Mikroorganizm Metoda Uwagi. A. acidoterrestris, Microbiologics 0265, powinien być inkubowany w 45 C. Alternaria sp. Metoda 5

Transkrypt

1 Polecane warunki wzrostu dla mikroorganizmów Wybór warunków ożywiania Preferowane jest stosowanie nieselektywnych pożywek agarowych. Wzrost w pożywkach bulionowych powinien być stosowany tylko w specjalnych okolicznościach lub gdy jest polecany. Ponieważ uwadnianie liofilizatu wymaga wielu czynności, czystość szczepu jest trudna do utrzymania w bulionie. Zanieczyszczenie może całkowicie przerastać i przesłaniać obecność szczepu ożywianego. 2. Poniższa lista zawiera informację, która metoda powinna być użyta do wzrostu poszczególnych szczepów. Opis metod znajduje się pod listą. 3. Poniżej zamieszczono informacje dotyczącą metod wzrostu mikroorganizmów. Jeśli było to możliwe, dla każdej metody zamieszczono kilka pożywek do wyboru. Mikroorganizm Metoda Uwagi Acetobacter sp. Metoda 3 Inkubacja w 25 C w CO2 przez 3 do 4 dni. Achromobacter sp. Metoda 1 Acinetobacter sp. Metoda 1 Actinobacillus sp. Metoda 3 Actinomyces sp. Metoda 4 Aerococcus sp. Metoda 1 Aeromonas sp. Metoda 2 A. hydrophila powinna być inkubowana w 30 C. A. salmoncida powinna być inkubowana w 25 C. Aggregatibacter sp. Metoda 3 Alcaligenes sp. Metoda 1 Alicyclobacillus sp. Metoda 12 A. acidoterrestris, Microbiologics 0265, powinien być inkubowany w 45 C. Alternaria sp. Metoda 5 Alloiococcus sp. Metoda 2 Amylomyces sp. Metoda 5 Aneurinibacillus sp. Metoda 1 TIB.081 Rev F Strona 1 z 11

2 Aquaspirillum sp. Metoda 1 Inkubacja w 25 C przez 6 dni. Arcanobacterium sp. Metoda 2 Arthrobacter sp. Metoda 1 Inkubacja w 25 C. Aspergillus sp. Metoda 5 A. flavus nie wyrasta dobrze na Standard Methods Agar (Plate Count Agar). Aureobasidum sp. Metoda 5 Bacillus sp. sp. Metoda 1 Niektóre Bacillus sp. wykazują lepszy odzysk przy przesiewaniu, gdy hodowla robocza do przechowywania utrzymywana jest raczej w temperaturze pokojowej niż w 2 C do 8 C. Bacteroides sp. Metoda 4 Bifidobacterium sp. Metoda 4 B. ureolyticus powinien być inkubowany przez 5 dni. Kolonie są bardzo małe. Do uzyskania odpowiedniej biomasy do badań powinno być posiane kilka płytek. B. animalis subsp. animalis dobrze rośnie tylko na Anaerobic Blood Agar lubtryptic Soy Agar. Bordetella bronchiseptica Metoda 15 Bordetella parapertussis Metoda 16 Bordetella pertussis Metoda 16 Brevibacillus sp. sp. Metoda 1 Brevundimonas sp. Metoda 1 Brochothrix sp. sp. Metoda 1 Inkubacja w 25 C. Budvicia sp. Metoda 1 Inkubacja w 25 C. Burkholderia sp. sp. Metoda 1 Chaetomium sp. Metoda 5 Campytobacter sp. sp. Metoda 6 Agar czekoladowy jest najlepszą pożywką do ożywiania C. jejuni. Nie otwierać posianej płytki z agarem przez pierwsze 48 godzin. Candida sp. Metoda 5 Capnocytophaga sp. Metoda 3 Cedecea sp. Metoda 1 Cellulosimicrobium sp. sp. Metoda 1 Chryseobacterium shigense Metoda 1 Inkubacja w 30 C. Citrobacter sp. sp. Metoda 1 TIB.081 Rev F Strona 2 z 11

3 Cladosporium sp. Metoda 5 Clostridium sp. sp. Metoda 4 C. difficile, C. sordellii, i C. tetani rośnie tylko na Anaerobic Blood Agar. C. perfringens nie rośnie dobrze na Nutrient Agar. Corynebacterium sp. Metoda 1 Dla C. urealyticum stosować metodę 2. Cronobacter sp. sp. Metoda 1 Curtobacterium sp. Metoda 1 Cryptococcus sp. Metoda 5 Cryptococcus musi być inkubowany w 25 C. C. gattii najlepeij rośnie na Malt Extract Agar lub Sabouraud Dextrose Emmons Agar. Cryptococcus słabo wyrasta na pożywce nieselektywnej z krwią Deinococcus sp. Metoda 1 Delftia sp. Metoda 1 Desulfotomaculum sp. Metoda 17 Edwardsiella sp. Metoda 1 Eggerthella sp. Metoda 4 Eikenella sp. Metoda 3 Elizabethkingia sp. Metoda 1 Enterobacter sp. Metoda 1 Enterococcus sp. Metoda 1 Erysipelothrix sp. Metoda 2 Escherichia coli Metoda 1 Exiguobacterium sp. Metoda 1 Finegoldia sp. Metoda 4 Inkubacja od 72 do 96 godzin w warunkach beztlenowych. Fluoribacter sp. Metoda 8 Fusarium sp. Metoda 5 Fusobacterium sp. Metoda 4 Gardnerella sp. Metoda 9 Gemella sp. Metoda 4 TIB.081 Rev F Strona 3 z 11

4 Geobacillus sp. Metoda 1 G. stearothermophilus musi być inkubowany w 55 C. G. stearothermophilus, Microbiologics 0137, nie rośnie na pożywce z krwią owczą. Geotrichum sp. Metoda 5 Granulicatella adiacens Metoda 19 Haemophilus sp. Metoda 3 Hafnia sp. Metoda 1 Issatchenkia sp. Metoda 5 Kingella sp. Metoda 2 Inkubacja w 5-10% CO2. Klebsiella sp. Metoda 1 Kloeckera sp. Metoda 5 Kocuria sp. Metoda 1 K. rosea powinna być inkubowana w 25 C. Lactobacillus sp. Metoda 11 Lactococcus sp. Metoda 2 Leclercia sp. Metoda 1 Legionella sp. Metoda 8 Listeria sp. Metoda 1 Lysinibacillus sp. Metoda 1 Macrococcus sp. Metoda 1 Malassezia sp. Metoda 14 Mannheimia sp. Metoda 1 Methylobacterium sp. Metoda 1 Microbacterium sp. Metoda 1 Inkubacja w 25 C przez 5 dni. Dobrze wyrasta na Standard Methods Agar (Plate Count Agar). Nie wyrasta na Tryptic Soy Agar (Soybean Casein Digest Agar) lub nieselektywnym Sheep Blood Agar. M. extorquens uzyskuje dobry wzrost na R2A Agar w 72 godziny w 30 C. Inkubacja w 30 C. TIB.081 Rev F Strona 4 z 11

5 Micrococcus sp. Metoda 1 Microsporum sp. Metoda 5 M. luteus, Microbiologics 0337 i 0689 najlepiej wyrasta na Tryptic Soya Agar (Soybean Casein Digest Agar) lub na nieselektywnym agarze z krwią owczą. M. luteus, Microbiologics 0689, powinien być inkubowany na Standard Methods Agar (Plate Count Agar) przez min. 72 godz. M. canis słabo wyrasta na Sabouraud Dextrose Agar. Moraxella sp. Metoda 2 Morganella sp. Metoda 1 Mucor racemosus Metoda 5 Mycobacterium sp. Metoda 7 Mycoplasma sp. Metoda 18 Myroides sp. Metoda 2 Neisseria sp. Metoda 3 Nocardia sp. Metoda 1 Novosphingobium sp. Metoda 1 M. gordonae, M. terrae and M. tuberculosis może wymagać powyżej 1 miesiąca inkubacji. M. haemophilium powinno wyrastać na Middlebrook 7H11 Agar i być inkubowane w 30 C w 5 do 7% CO2 przez 3 do 4 tygodni. Pasek z czynnikiem X musi być umieszczony na agarze, aby uzyskać wzrost. Agar czekoladowy jest najlepszą pożywką dla zainicjowania wzrostu Neisseria sp. Nie otwierać posianych płytek przez pierwsze 48 godzin jeśli stosuje się hodowlę w słoju ze świeczką. Inkubacja w 25 C. Ochrobactrum sp. Metoda 1 Oligella sp. Metoda 2 Paecilomyces sp. Metoda 5 Paenibacillus sp. Metoda 1 Parabacteroides sp. Metoda 4 Parvimonas sp. Metoda 4 Pasteurella sp. Metoda 2 Pediococcus sp. Metoda 11 P. larvae powinien być inkubowany tlenowo w 30 C. P. micra wymaga 5 do 7 dni inkubacji beztlenowej. P. damnosus może wyrastać w MRS bulion w 25 C przez 48 do 72 godzin. Przesiać z bulionu na MRS Agar, gdy uzyska się zmętnienie. Inkubować agar w 25 C w 5 do 7% CO2 przez 72 do 96 godzin. Alternatywnie, liofilizat może wyrastać bezpośrednio na MRS Agar w 25 C w 5 do 7% CO2 przez 5 do 7 dni. Penicillium sp. Metoda 5 TIB.081 Rev F Strona 5 z 11

6 Peptoniphilus sp. Metoda 4 Inkubacja 72 do 96 godzin w atmosferze beztlenowej. Peptostreptococcus sp. Metoda 4 Plesiomonas sp. Metoda 1 Porphyromonas sp. Metoda 4 Prevotella sp. Metoda 4 Propionibacterium sp. Metoda 4 Proteus sp. Metoda 1 Wymagane 5 do 7 dni w atmosferze beztlenowej. Wymagane 5 do 7 dni w atmosferze beztlenowej. Wymagane 3 do 5 dni w atmosferze beztlenowej. P. hauseri rośnie najlepiej na Blood and Tryptic Soy Agar. Prototheca sp. Metoda 5 Providencia sp. Metoda 1 Pseudomonas sp. Metoda 1 Ralstonia sp. Metoda 1 P. fluorescensand P. protogens powinien być inkubowany w 25 C. Pseudomonas species, Microbiologics 0162, i P. putida, Microbiologics 0627 i 0702, powinien być inkubowany w 30 C. P. aeruginosa, Microbiologics 0484, słabo rośnie na Nutrient Agar. Raoultella sp. Metoda 1 Rhizopus sp. Metoda 5 Rhodococcus sp. Metoda 2 Rhodotorula sp. Metoda 5 Saccharomyces sp. Metoda 5 Sabouraud Dextrose Emmons Agar jest najlepszym podłożem do wzrostu Saccharomyces sp. Salmonella sp. Metoda 1 Scopulariopsis sp. Metoda 5 Serratia sp. Metoda 1 Shewanella sp. Metoda 10 Shigella sp. Metoda 1 Sphingobacterium sp. Metoda 1 Sphingomonas sp. Metoda 1 Inkubować w 25 C. Sporidobolus sp. Metoda 5 TIB.081 Rev F Strona 6 z 11

7 Staphylococcus sp. Metoda 1 Stenotrophomonas sp. Metoda 1 Streptococcus sp. Metoda 2 Streptomyces sp. Metoda 5 Thermoanaerobacterium sp. Metoda 4 Trichoderma sp. Metoda 5 Trichophyton sp. Metoda 5 Stopień odporności S. aureus, Microbiologics 0158 na Vancomycin zmniejsza się w zależności od wieku kultury, rodzaju podłoża i liczby przesiewów. Najlepszy wzrost szczepu na Brian Heart Infusion Agar z 4mcg/ml Vancomycin. Inkubować w 30 C. S. criceti trzeba inkubować w mikroaerofilnym środowisku. Streptococcus sp., Microbiologics 0978 powinien wzrastać w obecności CO2. Streptococcus dobry wzrost na Columbia CNA Agar z 5% Sheep Blood. Podstawowym podłożem do wzrostu T. thermosaccharolyticum, Microbiologics 0728 jest Cooked Meat Medium. Inkubować w 45 C przez 72 godziny. Po zainicjowaniu wzrostu dalszy wzrost na Anaerobic Blood Agar, który jest inkubowany w 45 C przez 72 godziny w atmosferze beztlenowej. Inkubować przez 7 to 14 dni. Trichosporon sp. Metoda 5 Ureaplasma sp. Metoda 13 Veillonella sp. Metoda 4 Vibrio sp. Metoda 10 V. alginolyticus, Microbiologics 0819 słabo rośnie na Tryptic Soy Agar (Soybean Casein Digest Agar), najlepiej rośnie na Marine Agar. Virgibacillus sp. Metoda 1 Wallemia sebi Metoda 5 Yarrowia sp. Metoda 5 Yersinia sp. Metoda 1 Y. ruckeri, Microbiologics 0785 powinien być inkubowany w 25 C. Z. bailii, Microbiologics słabo rośnie na nieselektywnym Zygosaccharomyces sp. Metoda 5 Sheep Blood Agar, Nutrient Agar lub Tryptic Soy Agar (Soybean Casein Digest Agar). TIB.081 Rev F Strona 7 z 11

8 Metoda 1 Trypton Soja Agar - CM 131, lub Agar krwawy CM 55 + krew, lub Agar do ogólnej liczby CM 325, lub Agar Odżywczy - CM 3; 35 0 C, godzin. Metoda 2 Nieselektywny agar krwawy, (CM 55 + krew) w warunkach tlenowych przez godzin w 35 0 C, Wzrost niektórych gatunków takich jak Streptococcus i Arcanobacterium jest lepszy w atmosferze wzgogaconej w 5%-7% CO 2 polecane jest dla hodowli Streptococcus pneumoniae i innych streptokoków z grupy viridians. Metoda 3 Agar czekoladowy z hemoglobiną i NAD CM krew + SR 158; 35 0 C, 5%-7% CO 2, godzin. Metoda 4 Agar krwawy do beztlenowców CM krew; w 35 0 C, warunki beztlenowe, godziny. Niektóre bezwzględne beztlenowce wymagają od 5 do 7 dni. Świeżo przygotowany Trypton Soja Agar - CM 131 lub Agar Odżywczy - CM 3, lub Agar do ogólnej liczby CM 325 może być stosowany do szczepów Clostridium przy wydłużeniu czasu inkubacji o 24 godziny. Metoda 5 Sabouraud Dekstroza Agar CM 41; Metoda 6 Metoda C, atmosfera tlenowa, 2 do 7 dni. Agar krwawy CM 55 + krew; 25 0 C, atmosfera obojętna, 2 do 7 dni. Trypton Soja Agar - CM 131,lub Agar Odżywczy - CM 3,lub Agar ziemniaczany CM 139, lub Agar do ogólnej liczby CM 325; 25 0 C, atmosfera tlenowa, wydłużony czas inkubacji o 24 godziny. Agar czekoladowy 35 0 C, warunki mikroaerofilne, godzin. Lowenstein Jansen Agar - TV5102C ( gotowe ) lub Middlebrook Agar; 35 0 C, 5-7% CO 2 lub atmosfera tlenowa, inkubacja od 2 do 30 dni. M. fortuitum subsp. fortuitum, M. peregrinum oraz M. smegmatis będzie wyrastać również na Tryptic Soy Agar (Soybean Casein Digest Agar) jak i na Lowenstein Jensen lub Middlebrook Agar lecz z wydłużonym czasem inkubacji. TIB.081 Rev F Strona 8 z 11

9 Metoda 8 Buffered Charcol Yeast Extract Agar ( Legionella BCYE ) - CM 655; 35 0 C, atmosfera tlenowa, 3 do 5 dni. Metoda 9 Metoda 10 V Agar lub Agar czekoladowy CM krew; 35 0 C, 5-7% CO 2, 48 godzin. Uwodnić w sterylnym Bulionie Mózgowo Sercowym (BHI) CM 225,lub w Bulionie Tryptonowo Sojowym (TSB) CM 129 lub w 0,85% soli fizjologicznej. Uwodnienie w wodzie może powodować brak wzrostu. Stosowanie płynu zawartego w zestawie KWIK-STIK TM daje również dobre rezultaty. Hodowla w Trypton Soja Agar - CM 131; 35 0 C, atmosfera tlenowa, godzin. Vibrio sp. wyrasta również na Marine Agar. Metoda 11 Podstawowa hodowla w MRS Broth CM 361; Hodowla w 35 0 C, atmosfera obojętna, godzin. Przesiew na Columbia CNA z krwią baranią CM 331+ krew barania + SR 70;lub Trypton Soya Agar z krwią baranią, inkubacja w 35 0 C, 5-7% CO 2, 48 godzin. Kilka gatunków Lactobacilli, takich jak L. fermentum, L. paracasei subsp. paracasei, L. plantarum, L. rhamnosus, i L. sakei nie muszą być ożywiane przez bulion Lactobacilli MRS. Mogą one być posiewane bezpośrednio na Columbia CNA z krwią baranią lub Tryptic Soy Agar z krwią baranią i inkubowane w w 5 do 7% CO2 przez 48 godzin. Metoda 12 Agar ziemniaczany CM 139; Inkubacja w 55 0 C, atmosfera tlenowa, 24 do 48 godzin. Metoda 13 Uwodnić 1 tabletkę w SP4 Urea Broth. Alternatywnie, zaszczepić bulion KWIK-STIK. Sporządzić serię rozcieńczeń np. 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10,000. Inkubować w 35 0 C, w atmosferze tlenowej. Po zmianie koloru bulionu z argininą na czerwony, posiać 0,1 ml hodowli na agar A-8 metodą powierzchniową. Nie używać wymazówek z waty bawełnianej lub drewnianych patyczków. Inkubować A-8 Agar w 35 0 C, w warunkach beztlenowych przez 4 do 6 dni. W celu obserwacji kolonii, sprawdzić płytki mikroskopowo. Metoda 14 Leeming Notman Agar w 30 C w warunkach tlenowych przez 72 godziny. TIB.081 Rev F Strona 9 z 11

10 Metoda 15 Agar czekoladowy CM krew, Sheep Blood Agar, Tryptic Soy Agar-CM131, i Bordet Gengou Agar z 15% odwłóknionej krwi, Inkubacja w w atmosferze tlenowej przez 24 do 48 godzin. Standard Methods Agar (Plate Count Agar) lub Nutrient Agar CM3 jest dobrą alternatywą z przedłużonym czasem inkubacji o 24 godziny. Metoda 16 Agar czekoladowy lub Bordet Gengou Agar z 15% odwłóknionej krwi baraniej. Inkubacja w w atmosferze tlenowej przez 2 dni do 1 tygodnia. B. pertussis, Microbiologics 0100, i B. pertussis, Microbiologics 0843, wymaga Bordet Gengou Agar z 15% podwłóknionej krwi baraniej. Metoda 17 Przygotować i użyć (modified Infant Soy Formula) Bulion w następujących krokach: 1. Napełnić probówki z 10 ml Infant Soy Formula. Infant Soy Formula may be purchased at a grocery store. 2. Umieścić four-penny nail w każdej probówce. A four-penny nail to około 38 mm długości. Powinno to zawierać stal lub żelazo. 3. Wysterilizować bulion. 4. Inokulować ISF Bulion jedną tabletką LYFO DISK lub KWIK-STIK. 5. Hodowla w 55 C w warunkach beztlenowych przez 48 godzin. Bulion przy wzroście zmienia kolor na szary. 6. Sporządzić dwa rozcieńczenia, 1:10 i 1: Posiać wymazówką Sulfite Agar. Posiać nierozcieńczoną próbkę i rozcieńczenia 1:10 i 1:100. Jest niezbędne posianie rozcieńczonych próbek ponieważ w wysokiej koncentracji kolonie są bardzo małe i mogą być trudne do zobaczenia. Sulfite Agar jest stosowany do wykrywania termofilnych beztlenowców redukujących siarczany. 8. Inkubować agar w warunkach beztlenowych w 55 C przez 48 godzin do 7 dni. Metoda 18 Zaszczepić bullion LYFO DISK lub KWIK-STIK. Przygotować serię dziesiętnych rozcieńczeń za pomocą bulionu. Inkubować bulion zgodnie z tabelą poniżej. Następnie posiać 0.2 ml hodowli bulionowej na agar. Inkubować agar zgodnie z tabelą poniżej. Nie używać wymazówek z waty bawełnianej lub drewnianych patyczków. W celu obserwacji kolonii, sprawdzić płytki mikroskopowo. TIB.081 Rev F Strona 10 z 11

11 Numer katalogowy Rekomendowany bullion i agar do wzrostu Mycoplasma sp. Inkubacja bulionu Inkubacja agaru Bulion Temperatura / Agar Temperatura / ATM / Czas ATM / Czas Mikroorganizm 0156 Mycoplasma hominis Mycoplasma 0503 Mycoplasma pneumoniae SP4 Glucose 0504 Mycoplasma orale Mycoplasma Mycoplasma bovis Mycoplasma 0151 Ureaplasma parvum SP4 with Urea O 2 48 godzin Mycoplasma Metoda 19 Sheep Blood Agar z dodatkiem Pyridoxal w w 5 to 7% CO 2 przez 24 do 48 godzin. O2 7 do 28 dni O2 48 godzin O2 48 godzin O2 48 godzin SP4 Glucose Mycoplasma Mycoplasma A8 5 do 7% CO2 4 do 6 dni CO 2 (Candle Jar) 5 do 15 dni AN 3 do 6 dni 5 do 7% CO2 3 do 7 dni AN 4 do 6 dni TIB.081 Rev F Strona 11 z 11