Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1 Clone 22C3. Nr kat. M3653. Przeznaczenie

Transkrypt

1 Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1 Clone 22C3 Nr kat. M3653 Przeznaczenie Do badań diagnostycznych in vitro. Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone 22C3, są przeznaczone do stosowania w immunohistochemii. Te przeciwciała stosowane są do znakowania białka PD-L1 w prawidłowych i zmienionych nowotworowo tkankach. Interpretacja kliniczna wystąpienia barwienia lub jego braku musi być uzupełniona o badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez certyfikowanego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Przeciwciała te przeznaczone są do stosowania po pierwotnym rozpoznaniu guza w konwencjonalnym badaniu histopatologicznym z zastosowaniem barwników do nieimmunologicznych barwień histochemicznych. Synonimy antygenu Ligand receptora programowanej śmierci 1 (1). Streszczenie i informacje ogólne Wiązanie ligandów PD-1, PD-L1 i PD-L2, z receptorem PD-1 występującym na powierzchni limfocytów T hamuje proliferację limfocytów T i wytwarzanie cytokin (2). W przypadku niektórych guzów występuje zwiększona ekspresja ligandów PD-1, a sygnalizacja z udziałem tego szlaku moŝe przyczyniać się do hamowania czynnego nadzoru immunologicznego nad guzami przez limfocyty T (3). Blokada interakcji białka PD-1 z jego ligandami PD-L1 i PD-L2 prowadzi do zniesienia hamowania z udziałem szlaku PD-1 odpowiedzi immunologicznej, w tym przeciwnowotworowej odpowiedzi immunologicznej (4). Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub instrukcje do systemu detekcji IHC. Odczynnik dostarczony Immunogen Swoistość Środki ostroŝności Mysie przeciwciało monoklonalne dostarczane w postaci ciekłej w roztworze o ph 7,2 zawierającym Tris-HCl w stęŝeniu 0,05 mol/l, azydek sodu w stęŝeniu 0,015 ml/l i albuminę surowicy wołowej w stęŝeniu 1%. Klon: 22C3 (5). Izotyp: IgG1. StęŜenie mysich IgG (mg/l): Patrz: informacja podana na etykiecie fiolki. StęŜenie białek w róŝnych partiach moŝe się róŝnić, co nie ma wpływu na optymalne rozcieńczenie. W celu zapewnienia jednolitości odczynów immunohistochemicznych wykonywanych przy uŝyciu róŝnych partii produktu, miano kaŝdej partii jest porównywane i dostosowywane do partii referencyjnej. Zewnątrzkomórkowa domena ludzkiego białka PD-L1 (Phe19 Thr239) połączona z fragmentem ludzkiego białka IgG1 (R&D Systems, nr. kat. 156-B7-100) (5) W badaniach metodą Western blot rekombinowanego ludzkiego białka PD-L1 przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone 22C3, barwi prąŝek odpowiadający masie cząsteczkowej ok. 40 kda (5). 1. Do stosowania przez wyszkolony personel. 2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny w czystej postaci związek chemiczny azydek sodu (NaN 3). Azydek sodu zastosowany w produkcie w stęŝeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŝe reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać duŝą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydków metali w kanalizacji. 3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych naleŝy stosować właściwe procedury postępowania. 4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŝy nosić odpowiednie osobiste wyposaŝenie ochronne. 5. Niewykorzystany roztwór usuwać zgodnie z rozporządzeniami lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi. Przechowywanie Przygotowanie próbek Przechowywać w temperaturze 2 8 C. Nie uŝywać po upływie daty waŝności podanej na fiolce. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŝ podane powyŝej, uŝytkownik powinien zweryfikować te warunki. Nie ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjenta naleŝy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W przypadku uzyskania nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŝna wyjaśnić róŝnicami w procedurach laboratoryjnych, i gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŝy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Skrawki parafinowe: Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŝy pociąć na skrawki o grubości około 4 µm. Obróbka wstępna: Informacje dotyczące przeprowadzania obróbki wstępnej preparatów znajdują się w instrukcji uŝytkowania roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (nr kat. K8005). ( ) P04435PL_01/M3653/ s. 1/4

2 Procedura barwienia Są to wyłącznie wytyczne. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŝności od rodzaju materiału oraz sposobu jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w kaŝdym laboratorium. UŜytkownik powinien ustalić działanie przeciwciała podczas korzystania z innych systemów barwienia ręcznego lub z systemów zautomatyzowanych. Rozcieńczenie: Zalecane rozcieńczenie przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone 22C3, nr kat. M3653, to 1:50. Przeciwciało naleŝy rozcieńczyć w rozcieńczalniku Dako Antibody Diluent with Background-Reducing Components (nr kat. S3022). Skrawki tkankowe poddane obróbce wstępnej inkubować przez 30 minut w temperaturze pokojowej. Kontrola ujemna: Zalecana kontrola ujemna to odczynnik Dako Negative Control, Mouse IgG1 (nr kat. X0931) rozcieńczony do tego samego stęŝenia IgG1 co przeciwciało pierwotne. Jeśli stabilność rozcieńczonych przeciwciał i kontroli ujemnej nie została potwierdzona w procedurze barwienia, zaleca się rozcieńczenie tych odczynników bezpośrednio przed uŝyciem. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŝy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. Wizualizacja: W zalecanym układzie wizualizacji EnVision FLEX HRP inkubacja trwa 30 minut w temperaturze pokojowej. Czas inkubacji produktu EnVision FLEX+ Mouse (LINKER) (nr kat. K8021/K8022) wynosi 30 minut w temperaturze pokojowej. Postępować zgodnie z procedurą dostarczoną z wybranymi systemami do wizualizacji. Uwaga: Do wykonania HIER naleŝy uŝyć roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x), nr kat K8005. Czas inkubacji produktu DAB Enhancer (S ) wynosi 5 minut w temperaturze pokojowej. Barwienie kontrastowe: Zalecanym barwnikiem kontrastowym jest EnVision FLEX Hematoxylin (nr kat. K8008/K8018). W celu uzyskania optymalnych wyników zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania. Kontrole: Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŝy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne z uŝyciem identycznego protokołu. Tkankowa kontrola dodatnia powinna obejmować migdałki, a komórki / struktury powinny wykazywać odczyn taki, jak opisany dla tej tkanki w części Charakterystyka działania. Interpretacja wybarwienia Charakterystyka działania Odczyn komórkowy ma charakter błonowy. Tkanki prawidłowe: Odczyn błonowy zaobserwowano w przypadku komórek układu immunologicznego oraz komórek pochodzenia nabłonkowego. Odczyn cytoplazmatyczny zauwaŝono w niektórych typach komórek, lecz nie zarejestrowano go jako odczynu dodatniego. W tabeli 1 przedstawiono podsumowanie immunoreaktywności białka PD-L1 w obrębie zalecanego panelu tkanek prawidłowych. Wszystkie tkanki zostały utrwalone w formalinie, zatopione w parafinie i wybarwione z uŝyciem przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3, zgodnie z instrukcjami zamieszczonymi w ulotce dołączonej do opakowania. W obrębie analizowanych typów komórek i tkanek nie uzyskano nieoczekiwanych wyników. Obserwowany odczyn był zgodny z danymi literaturowymi dotyczącymi ekspresji PD-L1 IHC w tkankach prawidłowych (1, 2). Tabela 1: Podsumowanie reaktywności przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone 22C3, w tkankach prawidłowych Rodzaj tkanki (liczba badanych przypadków) Składniki tkankowe wykazujące odczyn dodatni Rodzaj tkanki (liczba badanych przypadków) Składniki tkankowe wykazujące odczyn dodatni Grasica (3) 3/3 Rdzeń Piersi (3) 0/3 Gruczoł krokowy (2) 2/2 Nabłonek Płuca (3) 3/3 Makrofagi Jajniki (3) 0/3 Przełyk (3) 0/3 Jądra (3) 0/3 Przysadka mózgowa (3) 1/3 Przedni płat przysadki Jelito cienkie (3) 0/3 1/3 Tylny płat przysadki Komórki międzybłonka (2) 0/2 Przytarczyce (3) 1/3 Nabłonek gruczołowy Macica (3) 0/3 Skóra (3) 0/3 Mięsień sercowy (3) 0/3 Szpik kostny (3) 3/3 Megakariocyty Mięśnie szkieletowe (3) 0/3 Szyjka macicy (3) Migdałki (3) 3/3 Nabłonek krypt migdałków Śledziona (3) 1/3 Komórki nabłonkowe 2/3 Makrofagi 2/3 Makrofagi Ślinianki (3) 0/3 Mózgowie (3) 0/3 Tarczyca (3) 0/3 MóŜdŜek (3) 0/3 Trzustka (3) 0/3 ( ) P04435PL_01/M3653/ s. 2/4

3 Nadnercza (3) 0/3 Wątroba (3) 1/3 Makrofagi Nerka (3) 1/3 Nabłonek kanalików 1/3 Hepatocyty Nerwy obwodowe (3) 0/3 śołądek (3) 2/3 Limfocyty OkręŜnica (3) 1/3 Limfocyty 1/3 Gruczoły Ŝołądkowe 1/3 Makrofagi Tkanki nieprawidłowe: Odczyn błonowy zaobserwowano w przypadku komórek układu immunologicznego oraz komórek pochodzenia nabłonkowego. Odczyn cytoplazmatyczny zauwaŝono w niektórych typach komórek, lecz nie zarejestrowano go jako odczynu dodatniego. W tabeli 2 przedstawiono podsumowanie immunoreaktywności białka PD-L1 w obrębie panelu tkanek zmienionych nowotworowo. Wszystkie tkanki zostały utrwalone w formalinie, zatopione w parafinie i wybarwione z uŝyciem przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3, zgodnie z instrukcjami zamieszczonymi w ulotce dołączonej do opakowania. W obrębie analizowanych próbek guza nie zaobserwowano nieoczekiwanych wyników. Obserwowany odczyn był zgodny z danymi literaturowymi dotyczącymi ekspresji PD-L1 IHC w tkankach nowotworowych (1 4). Tabela 2: Podsumowanie reaktywności przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone 22C3, w tkankach zmienionych nowotworowo Typ guza Chłoniak Chłoniak anaplastyczny z duŝych komórek Lokalizacja Węzły chłonne Chłoniak Hodgkina Węzły chłonne 2/2 Chłoniak nieziarniczy Węzły chłonne 1/1 Chłoniak rozlany z komórek B Węzły chłonne 0/4 Chrzęstniakomięsak Kości Czerniak Jama nosowa Odbytnica Glejak Mózg Grasiczak Śródpiersie 1/1 Guz chromochłonny Nadnercza Guz z komórek wyspowych Trzustka Gwiaździak Mózgowie 0/3 Kostniakomięsak Kości 0/2 Międzybłoniak Otrzewna Mięsak maziówkowy Jama miednicy Mięsak prąŝkowanokomórkowy Mięśniakomięsak gładkokomórkowy Gruczoł krokowy Przestrzeń zaotrzewnowa Tkanki miękkie, typ zarodkowy Pęcherz Tkanki miękkie, ściana klatki piersiowej Nasieniak Jądra 0/2 Nerwiak zarodkowy Przestrzeń zaotrzewnowa Nerwiakowłókniak Tkanki miękkie, odcinek krzyŝowy Oponiak Mózg 0/2 Prymitywny nowotwór neuroektodermalny (PNET) Rak Przestrzeń zaotrzewnowa Jama nosowo-gardłowa; rak jamy nosowo-gardłowej Rak drobnokomórkowy Płuca Wykazujące ekspresję PD-L1/wszystkie N=159 ( ) P04435PL_01/M3653/ s. 3/4

4 Rak gruczołowy Głowa i szyja; podniebienie twarde Gruczoł krokowy 0/5 Gruczoł ślinowy/ślinianka przyuszna 0/2 Jajniki Jajniki; rak endometrioidalny Jajniki; rak surowiczy Jajniki; rak śluzowy Jelito cienkie 0/2 Macica; rak endometrium 0/3 Macica; rak jasnokomórkowy Odbytnica 0/4 OkręŜnica 0/5 OkręŜnica; przerzuty do wątroby OkręŜnica; rak śluzowy Pęcherzyk Ŝółciowy 1/5 Piersi; rak przewodowy in situ 0/2 Piersi; rak przewodowy inwazyjny 0/7 Piersi; rak przewodowy inwazyjny z przerzutami do węzłów chłonnych Płuca 1/4 Przełyk Przewód pokarmowy; przerzuty do płuc Szyjka macicy; typ wewnątrzszyjkowy Tarczyca; rak brodawkowaty 0/3 Tarczyca; rak pęcherzykowobrodawkowaty Tarczyca; rak pęcherzykowy Trzustka 0/2 Trzustka; rak przewodowy 0/3 Wyrostek robaczkowy śołądek 0/6 śołądek; rak śluzowy Rak kory nadnerczy Nadnercza Rak nerkowokomórkowy Rak brodawkowaty Nerka Rak jasnokomórkowy Nerka 0/6 Rak płaskonabłonkowy Głowa i szyja 0/2 Macica Płuca 1/2 Przełyk 0/7 Rak płaskonabłonkowy przełyku, przerzutowy do węzłów chłonnych Skóra 0/2 Szyjka macicy 2/5 Rak podstawnokomórkowy Skóra Rak przejściowokomórkowy Nerka Pęcherz 0/6 Rak rdzeniowy Tarczyca Rak wątrobowokomórkowy Wątroba 0/5 Rak z komórek sygnetowych Rak z komórek śródmiąŝszowych OkręŜnica Rak okręŝnicy z komórek sygnetowych, przerzutowy do jajników Jelito cienkie Odbytnica OkręŜnica ( ) P04435PL_01/M3653/ s. 4/4

5 Rak zarodkowy Jądra Rdzeniak zarodkowy Mózg Spermatocytoma Jądra 0/2 Struniak Jama miednicy Wątrobiak zarodkowy Wątroba Wyściółczak Mózg Piśmiennictwo 1. Okazaki T, Honjo T. PD-1 and PD-1 ligands: from discovery to clinical application. International Immunol 2007(19); 7: Brown JA, Dorfman DM, Ma F-R, Sullivan EL, Munoz O, Wood CR, et al. Blockade of Programmed Death-1 Ligands on Dendritic Cells Enhances T Cell Activation and Cytokine Production. J Immunol 2003;170: Cooper WA, Tran T, Vilain RE, Madore J, Seliger CI, Kohonen-Cornish M, et al. PD-L1 expression is a favorable prognostic factor in early stage non-small cell carcinoma. Lung Cancer 2015; 89: Chen B, Chapuy B, Ouyang J et al. PD-L1 Expression Is Characteristic of a Subset of Aggressive B-cell Lymphomas and Virus-Associated Malignancies. Clin Cancer Res 2013; 19: Ellison AR. Technical Report: Characterization of monoclonal mouse anti-pd-l1 antibody clone 22C3. D29539/rev01/C22282, 2015 Wydanie 03/16 ( ) P04435PL_01/M3653/ s. 5/4