2. Celem tego testu jest wspomaganie diagnozy infekcji H. pylori w przypadku osób z objawami sugerującymi choroby układu pokarmowego i nie jest przeznaczone dla pacjentów, u których nie występują żadne objawy. 3. Ten test może być używany jako uzupełnienie, a nie jako zastąpienie badania przesiewowego na przeciwciała H. pylori IgG. Wyniki H. pylori IgA nie mogą być rozpatrywane bez odpowiadających im wyników H. pylori IgG. 4. Negatywny wynik H. pylori IgA nie wyklucza obecności H. pylori, ponieważ wiele osób z przebytą lub przechodzoną infekcją H. pylori może mieć negatywny wynik na H. pylori IgA. 5. Negatywny wynik na obecność przeciwciał H. pylori IgA nie wyklucza obecności infekcji H. pylori, ponieważ stężenie przeciwciał może być poniżej granicy wykrywania dla tego testu. 6. Można uzyskać negatywne wyniki, jeśli próbki zostaną pobrane na zbyt wczesnym etapie infekcji, przed pojawieniem się wykrywalnych przeciwciał. Jeśli podejrzewana jest infekcja H. pylori, należy pobrać próbki 4-6 tygodni później i przebadać je w identyczny sposób, jak pierwsze próbki. 7. Pozytywny wynik testu nie umożliwia rozróżnienia pomiędzy aktywną infekcją a kolonizacją H. pylori. 8. Pozytywny wynik testu wskazuje jedynie obecności przeciwciał przeciwko H. pylori i nie musi oznaczać obecności choroby układu pokarmowego. 9. Charakterystyka wyników badania nie została ustanowiona dla podłoża innego niż surowica. 10. To badanie nie jest przeznaczone dla pacjentów poniżej 18 roku życia. 11. Literatura sugeruje, że przeciwciała przeciwko szczepom Pseudomonas mogą reagować krzyżowo z H. pylori. Wyniki tego badania z surowicą zawierającą przeciwciała przeciwko pseudomonas nie zostały ocenione. 12. Wyniki tego badania powinny być użyte w powiązaniu z wynikami klinicznymi i innymi badaniami serologicznymi. 5

Spodziewane wartości Ustalono, że około 50% światowej populacji jest zainfekowane H. pylori. W krajach rozwijających się 50% populacji lub więcej jest zarażone H. pylori od 10 roku życia, natomiast w krajach rozwiniętych, przypadki infekcji w dzieciństwie są sporadyczne. Powszechność przeciwciał H. pylori IgG w surowicy wzrasta o około 0,5 1,0% na rok wraz ze wzrostem wieku (tzn. około 60% powszechności w grupie wiekowej 60 lat). 3,7,13,14 U zainfekowanych osób również stwierdzono wytwarzanie przeciwciał IgA przeciwko H. pylori. U niewielu osób (2 7%) stwierdzono wynik pozytywny na przeciwciała H. pylori IgA oraz negatywny na przeciwciała H. pylori IgG 12,15,16,18. Zdolność testu QUANTA Lite H. pylori IgA ELISA do wykrywania przeciwciał H. pylori IgA została oceniona poprzez porównanie z dostępnym w handlu testem H. pylori IgA ELISA oraz przez ocenę klinicznie określonych próbek pacjenta. Wyniki dostępnego w handlu badania H. pylori IgA ELISA zostały ustalone na podstawie broszury z instrukcjami producenta. Normalny zakres Został przetestowany panel 120 próbek pobranych od zdrowych osób bez objawów (w wieku 17 75 lat, średnia 35) przy użyciu testu QUANTA Lite H. pylori IgA ELISA. Spośród 120 próbek 9% (11/120) uzyskało wynik pozytywny na H. pylori IgA. Po wykluczeniu próbek niejednoznaczych lub pozytywnych na H. pylori IgG, 2,8% (3/105) wykazało wynik pozytywny na przeciwciała H. pylori IgA (oraz negatywny na przeciwciała H. pylori IgG). Oznacza to obliczoną swoistość na poziomie 97,1% (102/105) [95% CI= 91,9 99,4]. Specyficzna charakterystyka wyników Wydajność testu QUANTA Lite H. pylori IgA ELISA została porównana z dostępnym w handlu testempredykatem H. pylori IgA ELISA. W ramach dwóch testów przebadano 145 próbek dostarczonych w celu przebadania pod kątem przeciwciał H. pylori, 8 EQAS (program zewnętrznej kontroli jakości), plus 100 próbek pochodzących od zdrowych osób bez żadnych objawów. Spośród 253 próbek 130 było pozytywnych a 91 negatywnych wg obu metod. Tabela 1: Predykat H. pylori IgA ELISA + +/- - QUANTA Lite + 130 5 6 % zgodności pozytywnych: 91,5% (130/142) H. pylori IgA ELISA +/- 9 1 4 % Zgodności negatywnych: 90,1% (91/101) - 3 4 91 Badanie próbek Za pomocą zestawu Quanta Lite H. pylori IgA ELISA przebadano łącznie 111 próbek surowicy pochodzącej od pacjentów z infekcją H. pylori udokumentowaną przez kombinację metod UBT,CLO, histologii oraz/lub kulturę. Tabela 2: Metoda referencyjna + QUANTA Lite H. pylori IgA ELISA + 100 +/- 8-3 Czułość (bez wykluczenia niejednozn.) = 90,1% (100/111), [95% CI =83,0% 94,9%] Badanie reaktywności krzyżowej Zostało przeprowadzone badanie absorpcyjne w celu ocenienia reaktywności krzyżowej antygenów bakteryjnych za pomocą testu INOVA QUANTA Lite H. pylori IgA ELISA. W zasadzie surowice z różnymi poziomami przeciwciał przeciwko H. pylori zostały absorbowane przez antygeny H. pylori, C. jejuni, C. coli, C. fetus lub E. coli, a próbki nieleczonego serum zostały przebadane za pomocą badania H. pylori. Wszystkie surowiczo dodatnie próbki H. pylori pozostały surowiczo dodanie gdy zostały absorbowane antygenami innymi niż H. pylori. Średnia wartość procentowa zahamowania wyszła 82% przy użyciu antygenu H. pylori oraz 10%, gdy zostały użyte antygeny pochodzące od innych organizmów. Reakcyjność krzyżowa, występująca na skutek obecności przeciwjądrowych (3 surowice), czynnika reumatoidalnego (3 surowice), beta-2 mikroglobuliny (3 surowice) lub przeciwciał B. burgdorferi (11 surowic) została również przetestowana i na podstawie tego badania stwierdzono że nie ma wpływu na swoistość testu QUANTA Lite TM H. pylori IgA ELISA. Interferencja Zostały przeprowadzone dwa badania, aby określić, czy obecność wysokich poziomów bilirubiny, hemoglobiny, cholesterolu lub trójglicerydów w próbkach surowicy koliduje z testem QUANTA Lite TM H. pylori IgA ELISA. W pierwszym badaniu 6 próbek surowicy (4 H. pylori pozytywne i 2 negatywne) zostało przebadanych z dodatkiem oraz bez dodatku bilirubiny (40x normalny poziom) lub hemoglobiny (66x normalny poziom). Drugie badanie obejmowało iglicowanie pozytywnej surowicy H. pylori z surowicą zawierającą wysokie poziomy cholesterolu (3), trójglicerydów (1) lub bilirubiny (2). Pomimo tego, że wysokie poziomy bilirubiny, hemoglobiny lub cholesterolu nie zakłócały badania, wysokie poziomy trójglicerydów (jedna próbka) wykazywały pewne konflikty. 6

Powtarzalność/precyzja Wyniki wewnątrz badania zostały ocenione na podstawie 12-krotnego testu 6 próbek, w tym negatywnej, niejednoznacznej, pozytywnej na granicy, słabo pozytywnej, umiarkowanie pozytywnej i wysoko pozytywnej. Wyniki zostały podsumowane w tabeli 3. Tabela 3: Wyniki w ramach badania QUANTA Lite TM H. pylori IgA ELISA Surowica 1 Surowica 2 Surowica 3 Surowica 4 Surowica 5 Surowica 6 Średnio 52,8 57 40,84 15,9 7,00 29,6 S,D, 2,15 2,18 0,72 1,2 0,68 1,19 C,V,% 4,74 3,8 1,77 7,56 9,72 4,03 Wyniki pomiędzy próbkami zostały ocenione poprzez 6-krotne przebadanie w ciągu 3 dni 13 próbek, w tym negatywnej, słabo pozytywnej, umiarkowanie pozytywnej i wysoko pozytywnej. Przeprowadzono dwie serie dziennie jedną rano, a drugą po południu. Wyniki zostały podsumowane w tabeli 4. Tabela 4: Wyniki pomiędzy badaniami QUANTA Lite TM H. pylori IgA ELISA Surowica 1 Surowica 2 Surowica 3 Surowica 4 Surowica 5 Surowica 6 Średnio 53,7 6,1 54,7 53 17,5 19,1 S,D, 1,25 0,25 3,8 3,94 1,65 0,87 C,V,% 2,3 4,1 6,9 7,4 9,5 4,6 Surowica 7 Surowica 8 Surowica 9 Surowica 10 Surowica 11 Surowica 12 Surowica 13 43,4 49,4 31,1 5,8 26,7 28,9 36,7 1,46 1,97 1,53 0,35 1,38 2,48 2,51 3,4 4,0 4,9 6,0 5,2 8,6 6,9 Piśmiennictwo 1. Marshall BJ: Unidentified curved bacilli on gastric epithelium in active chronic gastritis. Lancet, ii 1273-1275, 1983. 2. Walsh JH and Peterson WL: The treatment of Helicobacter pylori infection in the management of peptic ulcer disease. N.Engl. J. Med. 333(15):984-991, 1995. 3. Blaser MJ: Helicobacter pylori: its role in disease. Clin. Infect. Dis. 15: 386-94, 1992. 4. The Eurogast Study Group. An international association between H. pylori infection and gastric cancer. Lancet 341(8857):1359-62. 5. NIH Concensus Development Panel on Helicobacter pylori in Peptic Ulcer Disease. JAMA 272-65-69, 1994. 6. Malfertheiner P, et.al.: Current European concept in the management of Helicobacter pylori infection- the Maastricht concensus report. Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 9:1-2, 1997. 7. Hirschl AM, et. al.: Kinetics of specific IgG antibodies for monitoring the effect of anti- Helicobacter pylori chemotherapy. J. Infect. Dis. 168:763-766. 8. Bourke B, Jones N, and Sherman P: Helicobacter pylori infection and peptic ulcer disease in children. Ped. Infect. Dis. J. 15:1-13, 1996. 9. Patel P, et. al.: Prospective screening of dyspeptic patients by Helicobacter pylori serology. Lancet. 346:1315-1318, 1995. 10. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Centers for Disease Control/National Institute of Health, 2007, Fifth Edition 11. National Committee for Clinical Laboratory Standards: Internal quality Control: Principles and definitions; Approved Guideline, NCCLS Document C24-A, Vol 11(6), 1991. 12. Kosunen T, et. al.: Diagnostic value of decreasing IgG, IgA and IgM antibody titers after eradication of Helicobacter pylori. Lancet 339:893-895, 1992. 13. Megraud F, et. Al.: Seroepidemiology of Campylobacter pylori infection in various populations. J. Clin. Microbiol. 27:1870-1873, 1989. 14. Veldhuyzen SJO, et. al.: Increasing prevalence of H. pylori infection with Age: Continuous risk of infection in adults rather than cohort effect. J. Infect. Dis. 169:4347, 1994. 15. Veenendaal RA: Long term serological surveillance after treatment of Helicobacter pylori infection. Gut 32:1291-1294, 1991. 16. Jaskowski TD, et. al.: Immunoglobulin A antibodies to Helicobacter pylori. J. Clin. Microbiol. 35(11): 2999-3000, 1997. 17. Aromaa A, et. al.: Circulating Anti-Helicobacter pylori Immunoglobulin A antibodies and low serum pepsinogen 1 level are associated with increased risk of gastric cancer. Am. J. Epidem. 144(2):142-149, 1996. 7

18. Granberg C, et. al.: Diagnosis of Helicobacter pylori Infection by Using Pyloriset EIA-G and EIA-A for Detection of Serum Immunoglobulin G (IgG) and IgA Antibodies. J. Clin. Microbiol. 31(6): 1450-1453, 1993. 19. Futagami S: Systemic and local immune responses against Helicobacter pylori urease in patient with chronic gastritis: distinct IgA and IgG productive sites. Gut 43:168-175, 1998. QUANTA Lite i INOVA Diagnostics, Inc. są zastrzeżonym znakiem handlowym firmy Copyright 2011. Wszelkie prawa zastrzeżone Wyprodukowano przez: INOVA Diagnostics, Inc. 9900 Old Grove Road San Diego, CA 92131 Stany Zjednoczone Ameryki Pomoc techniczna (tylko na terenie Stanów Zjednoczonych i Kanady): 877-829-4745 Pomoc techniczna (poza terenem Stanów Zjednoczonych): 00+ 1 858-805-7950 support@inovadx.com Autoryzowani przedstawiciele na terenie Unii Europejskiej: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D-66386 St. Ingbert, Niemcy Tel.: +49-6894-581020 Faks.: +49-6894-581021 www.mt-procons.com 628720POL Sierpień 2011 Wersja 0 8