QUANTA Lite RF IgM ELISA 708690 Do diagnostyki In Vitro Złożoność CLIA: Wysoka Przeznaczenie QUANTA Lite RF IgM to test immunoabsorpcji enzymatycznej (ELISA) do półilościowego oznaczania przeciwciał czynnika reumatoidalnego (RF) IgM w surowicy człowieka. W połączeniu z innymi wynikami klinicznymi i laboratoryjnymi, do diagnozowania reumatoidalnego zapalenia stawów wykorzystać można badanie na obecność wspomnianych przeciwciał (RA). Podsumowanie i wyjaśnienie testu Czynniki reumatoidalne (RF) to immunoglobuliny dowolnego izotypu z czynnością przeciwciał skierowaną przeciwko miejscom antygenowym w regionie Fc ludzkiego lub zwierzęcego IgG. 1,2 IgM-RF jest głównym izotypem wykryty przez klinicznie udostępnione badania diagnostyczne przeznaczone do wykrywania RF. Najbardziej spójnym serologicznym odkryciem u pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów (RA) jest wzrost stężenia IgM RF we krwi i w mazi stawowej. 1,2 IgM RF zostało stwierdzone u około 70 80% pacjentów z potwierdzonym RA. 3,4,5 Stężenie RF jest najwyższe w szczytowym punkcie choroby i spada w trakcie wydłużonej remisji. IgM RF występuje u 1 4% ogólnej populacji. RF występuje u 75% dorosłych pacjentów chorych na RA, gdzie najwyższe występowanie RF ma miejsce u osób powyżej 65 roku życia. Podwyższone miano może towarzyszyć różnorodnym ostrym reakcjom immunologicznym, w szczególności infekcjom wirusowym oraz wielu innym chorobom (mononukleozie zakaźnej, gruźlicy, trądowi, różnorodnym chorobom pasożytniczym, chorobie wątroby, sarkoidozie, toczeniowi rumieniowatemu układowemu). 6 Oprócz IgM RF, podwyższone poziomy IgG i IgA RF zostały stwierdzone u pacjentów z RA. W wielu grupach stwierdzono, że wysoki poziom IgA RF zapowiada poważniejsze skutki chorobowe. 7,8,9 Gdy poziomy izotypu RF zostaną porównane z radiologicznymi nieprawidłowościami stawów, najsilniejsza współzależność występuje z podniesionymi poziomami IgA RF. Wysokie poziomy IgA RF w ciągu trzech lat od wystąpienia objawów choroby zostały powiązane z poważniejszą chorobą po sześciu latach od wystąpienia. 9 Badania z 1984 roku sugerują, że wykrycie IgA RF we wczesnej fazie choroby wskazuje na słabą prognozę i uzasadnia bardziej agresywny przebieg leczenia. 10,11 Dwie różne grupy wykazały, że podniesione poziomy IgG RF ograniczają się praktycznie do surowicy pacjentów chorych na reumatoidalne zapalenie stawów, a nie na inne choroby stawów. 12,13 Najbardziej zaskakującym powiązaniem z IgG RF okazuje się być zapalenie naczyń RA. 11,12 Konwencjonalne metody pomiaru IgM RF były uzależnione od aglutynacji cząstek (np. lateks, węgiel drzewny, bentonit lub erytrocyty) pokrytych ludzkim lub zwierzęcym IgG. Test aglutynacji lateksu jest czuły, ale może dać dużą liczbę fałszywych pozytywnych wyników. 14 Nieswoista aglutynacja cząstek lateksu przez surowicę zdrowych osób nie jest rzadkim zjawiskiem. 14,15,16 Ilościowe testy serologiczne, takie jak EIA, RIA oraz nefelometria mają zaletę polegającą na obiektywnym pomiarze instrumentalnym na pojedynczym roztworze próbki. Metody EIA mają tę zaletę, że są w stanie jednocześnie wykrywać, oprócz RF IgM, RF podklas IgA oraz IgA i nie są podatne na prozone. Stało się oczywiste, że swoistość i wartość predykcyjna testu RF znacząco wzrosły dzięki detekcji wszystkich trzech izotypów RF. 7 Zasada badania QUANTA Lite RF IgM ELISA to test fazy stałej ELISA z mikrodołkami przeznaczony do wykrywania RF. Mikrodołki są pokryte króliczymi IgG, ponieważ materiał króliczy okazał się być bardziej swoisty do diagnozowania RA niż materiał ludzki na fazie stałej. 17 Rozcieńczone wstępnie próbki kontrolne i rozcieńczone surowice pochodzące od pacjentów dodaje się do oddzielnych dołków, co umożliwia związanie się wszelkich występujących w próbce przeciwciał RF IgM z unieruchomionym antygenem. Niezwiązana próbka jest wypłukiwana i do każdego dołka dodawany jest koniugat znakowanego enzymem przeciwciała przeciw-ludzkiego IgM. Druga inkubacja umożliwia przeciwciałom przeciw-ludzkim IgM znakowanym enzymem związać się z dowolnymi przeciwciałami pacjenta, które zostały przytwierdzone do mikrodołków. Po wypłukaniu wszelkich niezwiązanych przeciwciał przeciw-ludzkich IgM znakowanych enzymem, aktywność pozostałego enzymu bada się dodając substrat chromogeniczny i mierząc intensywność powstałej barwy. Badanie może zostać ocenione spektrofotometrycznie, poprzez zmierzenie i porównanie intensywności barwy, która powstaje w dołkach z próbką od pacjenta z barwą dołków wielopunktowej krzywej standardowej. Badanie może zostać ocenione przez porównanie barwy, która powstaje w dołkach z próbką od pacjenta z barwą dołków wielopunktowej krzywej standardowej, skalibrowanej zgodnie z międzynarodowym preparatem referencyjnym WHO (64/2). Odczynniki 1. Polistyrenowa płytka z mikrodołkami ELISA pokryta oczyszczonym antygenem króliczym IgG (12-1 x 8 dołków), z uchwytem w torebce foliowej zawierającej osuszacze 2. Negatywna kontrola ELISA, 1 fiolka buforu zawierająca środek konserwujący i surowicę ludzką bez ludzkich przeciwciał przeciwko RF IgM, wstępnie rozcieńczona, 1,2 ml 3. Kalibrator A testu RF IgM ELISA, 1 fiolka buforu zawierającego konserwant i przeciwciała surowicy 4. Kalibrator B testu RF IgM ELISA, 1 fiolka buforu zawierającego konserwant i przeciwciała surowicy 1
5. Kalibrator C testu RF IgM ELISA, 1 fiolka buforu zawierającego konserwant i przeciwciała surowicy 6. Kalibrator D testu RF IgM ELISA, 1 fiolka buforu zawierającego konserwant i przeciwciała surowicy 7. Kalibrator E testu RF IgM ELISA, 1 fiolka buforu zawierającego konserwant i przeciwciała surowicy 8. Kontrola RF IgM ELISA, 1 fiolka buforu zawierającego konserwant i przeciwciała surowicy ludzkiej przeciwko RF IgM, wstępnie rozcieńczona, 1,2 ml 9. Rozcieńczalnik do próbek HRP, 1 fiolka zabarwienie różowe, zawiera sól fizjologiczną buforowaną TRIS, Tween 20, stabilizatory białka i konserwant, 50 ml 10. Koncentrat do płukania HRP, 1 fiolka koncentratu 40x zabarwienie czerwone, zawiera sól fizjologiczną buforowaną TRIS i Tween 20, 25 ml. Instrukcje dotyczące rozcieńczania można znaleźć w sekcji Metody. 11. Koniugat HRP IgM, (kozi), przeciwciała przeciw-ludzkiemu IgM, 1 fiolka zabarwienie zielone, zawiera bufor, stabilizatory białka i konserwant, 10 ml 12. Chromogen TMB, 1 fiolka zawierająca stabilizatory, 10 ml 13. Roztwór zatrzymujący HRP, kwas siarkowy 0.344M, 1 fiolka bezbarwny, 10 ml Ostrzeżenia 1. OSTRZEŻENIE: Ten produkt zawiera substancję chemiczną (chloramfenikol 0,02%) w rozcieńczalniku do próbek, kontrolach i koniugacie, która według stanu Kalifornii wywołuje raka. 2. Wszystkie materiały pochodzenia ludzkiego używane w przygotowywaniu kontroli dla tego produktu zostały przetestowane i na podstawie metod zatwierdzonych przez FDA stwierdzono że nie zawierają przeciwciał przeciwko HIV, HBsAg i HCV. Jednak żadna metoda testowania nie może całkowicie zagwarantować braku obecności HIV, HBV, HCV lub innych czynników zakaźnych. W związku z tym, kontrola RF IgM ELISA, kalibrator RF IgM ELISA i kontrola negatywna ELISA powinny być obsługiwane w taki sam sposób, jak potencjalnie zakaźny materiał. 18 3. Jako konserwant stosowany jest azydek sodu. Azydek sodu jest trucizną i może być toksyczny w przypadku połknięcia lub wchłonięcia przez skórę lub oczy. Azydek sodu może wchodzić w reakcję z ołowianą lub miedzianą instalacją wodociągową, tworząc potencjalnie wybuchowe azydki metali. Jeśli do usuwania odczynników używane są zlewy, należy przepłukiwać je dużą ilością wody, aby nie dopuścić do gromadzenia się azydku. 4. Koniugat HRP zawiera rozcieńczoną trującą/korozyjną substancję chemiczną, która może być toksyczna w przypadku spożycia w dużej ilości. Aby uniknąć potencjalnych oparzeń chemicznych, należy unikać kontaktu ze skórą i oczami. 5. Chromogen TMB zawiera środek drażniący, w który może być szkodliwy w przypadku wdychania, spożycia lub wchłonięcia przez skórę. Aby uniknąć urazów, należy unikać wdychania, spożycia lub kontaktu ze skórą i oczami. 6. Roztwór zatrzymujący HRP składa się z rozcieńczonego roztworu kwasu siarkowego. Unikać wystawienia na działanie zasad, metali lub innych związków, które mogą wchodzić w reakcje z kwasami. Kwas siarkowy jest trucizną i ma właściwości korozyjne. W razie połknięcia może być toksyczny. Aby uniknąć oparzeń chemicznych, należy unikać kontaktu ze skórą i oczami. 7. Podczas pracy z dostarczonymi odczynnikami należy stosować odpowiednie środki ochrony osobistej. 8. Rozlane odczynniki należy natychmiast usunąć. Należy przestrzegać wszystkich krajowych i lokalnych przepisów w zakresie utylizacji odpadów. Środki ostrożności 1. Ten produkt jest przeznaczonych do zastosowań diagnostycznych in vitro. 2. Zastąpienie składników dostarczonych w tym systemie innymi składnikami może skutkować osiągnięciem niespójnych wyników. 3. Niepełne lub nieprawidłowe płukanie i niewystarczające usunięcie płynu z płytek z dołkami ELISA wpłynie negatywnie na precyzję badań i/lub spowoduje wysoki poziom tła. 4. Dostosowanie tego badania do stosowania ze zautomatyzowanymi analizatorami próbek oraz innymi urządzeniami do pracy z płynami, w całości lub w części, może skutkować rozbieżnością wyników w stosunku do badań przeprowadzanych ręcznie. Obowiązkiem każdego laboratorium jest potwierdzenie, że wyniki testów uzyskanych na podstawie zautomatyzowanych badań mieszczą się w akceptowalnych limitach. 5. Na wyniki analizy wpływa wiele różnych czynników. Obejmują one temperaturę początkową odczynników, temperaturę otoczenia, dokładność i powtarzalność techniki pipetowania, dokładność płukania i usuwania płynu z dołków płytek ELISA, fotometr użyty do analizy wyników oraz czasy trwania inkubacji podczas badania. Uzyskanie dokładnych i powtarzalnych wyników wymaga staranności i precyzji. 6. Zalecane jest ścisłe przestrzeganie procedury testowej. 7. Niedokładne zamknięcie torebki z zamknięciem strunowym, zawierającej płytki z mikrodołkami i osuszaczami, spowoduje degradację antygenu i brak precyzji badania. 8. Dwukrotne lub wielokrotne użycie koniugatu HRP z jednej butelki w pewnym okresie czasu może dać niedopuszczalnie niski poziom absorbancji. Aby nie dopuścić do takiej sytuacji istotne jest przestrzeganie wszystkich zaleceń dotyczących procedur pracy z koniugatem HRP. 2
9. Zanieczyszczenie chemiczne koniugatu HRP może być spowodowane nieprawidłowym czyszczeniem lub płukaniem sprzętu lub narzędzi. Pozostałości typowych laboratoryjnych substancji chemicznych, takich jak formalina, substancja wybielająca, etanol lub detergent, z czasem spowoduje degradację koniugatu HRP. Po użyciu chemicznych substancji czyszczących/dezynfekujących dokładnie wypłukać cały sprzęt i wszystkie narzędzia. Warunki przechowywania 1. Wszystkie odczynniki z zestawu przechowywać w temperaturze 2 8 C. Nie zamrażać. Odczynniki są trwałe do daty ważności, pod warunkiem, że są przechowywane i używane zgodnie z instrukcjami. 2. Nieużyte płytki z mikrodołkami pokrytymi antygenem powinny być starannie zamknięte w torebce foliowej z osuszaczami i przechowywane w temperaturze 2 8 C. 3. Rozcieńczony bufor do płukania zachowuje trwałość przez 1 tydzień w temperaturze 2 8 C. Pobieranie próbek Ta procedura powinna być wykonana z próbką surowicy. Dodanie azydku lub innych konserwantów do próbek analitycznych może mieć negatywny wpływ na wyniki. Nie używać próbek zawierających widoczne zanieczyszczenia, skażonych bakteryjnie lub podgrzanych. Należy unikać całkowicie zhemolizowanej lub lipemicznej surowicy albo próbek. Po pobraniu surowica powinna być oddzielona od skrzepu. Dokument CLSI (NCCLS) H18-A2 zaleca następujące warunki przechowywania próbek: 1) Przechowywać próbki w temperaturze pokojowej nie dłużej niż 8 godzin. 2) Jeśli badanie nie zostanie zakończone w ciągu 8 godzin, schłodzić próbkę do temperatury 2-8 C. 3) Jeśli badanie nie zostanie ukończone w ciągu 48 godzin lub w przypadku transportu próbki, należy zamrozić ją w temperaturze -20 C lub niższej. Zamrożone próbki po rozmrożeniu i przed badaniem muszą zostać dobrze wymieszane. Badanie Dostarczone materiały 1 Płytka z mikrodołkami RF IgM ELISA (12-1 x 8 dołków), z uchwytem 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonej kontroli negatywnej ELISA 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonego kalibratora A RF IgM ELISA 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonego kalibratora B RF IgM ELISA 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonego kalibratora C RF IgM ELISA 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonego kalibratora D RF IgM ELISA 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonego kalibratora E RF IgM ELISA 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonej kontroli RF IgM ELISA 1 50 ml rozcieńczalnika do próbek HRP 1 25 ml koncentratu do płukania HRP, koncentrat 40x 1 10 ml koniugatu przeciwciała IgM HRP, (koziego), przeciw-ludzkie IgM 1 10 ml chromogenu TMB 1 10 ml roztworu zatrzymującego HRP, kwas siarkowy 0.344M Wymagane materiały nie dołączone do zestawu Mikropipety na 5, 100, 200 300 i 500 µl Jednorazowe końcówki mikropipet Probówki do roztworów próbek pochodzących od pacjenta, 4 ml objętości Woda destylowana lub dejonizowana Naczynie o objętości 1 l do rozcieńczonego koncentratu HRP do płukania Czytnik płytek z mikrodołkami umożliwiający pomiar gęstości optycznej przy 450 nm (i przy 620 nm dla odczytów przy dwóch długościach fali) Sposób przygotowania Przed rozpoczęciem 1. Doprowadzić wszystkie odczynniki i próbki do temperatury pokojowej (20-26 o C) i dobrze wymieszać. 2. Rozcieńczyć koncentrat do płukania HRP w stosunku 1:40, dodając zawartość butelki koncentratu do płukania HRP do 975 ml wody destylowanej lub dejonizowanej. Jeśli cała płytka nie zostanie przetworzona w tym czasie, można przygotować mniejszą ilość. W tym celu należy dodać 2,0 ml koncentratu do 78 ml wody destylowanej lub dejonizowanej na każde 16 dołków, które będą użyte. Rozcieńczony bufor zachowuje trwałość przez 1 tydzień w temperaturze 2 8 o C. 3. Przygotowanie krzywej wzorcowej: W przypadku 5-punktowej standardowej krzywej użyć WSTĘPNIE ROZCIEŃCZONEGO kalibratora RF IgM ELISA od A do E, bezpośrednio z fiolki. Pięciopunktowa krzywa wzorcowa ma następujące wartości: Punkt Jednostki RF IgM A Wstępnie rozcieńczony kalibrator RF IgM ELISA A 100,0 B Wstępnie rozcieńczony kalibrator RF IgM ELISA B 50,0 C Wstępnie rozcieńczony kalibrator RF IgM ELISA C 25,0 D Wstępnie rozcieńczony kalibrator RF IgM ELISA D 12,5 E Wstępnie rozcieńczony kalibrator RF IgM ELISA E 5,0 3
4. Przygotować roztwór 1:101 każdej próbki pochodzącej od pacjenta, dodając 5 µl próbki do 500 µl rozcieńczalnika do próbek HRP. Rozcieńczone próbki muszą być użyte w ciągu 8 godzin od przygotowania. NIE ROZCIEŃCZAĆ kontroli RF IgM ELISA, kalibratorów RF IgM ELISA oraz negatywnej kontroli ELISA 1:101. 5. W celu stwierdzenia obecności lub braku RF IgM z zastosowaniem jednostek arbitralnych, potrzebne są po dwa dołki na każdą z trzech kontroli i jeden do dwóch dołków na każdą próbkę pochodzącą od pacjenta. Zalecane jest wykonanie duplikatów próbek. Procedura badania 1. WSZYSTKIE ODCZYNNIKI PRZED ROZPOCZĘCIEM BADANIA MUSZĄ BYĆ DOPROWADZONE DO TEMPERATURY POKOJOWEJ (20 26 C). Umieścić wymaganą liczbę mikrodołków/pasków w uchwycie. Natychmiast umieścić nieużywane płytki w torebce foliowej zawierającej osuszacz i dobrze ją zamknąć, aby ograniczyć kontakt z parą wodną. 2. Dodać do dołków 100 µl każdego rozcieńczonego kalibratora RF IgM ELISA, wstępnie rozcieńczoną kontrolę RF IgM ELISA, kontrolę negatywną ELISA oraz rozcieńczone próbki pacjenta. Przykryć dołki i inkubować przez 30 minut w temperaturze pokojowej na równej powierzchni. Czas inkubacji rozpoczyna się po dodaniu ostatniej próbki. 3. Etap płukania: Odessać całkowicie zawartość każdego dołka. Wlać 200 300 µl rozcieńczonego buforu HRP do płukania do wszystkich dołków, a następnie go odessać. Powtórzyć tę sekwencję jeszcze dwukrotnie, aby łącznie przeprowadzić trzy płukania. Odwrócić płytkę i postukać w nią na materiale pochłaniającym w celu usunięcia pozostałości płynu po ostatnim płukaniu. Ważne jest, aby całkowicie opróżnić każdy dołek po każdym etapie płukania. Zachować tę samą sekwencję odsysania, jak w przypadku dodawania próbki. 4. Do każdego dołka dodać 100 l koniugatu HRP IgM. Koniugat powinien być usunięty z butelek z zastosowaniem standardowych warunków aseptycznych oraz zalecanych technik laboratoryjnych. Pobrać z butelki jedynie wymaganą do analizy ilość koniugatu. ABY UNIKNĄĆ POTENCJALNEGO ZANIECZYSZCZENIA BAKTERYJNEGO I/LUB CHEMICZNEGO, NIE WOLNO WLEWAĆ NIEUŻYTEGO KONIUGATU Z POWROTEM DO BUTELKI. Inkubować dołki przez 30 minut jak w etapie 2. 5. Etap płukania: Powtórzyć etap 3. 6. Dodać 100 µl chromogenu TMB do każdego dołka i inkubować w ciemności przez 30 minut w temperaturze pokojowej. 7. Do każdego dołka dodać 100 µl roztworu zatrzymującego HRP. Zachować tę samą sekwencję i czas dodawania roztworu zatrzymującego HRP, jak w przypadku chromogenu TMB. Delikatnie postukać płytkę palcem, aby dokładnie wymieszać zawartość dołków. 8. Odczytać absorbancję (gęstość optyczną) każdego dołka przy długości fali 450 nm w ciągu jednej godziny od zatrzymania reakcji. Jeśli wymagane są pomiary bichromatyczne, referencyjną długością fali może być długość 620 nm. Kontrola jakości 1. Aby wszystkie odczynniki i procedury funkcjonowały prawidłowo, każdą serię próbek należy testować wraz z kontrolą ELISA RF IgM, kalibratorem ELISA RF IgM i kontrolą negatywną ELISA. 2. Należy zwrócić uwagę, że kontrola ELISA RF IgM, kalibrator ELISA RF IgM oraz kontrola negatywna ELISA są wstępnie rozcieńczone i nie będą one stanowić kontroli w przypadku procedur związanych z rozcieńczaniem próbek. 3. Dodatkowe kontrole mogą być przebadane zgodnie z wytycznymi lub wymaganiami lokalnych i/lub krajowych przepisów lub organów normalizacyjnych. Dodatkowe odpowiednie surowice kontrolne można przygotować, dzieląc połączone próbki surowicy ludzkiej i przechowując je w temperaturze -20 C. 4. Aby wyniki badania mogły być uznane jako ważne, muszą zostać spełnione wszystkie poniższe kryteria. Jeśli jakiekolwiek kryterium nie będzie spełnione, badanie powinno być traktowane jako nieważne i powinno zostać powtórzone. a. Absorbancja wstępnie rozcieńczonego kalibratora RF IgM ELISA A musi być większa niż absorbancja wstępnie rozcieńczonej kontroli RF IgM ELISA, która musi być większa niż absorbancja wstępnie rozcieńczonej kontroli negatywnej ELISA. b. Absorbancja wstępnie rozcieńczonego kalibratora RF IgM ELISA A musi być większa niż 1,0, a absorbancja wstępnie rozcieńczonej negatywnej kontroli ELISA nie może być większa niż 0,2. c. Absorbancja kontroli RF IgM ELISA musi być dwukrotnie większa od negatywnej kontroli ELISA lub wynosić powyżej 0,25. d. Stężenie kontroli RF IgM musi mieścić się w zakresie podanym na etykiecie. e. Dodatkowe wytyczne dotyczące odpowiednich praktyk QC można znaleźć w dokumencie CLSI (NCCLS) C24-A. Obliczanie wyników 1. Ustalić wartość średnią wszystkich zdublowanych odczytów. 2. Nanieść średnią absorbancję (gęstość optyczną) próbek na krzywej wzorcowej w odniesieniu do ich wartości w jednostkach. Użyć dopasowania krzywej regresji, wykresu logarytmicznego. Jednostki przypisane do kalibratorów znajdują się na fiolce kalibratora. 3. Ustalić nieznane stężenie RF IgM z osi X, odczytując odpowiednią absorbancję na osi Y. 4
Interpretacja wyników Badanie ELISA jest bardzo wrażliwe na technikę i jest w stanie wychwycić nawet najdrobniejsze różnice w populacjach pacjentów. Poniższe wartości są jedynie wartościami sugerowanymi. Każde laboratorium powinno ustalić własny normalny zakres na podstawie własnych technik, kontroli, sprzętu i populacji pacjentów, zgodnie z własnymi ustalonymi procedurami. Próbka następnie może być sklasyfikowana jako negatywna lub pozytywna, zgodnie z poniższą tabelą. Jednostki Negatywna 6 Pozytywne >6 1. Wynik pozytywny wskazuje na obecność przeciwciał RF IgM i sugeruje możliwość wystąpienia reumatoidalnego zapalenia stawów. 2. Negatywny wynik wskazuje na brak przeciwciał RF IgM lub poziomy poniżej ujemnych wartości granicznych testu. 3. Zalecane jest, aby wyniki raportowane przez laboratorium zawierały oświadczenie: Poniższe wyniki otrzymano przy wykorzystaniu zestawu INOVA QUANTA Lite RF IgM ELISA. Wartości RF IgM uzyskane metodami badań różnych producentów nie mogą być stosowane zamiennie. Rząd wielkości poziomów raportowanego IgM nie może być skorelowany z mianem punktu końcowego. Ograniczenia badania 1. Obecność kompleksów immunologicznych lub innych agregatów immunoglobuliny w próbce pochodzącej od pacjenta może powodować podwyższony poziom nieswoistego wiązania i wytwarzać fałszywe pozytywne wyniki w tym badaniu. 2. Nie można postawić diagnozy na podstawie samych wyników RF. Te wyniki muszą być interpretowane razem z wynikami fizycznymi. 3. Nie wolno rozpocząć leczenia jedynie na podstawie pozytywnego miana RF. Muszą być również wykazane uzasadniające wskazania kliniczne. 4. RF może występować przejściowo podczas wielu infekcji. Pacjenci z pozytywnym wynikiem RF powinni być poddani ponownym badaniom po upływie odpowiedniego czasu. 5. Wyniki tego badania powinny być użyte w powiązaniu z wynikami klinicznymi i innymi badaniami serologicznymi. 6. Charakterystyka wyników badania nie została ustanowiona dla podłoża innego niż surowica. Spodziewane wartości Normalny zakres W badaniach przeprowadzonych w laboratoriach badawczych firmy INOVA Diagnostics pod kątem IgM RF przebadano 193 losowych próbek od zdrowych osób. Próbki pochodziły od 58 mężczyzn i 135 kobiet. Zakres wieku populacji wynosił od 20 do 69 lat z średnią 36,3 lat. Siedem (3,6%) próbek dało wynik pozytywny. Tylko jedna z tych siedmiu próbek miała wynik powyżej 10 jednostek. Swoistość i wrażliwość względna Zestaw QUANTA Lite RF IgM ELISA został porównany z innym dostępnym w handlu zestawem RF IgM ELISA kit. Wyniki zostały ocenione na podstawie 163 próbek przekazanych do testów rutynowych RF. Poniżej zostały przedstawione wyniki. Odniesienie + - + 110 4 Wrażliwość względna 91,6% INOVA Swoistość względna 91,3% - 11 38 Skuteczność względna 91,6% Spośród 163 przetestowanych próbek 110 dało wynik pozytywny, a 38 dało wynik negatywny wg obu metod. Badanie INOVA wykazało 4 próbki z wynikiem pozytywnym, ale próbki te zostały sklasyfikowane jako negatywne na podstawie metody referencyjnej. Te 4 próbki były słabo reakcyjne na poziome 6,7, 7 i 9 jednostek dla każdej, powyżej wartości granicznej 6. Badania z użyciem metody referencyjnej wykazały 11 próbek pozytywnych, które jednak dały wynik negatywny z użyciem zestawu INOVA. Sześć spośród tych 11 pozytywnych próbek miało wynik poniżej 10 jednostek. Najsilniejsza próbka miała wynik o wartości 31 jednostek. Wszystkie 11 próbek wykazały jednak wynik negatywny na obecność IgM RF wg nefelometrii. Sto osiemnaście próbek pozytywnych próbek na obecność przeciwciał przeciwjądrowych (ANA) zostało przebadanych na obecność IgM RF przy użyciu zestawu QUANTA Lite. Jedenaście spośród tych próbek (9,3%) dało wyniki pozytywny. Próbki pozytywne wahały się od 6 do 17 jednostek, gdzie tylko 5 z 11 miało wynik powyżej 10 jednostek. 5
Precyzja i powtarzalność Precyzja i powtarzalność badania zostały przebadane przez przeprowadzenie sześciu powtórzeń każdej negatywnej, słabo pozytywnej i silnie pozytywnej próbki w sześciu oddzielnych badaniach. Średnia wyników silnie pozytywnych wyniosła 52,8, słabo pozytywnych wyniosła 11,9, a negatywnych 2,1. Poniżej znajduje się podsumowanie odchylenia standardowego oraz współczynnika zmienności dla każdej próbki. Negatywny Słabo pozytywna Silnie pozytywna SD CV SD CV SD CV Łącznie 0,19 9,2% 0,23 1,9% 1,67 3,2% W ramach serii 0,15 7,1% 0,24 2,0% 1,12 2,1% Pomiędzy seriami 0,15 7,0% 0,24 2,0% 1,75 3,3% 6
Piśmiennictwo 1. Waaler, E. On the occurrence of a factor in human serum activating the specific agglutination of sheep blood corpuscles. Acta Pathol Microbiol Scan. 17: 172-178, 1940. 2. Rose HM, Ragan C, Pearce E, and Lipmann MO. Differential agglutination of normal and sensitized sheep erythrocytes by sera of patients with rheumatoid arthritis. Proc Soc Exp Biol Med. 68: 1-11, 1948. 3. Cathcart ES. Rheumatoid Factors in Laboratory Diagnostic Procedures in the Rheumatic Diseases. 2nd ed. Cohen AS (ed.). Boston, MA: Little, Brown & Co. p. 104, 1975. 4. Freyberg RH. Differential Diagnosis of Arthritis. Postgrad Med. 51(20): 22-27, 1972. 5. Lawrence JS, Locke GR and Ball J. Rheumatoid Serum Factor in Populations in the U.K.I. Lung Disease and Rheumatoid Serum Factor. Clin Exp Immunol. 8: 723, 1971. 6. Linker JB III and Williams RC Jr. Tests for detection of rheumatoid factors, In: Rose NR, Freidman H, and Fahey JL (eds.). In: Man Clin Lab Immunol, 3rd Ed. Wash, DC: ASM; 759-761, 1986. 7. Jonsson T and Valdimarsson H. Is measurement of rheumatoid factor isotypes clinically useful? Annals of the Rheumatic Diseases. 52(2): 161-164, 1993. 8. Jonsson T and Valdimarsson H. Clinical significance of rheumatoid factor isotypes in seropositive arthritis. Rheumatology Intl. 12(3): 111-113, 1992. 9. van Zeben D, Hazes JMV, Zwinderman AH, Cats A, van der Voort EAM and Breedveld FC. Clinical significance of rheumatoid factors in early rheumatoid arthritis: results of a follow up study. Annals of the Rheumatic Diseases. 51(9): 1029-1035, 1992. 10. Teitsson I, Withrington RH, Seifert MH and Valdimarsson H. Prospective study of early rheumatoid arthritis. Prognostic value of IgA rheumatoid factor. Annals of Rheumatic Diseases. 43: 673-678, 1984. 11. Silvestris F, Goodwin JS and Williams RC Jr. IgM, IgA and IgG rheumatoid factors in patients with rheumatoid arthritis and normal donors. Clinical Rheumatology. 4: 392-398, 1985. 12. Allen C, Elson CJ, Scott DGI, Bacon PA and Bucknall RC. IgG antiglobulins in rheumatoid arthritis and other arthritides: relationship with clinical features and other parameters. Annals of the Rheumatic Diseases. 40: 127-131, 1981. 13. Pope RM and McDuffy SJ. IgG rheumatoid factor relationship to seropositive rheumatoid arthritis and absence in seronegative disorders. Arthritis Rheum. 22: 988-998, 1979. 14. Singer JM and Plotz CM. The Latex Test, I. Application to the Serological Diagnosis of Rheumatoid Arthritis. Am J Med. 21: 888, 1956. 15. Waller M, Toone EC and Vaughn C. Study of Rheumatoid Factor in the Normal Population. Arthritis Rheum. 7: 518-520, 1964. 16. Shimmerling RH and Belbanco TL. The Rheumatic Factor: An Analysis of Clinical Utility. The American Journal of Medicine. 91: 530, 1991. 17. Tuomi T. Which antigen to use in the detection of rheumatoid factors? Comparison of patients with rheumatoid arthritis and subjects with "false positive" rheumatoid factor reactions. Clin Exp Immunol. 77:349, 1989. 18. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Center for Disease Control/National Institute of Health, 2007, Fifth Edition. 7
QUANTA Lite i INOVA Diagnostics, Inc. są zastrzeżonym znakiem handlowym firmy Copyright 2014. Wszelkie prawa zastrzeżone Wyprodukowano przez: Inova Diagnostics, Inc. 9900 Old Grove Road San Diego, CA 92131 Stany Zjednoczone Ameryki Pomoc techniczna (tylko na terenie Stanów Zjednoczonych i Kanady): 877-829-4745 Pomoc techniczna (poza terenem Stanów Zjednoczonych): 1 858-805-7950 support@inovadx.com Autoryzowani przedstawiciele na terenie Unii Europejskiej: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D-66386 St. Ingbert, Niemcy Tel.: +49-6894-581020 Faks.: +49-6894-581021 www.mt-procons.com 628690POL Sierpień 2014 Wersja 1 8