Ostrze enia i œrodki ostro noœci: Do stosowania w diagnostyce in vitro 1 Je eli zaka enie nowym wirusem grypy A jest podejrzewane na podstawie aktualn

Transkrypt

1 Directigen Flu A B Do bezpoœredniego wykrywania antygenów wirusa grypy typu A U JAA 2006/09 Polski Zobacz objaœnienie symboli na koñcu ulotki Patent USA nr 5,093,231; 5,135,847 Patent zg³oszony PRZEZNACZENIE Test Directigen Flu A to szybki immunologiczny test b³onowy in vitro s³u ¹cy do bezpoœredniego i iloœciowego wykrywania antygenu wirusa grypy typu A w odpowiednich próbkach pacjentów z objawami choroby Wykazano, e pop³uczyny oraz aspiraty nosowo-gard³owe stanowi¹ lepsze próbki ni wymazy z nosogard³a oraz gard³a i dlatego próbki testu Directigen Flu A s¹ próbkami pierwszego wyboru Wszystkie negatywne wyniki badañ powinny zostaæ potwierdzone przez hodowle komórkowe, poniewa negatywne wyniki nie wykluczaj¹ zaka enia wirusem grypy i nie powinny byæ stosowane jako wy³¹czna podstawa do leczenia lub innych decyzji zwi¹zanych z prowadzeniem leczenia STRESZCZENIE I OBJAŒNIENIE Procedury stosowane obecnie w diagnostyce grypy typu A obejmuj¹ badania serologiczne, bezpoœrednie badania immunofluorescencyjne (IF) próbki, izolacjê hodowli komórkowej z potwierdzeniem 1,2,3 Ostatnia metoda uwa ana jest za badanie standardowe i rozpoczyna siê od wstêpnej izolacji wirusa w hodowli komórkowej, po której nastêpuje zahamowanie hemadsorbcji, badanie immunofluorescencyjne lub oznaczenie neutralizacyjne w celu potwierdzenia obecnoœci wirusa grypy 4,5,6 Test Directigen Flu A to oznaczenie wykorzystuj¹ce filtr immunob³onowy w celu wykrycia antygenów grypy A wyekstrahowanych z odpowiednich próbek pobranych od pacjentów wykazuj¹cych objawy choroby Ca³kowity czas testu wynosi mniej ni 15 minut, a reakcja jest okreœlana przez powstanie widocznego wzorca barwi¹cego W przypadku testu Directigen Flu A nie pojawia siê problem dryfu antygenowego, poniewa docelowe antygeny s¹ silnie zachowawczymi nukleoproteidami okreœlonego typu 7 Szybkoœæ oraz sposób przeprowadzenia testu Directigen Flu A sprawia, e znajduje on zastosowanie jako test STAT do wykrywania antygenu grypy A, dostarczaj¹c szybkiej, odpowiedniej informacji, która pomaga przy w³¹czaniu leczenia przeciwwirusowego oraz przy podejmowaniu innych decyzji klinicznych i wspomagaj¹cych ZASADY PROCEDURY Próbki pobrane z nosogard³a lub gard³a s¹ wprowadzane do urz¹dzenia testowego ColorPAC, a ka dy obecny antygen grypy A podczas przechodzenia przez b³onê jest wi¹zany z powierzchni¹ b³ony w sposób nieswoisty Naniesione na b³onê ColorPAC koniugaty przeciwcia³ monoklonalnych (2) s¹ wi¹zane z unieruchomionym antygenem nukleoproteidu grypy typu A Nastêpnie s¹ dodawane kolejno dwa substraty, które inkubuje siê przez 5 min, uzyskuj¹c na b³onie purpurowy trójk¹t wskazuj¹cy na dodatni wynik testu ODCZYNNIKI Test Directigen Flu A obejmuje: Urz¹dzenia ColorPAC (20) Zestaw 20 testów Urz¹dzenia z jednostk¹ kontrolera przep³ywu zawieraj¹ce kropki kontrolne inaktywowanego antygenu grypy A (H1N1) na œrodku b³ony Probówki i koñcowki DispensTube (20) Zestaw 20 testów Odczynnik A (5,0 ml) Odczynnik do ekstrakcji, czynnik mukolityczny 1,6% oraz detergent 6,4%, zawieraj¹cy azydek sodu 0,2% (œrodek konserwuj¹cy) Odczynnik 1 (8,5 ml) P³ukanie, 150 mm kwasu cytrynowego Odczynnik 2 (4,7 ml) P³ukanie, 50 mm Tris oraz immunoglobulina królicza (IgG) z 0,2% azydku sodu (œrodek konserwuj¹cy) Odczynnik 3 (4,3 ml) Wykrywanie, mysie przeciwcia³a monoklonalne przeciw grypie typu A (2) sprzê one z zasadow¹ fosfataz¹, z 0,2% azydku sodu (œrodek konserwuj¹cy) Odczynnik 4 (8,5 ml) P³ukanie, 5% butanolu, 2 M mocznika oraz 100 mm Hepes z 0,2% azydku sodu (œrodek konserwuj¹cy) Odczynnik 5 (7,3 ml) P³ukanie, 50 mm Tris oraz 150 mm NaCl z 0,2% azydku sodu (œrodek konserwuj¹cy) Odczynnik 6 (4,5 ml) Substrat A; 0,4 mm chromogenu z dodatkiem 0,02% azydku sodu (œrodek konserwuj¹cy) Odczynnik 7 (3,9 ml) Substrat B; 7,8 mm chromogenu z dodatkiem 0,2% azydku sodu (œrodek konserwuj¹cy) Odczynnik 8 (4,1 ml) Roztworu zatrzymuj¹cego, 150 mm kwasu cytrynowego Kontrola + (2,0 ml) Kontrola dodatnia: antygen grypy typu A (H1N1) nieaktywowany, traktowany detergentem z dodatkiem 0,2% azydku sodu (œrodek konserwuj¹cy) Kontrola (2,0 ml) Kontrola ujemna: niezaka ona zawartoœæ jaja traktowana detergentem, z dodatkiem 0,2% azydku sodu (œrodek konserwuj¹cy)

2 Ostrze enia i œrodki ostro noœci: Do stosowania w diagnostyce in vitro 1 Je eli zaka enie nowym wirusem grypy A jest podejrzewane na podstawie aktualnych klinicznych i epidemiologicznych kryteriów wynikaj¹cych z badañ populacji, zalecanych przez organy zdrowia publicznego, próbki powinny zostaæ pobrane z zastosowaniem œrodków ostro noœci w³aœciwych dla kontroli zaka enia nowymi zjadliwymi wirusami grypy i wys³ane do pañstwowych lub lokalnych wydzia³ów zdrowia w celu ich zbadania W takich przypadkach nie nale y podejmowaæ prób hodowli wirusów, o ile nie jest dostêpne laboratorium BSL 3+ do przyjêcia i hodowli próbek 2 W próbkach klinicznych mog¹ wystêpowaæ mikroorganizmy chorobotwórcze, w tym wirusy ó³taczki i ludzki wirus braku odpornoœci (HIV) Podczas przechowywania i wyrzucania materia³ów ska onych krwi¹ i innymi p³ynami ustrojowym, nale y przestrzegaæ Standardowych œrodków ostro noœci 8 11 oraz wytycznych obowi¹zuj¹cych w danej placówce 3 Mo na zaobserwowaæ ró nice w skutecznoœci tego badania, kiedy jest ono stosowane na próbkach pobranych od osób doros³ych i od dzieci, lecz specyficzne ró nice nie s¹ znane 4 Nie u ywaæ odczynników po up³ywie terminu wa noœci 5 NIE mieszaæ odczynników pochodz¹cych z partii o ró nych numerach ani nie zamieniaæ nakrêtek butelek z odczynnikami 6 Nie u ywaæ ponownie urz¹dzeñ ColorPAC Stosowanie czasów i temperatur inkubacji innych ni zalecane mo e byæ przyczyn¹ uzyskania b³êdnych wyników 7 Aby zakraplanie odbywa³o siê poprawnie, butelki z odczynnikami musz¹ byæ trzymane pionowo (w odleg³oœci oko³o 2,5 centymetra od b³ony ColorPAC lub probówki), a krople powinny spadaæ pojedynczo, szybko, jedna po drugiej 8 Unikaæ kontaktu odczynników ze skór¹ i b³onami œluzowymi Jeœli to nast¹pi, nale y sp³ukaæ te miejsca wod¹ i skontaktowaæ siê z lekarzem 9 Odczynniki zawieraj¹ azydek sodu, który jest szkodliwy przy wdychaniu, przy kontakcie ze skór¹ oraz w razie po³kniêcia Przy kontakcie z kwasami uwalnia silnie toksyczny gaz Jeœli dojdzie do kontaktu ze skór¹, natychmiast sp³ukaæ du ¹ iloœci¹ wody Azydek sodu mo e reagowaæ z o³owiem i miedzi¹ wystêpuj¹cymi w instalacjach kanalizacyjnych, w wyniku czego mog¹ powstaæ silnie wybuchowe azydki metali Po wylaniu przep³ukaæ du ¹ iloœci¹ wody, aby zapobiec gromadzeniu siê azydku 10 Do pobierania wymazów nosowo-gard³owych (NPS) zaleca siê wymazówki poliestrowe lub z koñcówk¹ ze sztucznego jedwabiu na drucie aluminiowym, np wymazówki BBL CultureSwab Mini-Tip (zob Dostêpnoœæ ) Podczas stosowania Directigen Flu A nie s¹ zalecane wymazówki z alginiatu wapniowego 11 Nie stosowaæ zestawu, je eli odczynniki Kontrola + i Kontrola nie daj¹ odpowiednich wyników 12 Usun¹æ urz¹dzenie ColorPAC: Wyj¹æ urz¹dzenie z foliowej torebki bezpoœrednio przed u yciem 13 Kontrola + wirusa grypy typu A zosta³a sporz¹dzona z zawartoœci jaja zaka onego wirusem grypy A (H1N1), które unieczynniono, a nastêpnie przetestowano, wykorzystuj¹c procedury biologiczne Przechowywanie i sposób postêpowania: Przechowywaæ w temperaturze (15 30 C) NIE ZAMRA AÆ POBIERANIE PRÓBEK I OBCHODZENIE SIÊ Z NIMI Patrz ilustracja, str 9 Transport i przechowywanie próbek Œwie e probówki najszybciej jak to mo liwe przesy³aæ do laboratorium w odpowiednim p³ynnym systemie transportowym w temperaturze 2 8 C (zgodnie z wymogami 42 CFR [Code of Federal Regulations] Part 72, dotycz¹cymi miêdzystanowego transportu materia³ów etiologicznych [jeœli dotyczy]) Próbki nale y poddawaæ obróbce jak najszybciej po pobraniu Nie odwirowywaæ próbek przed u yciem testu Directigen Flu A, poniewa usuniêcie materia³u komórkowego wp³ywa niekorzystnie na czu³oœæ testu Bardzo wa ne jest przestrzeganie poprawnych metod pobierania próbek i ich przygotowywania Próbki pobrane na wczesnym etapie choroby zawieraj¹ najwy sze miana wirusa Preferowane jest u ycie œwie ych próbek, poniewa wynikiem ich zamro enia mo e byæ obni ona czu³oœæ testu Unikaæ wielokrotnych cykli zamra ania i rozmra ania Nie przechowywaæ próbek w ch³odziarce z systemem automatycznego rozmra ania Pod³o e transportowe: Nastêpuj¹ce pod³o a transportowe zosta³y przebadane i wykazano, e s¹ kompatybilne z testem Directigen Flu A: Roztwór soli fizjologicznej, stê enie normalne Minimalne pod³o e Earle a (Earle's Minimum Essential Roztwór soli fizjologicznej buforowany fosforanem Media, EMEM) (Phosphate Buffered Saline, PBS) EMEM z hydrolizatem albuminy mleka PBS plus 0,5% elatyny Trypticase Soy Broth (bulion tryptozowo-sojowy) plus PBS plus 0,5% albuminy surowicy bydlêcej 0,5% elatyny (Bovine Serum Albumin, BSA) Pod³o e Minimal Essential Media (MEM) z 1% BSA Bulion infuzyjny cielêcy (Veal Infusion Broth, VIB) Pod³o e M5 Media VIB plus 0,5% BSA Inne pod³o a transportowe mog¹ byæ stosowane, jeœli wykonano odpowiednie badania kwalifikacyjne W celu zachowania œrodków ostro noœci przed u yciem wszystkie pod³o a transportowe powinny byæ badane pod k¹tem stosowania z testem Directigen Flu A Aby dokonaæ kwalifikacji pod³o a transportowego, jego jednakowe objêtoœci nale y posiaæ materia³em o znanej wartoœci dodatniej oraz materia³em o znanej wartoœci ujemnej, a uzyskane próbki zbadaæ za pomoc¹ testu Powinny byæ uzyskane odpowiednie wyniki 2

3 Pobieranie i przygotowywanie próbek Próbki, które mo na badaæ za pomoc¹ testu, to pop³uczyny, wymazy i aspiraty z nosogard³a oraz wymazy z gard³a Pop³uczyny oraz aspiraty z nosogard³a wykazuj¹ przewagê nad wymazami z nosogard³a i gard³a i s¹ traktowane jako próbki pierwszego wyboru Niewystarczaj¹ca iloœæ próbki, niew³aœciwe obchodzenie siê z próbk¹ i/lub niew³aœciwy transport mog¹ spowodowaæ otrzymanie fa³szywych negatywnych wyników W zwi¹zku z tym, zaleca siê przeszkolenie personelu w pobieraniu próbek z powodu wagi, jak¹ odgrywa jakoœæ próbek w uzyskaniu dok³adnych wyników badania UWAGA: Próbki o nadmiernej zawartoœci œluzu mog¹ byæ sporadycznie nieabsorbowane przez b³onê ColorPAC lub dawaæ wyniki niemo liwe do interpretacji Próbki tego typu mo na rozcieñczyæ w proporcji 1:4 za pomoc¹ 0,9% roztworu soli lub skorygowaæ za pomoc¹ 0,9% roztworu soli do standardu McFarland #1, ich zawartoœæ dok³adnie wymieszaæ i ponownie przebadaæ jednakowe objêtoœci 125 µl Procedura stosowana w przypadku pop³uczyn nosowo-gard³owych: 2 1 Zalecana objêtoœæ pop³uczyn nosowo-gard³owych to 2 3 ml 2 Nadmierna objêtoœæ pop³uczyn mo e wp³yn¹æ na zmniejszenie czu³oœci testu 3 Próbkê nale y poddaæ obróbce zgodnie z opisem w rozdziale Procedura testowa Procedura stosowana w przypadku aspiratów nosowo-gard³owych: 2 1 Próbki aspiratów nosowo-gard³owych o objêtoœci mniejszej ni 0,5 ml rozcieñczyæ przed badaniem w co najmniej 2 3 ml pod³o a transportowego lub roztworu soli fizjologicznej 2 Próbki aspiratów wiêksze ni 0,5 ml wymagaj¹ dodania co najmniej 4 ml pod³o a transportowego lub roztworu soli fizjologicznej 3 Próbkê nale y poddaæ obróbce zgodnie z opisem w rozdziale Procedura testowa Procedury stosowania wymazów nosowo-gard³owych lub gard³owych: 12 1 Wymazy mo na natychmiast po pobraniu umieœciæ w 1 2 ml pod³o a transportowego lub roztworu soli fizjologicznej 2 Wymazówkê dobrze wymieszaæ w pod³o u transportowym lub roztworze soli fizjologicznej 3 Mo liwie najdok³adniej wycisn¹æ wymazówkê 4 Wyrzuciæ wymazówkê do odpowiedniego pojemnika na odpadki 5 Próbkê nale y poddaæ obróbce zgodnie z opisem w rozdziale Procedura testowa PROCEDURY Dostarczane materia³y: Zapoznaj siê z informacjami na temat dostarczonych materia³ów w rozdziale Odczynniki Materia³y niezbêdne, ale niedostarczane: Wyposa enie i sprzêt laboratoryjny konieczne do transportowania, przechowywania, obróbki i przydzielania próbek Przeprowadzanie testu: Przegl¹d rozdzia³ów: Ostrze enia i œrodki ostro noœci, Pobieranie próbek i postêpowanie z nimi oraz Wyniki Odczynniki, próbki oraz urz¹dzenia ColorPAC musz¹ mieæ temperaturê pokojow¹ (15 30 C) podczas stosowania Procedura Testowa Umieœciæ urz¹dzenie DispensTube w okreœlonym miejscu w stacji roboczej Przygotowanie ColorPAC Sprawdziæ, czy kontroler przep³ywu jest œciœle dopasowany do urz¹dzenia ColorPAC 3

4 Ekstrakcja próbki Dok³adnie wymieszaæ próbkê Przenieœæ pipet¹ 125 µl próbki do urz¹dzenia DispensTube lub nape³niæ do poziomu oznakowania na skalibrowanej pipecie transportowej Przenieœæ próbkê do urz¹dzenia DispensTube Odczynnik A delikatnie zamieszaæ Wprowadziæ 8 kropli do urz¹dzenia DispensTube Dok³adnie wymieszaæ rêcznie lub za pomoc¹ urz¹dzenia vortex UWAGA: kontrola jakoœci W celu wykonania kontroli jakoœci zamiast próbek od pacjentów mo na u yæ odczynników Kontrola + lub Kontrola Wprowadziæ do urz¹dzenia DispensTube 4 krople dok³adnie wymieszanej Kontroli + lub Kontroli, a nastêpnie 8 kropli odczynnika A Dok³adnie wymieszaæ Uzyskiwanie barwy Umieœciæ koñcówkê w urz¹dzeniu DispensTube UWAGA: Nie stosowaæ koñcówek z innych produktów Directigen Obróciæ i ostro nie wycisn¹æ Odmierzyæ kroplami, jedna po drugiej, wyekstrahowan¹ próbkê (unikaj¹c tworzenia zbyt wielu pêcherzyków) do studzienki w urz¹dzeniu ColorPAC Jeœli próbka nie zostanie wch³oniêta do urz¹dzenia w ci¹gu 5 minut, nale y j¹ rozcieñczyæ w sposób opisany w rozdziale Pobieranie i przygotowywanie próbek i poddaæ ponownemu badaniu Odczynnik 1 delikatnie zamieszaæ Szybko zakropliæ a do nape³nienia studzienki (Oko³o 10 kropli ) Usun¹æ kontroler przep³ywu Zu yty sprzêt wyrzuciæ jako stanowi¹cy zagro enie biologiczne Odczynnik 2 delikatnie zamieszaæ Wprowadziæ 4 krople na b³onê ColorPAC Odczynnik 3 delikatnie zamieszaæ Wprowadziæ 4 krople na b³onê ColorPAC Odstawiæ na 2 minut Odczynnik 4 delikatnie zamieszaæ Szybko zakropliæ a do nape³nienia studzienki ColorPAC (Oko³o 12 kropli ) 4

5 Odczynnik 5 delikatnie zamieszaæ Wprowadziæ 4 krople na b³onê ColorPAC Odczynnik 6 delikatnie zamieszaæ Wprowadziæ 4 krople na b³onê ColorPAC UWAGA: B³ona zmieni kolor na ó³ty Odczynnik 7 delikatnie zamieszaæ Wprowadziæ 4 krople na b³onê ColorPAC Odstawiæ na 5 minut Kontrola jakoœci: Ka de urz¹dzenie Directigen Flu A ColorPAC zawiera wewnêtrzne kontrole dodatnie i ujemne (tj dwa poziomy) Pojawienie siê purpurowej kropki kontrolnej zapewnia wewnêtrzn¹ dodatni¹ kontrolê reaktywnoœci, stanowi¹c¹ dowód na skutecznoœæ immunologiczn¹ urz¹dzenia i odpowiednie dzia³anie odczynników oraz zapewniaj¹c¹ prawid³owe wykonanie w³aœciwej procedury Obszar b³ony otaczaj¹cej trójk¹t umo liwia Poziom 1 negatywn¹ kontrolê wewnêtrzn¹ w danym urz¹dzeniu Brak widocznego zabarwienia w obrêbie tego obszaru t³a wskazuje, e test zosta³ wykonany poprawnie Z ka dym zestawem jest równie dostarczana p³ynna kontrola dodatnia (Kontrola +) i ujemna (Kontrola ) Kontrole te stanowi¹ element dodatkowej kontroli jakoœci Powinny byæ wykonywane w celu przeprowadzenia kontroli jakoœci procedur przynajmniej raz dla ka dej partii otrzymanych urz¹dzeñ Pojawienie siê purpurowego trójk¹ta na b³onie podczas Kontroli + dowodzi, e b³ona ma w³aœciwoœci wi¹zania antygenu grypy A Nie Poziom 2 stosowaæ systemu, je eli odczynniki Kontroli + i Kontroli nie wyka ¹ odpowiednich wyników Kontrole p³ynne mog¹ byæ tak e stosowane w celu wykazania reakcji dodatniej lub ujemnej Kontrola + wyka e siln¹ reakcjê dodatni¹ zgodnie z opisem w Procedurze testowej Mo na wykonywaæ i badaæ rozcieñczenia (maksymalnie 1:2) Kontroli + z sol¹ w celu wykazania s³abszej reakcji Skutecznoœæ odczynników oraz stosowanej techniki mo na tak e oceniæ za pomoc¹ próbek o znanej wartoœci dodatniej lub ujemnej Nale y postêpowaæ zgodnie z obowi¹zuj¹cymi wymogami kontroli jakoœci, wynikaj¹cymi z przepisów miejscowych, krajowych i (lub) federalnych, wymogami akredytacji i rutynowymi procedurami kontroli jakoœci w danym laboratorium Zaleca siê, aby u ytkownik stosowa³ siê do odpowiednich zaleceñ CLSI (dawnie NCCLS) i przepisów CLIA dotycz¹cych sposobów kontroli jakoœci 5

6 WYNIKI Wynik nale y odczytywaæ w ci¹gu 25 minut w dobrze oœwietlonym miejscu i notowaæ OPCJONALNIE Aby wyd³u yæ czas odczytu wyników do maksymalnie 12 h, nale y zakropliæ 4 krople odczynnika 8 (roztworu zatrzymuj¹cego) na b³onê ColorPAC Wynik testu dodatni (obecny antygen) Pojawienie siê purpurowego trójk¹ta (o dowolnym natê eniu) na b³onie ColorPAC wskazuje, e w próbce zosta³ wykryty antygen grypy A Ten wynik nie rozpoznaje adnego podtypu wirusa grypy typu A Kolor t³a powinien byæ bia³o-szary Barwa fioletowa mo e wystêpowaæ w œrodku trójk¹ta, chyba e jest zamaskowana intensywn¹ reakcj¹ dodatni¹ Dodatni Wynik testu ujemny (brak antygenu) Brak purpurowego trójk¹ta wskazuj¹cego antygen grypy A w próbce Te wyniki nie wykluczaj¹ zaka enia wirusem grypy Na b³onie ColorPAC pojawia siê purpurowa kropka, wskazuj¹ca prawid³owe wykonanie procedury testowej i odczynników Kolor t³a powinien byæ bia³o-szary Ujemny Test niemo liwy do interpretacji Je eli nie jest widoczna ani purpurowa kropka, ani purpurowy trójk¹t Test, w którym powstaje niekompletny trójk¹t, tak e nale y uznaæ za niemo liwy do zinterpretowania W razie powstania takiego wyniku test nale y powtórzyæ Wyniku testu nie mo na równie interpretowaæ, je eli na b³onie ColorPAC pojawia siê bia³y trójk¹t, a t³o otaczaj¹ce b³onê jest purpurowe W œrodku bia³ego trójk¹ta mo e byæ widoczna przyt³umiona barwna kropka kontrolna Aby rozwi¹zaæ ten problem, nale y rozcieñczyæ próbkê w stosunku 1:4 0,9% roztworem soli fizjologicznej lub pod³o a transportowego i powtórzyæ test Próbki o nadmiernej zawartoœci œluzu mog¹ byæ nieabsorbowane przez b³onê ColorPAC lub dawaæ wyniki niemo liwe do interpretacji Mo na je rozcieñczyæ w proporcji 1:4 roztworem soli fizjologicznej, dobrze wymieszaæ i ponownie przebadaæ Jeœli bêdzie potrzebna pomoc, nale y skontaktowaæ siê z lokalnym przedstawicielem firmy BD OGRANICZENIA PROCEDURY Za pomoc¹ tego testu nie mo na ustaliæ etiologii zaka eñ dróg oddechowych wywo³anych przez drobnoustroje inne ni wirus grypy A Test Directigen Flu A mo e tak e s³u yæ do wykrywania ywych i niezdolnych do ycia cz¹stek wirusa grypy typu A Skutecznoœæ testu Directigen Flu A zale y od zawartoœci antygenów i mo e nie mieæ zwi¹zku z wynikami hodowli komórkowych z tej samej próbki Niskie poziomy wydalania wirusów mog¹ daæ fa³szywy negatywny wynik Oznacza to, e ujemny wynik testu nie wyklucza mo liwoœci zaka enia wirusem grypy typu A Diagnoza pacjenta zawsze powinna obejmowaæ wyniki testu laboratoryjnego oraz wszystkie dostêpne informacje kliniczne Nie okreœlono przydatnoœci testu Directigen Flu A w celu identyfikacji/potwierdzania kolonii hodowli komórkowych Cechy wyników dla wirusa grypy typu A zosta³y ustalone, kiedy wirusy A/H3 i A/H1 by³y przewa aj¹cymi wirusami grypy typu A w obiegu Kiedy wy³aniaj¹ siê inne wirusy grypy typu A, cechy wyników mog¹ siê ró niæ Dzieci mog¹ wydalaæ wirusy przez d³u sze okresy ni osoby doros³e, co mo e spowodowaæ ró nice w czu³oœci miêdzy doros³ymi i dzieæmi Pozytywne i negatywne wartoœci okreœlaj¹ce zale ¹ w wysokim stopniu od prewalencji Fa³szywe pozytywne wyniki testu s¹ bardziej prawdopodobne w okresach niskiej aktywnoœci grypy, kiedy prewalencja jest umiarkowana lub niska WARTOŒCI OCZEKIWANE Liczba wyników dodatnich obserwowana w testach wirusa grypy ró ni siê w zale noœci od metody pobierania próbek, sposobu postêpowania/transportu, metody wykrywania, okresu roku, wieku pacjenta, lokalizacji geograficznej oraz, co najwa niejsze, czêstoœci wystêpowania na danym obszarze CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŒCIOWA Dok³adnoœæ kliniczna: Kliniczn¹ wydajnoœæ testu Directigen Flu A oceniano w badaniach prospektywnych prowadzonych w piêciu niezale nych oœrodkach badawczych w trzech rejonach geograficznych USA w okresie zapadalnoœci na grypê w latach Przy u yciu testu Directigen Flu A zbadano ogóln¹ liczbê 1100 próbek pop³uczyn (NPW), wymazów (NPS), aspiratów (NPA) nosowo-gard³owych oraz wymazów gard³owych (PS), uzyskanych od pacjentów z objawami grypy Ponadto retrospektywnie w laboratorium producenta oceniono równie 29 zamro onych próbek NPS Hodowla komórkowa (CC) by³a jedyn¹ pierwszorzêdow¹ metod¹ referencyjn¹, dla której w razie potrzeby do rozwi¹zywania rozbie noœci stosowano analizê hamowania (BA) pod warunkiem dostêpnoœci odpowiedniej iloœci materia³u próbki Ogólne wyniki dla ka dego rodzaju próbki zamieszczono w Tabeli 1 6

7 Tabela 1 Zgodnoœæ pomiêdzy testem Directigen Flu A oraz wynikami referencyjnymi Rodzaj ¹czna Czu³oœæ Swoistoœæ próbki liczba jedynie CC * CC + BA ** jedynie CC CC + BA NPA % (68/74) 94% (90/96) 88% (568/643) 95% (568/597) NPW % (23/24) 96% (24/25) 90% (136/151) 91% (136/150) PS % (10/15) 80% (20/25) 92% (156/168) 99% (156/158) NPS 54 88% (21/24) 88% (22/25) 97% (29/30) 100% (29/29) * Metoda weryfikacji hodowli komórkowej: Szczepiono dwie probówki komórek nerki pierwotnego rezusa (Primary Rhesus Monkey Kidney) i hodowano przez dni We wszystkich ujemnych hodowlach CPE przynajmniej raz na 3 5 dni, a nastêpnie w ostatnim dniu hodowli przeprowadzono hemadsorpcjê z erytrocytami œwinki morskiej Wirus grypy A definiowano ostatecznie w hodowlach, w których wyst¹pi³ dodatni test hemadsorpcji dla fluorescencyjnych koniugatów antysurowic grypy A ** 24/75 próbek ujemnych w hodowli, dodatnich w teœcie Directigen okreœlono jako niewystarczaj¹c¹ iloœæ do wykonania testu blokowania i usuniêto z bazy Ogólnie czu³oœæ testu Directigen Flu A dla wszystkich wymienionych wy ej rodzajów próbek, badanych w hodowli i referencyjnym teœcie hamowania, wynosi³a 91% (156/171), a swoistoœæ 95% (889/934) W sumie 28 próbek (2,6%) w tym badaniu, które pierwotnie da³y wynik niemo liwy do interpretacji, po rozcieñczeniu i ponownym przebadaniu wykaza³y wyniki prawid³owe Ocena oraz powtarzalnoœæ wyników w gabinecie lekarskim: Niniejszy test by³ oceniany w 4 gabinetach lekarskich na bazie 160 próbek wymazów z nosa in vitro Ocenê tê przeprowadza³y nastêpuj¹ce gabinety lekarskie: dwie ma³y (1 lekarz), jeden œredni (6 lekarzy) oraz jeden du y (9 lekarzy), a do badania zaanga owano lekarza, recepcjonistkê, pielêgniarkê oraz wykwalifikowanego technika laboratorium Badane próbki sk³ada³y siê z 13 ujemnych, 15 s³abo dodatnich oraz 12 umiarkowanie do wysoko dodatnich próbek badanych w ka dym laboratorium metod¹ próby œlepej w ci¹gu 3 dni Wykazano 100% korelacjê pomiêdzy uzyskanymi i zaakceptowanymi wynikami w czterech laboratoriach Reaktywnoœæ krzy owa/badania interferencji Bakterie i wirusy (Tabela 2 i Tabela 3) zosta³y wykorzystane do oceny reaktywnoœci krzy owej i badania interferencji w teœcie Directigen Flu A Nie wykazano reakcji krzy owych oraz interferencji w odniesieniu do dowolnego drobnoustroju poddanego niniejszej analizie Tabela 2 Panel reakcji krzy owych/badania interferencji z bakteriami Streptococcus pyogenes Lactobacillus casei Streptococcus sp gr B Streptococcus sanguis Staphylococcus aureus Gardnerella vaginalis Streptococcus sp gr C Chlamydia trachomatis Pseudomonas aeruginosa Streptococcus pneumoniae Streptococcus sp gr F Chlamydia psittaci Serratia marcescens Neisseria meningitidis Streptococcus sp gr G Mycoplasma pneumoniae Staphylococcus epidermidis Haemophilus influenzae Lactobacillus plantarum Mycobacterium avium Acinetobacter calcoaceticus Neisseria gonorrhoeae Listeria monocytogenes Mycobacterium intracellulare Klebsiella pneumoniae Corynebacterium diphtheriae Mycobacterium tuberculosis Legionella pneumophila Escherichia coli Bordetella pertussis Proteus vulgaris Mycoplasma orale Streptococcus faecalis Bacteroides fragilis Moraxella catarrhalis Candida albicans Streptococcus mutans Neisseria sicca Tabela 3 Panel reakcji krzy owych/badania interferencji z wirusami Influenza B Great Lakes HSV typ 1 Wirus cytomegalii typ A9 Rhinowirus typ 13 Influenza B Hong Kong HSV typ 2 Wirus Coxsackie typ A9 Rhinowirus typ 15 Adenowirus typ 3 Wirus paragrypy typ 1 Wirus Coxsackie typ B5 Rhinowirus typ 37 Adenowirus typ 5 Wirus paragrypy typ 2 Wirus Coxsackie typ B6 VZV Adenowirus typ 7 Wirus paragrypy typ 3 Wirus Echo typ II RSV Adenowirus typ 10 Rhinowirus typ 1A Wirus Echo typ 3 Adenowirus typ 18 Rhinowirus typ 2 Wirus Echo typ 6 7

8 Reaktywnoœæ Reaktywnoœæ testu Directigen Flu A badano za pomoc¹ nastêpuj¹cych szczepów wirusa grypy A, okreœlonych jako reaktywne A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) A/England/648/89 (H3N2) A/Victoria/3/75 (H3N2) A/Taiwan/1/86 (H1N1) A/Victoria/5/89 (H3N2) A/Beijing/352/89 (H3N2) A/New Jersey/8/76 (HSW1N1) A/Czechoslovakia/16/89 (H3N2) A/Fukushima/2/88 (H1N1) A2/Taiwan/1/64 (H2N2) A/Shanghai/11/87 (H3N2) A/Trinidad/2/B6 (H1N1) A/Japan/170/62 (H2N2) A/NWS/33 (H1N1) A/Victoria/43/88 (H1N1) A/Japan/305/57 (H2N2) A/Port Chalmers/1/73 (H3N2) A/Sichuan/4/88 (H1N1) UWAGA: Nie ustanowiono cech wyników w celu wykrywania wirusa grypy typu A w próbkach ludzkich, kiedy wy³aniaj¹ siê inne podtypy wirusa typu A ni A/H3 i A/H1 jako ludzkie czynniki chorobotwórcze Powtarzalnoœæ Powtarzalnoœæ testu Directigen Flu A oceniano w badaniu z wieloma próbkami Piêciokrotnie badano zestaw sk³adaj¹cy siê z piêciu ró nych rodzajów antygenów grypy A (od s³abego do silnego) oraz kontroli ujemnej, stosuj¹c jedn¹ seriê produktu Directigen Flu A Badanie przeprowadzono jednego dnia, a wyniki by³y odczytywane przez kilka osób Uzyskano 100% dok³adnoœæ dla wszystkich dodatnich próbek oraz kontroli ujemnych DOSTÊPNOŒÆ Numer kat Opis Zestaw Directigen Flu A (wirus grypy typu A), 20 oznaczeñ BBL CultureSwab Mini-Tip, pojedyncze wymazówki, pude³ko 100 szt PIŒMIENNICTWO 1 Harris, P O : Clinical relevance and efficient detection of seven major respiratory viruses ACL 1989, p Kendal, A P : Influenza Viruses Laboratory Diagnosis of Viral Infections, Edwin H Lennette, ed Marcel Dekker, Inc, New York 1985, p McQuillin, J, Madeley, C R, and Kendal, A P : Monoclonal antibodies for the rapid diagnosis of influenza A and B virus infections by immunofluorescence Lancet 1985, ii: Guenthner, S H, and Linnemann, C C, Jr : Indirect immunofluorescence assay for rapid diagnosis of influenza virus Laboratory Medicine 1988, 19: Minnick, L L, and Ray, C G : Early testing of cell cultures for detection of hemadsorbing viruses J Clin Microbiol 1986, 25: Schmidt, N J, Ota, M, Gallo, D, and Fox, V L : Monoclonal antibodies for rapid, strain specific identification of influenza virus isolates J Clin Microbiol 1982, 16: Kendal, A P and Dowdle, W R 1986 Influenza Virus, Chapter 79, In Manual of clinical laboratory immunology, 3rd ed Lennette et al, American Society for Microbiology, National Committee for Clinical Laboratory Standards 2001 Approved Guideline M29-A2 Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed NCCLS, Wayne, Pa 9 Garner, J S 1996 Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U S Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention Guideline for isolation precautions in hospitals Infect Control Hospital Epidemiol 17: U S Department of Health and Human Services 1999 Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed U S Government Printing Office, Washington, D C 11 Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC) Official Journal L262, 17/10/2000, p Dowdle, W R, Kendal, A P, and Noble, G R 1980 Influenza Virus, Chapter 82, In Manual of clinical microbiology, 3rd ed Lennette et al, American Society for Microbiology,

9 Zasady pobierania próbek 70 Obróciæ g³owê pacjenta pod k¹tem 70 stopni A B C Nozdrza Dolny przyœrodkowy obszar dolnej ma³ owiny nosowej Tylna œciana gard³a (tylna czêœæ nosogard³a) A B C 1 Pobieranie pop³uczyn nosowo-gard³owych Wype³niæ roztworem soli fizjologicznej strzykawkê 3 5 ml przymocowan¹ do kauczukowej 20 cm probówki Mo na stosowaæ równie bañkê kauczukow¹ Wprowadziæ koniec kauczukowej probówki lub bañki do jamy nosowej przez nozdrza Wstrzykn¹æ roztwór soli i natychmiast odzyskaæ go, aspiruj¹c 2 Pobieranie aspiratów nosowo-gard³owych Pod³¹czyæ jedn¹ probówkê czêœci aspiracyjnej do pompki aspiracyjnej i wprowadziæ drug¹ probówkê do jamy nosowej przez nozdrza Uruchomiæ pompkê aspiracyjn¹ i pobraæ aspirat z jamy nosowej do czêœci aspiracyjnej 3 Pobieranie wymazów nosowo-gard³owych Wprowadziæ wymazówkê przez nozdrza przednie do tylnej czêœci nosogard³a, obróciæ wacik kilka razy, pobieraj¹c próbki nab³onka b³ony œluzowej nosa 4 Pobieranie wymazów z gard³a Wprowadziæ wymazówkê do gard³a przez jamê ustn¹ Pobraæ próbki nab³onka b³ony œluzowej, pocieraj¹c tyln¹ œcianê gard³a, podniebienie oraz migda³ki, ze szczególnym uwzglêdnieniem obszarów pokrytych rumieniem 9

10 10

11 B m Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland USA A BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon, County Clare, Ireland Tel: Fax: BD, BD Logo, BBL, Directigen, ColorPAC, DispensTube and Trypticase are trademarks of Becton, Dickinson and Company CultureSwab is a trademark of Difco Laboratories, subsidiary of Becton, Dickinson and Company 2006 BD