Affirm VPIII Microbial Identification Test

Transkrypt

1 Affirm VPIII Microbial Identification Test Zobacz objaœnienie symboli na koñcu ulotki JAA 2009/01 Polski PRZEZNACZENIE Affirm VPIII Microbial Identification Test (Test do identyfikacji drobnoustrojów Affirm VPIII) jest testem DNA przeznaczonym do wykrywania i identyfikacji kwasu nukleinowego gatunków Candida, Gardnerella vaginalis i Trichomonas vaginalis w próbkach p³ynu pochwowego pochodz¹cych od pacjentek z objawami zapalenia pochwy/waginozy. STRESZCZENIE I WYJAŒNIENIA Zapalenie pochwy, jeden z najczêœciej spotykanych problemów medycyny klinicznej, jest co roku powodem ponad 10 milionów wizyt lekarskich. 1 Wyró nia siê trzy g³ówne kategorie zapalenia pochwy: waginozê bakteryjn¹ (WB), dro d akowe zapalenie pochwy (kandydoza) i zapalenie pochwy wywo³ane przez T. vaginalis (rzêsistkowica). WB jest najczêœciej wystêpuj¹cym rodzajem zaka enia pochwy i w zale noœci od populacji pacjentek stanowi od 15 do 50% wszystkich przypadków zapalenia pochwy/waginozy. 2,3 Wprawdzie bakteria G. vaginalis nie jest ju traktowana jako jedyny czynnik etiologiczny waginozy bakteryjnej, jednak nadal jest uwa ana za jeden z g³ównych gatunków powoduj¹cych zaka enia, z którymi wi¹ e siê wzrost iloœci bakterii beztlenowych i ograniczenie fizjologicznej flory Lactobacillus. Powik³ania waginozy bakteryjnej mog¹ byæ szczególnie istotne u kobiet ciê arnych, powoduj¹c podwy szone ryzyko niepowodzenia ci¹ y, 4,5 w tym porodu 6 przedwczesnego i urodzenia przedwczesnego. 7,8 Ponadto ostatnie dane daj¹ podstawy do przypuszczeñ, e bakterie kojarzone z waginoz¹ bakteryjn¹ wystêpuj¹ce we florze œluzówki macicy mog¹ stanowiæ czynnik etiologiczny zapalenia œluzówki macicy i zapalenia narz¹dów miednicy, niezale nie od zaka enia bakteriami Neisseria gonorrhoeae i Chlamydia trachomatis. 9 Waginoza bakteryjna jest równie czynnikiem ryzyka rozwoju zapalenia przymacicza po histerektomii. 10 Kandydoza pochwy jest drug¹ pod wzglêdem czêstoœci wystêpowania postaci¹ zaka enia pochwy obserwowan¹ w ró nych warunkach klinicznych. 3 Co najmniej jeden epizod kandydozy pochwy wyst¹pi statystycznie u trzech czwartych doros³ych kobiet, zaœ u 40-50% wyst¹pi tak e drugi epizod. Oko³o 5% populacji doros³ych kobiet cierpi na nawracaj¹ce, czêsto oporne na leczenie zaka enie dro d akowe. 3 Szacuje siê, e rzêsistkowica, niepodlegaj¹ca zg³oszeniu choroba przenoszona drog¹ p³ciow¹, dotyka corocznie 180 milionów osób na ca³ym œwiecie. 11 Oszacowano, e co roku na rzêsistkowicê zapadaj¹ w Stanach Zjednoczonych 3 miliony kobiet. 12 U kobiet ciê arnych, u których wykryto obecnoœæ T. vaginalis, wystêpuje podwy szone ryzyko przedwczesnego przerwania b³on p³odowych 7 oraz przedwczesnego porodu i urodzenia. 13 Obecnoœæ T. vaginalis stanowi czynnik ryzyka rozwoju pozabiegowych zaka eñ ginekologicznych. 14,15 Ponadto obecnoœæ T. vaginalis stanowi czynnik ryzyka rozwoju zapalenia przymacicza po histerektomii. 16 Do badañ laboratoryjnych stosowanych w identyfikacji tych drobnoustrojów nale ¹: badania mikroskopowe, test aminowy, barwienie metod¹ Grama, badanie ph i hodowla. ZASADY PROCEDURY Dzia³anie testu Affirm VPIII Microbial Identification Test oparte jest na zasadzie hybrydyzacji kwasów nukleinowych. W testach hybrydyzacji kwasów nukleinowych komplementarne nici kwasu ³¹cz¹ siê, tworz¹c specyficzne, dwuniciowe kompleksy nazywane hybrydami. W teœcie na obecnoœæ ka dego drobnoustroju u ywane s¹ dwa odrêbne wzorce kwasu jednoniciowego: wzorzec wi¹ ¹cy i wzorzec barwi¹cy. Wzorce te s¹ komplementarne z niepowtarzalnymi sekwencjami genów przedmiotowego drobnoustroju. Wzorce wi¹ ¹ce s¹ unieruchomione na kulce wewn¹trz karty analizy wzorców (PAC, Probe Analysis Card), która zawiera osobne kulki dla poszczególnych przedmiotowych drobnoustrojów. Wzorce barwi¹ce znajduj¹ siê w szeregu cel kasety odczynnikowej (RC, Reagent Cassette). W trakcie przygotowywania próbka badanego materia³u jest poddawana dzia³aniu roztworu lizuj¹cego (L, Lysis Solution) i ogrzewana. Proces ten powoduje przerwanie œcian komórkowych drobnoustrojów i uwolnienie kwasu nukleinowego (analitu). Nastêpnie dodawany jest drugi roztwór, bufor (B, Buffer Solution). Stabilizuje on kwas nukleinowy i wytwarza stan niedoboru warunkuj¹cy swoist¹ hybrydyzacjê. Na tym etapie próbka jest wprowadzana do pierwszej celi kasety odczynnikowej (RC) razem z kart¹ PAC i rozpoczyna siê automatyczne przetwarzanie. Procesor BD MicroProbe przemieszcza kartê PAC miêdzy celami kasety odczynnikowej (RC). Hybrydyzacja zachodzi na kulkach karty PAC w pierwszej i drugiej celi kasety odczynnikowej (RC). Hybrydyzacja analitu we wzorcu wi¹ ¹cym na kulce zachodzi w celi 1, a hybrydyzacja wzorców barwi¹cych zachodzi w celi 2. Niezwi¹zane sk³adniki próbek i wzorców s¹ wyp³ukiwane w celi 3. W celi 4 koniugat enzymu wi¹ e siê ze zhybrydyzowanym analitem. Niezwi¹zany koniugat jest wyp³ukiwany w celach 5 i 6. W celi 7 substrat wskaÿnika przechodzi w zabarwiony na niebiesko produkt, pod warunkiem, e na kulce obecny jest zwi¹zany koniugat enzymu. Ostatnim etapem jest odczyt zabarwienia kulek przypisanych do poszczególnych drobnoustrojów oraz kontroli. ODCZYNNIKI Dostarczane materia³y Karty Analizy Wzorców (PAC, Probe Analysis Cards) (24 lub 120 testów): Karty pakowane osobno, owiniête w poch³aniaj¹c¹ papierow¹ serwetkê zwil on¹ roztworem zawieraj¹cym azydek sodu (stê enie wagowo-objêtoœciowe 0,1%) pe³ni¹cy rolê konserwantu. Ka da karta zawiera piêæ nastêpuj¹cych kulek: kontrola ujemna, Trichomonas, Gardnerella, Candida i kontrola dodatnia. Kasety Odczynnikowe (RC, Reagent Cassettes) (24 lub 120 testów): Odczynniki znajduj¹ siê w szczelnie zamkniêtych, pokrytych foli¹ kasetach z szeregiem cel. Ka da kaseta ma siedem cel. Zawieraj¹ one (numeracja od przodu ku ty³owi kasety): Cela nr 1 Zbiornik na próbki pochodz¹ce od pacjentki, fabrycznie pusty Cela nr 2 Roztwór hybrydyzacyjny, 350 µl: wzorzec barwi¹cy, formamid, buforowany roztwór chaotropowy Cela nr 3 Roztwór p³ucz¹cy, 750 µl: detergent, roztwór buforowy, konserwant (Proclin)

2 Cela nr 4 Koniugat, 500 µl: koniugat enzymu, konserwant (Proclin) Cela nr 5 Roztwór p³ucz¹cy, 750 µl: detergent, roztwór buforowy, konserwant (Proclin) Cela nr 6 Roztwór p³ucz¹cy, 750 µl: detergent, roztwór buforowy, konserwant (Proclin) Cela nr 7 Bufor substratu, 500 µl: buforowany roztwór nadtlenku Roztwór substratu (S, Substrate Solution) (czerwona nakrywka, 3,4 ml na 24 testy; butelka, 12 ml na 120 testów): roztwór pakowany osobno w torebce foliowej; substrat wskaÿnika, stabilizator, alkohol Roztwór lizuj¹cy (L) (niebieska nakrywka, 10,8 ml na 24 testy; butelka, 48 ml na 120 testów): detergent, roztwór buforowy, konserwant (Proclin) Roztwór buforowy (B) (zielona nakrywka, 15 ml na 24 testy; butelka, 72 ml na 120 testów): buforowany roztwór chaotropowy, formamid Koñcówki filtruj¹ce (FT, Filter Tips) (24 lub 120 testów) Nakrywki do probówek na próbki (SCC, Sample Collection Caps) (24 testów)* Probówki na próbki (SCT, Sample Collection Tubes) (24 testów)* Osobno pakowane, wstêpnie naciête, ja³owe wymazówki (24 testów)* *Nie do³¹czone w zestawie 120 testów. Materia³y wymagane, ale niedostarczane Dostêpne w firmie BD: Affirm VPIII Ambient Temperature Transport System (system transportu w temperaturze otoczenia Affirm VPIII) Affirm VPIII Sample Collection Sets (zestawy do pobierania próbek Affirm VPIII) BD MicroProbe Processor (procesor BD MicroProbe) BD MicroProbe Lysis Block (zespó³ lizuj¹cy BD MicroProbe) Termometr Pipeta odpowiednia do dozowania roztworu lizuj¹cego i roztworu buforowego na 120 testów Ostrze enia i œrodki ostro noœci Do stosowania w diagnostyce in vitro. Przed u yciem dok³adnie zapoznaæ siê ze wszystkimi instrukcjami. Do pobierania próbek u ywaæ wy³¹cznie systemu Affirm VPIII Ambient Temperature Transport System, Affirm VPIII Sample Collection Set lub wymazówek wchodz¹cych w sk³ad zestawu Affirm VPIII Microbial Identification Test Kit. U ywaæ tylko próbek p³ynu pochwowego pochodz¹cych od pacjentek z objawami zapalenia pochwy/waginozy. Podczas ka dego testu nale y monitorowaæ temperaturê zespo³u lizuj¹cego, która powinna wynosiæ 85 ± 5 C, i upewniæ siê, e temperatura w œrodowisku, w którym wykonywane s¹ testy, mieœci siê w zakresie od 22 do 28 C. Roztwór substratu (S): substancja zawiera alkohol i jest palna. Nie zbli aæ do Ÿróde³ ciep³a, iskier i p³omieni. Przechowywany pojemnik powinien byæ szczelnie zamkniêty, aby zapobiec parowaniu. Papierowa serwetka, w któr¹ zapakowana jest karta PAC: serwetka jest nas¹czona azydkiem sodu (stê enie wagowo-objêtoœciowe 0,1%). Azydek sodu jest silnie toksyczny w wypadku przedostania siê do dróg oddechowych, kontaktu ze skór¹ lub po³kniêcia. W kontakcie z kwasami uwalnia silnie toksyczny gaz. Jeœli dojdzie do kontaktu ze skór¹, natychmiast sp³ukaæ du ¹ iloœci¹ wody. W sk³ad odczynników wchodz¹ substancje, które mog¹ dzia³aæ dra ni¹co lub r¹co w kontakcie ze skór¹, oczami lub b³onami œluzowymi. Podczas pracy z odczynnikami nale y mieæ na sobie rêkawiczki, okulary ochronne i fartuch, a tak e stosowaæ standardowe œrodki ostro noœci obowi¹zuj¹ce w laboratorium. W razie po³kniêcia wezwaæ lekarza. Jeœli dojdzie do kontaktu ze skór¹ lub oczami, sp³ukiwaæ obficie wod¹. W próbkach materia³ów pochodzenia klinicznego mog¹ byæ obecne drobnoustroje chorobotwórcze, w tym wirusy zapalenia w¹troby i wirus ludzkiego niedoboru odpornoœci (HIV). Podczas pracy z materia³ami ska onymi krwi¹ i innymi p³ynami ustrojowym nale y przestrzegaæ Standardowych œrodków ostro noœci oraz wytycznych obowi¹zuj¹cych w danej placówce. Nale y ustaliæ procedury prawid³owego postêpowania z materia³ami i ich likwidacji. Rozlane próbki pochodz¹ce od pacjentów nale y natychmiast wycieraæ i dezynfekowaæ odpowiednim œrodkiem dezynfekcyjnym. Œrodki czyszcz¹ce traktowaæ nastêpnie jako odpady stwarzaj¹ce zagro enie biologiczne. Nie nale y u ywaæ ja³owej wymazówki, jeœli opakowanie jest otwarte lub uszkodzone. Unikaæ dotykania kulek. Unikaæ zanieczyszczania koñcówek zakraplaczy. Nie u ywaæ odczynnika po terminie wa noœci. Przygotowanie odczynników Wszystkie dostarczane odczynniki s¹ gotowe do u ytku. Przechowywanie odczynników Zestaw testowy Affirm VPIII pozostaje stabilny do daty wa noœci zamieszczonej na pude³ku zestawu, pod warunkiem, e przechowywany jest w temperaturze od 2 do 8 C. Dopuszczalne jest tak e przechowywanie w temperaturze pokojowej (maksymalnie 30 C) przez okres nie d³u szy ni 3 miesi¹ce. Wszystkie odczynniki i karty PAC przed u yciem musz¹ mieæ temperaturê od 22 do 28 C. Wszystkie napoczête odczynniki najwygodniej jest przechowywaæ w temperaturze pokojowej. Odczynniki sch³odzone nale y przed u yciem doprowadziæ do temperatury pokojowej, pozostawiaj¹c na 30 minut. UWAGA: Roztwór buforowy (B) str¹ca siê po sch³odzeniu. Nale y pozostawiæ do ogrzania w temperaturze pokojowej na co najmniej 30 minut, a nastêpnie wstrz¹saæ butelkê przez sekund, a do rozpuszczenia ca³ego osadu. 2

3 Objawy niestabilnoœci Objawy pogorszenia jakoœci obserwowane po zakoñczeniu testu s¹ nastêpuj¹ce: kontrola dodatnia NIE jest niebieska; kontrola ujemna NIE jest bezbarwna. POBIERANIE I TRANSPORT PRÓBEK Pobieranie próbek Pobieranie próbek jest niezwykle istotnym etapem badania. Personel pobieraj¹cy próbki p³ynu pochwowego powinien byæ odpowiednio przeszkolony, co zminimalizuje ryzyko pobrania nieprawid³owych próbek. Do pobierania próbek u ywaæ wy³¹cznie systemu Affirm VPIII Ambient Temperature Transport System, zestaw Affirm VPIII Sample Collection Set lub wymazówek wchodz¹cych w sk³ad zestawu Affirm VPIII Microbial Identification Test Kit. Do innych testów, np. hodowli lub mikroskopowego badania preparatów, nale y u ywaæ osobnych wymazówek. Pobieranie próbek p³ynu pochwowego 1. Opatrzyæ probówkê na próbkê (SCT) informacjami umo liwiaj¹cymi identyfikacjê pacjentki. Zaznaczyæ czas pobrania materia³u. 2. U³o yæ pacjentkê w pozycji takiej jak do badania ginekologicznego. Wprowadziæ wziernik do pochwy, aby umo liwiæ obserwacjê tylnego sklepienia pochwy.* 3. Za pomoc¹ ja³owej wymazówki pobraæ wymaz z tylnego sklepienia pochwy. Dwu- lub trzykrotnie okrêciæ wacik wymazówki lub przemieœciæ go ruchem okrê nym po œcianie pochwy, tak aby na ca³ym obwodzie zetkn¹³ siê ze œcian¹. Podczas wyjmowania wymazówki pobraæ wymaz z bocznej œciany pochwy. 4. Niezw³ocznie umieœciæ wymazówkê w probówce na próbkê (SCT). 5. Dotykaj¹c wacikiem wymazówki DNA probówki, chwyciæ wstêpnie naciêty uchwyt wymazówki tu nad górn¹ krawêdzi¹ probówki i zgi¹æ go, a pêknie. Gdy wymazówka jest do koñca wprowadzona do probówki, naciêcie na uchwycie wypada na wysokoœci ok. 1 cm nad krawêdzi¹ probówki. Wyrzuciæ od³amany uchwyt do pojemnika na odpady zakaÿne. 6. Na³o yæ nakrywkê na ods³oniêty koniec wymazówki i mocno wcisn¹æ j¹ na probówkê. Prawid³owo za³o ona nakrywka wskoczy na probówkê. *Podczas badañ klinicznych instrukcje dla oœrodków przewidywa³y u ycie nieposmarowanego wziernika. Dodatkowe informacje zamieszczono w czêœci Substancje zak³ócaj¹ce. PRZECHOWYWANIE I TRANSPORT PRÓBEK Przy u yciu systemu Affirm VPIII Ambient Temperature Transport System (ATTS): ¹czny czas od pobrania próbki do rozpoczêcia przygotowania próbki nie powinien przekraczaæ 72 h, jeœli próbka materia³u jest przechowywana w temperaturze otoczenia (od 15 do 30 C). System nadaje siê tak e do transportu w ch³odziarce (temperatura od 2 do 8 C). Przy u yciu zestawu Affirm VPIII Sample Collection Set lub wymazówek wchodz¹cych w sk³ad zestawu Affirm VPIII Microbial Identification Test Kit: ¹czny czas od umieszczenia wymazówki w probówce na próbkê do rozpoczêcia przygotowywania próbki nie powinien przekraczaæ 1 h, jeœli próbka przechowywana jest w temperaturze pokojowej, lub 4 h, jeœli próbka przechowywana jest w temperaturze od 2 do 8 C. PROCEDURA Przed podjêciem dalszych czynnoœci dok³adnie zapoznaæ siê ze wszystkimi instrukcjami. Przygotowanie próbek Nale y korzystaæ z ilustracji przebiegu procedury do³¹czonych do procesora BD MicroProbe Processor 1. Upewniæ siê, e zespó³ lizuj¹cy BD MicroProbe Lysis Block ma temperaturê 85 ± 5 C, a odczynniki maj¹ temperaturê C i s¹ dobrze wymieszane. 2. Zdj¹æ nakrywkê z probówki na próbkê (SCT), zwracaj¹c uwagê, by trzonek wymazówki by³ pewnie osadzony w nakrywce. Dodaæ 12 kropel lub odmierzyæ pipet¹ 0,4 ml roztworu lizuj¹cego (L) do probówki. Podczas zakraplania trzymaæ zakraplacz pionowo. 3. Przez co najmniej 10 sekund energicznie mieszaæ zawartoœæ probówki, obracaj¹c wymazówkê i poruszaj¹c j¹ w górê i w dó³, jednoczeœnie przyciskaj¹c do œcianki probówki. 4. W³o yæ wymazówkê z nakrywk¹ z powrotem do probówki i zamkn¹æ probówkê, aby zapobiec parowaniu. 5. Wprowadziæ probówkê do celi zespo³u lizuj¹cego w celu ogrzania. 6. Inkubowaæ probówkê w zespole lizuj¹cym przez 10 minut (co najmniej 10 minut, ale nie d³u ej ni 20 minut). W tym kroku u yæ minutnika. 7. Wyj¹æ probówkê z zespo³u lizuj¹cego. 8. Dodaæ 12 kropel lub odmierzyæ pipet¹ 0,6 ml dobrze wymieszanego roztworu buforowego (B) do probówki z wymazówk¹. Unikaæ dotykania probówki koñcówk¹ zakraplacza. 9. Ponownie szczelnie zamkn¹æ probówkê nakrywk¹ i wymieszaæ, energicznie potrz¹saj¹c probówk¹ 10 razy. 10. Aby rozpocz¹æ automatyczne przetwarzanie przygotowanej próbki, wycisn¹æ z wacika wymazówki jak najwiêcej p³ynu, unosz¹c wacik nad poziom p³ynu i dociskaj¹c go do œcianki probówki przez co najmniej 10 sekund. Wyrzuciæ wymazówki do pojemnika na odpady stwarzaj¹ce zagro enie biologiczne. Nacisn¹æ koñcówki filtruj¹ce (FT) na wszystkie probówki na próbki (SCT). UWAGA: Przygotowane próbki mo na przechowywaæ w temperaturze pokojowej przez czas maks. 24 h. PRZETWARZANIE AUTOMATYCZNE Uwaga: Przed przejœciem do dalszych czynnoœci nale y upewniæ siê, e wszystkie odczynniki maj¹ temperaturê C. Przy ka dej serii nale y sprawdzaæ, czy temperatura w œrodowisku, w którym wykonywane s¹ testy, mieœci siê w zakresie od 22 do 28 C. 3

4 Nale y korzystaæ z ilustracji przebiegu procedury do³¹czonych do procesora BD MicroProbe Processor 1. Jeœli karta Program Card (karta programu) testu Affirm VPIII Microbial Identification Test nie znajduje siê jeszcze w procesorze BD MicroProbe Processor, w³o yæ kartê Program Card do gniazda po prawej stronie z przodu urz¹dzenia, tak aby strona zadrukowana karty by³a zwrócona do góry, a strza³ka skierowana w stronê urz¹dzenia. Podczas wk³adania karty procesor musi byæ wy³¹czony. Gdy procesor jest wy³¹czony, nie œwieci adna lampka na panelu sterowania. 2. W³¹czyæ procesor. W fazie pocz¹tkowej ramiê procesora przemieœci siê do pozycji wyjœciowej. W trakcie procedury nale y postêpowaæ zgodnie z informacjami pojawiaj¹cymi siê na wyœwietlaczu procesora. Jeœli potrzebne s¹ dodatkowe wyjaœnienia, nale y nacisn¹æ klawisz [HELP] (POMOC). 3. Wyj¹æ zasobnik na kasety z procesora. Dodawanie próbek przebiega ³atwiej, gdy zasobnik jest wyjêty. 4. Dla ka dej testowanej próbki wybraæ jedn¹ kasetê odczynnikow¹ (RC). Niezmywalnym pisakiem nanieœæ na przód kasety (RC) dane identyfikacyjne pacjentki/próbki. Ostro nie œci¹gn¹æ foliê ochronn¹ z kasety, zaczynaj¹c od strony BEZ klapki odgiêtej w górê. W³o yæ kasety odczynnikowe (RC) do zasobnika na kasety, zape³niaj¹c zasobnik od œrodka w stronê boków, i w miarê mo liwoœci umieszczaj¹c tak¹ sam¹ liczbê kaset po obu stronach ramienia. 5. Otworzyæ torebkê zawieraj¹c¹ kartê PAC, nieznacznie wysun¹æ kartê PAC z torebki i w wyznaczonym miejscu nanieœæ na karcie PAC dane identyfikacyjne pacjentki/próbki. 6. Nacisn¹æ klawisz [RUN]. Zostanie wyœwietlona instrukcja Add Substrate (Dodaj substrat). Dodaæ 4 krople (0,1 ml) roztworu substratu (S) do celi nr 7 kasety odczynnikowej (RC). Zamkn¹æ zakraplacz nakrywk¹, aby unikn¹æ parowania. 7. Nacisn¹æ klawisz [RUN] (URUCHOM). Zostanie wyœwietlona instrukcja Add Sample (Dodaj próbkê). Dopasowaæ ka d¹ probówkê z próbk¹ (SCT)/koñcówkê filtruj¹c¹ (FT) do odpowiednio oznaczonej kasety odczynnikowej (RC). Odwróciæ probówkê z próbk¹ (SCT) i wycisn¹æ ca³¹ zawartoœæ probówki przez koñcówkê filtruj¹c¹ (FT) do zbiorniczka celi nr 1 odpowiedniej kasety odczynnikowej (RC). Wyrzuciæ probówkê po próbce do pojemnika na odpady stwarzaj¹ce zagro enie biologiczne. Pojawienie siê piany na koñcówce filtruj¹cej stanowi dobre potwierdzenie wprowadzenia ca³ej próbki. 8. Nacisn¹æ klawisz [RUN]. Zostanie wyœwietlona instrukcja Place PAC (Umieœæ kartê PAC). Umieœciæ oznaczone karty PAC w celach nr 1 odpowiednio oznaczonych kaset odczynnikowych (RC). Unikaæ dotykania kulek. 9. Nacisn¹æ klawisz [RUN]. Zostanie wyœwietlona instrukcja Place Caddy (Umieœæ zasobnik). Ostro nie w³o yæ zasobnik z kasetami do procesora, uwa aj¹c, by nie rozlaæ odczynników. Upewniæ siê, e zasobnik jest pewnie osadzony na wszystkich czterech ko³kach ustalaj¹cych. 10. Ponownie nacisn¹æ klawisz [RUN]. Ramiê procesora zacznie przemieszczaæ siê do przodu. W trakcie procedury testowania procesor bêdzie automatycznie pobiera³ i przemieszcza³ karty PAC. Urz¹dzenie rozpocznie odmierzanie czasu przetwarzania i wyœwietli komunikat Please wait. Processing 32:50 (Proszê czekaæ. Czas przetwarzania 32:50), wskazuj¹c liczbê minut do zakoñczenia pracy. Po zakoñczeniu przetwarzania wygenerowany zostanie sygna³ dÿwiêkowy i bêdzie mo na wyj¹æ kartê PAC. 11. Wyj¹æ kartê PAC i delikatnie osuszyæ rêcznikiem papierowym. Jak najszybciej po zakoñczeniu testu nale y odczytaæ wyniki dla wszystkich próbek. Kartê PAC nale y ogl¹daæ na bia³ym tle, przy normalnym natê eniu oœwietlenia. Uwaga: Nale y wyj¹æ karty PAC z procesora przed naciœniêciem przycisku [RUN] w celu rozpoczêcia nastêpnej serii. KONTROLA JAKOŒCI Affirm VPIII Microbial Identification Test zawiera po dwie kontrole wewnêtrzne na ka dej karcie PAC: kulkê kontroli dodatniej i kulkê kontroli ujemnej. Kulki kontrolne s¹ testowane równolegle ze wszystkimi próbkami pochodz¹cymi od pacjentki w celu potwierdzenia prawid³owego dzia³ania karty PAC, kasety odczynnikowej (RC) i procesora. Kontrola dodatnia pozwala dodatkowo wykluczyæ interferencje z próbk¹. Kontrola ujemna dodatkowo pozwala wykluczyæ nieswoiste wi¹zanie próbki. W prawid³owo przebiegaj¹cym teœcie po zakoñczeniu przetwarzania kulka kontroli dodatniej powinna byæ niebieska, a kulka kontroli ujemnej powinna pozostaæ bezbarwna (tj. nie powinien byæ na niej widoczny kolor niebieski). Jeœli kontrola dodatnia nie zabarwia siê na niebiesko i/lub kontrola ujemna nie pozostaje bezbarwna, wyniki testu s¹ niewiarygodne i nie nale y braæ pod uwagê wyników uzyskanych z próbki pacjentki. Ka d¹ partiê odczynników nale y przetestowaæ w celu potwierdzenia prawid³owej lizy próbki materia³u i uwalniania kwasu nukleinowego drobnoustroju nale y w tym celu u yæ wymazu ze œwie ej hodowli wskaÿnikowej (po h wzrostu) lub fabrycznie przygotowanego, dostêpnego w handlu wymazu Candida albicans (ATCC 18804, 14053, lub 60193). Poniewa Trichomonas vaginalis i Gardnerella vaginalis ulegaj¹ lizie szybciej ni gatunki Candida, kontrolê prawid³owej lizy bakterii wystarczy wykonaæ na gatunkach Candida. Potwierdzeniem prawid³owego przebiegu procesu lizy próbki jest niebieskie zabarwienie kulki Candida w teœcie Candida albicans, bezbarwna kulka Gardnerella, bezbarwna kulka Trichomonas oraz zadowalaj¹ce wyniki kontroli wewnêtrznych (tj. niebieska kulka kontroli dodatniej i bezbarwna kulka kontroli ujemnej). W celu dodatkowego zweryfikowania dzia³ania testu mo liwe jest przeprowadzenie dodatkowych testów jakoœci z u yciem œwie ych hodowli (po h wzrostu) wskaÿnikowych szczepów C. albicans (ATCC 10231), T. vaginalis (ATCC 30001) i G. vaginalis (ATCC 14018) lub za pomoc¹ dostêpnych w handlu, specjalnie spreparowanych wymazów. Przeprowadzaj¹c kontrolê jakoœci (QC) na wszystkich trzech gatunkach mikroorganizmów, nale y upewniæ siê, e wyniki kontroli wewnêtrznych s¹ zadowalaj¹ce (tj. niebieska kulka kontroli dodatniej i bezbarwna kulka kontroli ujemnej), i interpretowaæ wyniki w nastêpuj¹cy sposób: 1. Jeœli kulki wszystkich trzech gatunków barwi¹ siê na niebiesko, wszystkie wyniki pacjentów mo na uznaæ za wa ne. 2. Jeœli kulka Candida nie barwi siê na niebiesko, ca³¹ seriê testów kontroli jakoœci nale y uznaæ za niewa n¹. Nale y zbadaæ przyczyny niepowodzenia przy kontroli jakoœci, a wszystkie wyniki pacjentów nale y uznaæ za niewa ne. Aby uzyskaæ pomoc, nale y skontaktowaæ siê z lokalnym przedstawicielstwem BD. 3. Jeœli kulki Candida i Gardnerella barwi¹ siê na niebiesko, ale kulka Trichomonas nie barwi siê, seriê testów kontroli jakoœci nale y uznaæ za wa n¹ w zakresie testów Candida i Gardnerella. Wa ne s¹ wy³¹cznie wyniki pacjentów dotycz¹ce Candida i Gardnerella. Nale y zbadaæ przyczyny niepowodzenia kontroli jakoœci. Aby uzyskaæ pomoc, nale y skontaktowaæ siê z lokalnym przedstawicielstwem BD. 4. Jeœli kulki Candida i Trichomonas barwi¹ siê na niebiesko, ale kulka Gardnerella nie barwi siê, seriê testów kontroli jakoœci nale y uznaæ za wa n¹ w zakresie testów Candida i Trichomonas. Wa ne s¹ wy³¹cznie wyniki pacjentów dotycz¹ce Candida i 4

5 Trichomonas. Nale y zbadaæ przyczyny niepowodzenia kontroli jakoœci. Aby uzyskaæ pomoc, nale y skontaktowaæ siê z lokalnym przedstawicielstwem BD. Nale y postêpowaæ zgodnie z obowi¹zuj¹cymi wymogami kontroli jakoœci, wynikaj¹cymi z przepisów miejscowych, krajowych i (lub) federalnych, wymogami akredytacji i rutynowymi procedurami kontroli jakoœci w danym laboratorium. Zaleca siê, aby u ytkownik stosowa³ siê do odpowiednich zaleceñ CLSI (dawniej NCCLS) i przepisów CLIA, dotycz¹cych sposobów kontroli jakoœci. INTERPRETACJA WYNIKÓW Wynik okreœla siê na podstawie zabarwienia lub braku zabarwienia kulki testowej. O wyniku dodatnim œwiadczy obecnoœæ zabarwienia niebieskiego na kulce w³aœciwej dla przedmiotowego drobnoustroju, obserwowanej na bia³ym tle. Brak jakiegokolwiek niebieskiego zabarwienia na kulce w³aœciwej dla przedmiotowego drobnoustroju oznacza wynik ujemny. Wynik dodatni dla Candida, Gardnerella i/lub Trichomonas oznacza odpowiednio obecnoœæ w próbce kwasu nukleinowego gatunków Candida (C. albicans, C. glabrata, C. kefyr, C. krusei, C. parapsilosis, C. tropicalis), G. vaginalis i/lub T. vaginalis oraz o ile potwierdzaj¹ to kliniczne objawy przedmiotowe i subiektywne wskazuje, e pacjentka cierpi na kandydozê, waginozê bakteryjn¹ i/lub rzêsistkowicê. Czêste s¹ zaka enia wiêcej ni jednym drobnoustrojem. Ujemne wyniki testu na obecnoœæ Candida, Gardnerella lub Trichomonas pozwalaj¹ przypuszczaæ, e u pacjentki nie wystêpuje kandydoza, waginoza bakteryjna i/lub rzêsistkowica, o ile przypuszczenie takie potwierdzaj¹ kliniczne objawy przedmiotowe i subiektywne. OGRANICZENIA PROCEDURY Ten test jest przeznaczony do u ytku z systemem Affirm VPIII Ambient Temperature Transport System, zestawem Affirm VPIII Sample Collection Set lub wymazówkami wchodz¹cymi w sk³ad zestawu Affirm VPIII Microbial Identification Test Kit. Nie oceniono innych metod pobierania próbek. Warunkiem uzyskania optymalnych wyników testu jest prawid³owe pobranie próbek. Nieprawid³owe pobranie próbek, a tak e nieprawid³owe postêpowanie z próbkami i/lub przechowywanie ich w niew³aœciwych warunkach mo e mieæ wp³yw na wyniki testu. Ujemny wynik testu nie wyklucza obecnoœci zapalenia pochwy/waginozy. Jeœli u ywany jest system Affirm VPIII Ambient Temperature Transport System, próbki przechowywane przez czas d³u szy ni 72 h w temperaturze otoczenia (od 15 do 30 C) lub w ch³odziarce (od 2 do 8 C) mog¹ dawaæ fa³szywe wyniki. Jeœli u ywany jest zestaw Affirm VPIII Sample Collection Kit lub wymazówki wchodz¹ce w sk³ad zestawu Affirm VPIII Microbial Identification Kit, próbki przechowywane przed przygotowaniem w temperaturze pokojowej przez czas d³u szy ni 1 h lub w temperaturze od 2 do 8 C przez czas d³u szy ni 4 h mog¹ dawaæ fa³szywe wyniki. Przygotowane próbki przechowywane przed przetworzeniem w temperaturze pokojowej d³u ej ni 24 h mog¹ dawaæ niedok³adne wyniki. W trakcie wykonywania tego testu temperatura w œrodowisku musi wynosiæ od 22 do 28 C. Ujemny wynik testu na obecnoœæ Candida, Gardnerella i/lub Trichomonas oznacza, e próbka mo e zawieraæ kwas nukleinowy pochodz¹cy z mniej ni 1 x 10 4 komórek Candida, 2 x 10 5 CFU G. vaginalis lub 5 x 10 3 rzêsistków. Test Affirm VPIII Microbial Identification Test wykrywa obecnoœæ G. vaginalis w stê eniach wiêkszych ni 2 x 10 5 CFU na próbkê. Taki poziom nie pozwala na ostateczne rozpoznanie. Obecnoœæ G. vaginalis sugeruje wprawdzie waginozê bakteryjn¹, nie jest jednak podstaw¹ do jednoznacznego rozpoznania. Podobnie jak w wielu innych sytuacjach klinicznych, rozpoznanie nie powinno opieraæ siê na wynikach jednego testu laboratoryjnego. Wyniki nale y interpretowaæ w kontekœcie innych dostêpnych dla lekarza danych klinicznych i laboratoryjnych, takich jak wyniki testów ph, test aminowy, obecnoœæ komórek charakterystycznych ( clue cells ) i wystêpowanie up³awów. Kobiety, u których wystêpuj¹ up³awy, powinny byæ przebadane w kierunku czynników ryzyka wyst¹pienia zapalenia szyjki macicy i zapalenia narz¹dów miednicy oraz na obecnoœæ innych drobnoustrojów, w tym N. gonorrhoeae i C. trachomatis. Zapalenie pochwy/waginozê wywo³uje najczêœciej G. vaginalis, gatunki Candida i T. vaginalis. Objawy zapalenia pochwy mog¹ wyst¹piæ tak e w zespole wstrz¹su toksycznego (wywo³anego przez Staphylococcus aureus), pod wp³ywem czynników nieswoistych lub przez specyficzne drobnoustroje. Mo liwe jest wystêpowanie zaka eñ mieszanych. Dlatego wynik testu wskazuj¹cy na obecnoœæ gatunków Candida, G. vaginalis i/lub T. vaginalis nie wyklucza obecnoœci innych drobnoustrojów, w tym Mobiluncus mulieris, Mycoplasma hominis i/lub Prevotella bivia. Cryptococcus neoformans w stê eniach przekraczaj¹cych 1 x 10 8 dro d y/ml reaguje z testem Affirm VPIII Microbial Identification Test na obecnoœæ gatunków Candida. C. neoformans rzadko wystêpuje w pochwie. M. mulieris w stê eniach przekraczaj¹cych 4 x 10 6 bakterii/ml oraz Bifidobacterium dentium w stê eniach przekraczaj¹cych 8 x 10 5 bakterii/ml mo e reagowaæ niespecyficznie z testem Affirm VPIII Microbial Identification Test na obecnoœæ G. vaginalis. B. dentium rzadko wystêpuje w pochwie. Metoda zastosowana w teœcie Affirm VPIII Microbial Identification Test jest przeznaczona do badania próbek p³ynu pochwowego pochodz¹cych od pacjentek z objawami zapalenia pochwy/waginozy. Nie okreœlono dzia³ania testu w odniesieniu do innych próbek ani innych populacji pacjentów. Nie jest znane dzia³anie tego testu na próbkach pobranych od pacjentek w trakcie lub bezpoœrednio po leczeniu antybiotykowym. Obecnoœæ lub brak bakterii z gatunków Candida, G. vaginalis lub T. vaginalis nie mo e s³u yæ jako podstawa do okreœlenia powodzenia lub niepowodzenia leczenia. U ycie nieoryginalnych odczynników lub nieprzestrzeganie instrukcji u ycia mo e negatywnie wp³yn¹æ na dzia³anie testu, tak jak zaznaczono to na etykiecie. WARTOŒCI OCZEKIWANE I CHARAKTERYSTYKA WYNIKÓW Niezale ni badacze oceniali test Affirm VPIII Microbial Identification Test na obecnoœæ gatunków Candida, G. vaginalis i T. vaginalis w próbkach p³ynu pochwowego. Próbki pochodzi³y od kobiet z objawami zapalenia pochwy/waginozy lub od kobiet zaliczanych do grupy wysokiego ryzyka wyst¹pienia zaka enia. 21 Badacze rejestrowali przypadki bakteryjnego zapalenia pochwy, kandydozy i rzêsistkowicy. Pobierano równie próbki i analizowano je przy u yciu testu Affirm VPIII Microbial Identification Test. Ponadto badacze pobierali próbki przekazywane do laboratorium w celu wyizolowania hodowli i identyfikacji oraz w celu przygotowania rozmazu do barwienia metod¹ Grama. 5

6 Gatunki Candida Czu³oœæ i swoistoœæ testu Affirm VPIII Microbial Identification Test na obecnoœæ gatunków Candida ustalono na podstawie porównania z tradycyjnymi metodami mikroskopowymi i opartymi na izolacji hodowli. Wyniki testu Affirm VPIII na obecnoœæ gatunków Candida oraz wyniki badañ mikroskopowych oceniano na grupie 479 kobiet, u których wystêpowa³y kliniczne objawy przedmiotowe i subiektywne dro d akowego zapalenia pochwy, oraz na grupie 261 kobiet uznanych za silnie nara one na zaka enie z innych powodów, takich jak ci¹ a (n=186), stosowanie antykoncepcji lub kontakty z pacjentami, u których stwierdzono choroby przenoszone drog¹ p³ciow¹. ¹cznie przebadano 740 pacjentek. Do porównania u yto klinicznie istotnego poziomu izolacji hodowli dro d y (>10 4 CFU na jeden ml p³ynu pochwowego), poniewa wykazano (por. literatura przedmiotu), e poziom ten ma zwi¹zek z dro d akowym zapaleniem pochwy. W przypadku oko³o 15% pochodz¹cych od pacjentek próbek przebadanych na obecnoœæ dro d y uzyskano istotny klinicznie wynik dodatni testu Affirm VPIII i izolacji hodowli. W przypadkach ewidentnie fa³szywych wyników dodatnich, gdy wynik testu Affirm VPIII by³ dodatni, a wynik testu porównawczego ujemny, zastosowano alternatywne metody weryfikacji wyniku testu Affirm VPIII. Zweryfikowana czu³oœæ/swoistoœæ u pacjentek z pierwotnymi dolegliwoœciami pochwy (n=479) i u wszystkich pacjentek (n=740) wynosi³a odpowiednio 82%/98,4% i 81%/98,2%. Test Affirm VPIII jest bardziej czu³y ni badanie œwie ego preparatu lub identyfikacja dro d y metod¹ Grama przez porównanie z hodowl¹ istotn¹ klinicznie. Zobacz Tabela 1. Niezweryfikowana czu³oœæ/swoistoœæ testu Affirm VPIII w porównaniu z hodowl¹ klinicznie istotn¹ u pacjentek z pierwotnymi dolegliwoœciami pochwy (n=479) i u wszystkich pacjentek (n=740) wynosi³a odpowiednio 79%/95% i 78%/95,9%. Zobacz Tabela 1. Gardnerella vaginalis Czu³oœæ i swoistoœæ testu Affirm VPIII Microbial Identification Test na obecnoœæ G. vaginalis ustalono w grupie 299 pacjentek na podstawie porównania z tradycyjnymi metodami mikroskopowymi i opartymi na izolacji hodowli. Wyniki testu Affirm VPIII porównywano z istotnymi klinicznie stê eniami G. vaginalis, okreœlonymi jako >10 5 CFU na jeden ml p³ynu pochowego. 13 Spoœród 299 pacjentek badanych w kierunku waginozy bakteryjnej, u 51% (152) uzyskano wynik dodatni w badaniu metod¹ Grama, a u 56% (168) uzyskano wynik dodatni w izolacji hodowli istotnych klinicznie. W przypadkach ewidentnie fa³szywych wyników dodatnich, gdy wynik testu Affirm VPIII by³ dodatni, a wynik testu porównawczego ujemny, zastosowano alternatywne metody weryfikacji wyniku testu Affirm VPIII. Zweryfikowana czu³oœæ/specyficznoœæ testu Affirm VPIII w porównaniu z badaniami klinicznie istotnych hodowli i badaniem morfologicznym metod¹ Grama u pacjentek z klinicznym obrazem WB potwierdzonym 3 z 4 kryteriów Amstel (n=129) wynosi³a odpowiednio 98%/100% i 95%/100%. Zweryfikowana czu³oœæ/swoistoœæ testu Affirm VPIII w porównaniu z badaniem istotnych klinicznie hodowli i barwieniem metod¹ Grama u wszystkich pacjentek (n=299) wynosi³a odpowiednio 89%/99% i 84%/100%. W badaniach wszystkich kobiet test Affirm VPIII wykazywa³ czu³oœæ i swoistoœæ w porównaniu z identyfikacj¹ G. vaginalis przez badanie morfologiczne metod¹ Gramma lub badanie hodowli istotnych klinicznie. Zobacz Tabela 1. Niezweryfikowana czu³oœæ/specyficznoœæ testu Affirm VPIII w porównaniu z badaniami klinicznie istotnych hodowli i badaniem metod¹ Grama u pacjentek z klinicznym obrazem WB potwierdzonym 3 z 4 kryteriów Amstel (n=129) wynosi³a odpowiednio 98%/41% i 95%/83%. Niezweryfikowana czu³oœæ/swoistoœæ testu Affirm VPIII w porównaniu z badaniem istotnych klinicznie hodowli i barwieniem metod¹ Grama u wszystkich pacjentek (n=299) wynosi³a odpowiednio 88%/82% i 84%/96%. Zobacz Tabela 1. Trichomonas vaginalis Czu³oœæ/swoistoœæ testu Affirm VPIII Microbial Identification Test na obecnoœæ T. vaginalis ustalono w grupie 852 pacjentek na podstawie porównania z tradycyjnymi metodami mikroskopowymi i opartymi na izolacji hodowli. Spoœród przebadanych 852 pacjentek u 11% (98) uzyskano wynik dodatni w badaniu œwie ego preparatu, a u 13% (111) uzyskano wynik dodatni w oparciu o istotn¹ klinicznie hodowlê. W przypadkach ewidentnie fa³szywych wyników dodatnich, gdy wynik testu Affirm VPIII by³ dodatni, a wynik testu porównawczego ujemny, zastosowano alternatywne metody weryfikacji wyniku testu Affirm VPIII. Zweryfikowana czu³oœæ/swoistoœæ testu Affirm VPIII Microbial Identification Test na obecnoœæ T. vaginalis w porównaniu z badaniem œwie ego preparatu i klinicznie istotnej hodowli wynosi³a odpowiednio 93%/99,9% i 90%/99,9%. W tym badaniu klinicznym test Affirm VPIII Microbial Identification Test charakteryzowa³ siê czu³oœci¹ porównywaln¹ z 5-7 dniow¹ wyizolowan¹ hodowl¹ T. vaginalis. Zobacz Tabela 1. Niezweryfikowana czu³oœæ/swoistoœæ testu Affirm VPIII w porównaniu z badaniem œwie ego preparatu i istotnych klinicznie hodowli (5-7 dni) u wszystkich pacjentek wynosi³a odpowiednio 92%/98% i 89%/99%. Zobacz Tabela 1. Zaka enia mieszane i waginoza bakteryjna Dane dla podzbioru 289 pacjentek w tym badaniu klinicznym zebrano na podstawie rozpoznañ waginozy bakteryjnej, kandydozy i rzêsistkowicy dokonanych przez lekarzy prowadz¹cych na podstawie badania up³awów, ph, próby woni i badania œwie ych preparatów. Zdolnoœæ lekarzy prowadz¹cych do rozpoznania WB na podstawie 3 z 4 objawów przedmiotowych i subiektywnych u wszystkich badanych pacjentek wynios³a 75% (89/118). W przypadku kobiet, u których WB by³a jedyn¹ przyczyn¹ objawów subiektywnych, zdolnoœæ rozpoznawania WB przez lekarzy wynosi³a 82% (79/96). Jednak u pacjentek z zaka eniami mieszanymi, u których WB towarzyszy³a kandydoza lub rzêsistkowica, czu³oœæ rozpoznania przez lekarzy prowadz¹cych wynosi³a 45% (10/22). Lekarze prowadz¹cy mieli wiêksze trudnoœci z rozpoznaniem WB w zaka eniach mieszanych, gdzie czu³oœæ pierwszego rozpoznania wynosi³a 45% wobec 82% w przypadku zaka eñ pojedynczych. U pacjentek z zaka eniami mieszanymi w wielu przypadkach b³êdnie nie rozpoznawano WB. 6

7 Wyniki badania próbek pochodzenia nieklinicznego Zbadano swoistoœæ testu Affirm VPIII Microbial Identification Test na 88 izolatach reprezentuj¹cych 34 ró ne rodzaje drobnoustrojów zidentyfikowane przez Isenberga i in. 22 jako klinicznie istotne w schorzeniach dróg moczowo-p³ciowych. Acinetobacter sp. (1) Corynebacterium spp.(1) Listeria monocytogenes (1) Porphyromonas sp. (1) Actinomyces sp. (1) Cryptococcus neoformans (1) Mobiluncus spp. (3) Propionibacterium sp. (1) Bacteroides spp. (4) Entamoeba sp. (1) Mycobacterium sp. (1) Pseudomonas sp. (1) Branhamella sp. (1) Enterobacteriaceae (5) Mycoplasma hominis (1) Staphylococcus spp. (3) Bifidobacterium sp. (1) Enterococcus sp. (1) Neisseria spp. (2) Streptococcus spp. (3) Campylobacter sp. (1) Fusobacterium sp. (1) Neisseria gonorrhoeae (1) Trichomonas vaginalis (9) Candida spp. (16) Gardnerella vaginalis (10) Peptococcus sp. (1) Ureaplasma urealyticum (1) Chlamydia trachomatis (2) Haemophilus ducreyi (1) Peptostreptococcus spp. (3) Veillonella sp.(1) Clostridium spp. (2) Lactobacillus spp. (3) Prevotella spp.(2) Wszystkie drobnoustroje, z wyj¹tkiem Cryptococcus neoformans i gatunków Candida, dawa³y wynik ujemny w teœcie Affirm VPIII Microbial Identification Test na obecnoœæ gatunków Candida przy stê eniu 10 8 drobnoustrojów/ml. Wszystkie drobnoustroje, z wyj¹tkiem M. mulieris, B. dentium i G. vaginalis dawa³y wynik ujemny w teœcie Affirm VPIII Microbial Identification Test na obecnoœæ G. vaginalis przy stê eniu 10 8 drobnoustrojów/ml. M. mulieris dawa³y wynik ujemny przy stê eniu 4 x 10 6 bakterii/ml, a B. dentium dawa³y wynik ujemny przy stê eniu 8 x 10 5 bakterii/ml. Bakterie B. dentium s¹ tylko sporadycznie izolowane z pochwy. 23 Wiêkszoœæ Bifidobacterium sp. i szczepów B. dentium izoluje siê z okolic anatomicznych innych ni pochwa i drogi moczowo-p³ciowe. Wszystkie drobnoustroje z wyj¹tkiem T. vaginalis dawa³y wynik ujemny w teœcie Affirm VPIII Microbial Identification Test na obecnoœæ T. vaginalis przy stê eniu 10 8 drobnoustrojów/ml. Czu³oœæ analityczna Test Affirm VPIII Microbial Identification Test na obecnoœæ gatunków Candida umo liwia wykrycie 1 x 10 4 CFU Candida w fazie logarytmicznej w jednej analizie, 2 x 10 5 CFU G. vaginalis w fazie logarytmicznej w jednej analizie oraz 5 x 10 3 rzêsistków w jednej analizie. Substancje zak³ócaj¹ce W badaniach klinicznych nie stwierdzono oznak interferencji z dopochwowymi œrodkami poœlizgowymi, œrodkami higieny, krwi¹ miesi¹czkow¹, ani œrodkami plemnikobójczymi. W badaniach analitycznych nie stwierdzono oznak interferencji z dopochwowymi œrodkami poœlizgowymi. Powtarzalnoœæ System Affirm System by³ testowany pod k¹tem powtarzalnoœci w ramach jednej serii i miêdzy seriami w trzech typowych placówkach klinicznych przez trzy ró ne osoby niemaj¹ce z nim wczeœniej stycznoœci (pielêgniarki pracuj¹ce w zawodzie). W ka dym oœrodku badano 24 zakodowane próbki (12 dodatnich i 12 ujemnych). W ka dym oœrodku wykonano cztery serie testów obejmuj¹ce po szeœæ próbek. We wszystkich trzech oœrodkach uzyskano pe³n¹ zgodnoœæ wyników poszczególnych próbek, wykazuj¹c tym samym ³atwoœæ u ycia i powtarzalnoœæ wyników systemu Affirm w ramach serii, miêdzy seriami i w ró nych oœrodkach. DOSTÊPNOŒÆ Nr kat. Opis Affirm VPIII Microbial Identification Test, 24 testy Affirm VPIII Microbial Identification Test, 120 testy Affirm VPIII Bulk Sample Collection Swabs, 100 wymazówek Affirm VPIII Sample Collection Sets, 24 zestawy Affirm VPIII Ambient Temperature Transport System (system transportowy, do 72 h), 100 systemów BD MicroProbe Processor (120 V) BD MicroProbe Processor, (220/240 V) PIŒMIENNICTWO 1. Kent, HL. Am J. Obstet Gynecol; 165 (4 Pt 2):p ;Oct Vulvovaginitis ACOG Technical Bulletin. American College of Obstetricians and Gynecologists 3. Sobel, JD. Med Clin North Am; 74 (6) p ; Nov Gravett MG, HP Nelson, T DeRouen, et al J Am Med Assoc 256: Faro S J Reprod Med 34: Gravett MG, D Hummel, DA Eschenbach, et al Obstet Gynecol 67: McGregor JA, JI French, K Seo Am J Obstet Gynecol 165: McGregor JA, JI French, R Richter, et al Am J Obst Gynecol 163: Hillier SL, NB Kiviat, C. Critchlow, et al. Abstract presented at IDSOG, Aug. 6-8, San Diego, pg Spiegel, CA, R Amse, and KK Holmes J Clin Micro 18: Krieger JN Invest Urog 18: Rein MF Trichomonas vaginalis. In: Principles and Practice of Infectious Diseases, 3rd ed. Mandell GL, RG Douglas, Jr, and JE Bennett (eds). New York: Churchill Livingstone Inc., p Martius J, MA Krohn, SL Hillier, et al Obstet Gynecol 71: Nugent, RP, MA Krohn and SL Hillier J Clin Microbiol. 29: Morton K, L Regan, S Sprige, and E Houang Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol 37: Soper DE, RC Bump, and WG Hurt Am J Obstet Gynecol 163:

8 17. Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 18. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 5th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 20. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Data is on file at Becton, Dickinson and Company. 22. Isenberg, Henry D, and Richard F D Amato Manual of Clinical Microbiology, 5th ed, Ballows, Hausler, Herrman, Isenberg, Shadomy (ed), ASM, Washington, DC, p Bergey s Manual of Systematic Bacteriology, Vol. 2. PHA Sneath, NS Mair, ME Sharpe, JG Holt (eds), Baltimore, Williams and Wilkens p

9 TABELA 1 ZWERYFIKOWANE Pacjentki z objawami Affirm VPIII Œwie y preparat Barwienie m. Grama DROBNOUSTROJE Metoda ref. Czu³oœæ Swoistoœæ Dok³adnoœæ Czu³oœæ Swoistoœæ Dok³adnoœæ Czu³oœæ Swoistoœæ Dok³adnoœæ Candida sp. Hodowla 82,3% 98,4% 95,2% 71,9% 92,2% 88,1% 45,6% 99,6% 90,3% 79/96 377/ /479 69/96 353/ /479 26/57 271/ /329 G. vaginalis Barwienie m. Grama 95,2% 100% 95,3% 118/124 5/5 123/129 Hodowla 98,3% 100% 98,4% 118/120 9/9 127/129 Wszystkie pacjentki Affirm VPIII Œwie y preparat Barwienie m. Grama DROBNOUSTROJE Metoda ref. Czu³oœæ Swoistoœæ Dok³adnoœæ Czu³oœæ Swoistoœæ Dok³adnoœæ Czu³oœæ Swoistoœæ Dok³adnoœæ Candida sp. Hodowla 80,6% 98,2% 95,3% 60% 94,0% 88,2% 44,4% 99,3% 92,1% 100/ / /740 74/ / /740 28/63 418/ /484 G. vaginalis Barwienie m. Grama 83,8% 100% 89,0% 171/204 95/95 266/299 Hodowla 89,0% 99,1% 92.6% 170/ / /299 T. vaginalis Œwie y preparat 92,8% 99,9% 98,9% 103/ / /852 Hodowla 5-7 dni 89,6% 99,9% 98,5% 82,6% 99,6% 97,3% 103/ / /852 95/ / /852 NIEZWERYFIKOWANE Pacjentki z objawami Affirm VPIII Œwie y preparat Barwienie m. Grama DROBNOUSTROJE Metoda ref. Czu³oœæ Swoistoœæ Dok³adnoœæ Czu³oœæ Swoistoœæ Dok³adnoœæ Czu³oœæ Swoistoœæ Dok³adnoœæ Candida sp. Hodowla 79,3% 95,0% 92,3% 67,1% 88,9% 85,2% 42,6% 98,5% 89,4% 65/82 377/ /479 55/82 353/ /479 23/54 271/ /329 G. vaginalis Barwienie m. Grama 95,1% 83,3% 94,6% 117/123 5/6 122/129 Hodowla 98,1% 40,9% 88,4% 105/107 9/22 114/129 Wszystkie pacjentki Affirm VPIII Œwie y preparat Barwienie m. Grama DROBNOUSTROJE Metoda ref. Czu³oœæ Swoistoœæ Dok³adnoœæ Czu³oœæ Swoistoœæ Dok³adnoœæ Czu³oœæ Swoistoœæ Dok³adnoœæ Candida sp. Hodowla 78,0% 95,9% 93,2% 54,1% 91,8% 86,2% 41,7% 98,6% 91,5% 85/ / /740 59/ / /740 25/60 418/ /484 G. vaginalis Barwienie m. Grama 83,5% 96,0% 87,6% 167/200 95/99 262/299 Hodowla 87,5% 81,7% 84,9% 147/ / /299 T. vaginalis Œwie y preparat 91,8% 98,1% 97,4% 90/98 740/ /852 Hodowla 5-7 dni 89,2% 99,3% 98,0% 82,0% 99,1% 96,8% 99/ / /852 91/ / /852 *Czu³oœæ = TP/(TP+FN); Swoistoœæ = TN/(TN+FP); Dok³adnoœæ (TP+TN)/(TP+FP+FN+TN) 9

10 10

11 Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland USA BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon, County Clare, Ireland Tel: Fax: ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. Proclin is a trademark of Rohm and Haas Co. BD, BD Logo, MicroProbe and Affirm are trademarks of Becton, Dickinson and Company 2009 BD.