FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human AMACR Klon 13H4 Ready-to-Use (Dako Omnis) Nr kat. GA060. Przeznaczenie

Transkrypt

1 FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human AMACR Klon 13H4 Ready-to-Use (Dako Omnis) Nr kat. GA060 Przeznaczenie Do badań diagnostycznych in vitro. Przeciwciało FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human AMACR, klon 13H4, Ready-to-Use (Dako Omnis), jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii z urządzeniami Dako Omnis. Przeciwciała te są przydatne w identyfikacji gruczolakoraków gruczołu krokowego (1-9). Interpretacja kliniczna wystąpienia barwienia lub jego braku musi być uzupełniona o badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Synonimy antygenu Racemaza alfa-metyloacylo-koenzymu A, P504S (1, 2). Podsumowanie i wyjaśnienie Odczynnik dostarczony Królicze przeciwciała monoklonalne przeciwko enzymowi AMACR (racemazie alfa-metyloacylo-koenzymu A) rozpoznają białko złoŝone z 382 aminokwasów, zidentyfikowane z zastosowaniem subtrakcji bibliotek cdna, w połączeniu z masowym badaniem przesiewowym w kierunku gruczolakoraka gruczołu krokowego, prowadzonym przy uŝyciu mikromacierzy (1). Białko AMACR, znane równieŝ jako P504S, jest enzymem uczestniczącym w biosyntezie kwasów Ŝółciowych i β-oksydacji kwasów tłuszczowych o łańcuchach rozgałęzionych (10). Ekspresja białka AMACR zachodzi w komórkach przedzłośliwych gruczołu krokowego o cechach nowotworzenia śródnabłonkowego duŝego stopnia (HGPIN) i komórkach gruczolakoraka gruczołu krokowego, ale białko to obecne jest takŝe w małych lub niewykrywalnych ilościach w komórkach nabłonka gruczołowego prawidłowego gruczołu krokowego i łagodnych rozrostach tego gruczołu (1-9). Białko AMACR ulega ekspresji w normalnych komórkach nabłonka spoza gruczołu krokowego oraz w rakach niewywodzących się z tego gruczołu (2, 11-23). Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub instrukcje do systemu detekcji IHC. Gotowe do uŝycia królicze przeciwciało monoklonalne dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko stabilizujące i azydek sodu o stęŝeniu 0,015 mol/l. Klon: 13H4 (1-3). Immunogen Rekombinowane białko AMACR o pełnej długości (1). Swoistość Swoistość monoklonalnych przeciwciał króliczych przeciwko AMACR badano metodami immunocytochemicznymi i przy uŝyciu analizy Western blot. Przeciwciała przeciwko AMACR wiązały swoiście utrwalane w formalinie komórki HEK293 z nadekspresją AMACR, ale nie reagowały z komórkami transfekowanymi pustym plazmidem. W testach Western blot lizatów z preparatów pierwotnego raka gruczołu krokowego, przeciwciało znakuje białko o masie 54 kd, która odpowiada przewidywanej masie cząsteczkowej AMACR (3). Środki ostroŝności Przechowywanie 1. Do stosowania przez wyszkolony personel. 2. Opisywany produkt zawiera azydek sodu (NaN 3), związek silnie toksyczny w czystej postaci. Azydek sodu, zastosowany w produkcie w stęŝeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŝe reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać duŝą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydków metalu w kanalizacji. 3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŝy stosować właściwe procedury postępowania. 4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŝy nosić odpowiednie osobiste wyposaŝenie ochronne. 5. Niewykorzystany roztwór usuwać zgodnie z rozporządzeniami lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi. Przechowywać w temperaturze 2 8 C. Podczas przechowywania korek powinien być zamknięty. Nie naleŝy uŝywać odczynników po upływie terminu waŝności podanego na fiolce. Stabilność w urządzeniu wynosi 80 godzin. Pozostały okres stabilności w urządzeniu jest kontrolowany przez oprogramowanie Dako Omnis. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŝ podane powyŝej, uŝytkownik musi zweryfikować takie warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjenta naleŝy wykonywać kontrole pozytywne i negatywne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŝna wyjaśnić róŝnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŝy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. ( ) P02076PL_001_GA060/ s. 1/5

2 Skrócona instrukcja uŝytkownika Krok Utrwalanie/zatapianie Utrwalone w formalinie, zatopione w parafinie Obróbka wstępna EnVision FLEX, High ph (nr kat.gv804) HIER 30 min Comments (Komentarze) Odparafinowanie w urządzeniu Przeciwciało Produkt gotowy do uŝycia Inkubacja 17,5 min Kontrola negatywna FLEX Negative Control, Rabbit (nr kat. GA600) Wizualizacja EnVision FLEX (nr kat. GV800) + EnVision FLEX+ Rabbit LINKER (nr kat. GV809) Inkubacja 17,5 min Blokowanie: 3 min; Wiązanie: 10 min; Polimeryzacja: 20 min; Chromogen: 5 min Barwnik kontrastowy Hematoxylin (nr kat. GC808) Inkubacja 3 min Tkanka kontrolna Gruczolakorak gruczołu krokowego Odczyn cytoplazmatyczny Szkiełka FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020) Zalecane w celu uzyskania lepszego przylegania skrawków tkankowych do szkiełek. Zamykanie Wymagane niewodne, trwałe zatapianie preparatów Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone i zatopione w środku do trwałego zatapiania. Oprzyrządowanie Dako Omnis Odczynniki znajdują się we fiolkach dostosowanych do urządzenia *UŜytkownik jest zobowiązany przeczytać ulotki dostarczane do opakowań, które zawierają dokładne instrukcje przeprowadzania procedury barwienia i postępowania z produktem. Przygotowlanie próbek Procedura barwienia Interpretacja wybarwienia Charakterystyka działania Skrawki parafinowe: przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania skrawków utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŝy pociąć na skrawki o grubości 4 µm. Obróbka wstępna: wymagane jest poddanie utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych cieplnemu odmaskowaniu epitopu (HIER). Zaleca się przeprowadzenie na tkankach HIER z zastosowaniem odczynnika EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (Dako Omnis), nr kat. GV804. Procesy odparafinowania, nawodnienia i odmaskowania antygenu przeprowadza się w urządzeniu Dako Omnis. Informacje na ten temat moŝna znaleźć w podstawowym podręczniku uŝytkownika Dako Omnis. Podczas obróbki wstępnej lub procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek FLEX IHC Microscope Slides, nr kat. K8020. Program: w urządzeniu Dako Omnis wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Szczegółowe informacje dotyczące umieszczania szkiełek mikroskopowych i odczynników w urządzeniu przedstawiono w podstawowym podręczniku uŝytkownika Dako Omnis. Jeśli w uŝytkowanym urządzeniu Dako Omnis protokoły nie są dostępne, naleŝy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji przeprowadza się w temperaturze 32 C w urządzeniu Dako Omnis. Wizualizacja: zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High ph (Dako Omnis), nr kat. GV800 łącznie z odczynnikiem EnVision FLEX+ Rabbit LINKER (Dako Omnis), nr kat. GV809. Wizualizacja odbywa się w urządzeniu Dako Omnis. Barwienie kontrastowe: zaleca się stosowanie barwnika Hematoxylin (Dako Omnis),nr kat. GC808. Barwienie kontrastowe odbywa się w urządzeniu Dako Omnis. Zatapianie: po wykonaniu odczynu w urządzeniu Dako Omnis skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone i zatopione w środku do trwałego zatapiania. Próby kontrolne: równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŝy wykonywać pozytywne i negatywne próby kontrolne z zastosowaniem identycznego protokołu. Tkankowa kontrola pozytywna powinna obejmować raka gruczołu krokowego, a komórki/struktury powinny wykazywać odczyn taki, jak opisany dla tej tkanki w części Charakterystyka pracy. Zalecana kontrola negatywna to FLEX Universal Negative Control, Rabbit (Dako Omnis), nr kat. GA600. Przeciwciała wykazują odczyn cytoplazmatyczny. Tkanki normalne: Rodzaj tkanki (liczba testowanych Składniki komórkowe dające dodatni odczyn przypadków) (2-5,11-14) Nadnercza (12) 2 0/12 Pęcherz moczowy (7) 2 0/7 Mózg (5) 2 0/5 Gruczoły sutkowe (12) 2 0/12 OkręŜnica (24) 11,12 20/24 Nabłonek powierzchni jelita grubego, zogniskowany i w obrębie kanalików OkręŜnica, polip hiperplastyczny (28) 12 1/28 ( ) P02076PL_001_GA060/ s. 2/5

3 Endometrium (17) 2,11 0/17 Pęcherzyk Ŝółciowy (10) 2 10/10 Komórki nabłonka Serce (5) 2 0/5 Nerki (12) 2 12/12 Komórki nabłonka kanalików Wątroba (31) 2,13 18/31 Hepatocyty Płuca (18) 2,11 12/18 Komórki nabłonka oskrzeli Węzły chłonne (7) 2 0/7 Jajniki (14) 2,11 0/14 Trzustka (15) 2 0/15 Gruczoł krokowy, prawidłowy (34) 2,11 0/34 Gruczoł krokowy, łagodne (156) 3,4,5 11/156 Ślinianki (7) 2 0/7 Skóra (10) 2,11 0/10 Jelito cienkie (18) 2 0/18 Śledziona (12) 2 0/12 śołądek (13) 2 0/13 śołądek, nabłonek nienowotworowy (44) 14 2/44 Jądra (5) 2 0/5 Tarczyca (5) 2 0/5 Tkanki nieprawidłowe: przeciwciała przeciwko AMACR wykazują immunoreaktywność z większością przebadanych komórek raków gruczołu krokowego (2-8,11). Komórki nabłonka hiperplastycznego gruczołu krokowego powinny wykazywać wynik ujemny lub bardzo słaby zogniskowany odczyn cytoplazmatyczny. Większość komórek nowotworowych w przypadku gruczolakoraka gruczołu krokowego powinna wykazywać odczyn cytoplazmatyczny o nasileniu od umiarkowanego do silnego. 95/167 0/5 Rodzaj tkanki (liczba testowanych przypadków)2,11-23 Liczba preparatów z nowotworów dających odczyn dodatni Nowotwór kory nadnerczy (20) 2 1/20 Rak podstawnokomórkowy skóry (20) 2 0/20 Rak przewodów Ŝółciowych (14) 2 2/14 Gruczolakorak sutka (315) 2,11,15 54/315 Rakowiaki płuc i przewodu pokarmowego (10) 2 0/10 Raki okręŝnicy (233) 11,12,16,17 OkręŜnica (35) 11,16 16/35 Dobrze zróŝnicowane (58) 12 45/58 Umiarkowanie zróŝnicowane (88) 12 66/88 Słabo zróŝnicowane (30) 12 11/30 Przerzutowy (22) 17 7/22 Rak endometrioidalny (10) 2 0/10 Guzy zarodkowe (14) 2 0/14 Rak wątrobowokomórkowy (72) 2,13 59/72 Rak płuc (300) 2,11,18 Rak (28) 11 4/28 Gruczolakorak (151) 2,18 75/151 Rak z komórek płaskonabłonkowych (121) 18 27/121 Czerniak (41) 2,11 2/41 Rak neuroendokrynny przewodu pokarmowego, płuc i wątroby (167) 2,18 Gruczolakorak jajnika (76) 2,11,17 2/76 Gruczolakorak trzustki (13) 2 1/13 Międzybłoniak opłucnej (16) 2 0/16 Gruczolakorak gruczołu krokowego (640) 2-8,11 587/640 Guzy nerek (105) 19,20 Rak jasnokomórkowy (77) 19,20 17/77 Rak barwnikooporny (24) 19,20 1/24 Onkocytoma (29) 19,20 4/29 Rak z komórek przewodu Belliniego/nabłonka dróg moczowych (5) 19 Rak z komórek śluzowych i wrzecionowatych (5) 19 5/5 Rak z komórek brodawkowatych (96) 19,20 96/96 Rak mięsakowaty (15) 20 0/15 Nowotwory ślinianek (28) 2 1/28 Rak drobnokomórkowy płuc i skóry (15) 2 0/15 Mięsak nabłonkowaty tkanki miękkiej (12) 2 1/12 Mięsak maziówkowy tkanki miękkiej (6) 2 0/6 Rak płaskonabłonkowy skóry i błon śluzowych (25) 2 0/25 Gruczolakorak Ŝołądka (413) 2,14,21,22 262/413 Rak niezróŝnicowany (27) 2 0/27 Grasiczak (8) 2 0/8 ( ) P02076PL_001_GA060/ s. 3/5

4 Guzy tarczycy (54) 2 0/54 Rak z komórek nabłonka dróg moczowych (50) 2,20,23 Rak z komórek nabłonka dróg moczowych (17) 20 2/17 Rak z komórek nabłonka przejściowego, pęcherza (29) 2 9/29 Gruczolakorak jasnokomórkowy (4) 23 4/4 Piśmiennictwo 1. Xu J, Stolk JA, Zhang X, Silva SJ, Houghton RL, Matsumura M, Vedvick TS, Leslie KB, Badaro R, Reed SG. Identification of differentially expressed genes in human prostate cancer using subtraction and microarray. Canc Res. 2000; 60: Jiang Z, Fanger GR, Woda BA, Banner BF, Algate P, Dresser K, Xu J, Chu PG. Expression of α-methylacyl- CoA racemase (P504S) in various malignant neoplasms and normal tissues: A study of 761 cases. Human Pathology. 2003; 34(8): Jiang Z, Woda BA, Rock KL, Xu Y, Savas L, Khan A, Pihan G, Cai F, Babcook JS, Rathanaswami P, Reed SG, Xu J, Fanger GR. P504S: a new molecular marker for the detection of prostate carcinoma. Am J Surg Pathol. 2001; 25(11): Jiang Z, Wu C, Woda BA, Dresser K, Xu J, Fanger GR, Yang XJ. P504S/α-methylacyl-CoA racemase: a useful marker for diagnosis of small foci of prostatic carcinoma on needle biopsy. Am J Surg Path. 2002; 26(9): Yang XJ, Wu C, Woda BA, Dresser K, Tretiakova M, Fanger GR, Jiang Z. Expression of α-methylacyl-coa racemase (P504S) in atypical adenomatous hyperplasia of the prostate. Am J Surg Path. 2002; 26(7): Zhou M, Jiang Z, Epstein JI. Expression and diagnostic utility of alpha-methylacyl-coa-racemase (P504S) in foamy gland and pseudohyperplastic prostate cancer. Am J Surg Path. 2003; 27(6): Beach R, Gown AM, de Peralta-Venturina MN, Folpe AL, Yaziji H, Salles PG, Grignon DJ, Fanger GR, Amin MG. P504S immunohistochemical detection in 405 prostatic specimens including gauge needle biopsies. Am J Surg Pathol. 2002; 26(12): Wu C-L, Yang XJ, Tretiakova M, Patton KT, Halpern EF, Woda BA, Young RH, Jiang Z. Analysis of α- methylacyl-coa racemase (P504S) expression in high-grade prostatic intraepithelial neoplasia. Hum Pathol 2004;35(8): Jiang Z, Woda B, Wu C-L, Yang X. Discovery and clinical application of a novel prostate cancer marker. Am J Clin Pathol 2004;122: Ferdinandusse S, Denis S, Ijst L, Dacremont G, Waterham HR, Wanders JA. Subcellular localization and physiological role of α-methylacyl-coa racemase. Journal of Lipid Research. 2000; 41: Nassar A, Amin MB, Sexton DG, Cohen C. Utility of α-methylacyl coenzyme A racemase (P504S) antibody) as a diagnostic immunohistochemical marker for cancer. Appl Immunohistochem Mol Morphol 2005;13(3): Jiang Z, Fanger GR, Banner BF, Woda BA, Algate P, Dresser K, Xu J, Reed SG, Rock KL, Chu PG. A dietary enzyme: alpha-methylacyl-coa racemase/p504s is overexpressed in colon carcinoma. Cancer Detect Prev. 2003;27(6): Li W, Cagle PT, Botero RC, Liang JJ, Zhang Z, Tan D. Significance of overexpression of alpha methylacylcoenzyme A racemase in hepatocellular carcinoma. J Exp Clin Cancer Res 2008;27: Lee WA. α-methylacyl-coa-racemase expression in adenocarcinoma, dysplasia and non-neoplastic epithelium of the stomach. Oncology 2006;71: Witkiewicz AK, Varambally S, Shen R, Mehra R, Sabel MS, Ghosh D, Chinnaiyan AM, Rubin MA, Kleer CG. α-methylacyl CoA racemase protein expression is associated with the degree of differentiation in breast cancer using quantitative image analysis. Canc Epidemiol Biomarkers Prev 2005;14(6): Osunkoya AO, Netto GJ, Epstein JI. Colorectal adenocarcinoma involving the prostate: report of 9 cases. Human Pathol 2007;38: Logani S, Oliva E, Arnell PM, Amin MB, Young RH. Use of novel immunohistochemical markers expressed in colonic adenocarcinoma to distinguish primary ovarian tumors from metastatic colorectal carcinoma. Mod Pathol 2005;18: Shilo K, Dracheva T, Mani H, Fukuoka J, Sesterhenn IA, Chu W-S, Shih JH, Travis WD, Franks TJ. α- methylacyl CoA racemase in pulmonary adenocarcinoma, squamous cell carcinoma, and neuroendocrine tumors. Arch Pathol Lab Med 2007;131: Molinié V, Balaton A, Rotman S, Mansouri D, de Pinieux I, Homsi T, Guillou L. Alpha-methyl CoA racemase expression in renal cell carcinomas. Human Pathol 2006;37: Tretiakova MS, Sahoo S, Takahashi M, Turkyilmaz M, Vogelzang NJ, Lin F, Krausz T, Teh BT, Yang XJ. Expression of alpha-methylacyl-coa racemase in papillary renal cell carcinoma. Am J Surg Pathol 2004;28(1): Truong CD, Li W, Feng W, Cagle P, Khoury T, Sadir A, Xie K, Yao J, Tan D. Alpha-methylacyl-CoA racemase expression is upregulated in gastric adenocarcinoma: a study of 249 cases. Int J Clin Exp Path 2008;1: Cho EY, Kim K-M, Park CK, Kim JJ, Sohn TS, Kim DW. AMACR is highly expressed in gastric adenomas and intestinal-type carcinomas. APMIS 2007;115: Sun K, Huan Y, Unger PD. Clear cell adenocarcinoma of urinary bladder and urethra: another urinary tract lesion immunoreactive for P504S. Arch Pathol Lab Med 2008;132: ( ) P02076PL_001_GA060/ s. 4/5

5 Wydanie 10/12 ( ) P02076PL_001_GA060/ s. 5/5