2013/06/18 A93A01300APL A11A01665 29.5 ml Pentra C400 Odczynnik diagnostyczny do oznaczania ilościowego in vitro stężenia fosforu w surowicy i osoczu krwi oraz moczu metodą kolorymetryczną. QUAL-QA-TEMP-0846 Rev.8 Wersja aplikacji Surowica, osocze: Phos Mocz: Phos-U Zastosowanie jest odczynnikiem diagnostycznym do ilościowego oznaczania in vitro stężenia fosforu w surowicy i osoczu krwi ludzkiej oraz w moczu przy zastosowaniu fosfomolibdenianu metodą UV. Pomiary stężenia fosforu (nieorganicznego) wykorzystuje się w diagnostyce i leczeniu różnorakich schorzeń, w tym chorób przytarczyc, chorób nerek oraz zaburzeń stężenia witaminy D. Aspekty kliniczne (1) Fosfor wchodzący w skład organizmu człowieka (80% jego zawartości znajduje się w kościach) występuje wyłącznie w formie fosforanów nieorganicznych. Niezbędną ilość fosforanów zapewnia dieta. Fosforany odgrywają istotną rolę w magazynowaniu i transporcie energii potrzebnej w metabolizmie komórek. Jony fosforanowe, znajdujące się głównie w płynach pozakomórkowych mają również działanie buforujące. Wzrost stężenia jonów fosforanowych w surowicy może pojawiać się w związku z nadmiarem witaminy D, niedoczynnością przytarczyc oraz niewydolnością nerek. Zmniejszenie stężenia fosforanu w surowicy krwi obserwuje się w przypadku niedoboru witaminy D oraz nadczynności przytarczyc. Stężenie fosforu mineralnego w osoczu zależy od diety, wchłaniania wewnątrzjelitowego, filtracji nerek, wchłaniania zwrotnego oraz metabolizmu kości. Pomiar stężenia fosforu nieorganicznego przeprowadza się zazwyczaj na próbkach krwi; pomiar stężenia fosforu w moczu w uzależnieniu od czasu można stosować do kontrolowania wydalania fosforu przez nerki. Na wszystkie powyższe mechanizmy mają wpływ hormony regulujące oraz stężenie wapnia (hormon przytarczyc PTH, kalcytonina oraz witamina D). W konsekwencji, stężenie fosforanów w osoczu jest ściśle zależne od stężenia wapnia. Wahania w stężeniu fosforanów we krwi (PTH stymuluje nerki, co prowadzi do eliminacji fosforanów i zatrzymania wapnia), spowodowane złym funkcjonowaniem mechanizmów wymienionych powyżej, są często odwrotne do wahań w stężeniu wapnia. Metoda (2) Metoda UV z zastosowaniem fosfomolibdenianu. Fosforan wchodzi w reakcję z molibdenianem amonu w środowisku kwaśnym, tworząc kompleks fosfomolibdenianu o żółtym zabarwieniu: Fosfor Molibdenian amonu+kwas siarkowy > Kompleks fosfomolibdenianowy Intensywność zabarwienia jest proporcjonalna do stężenia nieorganicznego fosforanu w próbce. Odczynniki jest odczynnikiem gotowym do użycia. 1 / 5
Odczynnik: Kwas siarkowy Molibdenian amonu 210 650 µmol/l Produktu należy używać zgodnie z niniejszą ulotką. Producent nie może zagwarantować właściwego działania produktu, jeżeli zostanie on użyty w sposób inny od podanego. Postępowanie z preparatem Wymagane wyposażenie niewchodzące w skład produktu Zautomatyzowany kliniczny analizator biochemiczny: Pentra C400 Kalibrator: Multical, nr ref. A11A01652 Kontrole: N Control, nr ref. A11A01653, oraz P Control, nr ref. A11A01654 Urine Control L/H, nr ref. A11A01674 Standardowy sprzęt laboratoryjny. 1. Wyjmij zatyczkę kasety. 2. Jeżeli odczynnik zawiera pianę, usuń ją za pomocą plastikowej pipety. 3. Umieść kasetę w chłodzonej komorze odczynnikowej analizatora Pentra C400. Kalibrator Do celów kalibracji należy używać: Multical, nr ref. A11A01652 (do oddzielnego zakupu) 10 x 3 ml (liofilizat) Kontrola Do wewnętrznej kontroli jakości należy używać: N Control, nr ref. A11A01653 (wymaga osobnego zakupu) 10 x 5 ml (liofilizat) P Control, nr ref. A11A01654 (wymaga osobnego zakupu) 10 x 5 ml (liofilizat) Urine Control L/H, nr ref. A11A01674 (wymaga osobnego zakupu) 1 x 10 ml + 1 x 10 ml Oznaczenie kontroli powinno być przeprowadzane raz dziennie i/lub po wykonaniu kalibracji. Częstość przeprowadzania kontroli oraz przedziały ufności powinny być ustalone w oparciu o wytyczne laboratoryjne oraz przepisy obowiązujące w danym kraju. Należy przestrzegać krajowych, regionalnych i lokalnych wytycznych dotyczących materiałów do kontroli jakości. Wynik kontroli musi zawierać się w zdefiniowanych przedziałach ufności. Każde laboratorium powinno wypracować sposób postępowania w przypadku, gdy wyniki wykroczą poza wyznaczone przedziały. Surowica niehemolizowana. Osocze pobrane z heparyną litową. Świeży odwirowany mocz. Mocz z 24 godz. należy pobierać z HCl 6N Firma HORIBA Medical nie prowadziła testów dla antykoagulantów innych niż wymienione na liście i w związku z tym nie zaleca ich używania dla potrzeb tego oznaczenia. Stabilność: Surowica, osocze (3): 1 tydzień w temp. 2-8 C Mocz (4, 5): 2 dni w temp. 20-25 C, jeżeli ph < 5,0 Zakres norm Każde laboratorium powinno wypracować swoje własne zakresy odniesienia. Wartości podane w niniejszej ulotce mają wyłącznie charakter orientacyjny. Surowica, osocze (1): Mocz (6): Przechowywanie i stabilność 27-45 mg/l 2,7-4,5 0,87-1,45 Dorośli: 12,9-42,0 mmol/24 godz. (0,4-1,3 g/24 godz.) Odczynniki, w nieotwieranych kasetach, zachowują stabilność do daty ważności podanej na etykiecie, o ile są przechowywane w temperaturze 2-8 C. Stabilność po otwarciu: patrz rozdział Wydajność przy użyciu w analizatorze Pentra C400. 2 / 5
Uszkodzenie opakowania W przypadku zniszczenia opakowania ochronnego, nie należy używać odczynnika, jeżeli uszkodzenie mogło wpłynąć na jego właściwości. Postępowanie z odpadami Należy postępować zgodnie z lokalnie obowiązującymi przepisami. Ogólne środki ostrożności Niniejszy odczynnik jest przeznaczony wyłącznie do profesjonalnej diagnostyki in vitro. Ostrzeżenie: produkt o działaniu drażniącym, zawiera kwas siarkowy. Xi: Produkt drażniący. R36/38: Działa drażniąco na oczy i skórę. S26: Zanieczyszczone oczy przemyć natychmiast dużą ilością wody i zasięgnąć porady lekarza. S37/39: Nosić odpowiednie rękawice ochronne i okulary lub ochronę twarzy. Kasety odczynnikowe są kasetami jednorazowego użytku, należy je utylizować zgodnie z lokalnymi przepisami. Należy uważnie zapoznać się z kartą charakterystyki (MSDS) dołączoną do odczynnika. Nie używać produktu, jeżeli można zaobserwować zmianę jego cech biologicznych, chemicznych lub fizycznych, co wskazuje na jego nieprzydatność do użytku. Wydajność przy użyciu w analizatorze Pentra C400 Dane przedstawione poniżej to wartości uzyskiwane na analizatorach HORIBA Medical. Surowica, osocze Liczba oznaczeń: 100 Jeżeli liczba oznaczeń do wykonania jest niewielka i użytkownik analizatora Pentra C400 chce korzystać z kasety do upływu okresu stabilności roboczej, HORIBA Medical zaleca użycie membrany XEC084, co pozwoli uzyskać liczbę oznaczeń podaną na tej ulotce. Stabilność robocza odczynników: Po otwarciu kaseta z odczynnikiem umieszczona w chłodzonej komorze analizatora Pentra C400 zachowuje stabilność przez 70 dni. Objętość próbki: 2,8 µl/oznaczenie Wykrywalność: Wykrywalność ustalono zgodnie z zaleceniami procedury Valtec (7) i wynosi ona 0,09 (0,28 ). Trafność i precyzja: Powtarzalność (precyzja w trakcie pracy urządzenia) Przeprowadzane jest 20 oznaczeń dla 3 próbek o niskim, średnim oraz wysokim stężeniu oraz dla 2 kontroli, zgodnie z zaleceniami procedury Valtec (7). 1,32 4,08 1,25 2,04 6,34 0,77 1 0,77 2,39 2,48 2 1,12 3,48 1,61 3 2,96 9,19 1,38 Powtarzalność (precyzja całkowita) Urządzenie przez 20 dni przeprowadza podwójne oznaczenia dla 2 próbek osocza (o stężeniu niskim i wysokim) oraz dla 2 kontroli (2 serie dziennie), zgodnie z zaleceniami CLSI (NCCLS), procedura EP5-A (8). 1,29 4,01 2,50 2,05 6,35 1,82 1 0,81 2,50 3,56 2 3,69 11,44 1,38 Zakres pomiaru: Oznaczenie potwierdziło zakres pomiaru od 0,10 do 7,77 µmol/l (od 0,30 do 24,08 ), z automatycznym rozcieńczeniem następczym do 31,20 (96,72 ). Liniowość odczynnika ustalono do wartości 7,80 (24,18 ), stosując zalecenia CLSI (NCCLS), procedura EP6-A (9). Korelacja: Próbki: 132 próbek (surowicy) pobranych od pacjentów koreluje się z komercyjnie dostępnym odczynnikiem 3 / 5
użytym jako wzorzec, zgodnie z zaleceniami CLSI (NCCLS), procedura EP9-A2 (10). Wartości zawierały się w zakresie od 0,10 do 7,77 µmol/l (od 0,30 do 24,08 ). Równanie dla otrzymanej linii allometrycznej (11) jest następujące: Y = 1,04 X + 0,05 () Y = 1,04 X + 0,15 () przy współczynniku korelacji r 2 = 0,998. Czynniki zakłócające: Hemoglobina: Nie obserwuje się znaczącego wpływu do 72,5 µmol/l (125 ). Triglicerydy: Nie obserwuje się znaczącego wpływu do stężenia Intralipid (świadczącego o lipemii) wynoszącego 3 (262,5 ). Bilirubina całkowita: Nie obserwuje się znaczącego wpływu do 102 µmol/l (6 ). Bilirubina bezpośrednia: Nie obserwuje się znaczącego wpływu do 385 µmol/l (22,5 ). Young podaje także inne ograniczenia, a w szczególności listę leków oraz zmiennych przedanalitycznych, które według obecnego stanu wiedzy wpływają na wyniki tej metody (12, 13). Stabilność kalibracji: Odczynnik jest kalibrowany w dniu 0. Stabilność kalibracji jest kontrolowana przez wykonanie testów na 2 próbkach kontrolnych. Stabilność kalibracji wynosi 34 dni. Uwaga: Ponowną kalibrację odczynnika zaleca się w przypadku zmiany jego serii oraz w przypadku, gdy wyniki kontroli jakości wykroczą poza założony zakres. Wersja aplikacji: Mocz Liczba oznaczeń: 100 Jeżeli liczba oznaczeń do wykonania jest niewielka i użytkownik analizatora Pentra C400 chce korzystać z kasety do upływu okresu stabilności roboczej, HORIBA Medical zaleca użycie membrany XEC084, co pozwoli uzyskać liczbę oznaczeń podaną na tej ulotce. Stabilność robocza odczynników: Po otwarciu kaseta z odczynnikiem umieszczona w chłodzonej komorze analizatora Pentra C400 zachowuje stabilność przez 70 dni. Wykrywalność: Wykrywalność ustalono zgodnie z zaleceniami procedury Valtec (7) i wynosi ona 0,41 (1,28 ). Trafność i precyzja: Powtarzalność (precyzja w trakcie pracy urządzenia) 5 Przeprowadzane jest 20 oznaczeń dla próbek o niskim, średnim i wysokim stężeniu oraz dla 2 kontroli zgodnie z zaleceniami protokołu Valtec (7). 6,1 19,0 1,67 14,3 44,2 0,80 1 2,1 6,6 3,87 2 12,8 39,8 1,21 3 19,6 60,9 0,94 4 47,0 145,6 1,78 5 53,4 165,4 0,79 Powtarzalność (precyzja całkowita) Przeprowadza się podwójne oznaczenia 2 próbek (o stężeniu niskim i wysokim) i 2 kontroli przez 20 dni (2 serie dziennie) zgodnie z zaleceniami CLSI (NCCLS), procedura EP5-A (8). 6,3 19,5 2,82 14,8 45,9 2,06 1 2,3 7,1 5,95 2 29,8 92,4 1,97 Zakres pomiaru: Oznaczenie potwierdziło zakres pomiaru od 0,41 do 64 (od 1,28 do 198,4 ), a z automatycznym rozcieńczeniem następczym do 128,00 (396,80 ). Liniowość odczynnika ustalono do wartości 64 (198,4 ), stosując zalecenia CLSI (NCCLS), procedura EP6-A (9). Objętość próbki: 5 µl/oznaczenie 4 / 5
Korelacja: 119 pobrane od pacjentów próbki (mocz) koreluje się z komercyjnie dostępnym odczynnikiem, służącym jako wzorzec, zgodnie z zaleceniami CLSI (NCCLS), procedura EP9-A2 (10). Wartości zawierały się w zakresie od 0,71 do 63,48 (od 2,2 do 196,8 ). Równanie dla otrzymanej linii allometrycznej (11) jest następujące: Y = 1,07 X - 0,35 () Y = 1,07 X - 1,10 () przy współczynniku korelacji r 2 = 0,9892. Czynniki zakłócające: Hemoglobina: Nie obserwuje się znaczącego wpływu do 213 µmol/l (367 ). Bilirubina Nie obserwuje się znaczącego bezpośrednia: wpływu do 650 µmol/l (38 ). Young podaje także inne ograniczenia, a w szczególności listę leków oraz zmiennych przedanalitycznych, które według obecnego stanu wiedzy wpływają na wyniki tej metody (12, 13). Stabilność kalibracji: Odczynnik jest kalibrowany w dniu 0. Stabilność kalibracji jest kontrolowana przez wykonanie testów na 2 próbkach kontrolnych. Stabilność kalibracji wynosi 34 dni. Uwaga: Ponowną kalibrację odczynnika zaleca się w przypadku zmiany jego serii oraz w przypadku, gdy wyniki kontroli jakości wykroczą poza założony zakres. Wersja aplikacji: Współczynnik konwersji: x 31 = mg/l x 3,1 = Ostrzeżenie 2. Daly JA, Ertingshausen G. Direct method for determining inorganic phosphorus in serum with the Centrifichem. Clin. Chem. (1972) 18: 263. 3. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1 st ed. Frankfurt: THBooks Verlagsgesellshaft (1998): 241-247. 4. Guder WG, Zawta B. The quality of diagnostics samples. Samples: from the patient to the laboratory. 1 st ed. Guder WG, Narayanan S, Zawta B, (WHILEY- VCH, Darmstadt, Germany), (2001): 52-53. 5. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Urinalysis and Collection, Transportation, and Preservation of Urine Specimens; Approved Guideline-Second Edition; NCCLS document GP16- A2 (2001). 6. Roberts WL, McMillin GA, Burtis CA, Bruns DE. Reference Information for the Clinical Laboratory, TIETZ Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics, 4 th ed., Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE, (Elsevier Saunders eds., St Louis, USA), (2006): 2290. 7. Vassault A, Grafmeyer D, Naudin C et al. Protocole de validation de techniques (document B). Ann. Biol. Clin. (1986) 44: 686-745. 8. Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP5-A (1999) 19 (2). 9. Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP6-A (2003) 23 (16). 10. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples. Approved Guideline, 2 nd ed., CLSI (NCCLS) document EP9-A2 (2002) 22 (19). 11. Passing H, Bablock W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1983) 21: 709-20. 12. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4 th Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 143-163. 13. Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests. 2 nd Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 120-132. Użytkownik ma obowiązek sprawdzić, czy niniejszy dokument dotyczy używanego odczynnika. Bibliografia 1. Endres DB, Rude RK. Mineral and bone metabolism. Tietz Fundamentals of Clinical Chemestry, Burtis CA and Ashwood ER (WB. Saunders eds. Philadelphia USA), (2001): 795. 5 / 5