QUANTA Lite Celiac DGP Screen 704545 Do diagnostyki in vitro Złożoność CLIA: Wysoka

QUANTA Lite Celiac DGP Screen 704545 Do diagnostyki in vitro Złożoność CLIA: Wysoka Przeznaczenie Test QUANTA Lite TM badania przesiewowego DGP celiakii to test immunoenzymatyczny (ELISA) do półilościowej detekcji przeciwciał IgA i IgG skierowanych przeciwko syntetycznym, deamidowanym peptydom będących pochodnymi gliadyny w surowicy ludzkiej. Obecność tych przeciwciał deamidowanych peptydów można użyć w połączeniu z wynikami klinicznymi i innymi testami laboratoryjnymi do wspomagania diagnozy celiakii z wystarczającym lub niewystarczającym poziomem IgA oraz zapalenia opryszczkowatego skóry. Podsumowanie i wyjaśnienie testu Celiakia lub enteropatia związana z nadwrażliwością na gluten to choroba przewlekła, której główne cechy obejmują stan zapalny i charakterystyczne histologiczne spłaszczenie błony śluzowej przewodu pokarmowego, którego skutkiem jest zespół złego wchłaniania. Dokładna etiologia choroby pozostaje nieznana, ale gliadyna lub rozpuszczalna w alkoholu frakcja glutenu pszennego jest zdecydowanie czynnikiem toksycznym. 1 Pierwotnie do diagnozowania celiakii i powiązanych zaburzeń stosowano serię biopsji jelitowych. Ostatnio zasugerowano wykonywanie badań serologicznych jako badań przesiewowych wykonywanych u pacjentów z podejrzeniem enteropatii wrażliwej na gluten, jak również do monitorowania przestrzegania diety. 2-5 Europejskie Towarzystwo Gastroenterologii Pediatrycznej (European Society of Pediatric Gastroenterology and Nutrition (ESPGAN)) w celu zmniejszenia liczby biopsji jelita potrzebnych do postawienia rozpoznania zaleciło stosowanie markerów serologicznych, takich jak gliadyna, jak również przeciwciał przeciwko retikulinie (białko tkanki łącznej układu chłonnego) i śródmięsnej (endomysium). 6 Niedawne prace ujawniły, że reaktywne przeciwciała gliadyny pacjentów z celiakią wiążą bardzo ograniczoną liczbę swoistych epitopów na cząsteczce gliadyny. 7,8 Te same badania ujawniły później, że selektywna deamidacja gliadyny przez enzym związany z celiakią (transglutaminaza tkankowa) powoduje silniejsze wiązanie przez przeciwciała przeciw-gliadynowe. Na podstawie powyższych obserwacji wykazano, że testy wykorzystujące deamidowane i określone peptydy mają wyższą dokładność diagnostyczną celiakii niż 9, 10, 11 standardowe testy przeciw-gliadynowe i ttg. U pacjentów z enteropatią związaną z nadwrażliwością na gluten wykrywano zarówno przeciwciała IgA oraz IgG gliadyny. 2,3 Strategia czułych badań przesiewowych w populacji wysokiego ryzyka obejmuje badanie przeciwciał IgG i IgA, ponieważ u znacznej części pacjentów z celiakią występuje niedobór przeciwciał IgA. 12 Przeciwciała IgA gliadyny są interesujące ze względu na przebieg choroby w czasie oraz monitorowanie przestrzegania diety bezglutenowej. 5 Zapalenie opryszczkowate skóry (ang. Dermatitis Herpetiformis, DH) to choroba skóry wywoływana, podobnie jak celiakia, przez trawienie białka pszenicy. Większość pacjentów z DH ma atrofię kosmków jelita czczego identyczną z występującą w przypadku celiakii i ścisła dieta bezglutenowa powoduje poprawę zmian chorobowych jelit oraz skóry. 13, 14 Bieżące metody serologiczne, takie jak testy EMA i ttg wykazują niezadowalającą wydajność podczas badania pod kątem DH (czułość w zakresie zaledwie 60 75%) 15,16 w porównaniu z czułością 95% i wyższą w przypadku celiakii. Test QUANTA Lite badania przesiewowego DGP celiakii to test o podwyższonej wydajności do jednoczesnego wykrywania przeciwciał IgA i IgG skierowanych przeciwko selektywnie deamidowanym, syntetycznym peptydom będących pochodnymi białka pszenicy gliadyny, który umożliwia wykrywania celiakii nawet przy współistniejącym niedoborze IgA. Zasada badania Oczyszczone syntetyczne peptydy gliadyny wiążą się z dołkami płytek polistyrenowych w warunkach, które zabezpieczają antygen w jego stanie natywnym. Wstępnie rozcieńczone kontrole oraz surowice pacjentów są dodawane do oddzielnych dołków umożliwiając związanie wszelkich występujących przeciwciał IgA i IgG peptydu gliadyny z unieruchomionym antygenem. Niezwiązana próbka jest wypłukiwana i do każdego dołka dodawany jest koniugat znakowanego enzymem koniugatu przeciwciał przeciw-ludzkich IgA i IgG. Druga inkubacja umożliwia przeciwciałom przeciw-ludzkim IgA i/lub IgG znakowanych enzymem związanie się z dowolnymi przeciwciałami pacjenta, które zostały przytwierdzone do mikrodołków. Po wypłukaniu wszelkich niezwiązanych przeciwciał przeciw-ludzkich IgA i/lub IgG znakowanych enzymem, aktywność pozostałego enzymu bada się dodając substrat chromogeniczny i mierząc intensywność powstałej barwy. Badanie może zostać ocenione spektrofotometrycznie, poprzez zmierzenie i porównanie intensywności barwy, która powstaje w dołkach z próbkami od pacjenta z barwą dołków kontrolnych. Odczynniki 1. Polistyrenowa płytka z mikrodołkami ELISA pokryta oczyszczonym antygenem peptydów gliadyny (12-1 x 8 dołków), z uchwytem w torebce foliowej zawierającej osuszacze 2. Kontrola negatywna testu ELISA, 1 fiolka buforu zawierająca środek konserwujący i surowicę ludzką bez przeciwciał ludzkich skierowanych przeciwko peptydom gliadyny, wstępnie rozcieńczona, gotowa do użycia, 1,2 ml 3. Słabo pozytywna kontrola testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii, 1 fiolka buforu zawierającego środek konserwujący oraz przeciwciała IgA i IgG surowicy ludzkiej przeciwko peptydom gliadyny, wstępnie rozcieńczona, gotowa do użycia, 1,2 ml 4. Wysoko pozytywna kontrola testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii, 1 fiolka buforu zawierającego środek konserwujący oraz przeciwciała IgA i IgG surowicy ludzkiej przeciwko peptydom gliadyny, wstępnie rozcieńczona, gotowa do użycia, 1,2 ml 1

5. Rozcieńczalnik do próbek HRP, 1 fiolka zabarwienie różowe, zawiera sól fizjologiczną buforowaną TRIS, Tween 20, stabilizatory białka i konserwant, 50 ml 6. Koncentrat do płukania HRP, 1 fiolka koncentratu 40x zabarwienie czerwone, zawiera sól fizjologiczną buforowaną TRIS i Tween 20, 25 ml. Instrukcje dotyczące rozcieńczania można znaleźć w sekcji Metody. 7. Koniugat Ig G/A, (kozi), przeciwciała przeciw-ludzkie IgG i IgA, 1 fiolka bezbarwny, zawiera bufor, stabilizatory białka i konserwant, 10 ml 8. Chromogen TMB, 1 fiolka zawierająca stabilizatory, 10 ml 9. Roztwór zatrzymujący HRP, kwas siarkowy 0,344M, 1 fiolka bezbarwny, 10 ml Ostrzeżenia 1. OSTRZEŻENIE: Ten produkt zawiera substancję chemiczną (chloramfenikol 0,02%) w rozcieńczalniku do próbek, kontrolach i koniugacie, która według stanu Kalifornii wywołuje raka. 2. Wszystkie materiały pochodzenia ludzkiego używane w przygotowywaniu kontroli dla tego produktu zostały przetestowane i na podstawie metod zatwierdzonych przez FDA stwierdzono że nie zawierają przeciwciał przeciwko HIV, HBsAg i HCV. Jednak żadna metoda testowania nie może całkowicie zagwarantować braku obecności HIV, HBV, HCV lub innych czynników zakaźnych. Z tego powodu słabo pozytywna kontrola testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii, wysoko pozytywna kontrola testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii i kontrola negatywna testu ELISA powinny być oznaczane w taki sam sposób jak materiał potencjalnie zakaźny. 17 3. Jako konserwant stosowany jest azydek sodu. Azydek sodu jest trucizną i może być toksyczny w przypadku połknięcia lub wchłonięcia przez skórę lub oczy. Azydek sodu może wchodzić w reakcję z ołowianą lub miedzianą instalacją wodociągową, tworząc potencjalnie wybuchowe azydki metali. Jeśli do usuwania odczynników używane są zlewy, należy przepłukiwać je dużą ilością wody, aby nie dopuścić do gromadzenia się azydku. 4. Koniugat HRP zawiera rozcieńczoną trującą/korozyjną substancję chemiczną, która może być toksyczna w przypadku spożycia w dużej ilości. Aby uniknąć potencjalnych oparzeń chemicznych, należy unikać kontaktu ze skórą i oczami. 5. Chromogen TMB zawiera środek drażniący, w który może być szkodliwy w przypadku wdychania, spożycia lub wchłonięcia przez skórę. Aby uniknąć urazów, należy unikać wdychania, spożycia lub kontaktu ze skórą i oczami. 6. Roztwór zatrzymujący HRP składa się z rozcieńczonego roztworu kwasu siarkowego. Unikać wystawienia na działanie zasad, metali lub innych związków, które mogą wchodzić w reakcje z kwasami. Kwas siarkowy jest trucizną i ma właściwości korozyjne. W razie połknięcia może być toksyczny. Aby uniknąć oparzeń chemicznych, należy unikać kontaktu ze skórą i oczami. 7. Podczas pracy z dostarczonymi odczynnikami należy stosować odpowiednie środki ochrony osobistej. 8. Rozlane odczynniki należy natychmiast usunąć. Należy przestrzegać wszystkich krajowych i lokalnych przepisów w zakresie utylizacji odpadów. Środki ostrożności 1. Ten produkt jest przeznaczonych do zastosowań diagnostycznych in vitro. 2. Zastąpienie składników dostarczonych w tym systemie innymi składnikami może skutkować osiągnięciem niespójnych wyników. 3. Niepełne lub nieprawidłowe płukanie i niewystarczające usunięcie płynu z płytek z dołkami ELISA wpłynie negatywnie na precyzję badań i/lub spowoduje wysoki poziom tła. 4. Dostosowanie tego badania do stosowania ze zautomatyzowanymi analizatorami próbek oraz innymi urządzeniami do pracy z płynami, w całości lub w części, może skutkować rozbieżnością wyników w stosunku do badań przeprowadzanych ręcznie. Obowiązkiem każdego laboratorium jest potwierdzenie, że wyniki testów uzyskanych na podstawie zautomatyzowanych badań mieszczą się w akceptowalnych limitach. 5. Na wyniki analizy wpływa wiele różnych czynników. Obejmują one temperaturę początkową odczynników, temperaturę otoczenia, dokładność i powtarzalność techniki pipetowania, dokładność płukania i usuwania płynu z dołków płytek ELISA, fotometr użyty do analizy wyników oraz czasy trwania inkubacji podczas badania. Uzyskanie dokładnych i powtarzalnych wyników wymaga staranności i precyzji. 6. Zalecane jest ścisłe przestrzeganie procedury testowej. 7. Niedokładne zamknięcie torebki z zamknięciem strunowym, zawierającej płytki z mikrodołkami i osuszaczami spowoduje degradację antygenu i brak precyzji badania. 8. Dwukrotne lub wielokrotne użycie koniugatu HRP z jednej butelki w pewnym okresie czasu może spowodować niedopuszczalnie niski poziom absorbancji. Aby nie dopuścić do takiej sytuacji istotne jest przestrzeganie wszystkich zaleceń dotyczących procedur pracy z koniugatem HRP. 9. Zanieczyszczenie chemiczne koniugatu HRP może być spowodowane nieprawidłowym czyszczeniem lub płukaniem sprzętu lub narzędzi. Pozostałości typowych laboratoryjnych substancji chemicznych, takich jak formalina, substancja wybielająca, etanol lub detergent, z czasem spowoduje degradację koniugatu HRP. Po użyciu chemicznych substancji czyszczących/ dezynfekujących dokładnie wypłukać cały sprzęt i wszystkie narzędzia. 2

Warunki przechowywania 1. Wszystkie odczynniki z zestawu przechowywać w temperaturze 2-8 C. Nie zamrażać. Odczynniki są trwałe do daty ważności, pod warunkiem, że są przechowywane i używane zgodnie z instrukcjami. 2. Nieużyte płytki z mikrodołkami pokrytymi antygenem powinny być starannie zamknięte w torebce foliowej z osuszaczami i przechowywane w temperaturze 2-8 C. 3. Rozcieńczony bufor do płukania zachowuje trwałość przez 1 tydzień w temperaturze 2-8 C. Pobieranie próbek Ta procedura powinna być wykonana z próbką surowicy. Dodanie azydku lub innych konserwantów do próbek analitycznych może mieć negatywny wpływ na wyniki. Nie używać próbek zawierających widoczne zanieczyszczenia, skażonych bakteryjnie lub podgrzanych. Należy unikać całkowicie zhemolizowanej lub lipemicznej surowicy albo próbek. Po pobraniu surowica powinna być oddzielona od skrzepu. Dokument CLSI (NCCLS) H18-A3 zaleca następujące warunki przechowywania próbek: 1) Przechowywać próbki w temperaturze pokojowej nie dłużej niż 8 godzin. 2) Jeśli badanie nie zostanie zakończone w ciągu 8 godzin, schłodzić próbkę do temperatury 2-8 C. 3) Jeśli badanie nie zostanie ukończone w ciągu 48 godzin lub w przypadku transportu próbki, należy zamrozić ją w temperaturze -20 C lub niższej. Zamrożone próbki po rozmrożeniu i przed badaniem muszą zostać dobrze wymieszane. 18 Badanie Dostarczone materiały 1 Płytka z mikrodołkami testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii (12-1 x 8 dołków), z uchwytem 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonej kontroli negatywnej ELISA 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonej słabo pozytywnej kontroli testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonej wysoko pozytywnej kontroli testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii 1 50 ml rozcieńczalnika do próbek HRP 1 25 ml koncentratu do płukania HRP, koncentrat 40x 1 10 ml koniugatu HRP Ig G/A, (kozi), przeciwciała przeciw-ludzkie IgG i IgA 1 10 ml chromogenu TMB 1 10 ml roztworu zatrzymującego HRP, kwas siarkowy 0,344 M Wymagane materiały nie dołączone do zestawu Mikropipety na 5, 100, 200-300 i 500 µl Jednorazowe końcówki mikropipet Probówki do roztworów próbek pochodzących od pacjenta, 4 ml objętości Woda destylowana lub dejonizowana Naczynie o objętości 1 l do rozcieńczonego koncentratu HRP do płukania Czytnik płytek z mikrodołkami umożliwiający pomiar gęstości optycznej przy 450 nm (i przy 620 nm dla odczytów przy dwóch długościach fali) Sposób przygotowania Przed rozpoczęciem 1. Doprowadzić wszystkie odczynniki i próbki do temperatury pokojowej (20-26 C) i dobrze wymieszać. 2. Rozcieńczyć koncentrat do płukania HRP w stosunku 1:40, dodając zawartość butelki koncentratu do płukania HRP do 975 ml wody destylowanej lub dejonizowanej. Jeśli cała płytka nie zostanie przetworzona w tym czasie, można przygotować mniejszą ilość. W tym celu należy dodać 2,0 ml koncentratu do 78 ml wody destylowanej lub dejonizowanej na każde 16 dołków, które będą użyte. Rozcieńczony bufor zachowuje trwałość przez 1 tydzień w temperaturze 2-8 o C. 3. Przygotować roztwór 1:101 każdej próbki pobranej od pacjenta, dodając 5 µl próbki do 500 µl rozcieńczalnika do próbek HRP. Rozcieńczone próbki muszą być użyte w ciągu 8 godzin od przygotowania. NIE ROZCIEŃCZAĆ słabo pozytywnej kontroli testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii, wysoko pozytywnej kontroli testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii i kontroli negatywnej testu ELISA. 4. Oznaczenie obecności lub braku przeciwciał IgA i/lub IgG gliadyny z wykorzystaniem jednostek dowolnych wymaga dwóch dołków dla każdej z trzech kontroli lub jednego bądź dwóch dołków dla każdej próbki pacjenta. Zalecane jest wykonanie duplikatów próbek. Procedura badania 1. WSZYSTKIE ODCZYNNIKI PRZED ROZPOCZĘCIEM BADANIA MUSZĄ BYĆ DOPROWADZONE DO TEMPERATURY POKOJOWEJ (20-26 C). Umieścić wymaganą liczbę mikrodołków/pasków w uchwycie. Natychmiast umieścić nieużywane płytki w torebce foliowej zawierającej osuszacz i dobrze ją zamknąć, aby ograniczyć kontakt z parą wodną. 2. Dodać do dołków 100 µl wstępnie rozcieńczonej słabo pozytywnej kontroli testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii, wysoko pozytywnej kontroli testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii, kontroli negatywnej testu ELISA oraz rozcieńczonych próbek pacjenta. Przykryć dołki i inkubować przez 30 minut w temperaturze pokojowej na równej powierzchni. Czas inkubacji rozpoczyna się po dodaniu ostatniej próbki. 3

3. Etap płukania: Odessać całkowicie zawartość każdego dołka. Wlać 200 300 µl rozcieńczonego buforu HRP do płukania do wszystkich dołków, a następnie go odessać. Powtórzyć tę sekwencję jeszcze dwukrotnie, aby łącznie przeprowadzić trzy płukania. Odwrócić płytkę i postukać w nią na materiale pochłaniającym w celu usunięcia pozostałości płynu po ostatnim płukaniu. Ważne jest, aby całkowicie opróżnić każdy dołek po każdym etapie płukania. Zachować tę samą sekwencję odsysania, jak w przypadku dodawania próbki. 4. Do każdego dołka dodać 100 μl koniugatu Ig G/A HRP. Koniugat powinien być usunięty z butelek z zastosowaniem standardowych warunków aseptycznych oraz zalecanych technik laboratoryjnych. Pobrać z butelki jedynie wymaganą do analizy ilość koniugatu. ABY UNIKNĄĆ POTENCJALNEGO ZANIECZYSZCZENIA BAKTERYJNEGO I/LUB CHEMICZNEGO, NIE WOLNO Z POWROTEM WLEWAĆ NIEUŻYTEGO KONIUGATU DO BUTELKI. Inkubować dołki przez 30 minut jak w etapie 2. 5. Etap płukania: Powtórzyć etap 3. 6. Dodać 100 µl chromogenu TMB do każdego dołka i inkubować w ciemności przez 30 minut w temperaturze pokojowej. 7. do każdego dołka dodać 100 µl roztworu zatrzymującego HRP. Zachować tę samą sekwencję i czas dodawania roztworu zatrzymującego HRP, jak w przypadku chromogenu TMB. Delikatnie postukać płytkę palcem, aby dokładnie wymieszać zawartość dołków. 8. Odczytać absorbancję (gęstość optyczną) każdego dołka przy długości fali 450 nm w ciągu jednej godziny od zatrzymania reakcji. Jeśli wymagane są pomiary bichromatyczne, referencyjną długością fali może być długość 620 nm. Kontrola jakości 1. Z każdą serią próbek należy oznaczać słabo pozytywną kontrolę testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii, wysoko pozytywną kontrolą testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii i kontrolą negatywną testu ELISA, aby upewnić się, że wszystkie odczynniki i procedury są prawidłowe. 2. Proszę zwrócić uwagę, że słabo pozytywna kontrola testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii, wysoko pozytywna kontrola testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii oraz kontrola negatywna testu ELISA są wstępnie rozcieńczone i dlatego nie kontrolują one metod proceduralnych związanych z rozcieńczaniem próbek. 3. Dodatkowe kontrole mogą być przebadane zgodnie z wytycznymi lub wymaganiami lokalnych i/lub krajowych przepisów lub organów normalizacyjnych. Dodatkowe odpowiednie surowice kontrolne można przygotować, dzieląc połączone próbki surowicy ludzkiej i przechowując je w temperaturze < -20 C. 4. Aby wyniki badania mogły być uznane jako ważne, muszą zostać spełnione wszystkie poniższe kryteria. Jeśli jakiekolwiek kryterium nie będzie spełnione, badanie powinno być traktowane jako nieważne i powinno zostać powtórzone. a. Absorbancja wstępnie rozcieńczonej wysoko pozytywnej kontroli testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii musi być wyższa od absorbancji wstępnie rozcieńczonej słabo pozytywnej kontroli testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii, która musi być wyższa od absorbancji wstępnie rozcieńczonej kontroli negatywnej testu ELISA. b. Wstępnie rozcieńczona wysoko pozytywna kontrola testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii musi mieć absorbancję wyższą niż 1,0, natomiast absorbancja wstępnie rozcieńczonej kontroli negatywnej nie może przekraczać 0,2. c. Absorbancja słabo pozytywnej kontroli testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii musi być przynajmniej dwukrotnie wyższa niż kontroli negatywnej testu ELISA lub przekraczać 0,25. d. Kontrola negatywna testu ELISA oraz wysoko pozytywna kontrola testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii mają monitorować występowanie poważnych nieprawidłowości związanych z odczynnikami. Wysoko pozytywna kontrola testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii nie zapewni precyzji na poziomie wartości granicznej testu. e. Dodatkowe wytyczne dotyczące odpowiednich praktyk QC można znaleźć w dokumencie CLSI (NCCLS) C24-A2. 19 Obliczanie wyników W pierwszej kolejności jest określana średnia gęstość optyczna każdego zestawu duplikatów. Reaktywność dla każdej próbki można następnie obliczyć dzieląc średnią gęstość optyczną próbki przez średnią gęstość optyczną słabo pozytywnej kontroli testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii. Wynik jest mnożony przez liczbę jednostek przypisanych do słabo pozytywnej kontroli testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii występującej na etykiecie. Gęstość optyczna próbki Wartość próbki = x słabo pozytywna kontrola testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii (jednostki) Gęstość optyczna słabo pozytywnej (jednostki) kontroli testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii Reaktywność w sposób nieliniowy zależy od ilości obecnych przeciwciał. Wzrosty i spadki stężeń przeciwciał u pacjenta będą odzwierciedlone w analogicznym wzroście lub spadku reaktywności, jednak zmiana ta nie jest proporcjonalna (tzn. podwojenie stężenia przeciwciał nie oznacza podwojenia reaktywności). 4

Interpretacja wyników Badanie ELISA jest bardzo wrażliwe na technikę i jest w stanie wychwycić nawet najdrobniejsze różnice w populacjach pacjentów. Poniższe wartości są jedynie wartościami sugerowanymi. Każde laboratorium powinno ustalić własny normalny zakres na podstawie własnych technik, kontroli, sprzętu i populacji pacjentów, zgodnie z własnymi ustalonymi procedurami. Próbka następnie może być sklasyfikowana jako negatywna, słabo pozytywna, średnio pozytywna lub silnie pozytywna, zgodnie z poniższą tabelą. Jednostki Negatywna <20 Słabo pozytywna 20 30 Możliwe są wyniki od średnio pozytywnych do Silnie pozytywna >30 1. Wynik pozytywny wskazuje na obecność przeciwciał IgA i/lub IgG gliadyny i sugeruje możliwość występowania określonych enteropatii wrażliwości na gluten, takich jak celiakia i zapalenie opryszczkowate skóry. 2. Wynik negatywny wskazuje brak przeciwciał przeciwciał IgA i/lub IgG gliadyny lub ich poziom poniżej wartości granicznej testu. 3. Zalecane jest, aby wyniki raportowane przez laboratorium zawierały oświadczenie: Następujące wyniki uzyskano za pomocą testu ELISA INOVA QUANTA Lite badania przesiewowego DGP celiakii. Wartości IgA i/lub IgG gliadyny uzyskane przy użyciu metod testowania różnych producentów nie mogą być stosowane zamiennie. Rząd wielkości poziomów raportowanego przeciwciała nie może być skorelowany z mianem punktu końcowego. Ograniczenia badania 1. Wynik negatywny u nieleczonego pacjenta nie wyklucza całkowicie enteropatii wrażliwości na gluten. Próbki negatywne mogą być testowane ponownie pod kątem innych przeciwciał związanych z celiakią, takich jak transglutaminaza śródmięśniowa (EMA) lub tkankowa (ttg). 2. U pacjentów leczonych, u których znana jest ekspresja IgA, poziomy przeciwciał IgA gliadyny stanowią lepszy wskaźnik przestrzegania diety niż stężenia przeciwciał IgG gliadyny. 5 3. Możliwe są wyniki fałszywie pozytywne (wysokie poziomy przeciwciał bez charakterystycznych wyników histologicznych). Z antygenem DGP rzadko reagują przeciwciała innych zaburzeń żołądkowo-jelitowych i próbek prawidłowych. 4. Związek między zapaleniem opryszczkowatym skóry i enteropatią wrażliwości na gluten jest tak silny, że sugerowano, że obie choroby mają taką samą etiologię; u takich pacjentów oznaczanie przeciwciał DGP jest użyteczne w wykrywaniu bezobjawowej celiakii i szacowania ciężkości objawów żołądkowo-jelitowych. 13,14 5. Ten test wykrywa jednocześnie przeciwciała IgA i IgG. Jeżeli preferowane jest indywidualne oznaczanie swoistych przeciwciał IgA lub IgG, firma INOVA zapewnia w tym celu oddzielne zestawy ELISA dla przeciwciał IgA i IgG (QUANTA Lite QUANTA Lite gliadyny, IgA II TM gliadyny, IgG II). 6. Wyniki tego badania powinny być użyte w powiązaniu z wynikami klinicznymi i innymi badaniami serologicznymi. 7. Charakterystyka wyników badania nie została ustanowiona dla podłoża innego niż surowica. Spodziewane wartości Zdolność testu QUANTA Lite TM badania przesiewowego DGP celiakii do wykrywania przeciwciał IgG oraz IgA gliadyny oceniano przez porównanie z testami ELISA QUANTA Lite gliadyna, IgA II oraz QUANTA Lite gliadyna, IgG II. Normalny zakres Czterysta dziewięćdziesiąt siedem losowych bezobjawowych, zdrowych osób mieszkających na terenie USA badano pod kątem przeciwciał DGP. Wśród nich trzystu dawców mieściło się w zakresie wieku od 14 do 78 lat i grupa obejmowała równą liczbę mężczyzn i kobiet. Cztery próbki (0,8%) przekraczało wartość graniczną 20-jednostkowej wartości granicznej. Dwie było słabo pozytywne z wartościami 20,1 i 20,2 jednostek, a jedna umiarkowanie pozytywna z wartością 46,6 jednostki. Czwartą pozytywną przy 25,4 jednostki uznano za prawdziwą celiakię ze względu na fakt, że próbka była także silnie pozytywna dla przeciwciał IgA skierowanych przeciwko transglutaminazie tkankowej (57 jednostek). Średnia wartość tych 497 próbek wyniosła 3,17 jednostek. Standardowe odchylenie próbek wyniosło 3,0 jednostki. Średnia wartość wynosi sześć odchyleń standardowych poniżej 20-jednostkowej wartości granicznej. 5

Specyficzna charakterystyka wyników Porównanie z urządzeniami predykatowymi Sto jeden próbek z trzech laboratoriów referencyjnych celiakii przetestowano wewnętrznie z użyciem testów ELISA QUANTA Lite badania przesiewowego DGP celiakii, QUANTA Lite gliadyna, IgA II i QUANTA Lite gliadyna, IgG II. Te wyniki oraz 497 normalnych przedstawiono poniżej. N = 598 Badanie przesiewowe DGP celiakii Gliadyna, IgG II i/lub gliadyna, IgA II Pozytywna Negatywny Pozytywna 39 3* Negatywny 11** 545 Procentowa zgodność wyników pozytywnych: 39/50 (78,0%) Procentowa zgodność wyników negatywnych: 545/548 (99,4%) Ogólna zgodność: 548/598 (91,6%) *Z 3 próbek uznanych za pozytywne w badaniu przesiewowym DGP celiakii, ale negatywnych z zestawami gliadyny II, 2 było pacjentami z celiakią na diecie bezglutenowej z 28,7 i 20,9 jednostkami. Trzeci pacjent był krewnym 1 stopnia pacjenta z celiakią z 20,2 jednostki. **Z jedenastu próbek negatywnych w zestawie badania przesiewowego DGP celiakii, ale pozytywnych z dowolnym z zestawów gliadyny II, 9 pochodziło ze zwykłego badania. Z pozostałych dwóch obaj byli pacjentami z celiakią na diecie bezglutenowej. Jeden miał 20,1 jednostki w teście gliadyna, IgG II, a drugi miał 25,3 jednostki w teście gliadyna, IgA II. Badania kliniczne Próbki określone klinicznie jako pochodzące od pacjentów z celiakią, od pacjentów z celiakią z niedoborem IgA, od pacjentów z celiakią będących na diecie bezglutenowej, krewnych pierwszego stopnia pacjentów z celiakią, pacjentów z zapaleniem opryszczkowatym skóry, kontroli z niedoborem IgA oraz pacjentów nie cierpiących na celiakię badano w wewnętrznych oraz zewnętrznych badaniach klinicznych z użyciem badania przesiewowego DGP celiakii QUANTA Lite. Poniżej przedstawiono podsumowanie próbek zdefiniowanych klinicznie oraz 517 wspominanych wyżej próbek zakresu prawidłowego. Grupa pacjentów Liczba Pozytywny wynik badania przesiewowego DGP celiakii % Pacjenci z celiakią 85 81 95,3% Niedobór przeciwciał IgA w celiakii 50 50 100% Pacjenci z celiakią na diecie bezglutenowej 33 9 27% Krewni 1 stopnia 18 2* 11% Pacjenci z zapaleniem opryszczkowatym skóry 65 59** 91% Kontrole z niedoborem IgA 36 0 0% Pacjenci nie cierpiący na celiakię 81 1 1,2% Ludzie zdrowi 517 4*** 0,8% *Jeden z krewnych miał 41,3 jednostki i był h-ttg oraz EMA pozytywny. Drugi miał 20,2 jednostki i był h-ttg oraz EMA negatywny. **W tej samej grupie pacjentów tylko 54 lub 83% było h-ttg pozytywnych i 6 z tych 65 osób nie miało objawów jelitowych (biopsja Marsh 0). ***Z tych 4 próbek 1 miała 20,1 jednostki, a inne 20,2 jednostki. Wartość graniczna wynosi 20 jednostek. Inny z tych 4 miał 25,4 jednostki i był także silnie h-ttg pozytywny i w istocie mógł mieć celiakię. Wydajność testu ELISA badania przesiewowego DGP celiakii w diagnostyce celiakii: Test QUANTA Lite badania przesiewowego DGP Diagnoza Pozytywna Negatywny (Kontrole chore oraz kontrole zdrowe) Łącznie Pozytywna 131 5 136 Negatywny 4 629 633 Łącznie 135 634 769 Wrażliwość: 97% (131/135) Swoistość: 99,2% (629/634) Czułość Czułość całkowita wobec celiakii jest obliczana przez grupowanie wyników 85 chorych na celiakię oraz 50 chorych na celiakię z niedoborem IgA. Całkowita liczba chorych na celiakię wynosi 135, z czego 131 lub 97% ma wyniki pozytywne. Swoistość Swoistość można obliczyć grupując 517 wyników prawidłowych (w tym próbki h-ttg pozytywne) 81 kontroli nie cierpiących na celiakię oraz 36 kontroli z niedoborem IgA. Ta grupa liczy łącznie 634 próbki. Z nich tylko 5 próbek było pozytywnych dając swoistość wynoszącą 99,2%. 6

Reaktywność krzyżowa W celu oceny potencjalnych problemów związanych z reaktywnością krzyżową z innymi autoprzeciwciałami, za pomocą zestawu QUANTA Lite badania przesiewowego DGP celiakii oznaczono szereg próbek o wysokim mianie autoprzeciwciał. Ogółem, przeprowadzono badania dla 86 próbek. Wiele próbek stanowiło kontrole wysoko pozytywne z innych zestawów testowych autoprzeciwciał INOVA QUANTA Lite. Obejmowały one testy centromeru (4), aktyny (4), Sm (9), SS-A (12), RNP (9), Jo-1 (9), SS-B (8), Scl-70 (8), GBM (4), MPO (6), RF (5), Ribo P (4) i M2 (4). Średnia wartość dla tych 86 próbek wyniosła 2,40 jednostek. Wszystkie próbki były negatywne w teście QUANTA Lite badania przesiewowego DGP celiakii. Średnia wartość wynosi osiem odchyleń standardowych poniżej 20-jednostkowej wartości granicznej. Precyzja i powtarzalność Wydajność w obrębie badania dla testu ELISA QUANTA Lite badania przesiewowego DGP celiakii oceniano testując 13 próbek po 5 razy każdą. Wyniki przedstawiono poniżej. Wydajność w obrębie badania testu ELISA QUANTA Lite badania przesiewowego DGP celiakii 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 Jednostki średnie 57,5 51,8 102,0 27,5 121,0 162,0 7,9 4,6 5,3 17,7 25,0 17,4 23,4 SD 0,3 1,4 0,9 0,4 1,3 2,8 0,4 0,2 0,1 0,4 0,7 0,4 0,7 CV % 0,5 2,7 0,9 1,6 1,1 1,7 4,7 4,1 2,6 2,2 2,8 2,2 2,8 Zmienność między badaniami oceniano testując dwa razy dziennie (rano i po południu) przez 3 dni w powtórzeniu panel 8 próbek oraz wysoko pozytywną kontrolę testu zestawu (HPC). Podsumowanie tych wyników przedstawiono poniżej. Wydajność między badaniami testu ELISA QUANTA Lite badania przesiewowego DGP celiakii HPC A B C D E F G H Jednostki średnie 110,4 54,6 48,5 27,5 157,9 9,8 16,4 22,2 18,8 SD 3,4 1,4 1,9 1,0 3,8 0,6 0,1 0,7 0,6 CV% 3,0 2,5 3,8 3,6 2,4 5,8 4,7 3,2 3,4 Piśmiennictwo 1. Trier JS: Celiac Sprue. New England Journal of Medicine 325: 1709-1719, 1991. 2. Troncone R and Ferguson A: Antigliadin antibodies. J Pediatr Gastroenterol Nutr 12: 150-158, 1991. 3. McMillan SA, Haughton DJ, et al.: Predictive value for coeliac disease of antibodies to gliadin, endomysium and jejunum in patients attending for jejunal biopsy. BMJ 303: 1163-1165, 1991. 4. Lindh E, Ljunghall S, et al.: Screening for antibodies against gliadin in patients with osteoporosis. Journal of Internal Medicine 241: 403-506, 1992. 5. Burgin-Wolff A, Gaze H, et al.: Antigliadin and antiendomysium antibody determination for coeliac disease. Arch Dis Child 66: 941-947, 1991. 6. Working Group of European Society of Paediatric Gastroenterology and Nutrition. Revised criteria for diagnosis of coeliac disease. Arch Dis Child 65: 909-911, 1990. 7. Osman AA, et al.: B-Cell epitopes of gliadin. Clin Exp Immunol 121: 248-254, 2000. 8. Aleanzi M, et al.: Celiac disease: Antibody recognition against native and selectively deamidaion gliadin peptides. Clinical Chemistry 47: 2023-2028, 2001. 9. Schwertz E, et al.: Serologic assay based on gliadin-related nonapeptides as a highly sensitive and specific diagnostic aid in celiac disease. Clinical Chemistry 50: 2370-2375, 2004. 10. Prince HE: Evaluations of the INOVA Diagnostics Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Kits for Measuring Serum Immunoglobulins G (IgG) and IgA to Deamidated Glidin Peptides. Clinical and Vaccine Immunology 13: 150-151, 2006. 11. Sugai E, et al.: Accuracy of Testing Antibodies to Synthetic Gliadin-Related Peptides in Celiac Disease. Clinical Gastroenterology and Hepatology 4: 1112-1117, 2006. 12. Collin P, et al.: Selective IgA deficiency and coeliac disease. Scand Journal Gastroenterology 27: 367-371, 1992. 13. Stober W: Gluten-sensitive enterophy: A nonallergic immune hypersensitivity of the gastrointestinal tract. J. Allergy Clin. Immunol. July 202-211,1986. 14. Smecuol E, et al.: Permeability, Zonulin Production, and Enteropathy in Dermatitis Herpetiformis. Clinical Gastroenterlogy and Hepatology 3: 335-341, 2005. 15. Beutner EH, et al.: Sensitivity and Specificity of IgA-class antiendomysial antibodies for dermatitus herpetiformis and findings relevant to their pathogenic significance. Journal of the American Academy of Dermatology 15: 464-473, 1986. 16. Porter WM, et al.: Tissue Transglutaminase Antibodies in Dermatitis Herpetiformis Correspondence. Gastroenterology 117:749-750, 1999. 17. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Centers for Disease Control and Prevention/National Institutes of Health, Fifth Edition, 2007. 18. CLSI (NCCLS). Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens; Approved Guidline-Third Edition. CLSI Document H18-A3, Vol 24(38), 2004. 19. CLSI (NCCLS). Statistical quality control: Principles and definitions; Approved Guideline- 2 nd edition NCCLS Document C24-A2, Vol. 19(5), 2006. 7

QUANTA Lite jest zastrzeżonym znakiem handlowym firmy INOVA Diagnostics, Inc. Copyright 2011. Wszelkie prawa zastrzeżone Wyprodukowano przez: INOVA Diagnostics, Inc. 9900 Old Grove Road San Diego, CA 92131 Stany Zjednoczone Ameryki Pomoc techniczna (tylko na terenie Stanów Zjednoczonych i Kanady): 877-829-4745 Pomoc techniczna (poza terenem Stanów Zjednoczonych): 00+ 1 858-805-7950 support@inovadx.com Autoryzowani przedstawiciele na terenie Unii Europejskiej: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D-66386 St. Ingbert, Niemcy Tel.: +49-6894-581020 Faks.: +49-6894-581021 www.mt-procons.com 624545POL Marzec 2011 Wersja 0 8