EGFR pharmdx. Nr kat. K testów do stosowania w aparacie Dako Autostainer Wydanie 9/27/2006. Przeznaczenie Do stosowania w diagnostyce in vitro.

Wielkość: px
Rozpocząć pokaz od strony:

Download "EGFR pharmdx. Nr kat. K1494 50 testów do stosowania w aparacie Dako Autostainer Wydanie 9/27/2006. Przeznaczenie Do stosowania w diagnostyce in vitro."

Transkrypt

1 1 EGFR pharmdx Nr kat. K testów do stosowania w aparacie Dako Autostainer Wydanie 9/27/2006 Przeznaczenie Do stosowania w diagnostyce in vitro. Zestaw EGFR pharmdx jest przeznaczony do jakościowych testów immunohistochemicznych (IHC) w celu wykrywania ekspresji receptora nabłonkowego czynnika wzrostu (EGFR) w tkankach prawidłowych i nowotworowych, standardowo utrwalanych do badania histopatologicznego. Zestaw EGFR pharmdx pozwala na swoiste wykrywanie białka EGFR (HER1) w komórkach wykazujących ekspresję EGFR. Stosowanie zestawu EGFR pharmdx jest wskazane jako pomocnicza metoda identyfikacji pacjentów z rakiem jelita grubego, spełniających kryteria leczenia preparatem ERBITUX (cetuximab) lub Vectibix (panitumumab). Streszczenie i informacje ogólne Wprowadzenie Receptor nabłonkowego czynnika wzrostu o masie 170 kd, należący do receptorów transbłonowych, jest kodowany przez ludzki gen HER1. W skład białka receptora EGFR wchodzi zewnątrzkomórkowa domena wiążąca ligandy, rejon transbłonowy oraz domena wewnątrzkomórkowa z wewnętrzną aktywnością białka kinazy tyrozynowej. Receptor EGFR jest homologiczny ze związkami należącymi do rodziny receptorów EGF/erbB, np. HER2/erbB2 lub neu, HER3/erbB3 i HER4/erbB4. 1,2 Wiele rodzajów prawidłowych komórek, w tym wiele typów komórek nabłonkowych oraz nowotworów wywodzących się z tych komórek wykazuje ekspresję białka receptora EGFR. 3-9 Do komórek nienabłonkowych wykazujących ekspresję EGFR należą komórki mięśni gładkich i nerwów obwodowych oraz fibroblasty. 10 Swoistość Mysie przeciwciała monoklonalne, klon 2-18C9, skierowane przeciw ludzkim antygenom EGFR są dostarczane jako supernatant hodowli tkankowej komórek hybrydoma. Przeciwciała są wytwarzane przez myszy immunizowane EGFR otrzymywanym metodą immunoprecypitacji z komórek linii A431 ludzkiego raka nabłonkowatego. Wyniki mapowania epitopów wskazują, ze przeciwciała rozpoznają epitop zlokalizowany w pozakomórkowym regionie o wysokiej zawartości cysteiny w obrębie łączącej subdomeny S2, proksymalnie do domeny transbłonowej. Mapowanie najważniejszych aminokwasów wskazuje, że epitop ma strukturę konfirmacyjną, zależną od mostków dwusiarczkowych w macierzystej cząsteczce. 11 Wykazano, że opisywany klon przeciwciał monoklonalnych nie wykazuje reakcji krzyżowej z HER2, HER3, HER4 ani końcem wektora myc. Często spotyka się odczyn cytoplazmatyczny. Niemniej jednak, testy należy powtórzyć jeżeli znaczne zabarwienie cytoplazmy utrudnia identyfikację barwienia diagnostycznego błony komórkowej i interpretację wyników. Zasady procedury W skład zestawu IHC EGFR pharmdx wchodzą odczynniki konieczne do przeprowadzenia całej procedury barwienia ICH dla preparatów utrwalanych metodą standardową i utrwalanych w parafinie. W zastosowanym zestawie po zakończeniu inkubacji pierwotnych przeciwciał monoklonalnych 2-18C9 z ludzkim białkiem EGFR następuje reakcja z gotowym barwnym odczynnikiem produkowanym w oparciu o technologię stosowaną do wytwarzania dekstranu. W skład odczynnika wchodzą cząsteczki wtórnych przeciwciał owczych skierowanych przeciw antygenom mysim oraz cząsteczki peroksydazy chrzanowej połączone ze wspólnym polimerowym szkieletem dekstranu. W ten sposób wyeliminowano konieczność sekwencyjnego stosowania przeciwciała wtórnego i koniugatu peroksydazy. Po dodaniu chromogenu następuje przemiana enzymatyczna, której efektem jest widoczny produkt reakcji zlokalizowany w miejscu występowania antygenu. Następnie można wykonać barwienie kontrastowe i nakryć preparat szkiełkiem nakrywkowym. Wynik reakcji interpretuje się za pomocą mikroskopii świetlnej. Dostarczane są również dwa preparaty kontrolne zawierające utrwalane i zatapiane w parafinie komórki ludzkie o nasileniu odczynu 2+ i 0. Preparaty są przeznaczone do kontroli wydajności zestawu odczynnikowego. Odczynniki Nr kat. K1494 odpowiada automatycznemu barwieniu przy użyciu aparatu DAKO Autostainer. Wyszczególnione materiały wystarczają na wykonanie 50 testów (50 szkiełek mikroskopowych inkubowanych z odczynnikiem Primary Antibody to EGFR Protein i 50 szkiełek inkubowanych z odpowiadającą ujemną próbą kontrolną Negative Control Reagent). Liczbę testów obliczono na podstawie badania przy użyciu aparatu EGFR pharmdx Autostainer i gotowych odczynników. Materiał znajdujący się w zestawie wystarcza na wykonanie co najwyżej 10 pojedynczych serii oznaczeń. ( ) PL_005 tr. 1/14

2 Dostarczane materiały Ilość Opis 2x11 ml Proteinase K Enzym proteolityczny < 0,1% Proteinase K rozcieńczony buforem Tris-HCI zawierającym azydek sodu o stężeniu 0,015 mol/l. 2x11 ml Peroxidase Block roztwór nadtlenku wodoru o stężeniu 3%. 1x12 ml EGFR pharmdx Monoclonal Mouse IgG 1 Antibody Nadsącz hodowli tkankowej monoklonalnych przeciwciał mysich IgG 1 skierowanych przeciw antygenom ludzkiego EGFR (klon 2-18C9) w buforze Tris-HCl zawierającym białko stabilizujące i roztwór azydku sodu o stężeniu 0,015 mol/l. 1x11 ml Mouse IgG 1 Negative Control Reagent Nadsącz hodowli tkankowej monoklonalnych przeciwciał mysich IgG 1 w buforze Tris-HCl zawierającym białko stabilizujące i roztwór azydku sodu o stężeniu 0,015 mol/l. 2x11 ml Labelled Polymer, HRP Polimer dekstranowy skoniugowany z peroksydazą chrzanową oraz przeciwciała kozie izolowane ze względu na powinowactwo, skierowane przeciw antygenom mysim. Dostarczany w buforze Tris-HCl zawierającym białko stabilizujące i środek przeciwbakteryjny. 10x11 ml DAB+ Substrate Buffer Roztwór buforowy substratu, ph 7,5, zawierający roztwór nadtlenku wodoru o stężeniu < 0,1%, substancje stabilizujące, substancje wzbogacające i środek przeciwbakteryjny. 2x3 ml Liquid DAB+ Chromogen Roztwór 3,3 -diaminobenzydyny o stężeniu 5% w roztworze chromogenu. 2x1 l Wash Buffer 10x Roztwór soli fizjologicznej z buforem Tris o ph 7,6, zawierający preparat Tween 20. 2x5 szkiełek EGFR pharmdx Control Slides Na każdym szkiełku znajdują się wycinki z dwóch linii komórek ludzkich, odwirowane, utrwalone w formalinie i osadzone w parafinie, reprezentujące umiarkowany poziom ekspresji EGFR i brak ekspresji EGFR. Nasilenie odczynu wirowanych komórek wynosi 2+ i 0. Linia komórkowa: CAMA-1 Poziom ekspresji: 0 Linia komórkowa: HT-29 Poziom ekspresji: 2+ ( ) PL_005 tr. 2/14

3 Materiały wymagane, ale niedostarczane Roztwór wodorotlenku amonu o stężeniu 15 mol/l rozcieńczony do 0,037 mol/l Barwienie kontrastowe: Hematoksylina, roztwór alkoholowy lub wodny, np. Dako Hematoxylin (nr kat. S3302) lub Dako Automation Hematoxylin (nr kat. S3301) Szkiełka nakrywkowe Woda destylowana lub dejonizowana (woda do odczynników laboratoryjnych) Suszarka umożliwiająca utrzymanie temperatury C Etanol absolutny i roztwór o stężeniu 95% Mikroskop świetlny (wzmocnienie obiektywu 4x 40x) Środki do zatapiania, np. Dako Faramount (nr kat. S3025), Dako Glycergel (nr kat. C0563) lub Dako Ultramount (nr kat. S1964) Tkanki o dodatnim i ujemnym odczynie, do stosowania w charakterze próby kontrolnej (zobacz część Kontrola jakości) Szkiełka mikroskopowe Fisher SuperFrost Plus, szkiełka z warstwą poli-l-lizyny, szkiełka elektrostatyczne lub szkiełka Dako Silanized Slides (nr kat. S3003) (zobacz część Przygotowanie preparatów) Naczynia lub kąpiele do barwienia Minutnik (pomiar w odstępach 2 30 minut) Butelka z roztworem płuczącym Ksylen, toluen lub substytuty ksylenu Pipeta 1 ml Aparat Dako Autostainer Universal Staining System (nr kat. S3400) lub Autostainer Plus (nr kat. S3800) z oprogramowaniem Dako Autostainer w wersji lub wyższej. Koniecznie elementy przedstawiono w instrukcji dla użytkownika aparatu Dako Autostainer. Uwaga: Wszystkie odczynniki dostępne w zestawie lub oddzielnie (np. Dako Wash Buffer [nr kat. S3006]) są przeznaczone do stosowania wyłącznie w opisywanym teście. Warunkiem przeprowadzenia testu zgodnie z zaleceniami jest niestosowanie zamienników. Przygotowanie materiału Materiał biopsyjny należy traktować tak, by zachować fragmenty tkanek do wykonania odczynów IHC. Dla wszystkich preparatów należy stosować standardowe metody przeprowadzania tkanek. 13 Do testowania za pomocą systemu EGFR pharmdx nadają się preparaty przygotowane przy użyciu następujących substancji utrwalających: obojętnej buforowanej formaliny 10% (stęż. Objętościowo-objętościowe), niebuforowanej formaliny 10% (stęż. Objętościowo-objętościowe), niebuforowanej formaliny 25% (stęż. Objętościowo-objętościowe), AFA (mieszanina alkoholu, kwasu octowego i formaliny), utrwalacza PEN firmy Richard-Allen Scientific i płynu Bouina. Próbki tkanek utrwalonych w preparacie Anatech s PreFer nie nadają się do testowania w systemie EGFR pharmdx. Stosowanie systemu EGFR pharmdx w przypadku tkanek utrwalonych w preparacie PreFer powoduje zniekształcenie morfologii tkanek i może prowadzić do błędnych wyników. 14 Skrawki zatapiane w parafinie Do badań nadają się tkanki poddawane rutynowemu przeprowadzaniu i zatapiane w parafinie. Preparaty biopsyjne należy pociąć na bloki o grubości 3 lub 4 mm i utrwalać przez okres właściwy dla danej substancji utrwalającej. Następnie tkanki poddaje się uwodnieniu i oczyszczeniu stosując serię kąpieli alkoholowych i ksylenowych, po czym nasącza płynną parafiną. Temperatura parafiny nie powinna przekraczać 60 C. Właściwie utrwalone i zatopione bloczki tkanek wykazujących ekspresję białka EGFR nadają się do sporządzania preparatów po dowolnym okresie przechowywania, o ile były utrzymywane w chłodnym miejscu, w temperaturze (15 25 C). 13,15 Preparaty tkankowe należy pociąć na skrawki o wymiarach 3 5 µm. Po sporządzeniu skrawków należy umieścić preparaty na szkiełkach mikroskopowych i przełożyć do suszarki. Zaleca się stosowanie następujących rodzajów szkiełek mikroskopowych: Fisher SuperFrost Plus, Dako Silanized Slides (nr kat. S3003), szkiełka elektrostatyczne lub pokryte warstwą poli-l-lizyny. Stojaki na szkiełka należy osuszyć, uderzając o pochłaniający ręcznik w celu usunięcia wody znajdującej się pod warstwą parafiny i na szkiełku, a następnie suszyć w temperaturze pokojowej przez jedną godzinę. Następnie stojak wraz z preparatami należy umieścić na jedną godzinę w cieplarce, w temperaturze C. Po wyjęciu preparatów z cieplarki należy usunąć nadmiar wody, uderzając o pochłaniający ręcznik w celu usunięcia wody znajdującej się pod warstwą parafiny i na szkiełku, a następnie znów suszyć w cieplarce przez jedną godzinę. Po wyjęciu z cieplarki, preparaty należy przechowywać w temperaturze pokojowej aż do czasu ich schłodzenia i stwardnienia parafiny. Aby zachować antygenowość, skrawki tkankowe zatopione na szkiełkach (Fisher SuperFrost Plus, szkiełka z warstwą poli-l-lizyny, szkiełka elektrostatyczne lub szkiełka Dako Silanized Slides [nr kat. S3003]) powinny zostać poddane barwieniu w ciągu 2 miesięcy od sporządzenia skrawków, o ile skrawki były przechowywane w temperaturze pokojowej (20 25 C). 14 Szczegółowe informacje dotyczące przygotowywania próbek przedstawiono w podręczniku Dako Immunochemical Staining Methods 16 lub 13. i 15. pozycji piśmiennictwa. Z uwagi na brak odpowiednich badań, nie zaleca się stosowania opisywanego testu w odwapnionych tkankach. Preparaty służące do oceny EGFR i weryfikacji obecności nowotworu należy przygotowywać w tym samym czasie. Zaleca się stosowanie co najmniej 5 szkiełek jednego do badania obecności nowotworu, dwóch do oceny białka EGFR (jedno szkiełko dla przeciwciał pierwotnych i jedno dla odczynnika Negative Control Reagent) oraz dwóch szkiełek zapasowych. Środki ostrożności 1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników. 2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek czysty azydek sodu (NaN 3). Stężenie NaN 3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Niemniej jednak, w wyniku reakcji NaN 3 z ołowiem lub miedzią wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynników należy używać dużych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydku w instalacji kanalizacyjnej Tak jak w wypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, podczas pracy z próbkami i odczynnikami należy stosować odpowiednie procedury. 4. Aby uniknąć tworzenia nieswoistego odczynu należy ograniczyć do minimum zanieczyszczenie mikrobiologiczne odczynnika. 5. Stosowanie innych niż opisane parametrów czasu inkubacji, temperatury lub metod może powodować błędne wyniki badania. 6. Dostarczone odczynniki mają optymalne rozcieńczenia. Zwiększanie rozcieńczenia może powodować utratę odczynu antygenów. ( ) PL_005 tr. 3/14

4 7. Nie należy zastępować przeciwciał pierwotnych ani odczynników kontroli ujemnej przeciwciałami pierwotnymi lub odczynnikami kontroli ujemnej należącymi do różnych partii produkcyjnych (numery partii podano na etykietach fiolek), bądź pochodzącymi od różnych producentów. 8. W przypadku ekspozycji na silne światło może nastąpić pogorszenie wydajności preparatów Labeled Polymer, Liquid DAB+ Chromogen i gotowego roztworu DAB+ Substrate-Chromogen. Nie należy przechowywać składników systemu ani wykonywać barwienia w silnym oświetleniu, takim jak bezpośrednie światło słoneczne. 9. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą lub oczami. 18 Niewykorzystany odczynnik należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i ogólnokrajowymi. 10. Karta Charakterystyki Substancji Niebezpiecznej jest dostępna na żądanie Użytkowników. Zagrożenia i warunki bezpiecznego stosowania DAB Chromogen R 40 Ograniczone dowody działania rakotwórczego. R43 Może powodować uczulenie w kontakcie ze skórą R68 Istnieje ryzyko nieodwracalnych skutków. S35 Niniejszy materiał wraz z opakowaniem musi być usuwany z zachowaniem zasad bezpieczeństwa. S 36/37 Należy stosować odpowiednią odzież i rękawice ochronne. Jako zasadę należy przyjąć zakaz pracy z produktem osobom w wieku poniżej 18 lat. Użytkowników należy starannie poinstruować co do właściwych procedur pracy, niebezpiecznych własności produktu i środków ostrożności (zgodnie z Dyrektywą Unii Europejskiej 94/33/WE). Przechowywanie Zestaw EGFR pharmdx należy przechowywać w temperaturze 2 8 C. Preparaty kontrolne muszą być również przechowywane w temperaturze 2 8 C. Tak przygotowany roztwór Substrate-Chromogen Solution (DAB) zachowuje trwałość przez ok. 5 dni, o ile jest przechowywany w temperaturze 2 8 C. Nie należy używać zestawu po upływie daty ważności wydrukowanej na zewnętrznej części opakowania zestawu. Ponieważ nie istnieją ewidentne objawy wskazujące na utratę trwałości produktu, należy wykonywać badanie próbek pochodzących od pacjenta i jednocześnie dodatni i ujemny odczyn kontrolny. Jeżeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane na wkładce informacyjnej do opakowania, Użytkownik powinien sprawdzić ich jakość. 12 Instrukcja Użytkowania Przygotowanie odczynników Przed przystąpieniem do barwienia należy przygotować następujące odczynniki: Wash Buffer Solution Przygotować wystarczającą ilość roztworu bufora płuczącego, rozcieńczając odczynnik Wash Buffer wodą destylowaną lub dejonizowaną (wodą do odczynników laboratoryjnych) w stosunku 1:10, dla potrzeb kolejnych etapów oznaczenia. W przypadku zmętnienia należy odrzucić bufor. Substrate-Chromogen Solution (DAB+) Roztwór należy dokładnie wymieszać przed użyciem. Wytrącanie się osadu nie wpływa na jakość odczynu. Przygotowanie roztworu DAB+ Substrate-Chromogen Solution: dodać 11 kropli roztworu Liquid DAB+ Chromogen do jednej fiolki zawierającej roztwór DAB+ Substrate Buffer i wymieszać. Odrzucić niewykorzystany roztwór. Uwaga: Roztwór Liquid DAB+ Chromogen w butelce może przyjmować odcienie od przejrzystego do jasnofioletowo-brązowego. Barwa roztworu nie wpływa na wydajność produktu. Stosować rozcieńczenie zgodnie z opisem przedstawionym powyżej. Dodanie nadmiernej ilości roztworu Liquid DAB+ Chromogen do buforu DAB+ Substrate spowoduje pogorszenie jakości dodatniego odczynu. Barwienie kontrastowe W razie potrzeby przygotować wodny roztwór amoniaku do barwienia kontrastowego na niebiesko. W celu przygotowania wodnego roztworu amoniaku o stężeniu 0,037 mol/l należy wymieszać 2,5 (±0,5) ml wodorotlenku amonu 15mol/L (stężonego) z 1 litrem wody do odczynników laboratoryjnych. Niewykorzystany wodny roztwór amoniaku o stężeniu 0,037 mol/l można przechowywać w temperaturze pokojowej (20 25 C) w szczelnie zamkniętej butelce przez okres do 12 miesięcy. Środek do zatapiania preparatu Zaleca się stosowanie następujących wodnych środków do zatapiania: gotowego preparatu Dako Faramount Aqueous Mounting Medium Ready-to-use (nr kat. S3025) lub Dako Glycergel Mounting Medium (nr kat. C0563). Przed użyciem należy przeprowadzić preparat Glycergel w stan płynny, ogrzewając do temperatury ok. 40 (±5) C. Można również stosować bezwodne środki do zatapiania, np. Dako Ultramount (nr kat. S1964). Wykonanie odczynu w aparacie Dako Autostainer Uwagi dotyczące procedury Przed przystąpieniem do wykonania odczynu Użytkownik powinien uważnie przeczytać podane instrukcje i zaznajomić się ze wszystkimi elementami zestawu (zobacz część Środki ostrożności). Więcej informacji przedstawiono w instrukcji dla użytkownika aparatu DAKO Autostainer, Universal Staining System, User Guide. ( ) PL_005 tr. 4/14

5 Przed przystąpieniem do wykonania odczynu wszystkie odczynniki należy doprowadzić do temperatury pokojowej (20 25 C). Wszystkie procedury inkubacji należy przeprowadzać również w temperaturze pokojowej. Podczas wykonywania barwienia nie można dopuścić do wysychania skrawków tkankowych. Wysuszone skrawki tkankowe mogą powodować nasilenie nieswoistego odczynu. Odparafinowanie i ponowne uwadnianie Przed przystąpieniem do wykonania odczynu należy usunąć parafinę z preparatów w celu usunięcia środka zatapiającego i ponownego uwodnienia. Należy unikać niecałkowitego usunięcia parafiny ponieważ pozostałości środka zatapiającego powodują nasilenie nieswoistego odczynu. 1. ETAP. Umieścić preparaty w kąpieli ksylenowej i inkubować przez 5 (±1) minut. Zmienić kąpiel i jednokrotnie powtórzyć procedurę. 2. ETAP. Strząsnąć nadmiar płynu i umieścić preparaty w absolutnym etanolu na 3 (±1) minuty. Zmienić kąpiel i jednokrotnie powtórzyć procedurę. 3. ETAP. Strząsnąć nadmiar płynu i umieścić preparaty w roztworze etanolu o stężeniu 95% na 3 (±1) minuty. Zmienić kąpiel i jednokrotnie powtórzyć procedurę. 4. ETAP. Strząsnąć nadmiar płynu i umieścić preparaty w wodzie do odczynników laboratoryjnych na 5 (±1) minut. 5. ETAP. Strząsnąć nadmiar buforu i umieścić preparaty w buforze płuczącym. Rozpocząć wykonywanie odczynu zgodnie z opisem w części Wykonanie odczynu. Po wykonaniu barwienia 40 preparatów należy zmienić roztwór ksylenu i alkoholu. Można stosować ksylen lub substytuty ksylenu, takie jak preparat Histoclear. System EGFR pharmdx obejmuje etap preparatyki wstępnej trawienia enzymem proteolitycznym. Skrawki tkankowe mogą niekiedy być poddawane zbyt intensywnemu trawieniu, co powoduje uszkodzenie błon komórkowych i struktury tkanek. Wykonując odczyn należy zwracać baczną uwagę na czas trwania trawienia proteolitycznego. Uwaga: W przypadku powtarzającego się zbyt intensywnego trawienia można dodatkowo utrwalić preparaty; skrawki utrwalane w 10% obojętnym roztworze buforowanej formaliny, należy dodatkowo utrwalić w 10% obojętnym roztworze buforowanej formaliny przez 10 minut po odparafinowaniu. Zobacz opis procedury poniżej: Postępowanie po zakończeniu utrwalania 1. Odparafinować skrawki i zanurzyć w wodzie do odczynników laboratoryjnych. 2. Zanurzyć preparaty w 10% neutralnym roztworze buforowanej formaliny na 10 min. 3. Dwukrotnie przepłukać preparaty wodą dejonizowaną lub destylowaną. 4. Kontynuować procedurę barwienia przy użyciu systemu EGFR pharmdx. Przebieg automatycznego barwienia Więcej informacji przedstawiono w instrukcji dla użytkownika aparatu DAKO Autostainer, Universal Staining System, User Guide. 1. ETAP. Wybrać protokół i zaprogramować serię odczynów. 2. ETAP. W celu konfiguracji oprogramowania i rozpoczęcia programu EGFR pharmdx należy zastosować programy Auto (automatyczne). 3. ETAP. Umieścić fiolki z odczynnikami w statywie na odczynniki aparatu DAKO Autostainer zgodnie z generowaną przez oprogramowanie mapą odczynników. 4. ETAP. Umieścić szkiełka mikroskopowe w aparacie DAKO Autostainer zgodnie z generowaną przez oprogramowanie mapą szkiełek. 5. ETAP. Rozpocząć serię odczynów. 6. ETAP. Wyjąć szkiełka z aparatu DAKO Autostainer. Przejść do etapu Barwienie kontrastowe i zatapianie. Uwaga: Po zakończeniu etapu z roztworem DAB+ Substrate-Chromogen należy przemyć szkiełka wodą destylowaną. W aparacie DAKO Autostainer w wersji 02 i 03 następuje automatyczne przemycie szkiełek wodą destylowaną po zakończeniu etapu z substratem i chromogenem. W aparacie DAKO Autostainer w wersji 01 do przemywania szkiełek stosowany jest roztwór buforu. Tak więc szkiełka barwione w aparacie w wersji 01 muszą być przemyte wodą destylowaną po wyjęciu z aparatu Autostainer. ( ) PL_005 tr. 5/14

6 Rysunek 1. Tabela programowania aparatu Autostainer Przedstawia zaprogramowaną serię oznaczeń wykonywaną w aparacie DAKO Autostainer. Powyższa tabela programowania stanowi Główny szablon protokołu, zawierający elementy wymagane do prowadzenia oznaczeń we wszystkich systemach detekcji razem z zestawem EGFR pharmdx. W przedstawionej przykładowej tabeli widoczne są jedynie odczynniki EGFR. Barwienie kontrastowe (instrukcje dla hematoksyliny) Barwny produkt końcowy reakcji barwienia jest nierozpuszczalny w alkoholu i wodzie. Można stosować roztwór alkoholowy lub wodny hematoksyliny, np. Dako Hematoxylin (nr kat. S3302) lub Dako Automation Hematoxylin (nr kat. S3301). Nie stosować regresyjnego barwienia kontrastowego. 1. ETAP. Wyjąć szkiełka z aparatu Dako Autostainer i wykonać barwienie kontrastowe hematoksyliną, zgodnie z opisem poniżej. 2. ETAP. Zanurzyć preparaty w kąpieli z hematoksyliny. Inkubować przez 2 5 minut, w zależności od stężenia stosowanego roztworu hematoksyliny. 3. ETAP. Ostrożnie przepłukać wodą do odczynników laboratoryjnych. Należy zadbać, by pozostałości hematoksyliny zostały dokładnie wypłukane.opcjonalnie: Dziesięciokrotnie zanurzyć preparaty w kąpieli wodnego roztworu amoniaku o stężeniu 0,037 mol/l (zobacz część Przygotowanie odczynnika) Etap z użyciem wodnego roztworu amoniaku nie jest wymagany w przypadku stosowania preparatów Dako Hematoxylin (nr kat. S3302) lub Dako Automation Hematoxylin (nr kat. S3301). Uwaga: Zdecydowanie zaleca się stosowanie preparatu Dako Automation Hematoxylin (nr kat. S3301). Po pięciominutowym okresie inkubacji, w wyniku barwienia kontrastowego powstaje końcowy produkt reakcji o barwie jasnofioletowej lub niebieskiej, niezakłócający swoistego odczynu immunologicznego. Silne barwienie kontrastowe może maskować słabą ekspresję EGFR. 4. ETAP. Ostrożnie przepłukiwać wodą do odczynników laboratoryjnych przez 2 5 minut. Zatapianie preparatu Zaleca się stosowanie następujących wodnych środków do zatapiania: gotowego preparatu Dako Faramount Aqueous Mounting Medium Ready-to-use (nr kat. S3025) lub Dako Glycergel Mounting Medium (nr kat. C0563). Przed użyciem należy przeprowadzić preparat Glycergel w stan płynny, ogrzewając do temperatury ok. 40 (±5) C. Można również używać bezwodnych środków do zatapiania, np. Dako Ultramount (nr kat. S1964). Uwaga: Odczyt odczynu można przeprowadzić w dogodnym momencie. Niemniej jednak, jeżeli na powierzchni preparatów znajduje się wodny środek do zatapiania, ekspozycja na silne światło może powodować zblaknięcie. Aby ograniczyć blaknięcie, należy przechowywać preparaty w zaciemnionym pomieszczeniu o temperaturze pokojowej (20 25 C). Kontrola jakości Stosowanie w laboratorium Użytkownika innych niż zalecane metod utrwalania, przeprowadzania i zatapiania tkanek może spowodować istotne różnice wyników, wymagające regularnego wykonywania dodatkowej wewnętrznej kontroli jakości, niezależnie od standardowych załączonych preparatów kontroli jakości Dako. ( ) PL_005 tr. 6/14

7 W USA należy postępować zgodnie z wytycznymi dotyczącymi kontroli jakości wydanymi przez Kolegium Patologów Amerykańskich jako Program certyfikacji immunohistochemicznej (College of American Pathologists CAP: Certification Program for Immunohistochemistry). Dodatkowe informacje przedstawiono w dokumencie Kontrola jakości CLSI dla zatwierdzonych wytycznych dot. immunocytochemii (NCSS Quality Assurance for Immunocytochemistry Approved Guideline), 19 oraz pozycjach piśmiennictwa Preparaty kontrolne EGFR pharmdx (w zestawie) Każdy z dwóch dostarczanych preparatów kontrolnych zawiera odwirowane komórki pochodzące z dwóch ludzkich linii komórkowych utrwalane w formalinie i zatapiane w parafinie, o nasileniu odczynu 2+ i 0. Dla każdego odczynu należy wykonać barwienie jednego preparatu kontrolnego. Ocena linii komórkowych preparatów kontrolnych Dako świadczy o ważności serii odczynów. Preparaty kontrolne nie powinny być używane pomocniczo w interpretacji wyników pacjenta. Tkanka do dodatniej próby kontrolnej Preparaty kontrolne należy sporządzić ze świeżych materiałów autopsyjnych, biopsyjnych lub chirurgicznych, możliwie szybko przeprowadzanych i zatopionych w sposób analogiczny do próbki (próbek) pochodzącej od pacjenta. Dodatnia kontrola tkankowa potwierdza właściwe przygotowanie tkanek i prawidłową technikę barwienia. Dla wszystkich serii odczynów i dla każdego rodzaju warunków badania należy uwzględnić jedną dodatnią kontrolę tkankową. Tkanki stosowane jako dodatnie próby kontrolne powinny dawać słaby odczyn dodatni, wskazujący na zdolność do wykrycia niewielkich zmian czułości przeciwciał pierwotnych. Preparaty kontrolne dostarczane z opisywanym systemem lub preparaty przeprowadzane w sposób odmienny od próbek pochodzących od pacjenta pozwalają wyłącznie na weryfikację wydajności odczynników; te preparaty nie pozwalają na weryfikację prawidłowego przygotowania tkanek. Znane dodatnie kontrole tkankowe powinny być stosowane wyłącznie w celu monitorowania jakości badanych tkanek i odczynników testowych, a NIE pomocniczo podczas formułowania swoistych rozpoznań próbek pochodzących od pacjenta. Jeżeli nie udaje się potwierdzić dodatniego odczynu za pomocą dodatnich kontroli tkankowych należy uznać, że wyniki preparatów testowych są nieważne. Do prawidłowych rodzajów komórek, które można użyć do uzyskania słabo dodatniego odczynu EGFR należą komórki nabłonka gruczołowego stercza oraz prawidłowy nabłonek oskrzeli płucnych. Ponieważ barwienie EGFR jest heterogenne, słabe odczyny prawidłowych struktur tkankowych mogą być interpretowane jako ujemne. Onerwie zapewnia silnie dodatnią kontrolę wewnętrzną. Do prawidłowych tkanek o umiarkowanie dodatnim odczynie EGFR zalicza się komórki nabłonkowe szyjki macicy i skóry. Tkanka do ujemnej próby kontrolnej Należy stosować ujemną kontrolę za pomocą tkanki dającej odczyn ujemny, w której nie występują białka EGFR. Dla każdej serii odczynów tkanka powinna zostać utrwalona, przeprowadzona i poddana zatapianiu w sposób identyczny do próbki (próbek) pochodzącej od pacjenta, w celu weryfikacji swoistości przeciwciał pierwotnych i identyfikacji swoistego odczynu tła. W charakterze wewnętrznej kontroli ujemnej można wykorzystywać różne rodzaje komórek pochodzące z większości przekrojów tkankowych. Pochodzenie tkanek kontrolnych powinno zostać zweryfikowane przez Użytkownika. Jeżeli w badaniu tkanek stanowiących ujemną próbę kontrolną uzyskuje się swoisty odczyn, wyniki uzyskane dla próbek pochodzących od pacjenta należy uznać za nieważne. Do struktur tkankowych, które mogą być wykorzystane w charakterze ujemnych kontroli zalicza się kardiomiocyty. Komórki zrazików trzustkowych dają również ujemny odczyn EGFR, natomiast komórki nabłonka przewodu żółciowego odczyn dodatni. Ponieważ odczyn limfocytów w teście EGFR pharmdx jest ujemny, te komórki można stosować jako ujemną kontrolę wewnętrzną. Nieswoisty odczynnik do kontroli ujemnej W celu oceny występowania odczynu nieswoistego i ułatwienia interpretacji swoistego odczynu w miejscach występowania antygenów, w wycinku każdej próbki pochodzącej od pacjenta, w miejsce przeciwciał pierwotnych należy stosować odczynnik Negative Control Reagent. Czas inkubacji odczynnika Negative Control Reagent powinien odpowiadać czasowi stosowanemu w przypadku przeciwciał pierwotnych. Weryfikacja odczynu Przed pierwszym zastosowaniem systemu do wykonywania odczynów Użytkownik powinien zweryfikować jakość barwienia. W tym celu należy wykonać testy serii wewnętrznych tkanek kontrolnych o znanej charakterystyce odczynów w zakresie IHC, odpowiadających tkankom o dodatnim i ujemnym odczynie. Powyższe procedury weryfikacji należy powtarzać dla każdej nowej partii testów. Dodatkowe informacje dotyczące procedur kontroli jakości przedstawiono w tej części wkładki informacyjnej produktu, wymaganiach dotyczących kontroli jakości przedstawionych w dokumencie Program certyfikacji immunohistochemicznej CAP (Certification Program for Immunohistochemistry) i (lub) dokumencie Kontrola jakości CLSI dla zatwierdzonych wytycznych dot. immunocytochemii (NCSS Quality Assurance for Immunocytochemistry Approved Guideline). 19 Do weryfikacji odczynu można stosować tkanki raków o znanych odczynach EGFR oraz tkanki o ujemnym odczynie. ( ) PL_005 tr. 7/14

8 Tabela 1: Cel codziennej kontroli jakości Rodzaj tkanki: utrwalona i przeprowadzona identycznie jak próbki pochodzące od pacjenta. Preparat kontrolny dostarczany przez firmę Dako. Dodatnia tkanka kontrolna: tkanki lub komórki zawierające antygen docelowy (mogą występować w tkankach pacjenta). Idealna próba kontrolna jest tkanką wykazującą słabo dodatni odczyn i możliwie największą czułość na utratę własności przez przeciwciała lub antygeny. Ujemna tkanka kontrolna: tkanki lub komórki z oczekiwanym ujemnym wynikiem odczynu (mogą występować w tkankach pacjenta lub dodatniej kontroli tkankowej). Swoisty system Antibody & Detection System Wyłącznie odczyn z preparatami kontrolnymi. Ocena linii komórkowych preparatów kontrolnych Dako świadczy o ważności serii odczynów. Kontrola wszystkich etapów badania. Weryfikacja odczynnika i procedur stosowanych do odczynu EGFR. Detekcja niepożądanej reakcji krzyżowej przeciwciał z komórkami lub strukturami komórkowymi. Dodatkowe informacje: w zestawie dostępne nieswoiste przeciwciała (Mouse IgG 1 Negative Control Reagent). Detekcja nieswoistego odczynu tła. Detekcja nieswoistego odczynu tła. Tkanka pacjenta. Detekcja odczynu swoistego. Detekcja nieswoistego odczynu tła. Interpretacja odczynu Ocena preparatów powinna być prowadzona przez patologa pod mikroskopem świetlnym. Wszystkie analizy należy prowadzić na podstawie oceny części preparatu zawierającej utkanie nowotworu. W celu oceny obecności i nasilenia odczynu immunocytochemicznego należy stosować obiektyw o powiększeniu 10x lub 20x. Do interpretacji należy wybierać jedynie komórki prawidłowe, gdyż w komórkach z martwicą lub degeneracją często występują odczyny nieswoiste. 19 Linie komórkowe dające odczyn dodatni i ujemny załączono do każdego z zestawów EGFR pharmdx w celu weryfikacji serii odczynów podczas każdego badania. Odpowiedni odczyn kontrolnej linii komórkowej stanowi dowód na prawidłowe funkcjonowanie testu EGFR pharmdx. odczynu błonowego kontrolnej linii komórkowej CAMA-1 (0) i barwienie całego lub części obwodu komórek kontrolnej linii komórkowej HT-29 na kolor brązowy (2+) wskazuje, że wynik serii odczynów jest ważny. Jeżeli intensywność barwienia linii komórkowej kontroli dodatniej jest zbyt słaba lub zbyt silna należy powtórzyć test z uwagi na ryzyko otrzymania wyniku fałszywie dodatniego lub fałszywie ujemnego. Ilustracje zamieszczono w Przewodniku interpretacji wyników testu EGFR pharmdx. W teście EGFR pharmdx odczyn dotyczy głównie błon komórkowych, przez co barwienie jest widoczne wzdłuż całego obwodu komórki lub jego części. Rozmieszczenie zabarwienia jest często heterogenne, ze zróżnicowanym natężeniem odczynu w obrębie pojedynczego nowotworu. Występowanie odczynu obserwowano również w cytoplazmie i przestrzeni pozakomórkowej. Często obserwuje się barwienie cytoplazmy. Niemniej jednak jeżeli intensywne zabarwienie cytoplazmy utrudnia identyfikację barwienia diagnostycznego błony komórkowej i interpretację wyników, należy powtórzyć test. Przypadki nowotworów należy przekazywać jako dodatnie lub ujemne ze względu na EGFR na podstawie obserwowanego odczynu ocenianej struktury błony komórkowej. Dodatni wynik ekspresji EGFR jest zdefiniowany jako barwienie błony komórki nowotworowej silniejsze niż odczyn tła, obejmujące cały obwód komórki lub jego część. barwienia błonowego silniejszego niż odczyn tła należy przekazywać jako wynik ujemny ze względu na EGFR. W zależności od czasu inkubacji i stężenia roztworu hematoksyliny, barwienie kontrastowe powoduje wybarwienie jąder komórkowych na kolor blady do ciemnoniebieskiego. Nadmierne lub niecałkowite barwienie kontrastowe może utrudniać interpretację wyników. Tabela 2: Wyniki barwienia EGFR pharmdx Wynik przekazywany lekarzowi prowadzącemu leczenie Nowotwór EGFR-ujemny Nowotwór EGFR-dodatni Definicja barwienia błon komórkowych silniejszego niż tło we wszystkich komórkach nowotworowych Odczyn dodatni definiuje się jako wystąpienie jakiegokolwiek barwienia błon komórek nowotworu ponad poziom tła, niezależnie czy barwienie dotyczy całego obwodu komórki czy jego części. Intensywność odczynu Udział procentowy wybarwionych komórek nowotworowych 1+, 2+ lub 3+ > 0% Powyższe definicje wyników dodatnich i ujemnych są zgodne z piśmiennictwem, 24 ale w niektórych kontekstach może być konieczne zmodyfikowanie ich (Patrz sekcja Ograniczenia swoiste dla opisywanego produktu poniżej) ( ) PL_005 tr. 8/14

9 Ograniczenia metody Ograniczenia ogólne IHC jest wieloetapową metodą diagnostyczną, wymagającą specjalistycznego przeszkolenia w doborze odpowiednich odczynników, wyborze tkanek, utrwalaniu i przeprowadzaniu, przygotowaniu preparatów do IHC i interpretacji wyników barwienia. Odczyn tkankowy jest uzależniony od obróbki i przeprowadzenia tkanki przed wykonaniem barwienia. Nieprawidłowe utrwalanie, zamrażanie, rozmrażanie, przemywanie, suszenie, ogrzewanie lub zanieczyszczenie skrawków domieszką innych tkanek lub płynów może powodować artefakty, ukrycie przeciwciał lub wyniki fałszywie ujemne. Przyczyną sprzecznych wyników może być stosowanie zmiennych metod utrwalania i zatapiania lub naturalne zmienne czynniki związane z tkankami. Nadmierne lub niecałkowite barwienie kontrastowe może utrudniać prawidłową interpretację wyników. Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być prowadzona w kontekście objawów klinicznych, morfologicznych i innych kryteriów histopatologicznych. Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez badania morfologiczne, wykonywanie odpowiednich prób kontrolnych i innych badań diagnostycznych. Odpowiedzialność związana z interpretacją wybarwionego preparatu spoczywa na wykwalifikowanym histopatologu, dysponującym doświadczeniem obejmującym stosowane przeciwciała, odczynniki i metody. Barwienie należy wykonać w akredytowanej pracowni histopatologicznej, pod nadzorem histopatologa odpowiedzialnego za przegląd wybarwionych preparatów i właściwe wykonanie dodatnich i ujemnych prób kontrolnych. Tkanki pochodzące od osób z zakażeniem wirusem zapalenia wątroby typu B i zawierające antygen powierzchniowy wirusa zapalenia wątroby typu B (HBsAg) mogą wykazywać nieswoiste barwienie w reakcji z peroksydazą chrzanową. 25 W tkankach, które nie zostały uprzednio przetestowane odczynniki mogą wykazywać nieoczekiwane reakcje. Nie można wykluczyć wystąpienia nieoczekiwanych reakcji również w przetestowanych tkankach z uwagi na zmienność biologiczną ekspresji antygenów w tkankach nowotworów i innych zmienionych chorobowo tkankach. 22 W przypadku uzyskania nieoczekiwanych reakcji należy przesłać odpowiednią dokumentację do działu wsparcia technicznego firmy Dako. Wiązanie białek lub produktów reakcji na drodze mechanizmów innych niż immunologiczne może być przyczyną wyników fałszywie dodatnich. Wyniki fałszywie dodatnie mogą również wystąpić na skutek aktywności podobnej do peroksydazy (erytrocyty) i endogennej aktywności persksydazy (cytochromu C). 21 Uwaga: Odczynniki i instrukcje dostarczane z systemem opracowano z myślą o uzyskaniu optymalnych wyników. Dodatkowe rozcieńczenie odczynników bądź nieprzestrzeganie czasu lub temperatury inkubacji może spowodować uzyskanie błędnych lub niezgodnych wyników. Ograniczenia swoiste dla opisywanego produktu Odsetek odpowiedzi klinicznych u przyjmujących cetuximab pacjentów EGFR-ujemnych i EGFR-dodatnich z odczynem w mniej niż jednym procencie komórek nowotworowych nie jest znany, ponieważ w próbach klinicznych leku nie uczestniczyli pacjenci spełniający te kryteria. Nowotwory, w których dodatni odczyn ze względu na EGFR występuje w 1% komórek, uznaje się za wykazujące ekspresję EGFR będącą obowiązującym obecnie wskazaniem do użycia cetuximabu. Pacjenci, u których odczyn błonowy z zestawem EGFR wystąpił w mniej niż jednym procencie komórek nowotworu, nie zostali włączeni do randomizowanej klinicznej próby kontrolnej panitumumabu, dlatego aktywność panitumumabu u tej populacji pacjentów nie jest znana. Nowotwory, w których >1% komórek wykazuje odczyn EGFR-dodatni, uznaje się za wykazujące ekspresję EGFR, co stanowi obecnie wskazanie do stosowania leku panitumumab. Wyniki fałszywie ujemne mogą być spowodowane procesem stopniowego rozkładu antygenu w tkankach. Jeżeli próbki przechowywano w temperaturze pokojowej (20 25 C), powinny być poddane barwieniu w ciągu 2 miesięcy od osadzenia preparatów tkankowych na 14, 26 szkiełkach. W celu uzyskania optymalnych, powtarzalnych wyników, w preparatach utrwalanych standardowo i zatapianych w parafinie należy zastosować proteolityczne trawienie białka EGFR. Charakterystyka wydajnościowa Swoistość Testowano reaktywność przeciwciał przeciw EGFR, klon 2-18C9 (2-18C9) z liniami komórkowymi wykazującymi ekspresję EGFR, HER2, HER3 i HER4. W testach Western blot lizatów komórkowych SKBR3 i A431 z przeciwciałami 2-18C9 uzyskano prążek odpowiadający masie cząsteczkowej 170 kd, zgodnej ze znaną masą cząsteczkową EGFR. Stwierdzono również, że klon 2-18C9 pozwala na rozpoznanie formy receptora EGFRvIII (145 kd) w badaniach immunohistochemicznych, cytometrii przepływowej i Western blot transfekowanych linii komórkowych. W badaniach eksperymentalnych metodą Western blot, przeciwciała 2-18C9 nie wykazywały reakcji z HER2, natomiast wykazywały reaktywność z lizatami komórek CAMA-1, ekstraktami białkowymi z transformowanych pod względem HER-3 szczepów E. coli BL-21 oraz transfekowanych lizatów komórkowych CHO-HER4. Poza tym w transfekowanych komórkach jajników chomika chińskiego (Chinese Hamster Ovary CHO) wykazujących ekspresję genu myc (końca wektora), zarówno samodzielnie jak i łącznie z jednym z białek z rodziny HER, stosowano hodowlę w szkiełkach z komorami hodowlanymi. Wykonano utrwalanie w formalinie i zatapianie w parafinie oraz test z przeciwciałami anty-myc i anty-2-18c9. Przeciwciała anty-myc dawały odczyn z wszystkimi pięcioma transfekowanymi liniami komórkowymi CHO, natomiast przeciwciała anty-2-18c9 dawały odczyn jedynie z komórkami CHO transfekowanymi genem HER1. Próby kliniczne Próby kliniczne cetuximabu Przeprowadzono trzy badania z użyciem cetuximabu w grupie pacjentów z rakiem jelita grubego (CRC) (EMD , IMCL CP i IMCL CP ). Dodatni wynik odczynu IHC EGFR Dako stosowano jako jedno z kryteriów spełnienia warunków badania. W 2 z 3 badań, w tym badaniu osiowym EMD , próg dodatniego wyniku ustalono dla odczynu o nasileniu 1+ (zakres wyników wynosił od 0 do +3) obecnego w 1% wszystkich komórek nowotworowych. Ten próg ustalono, ponieważ analiza podgrup uwzględniających wszystkie progi kryteriów odczynu błonowego i inne kryteria różnicujące nie pozwoliła na wykrycie istotnych różnic pod względem wyników klinicznych. ( ) PL_005 tr. 9/14

10 Badanie osiowe cetuximabu Do badania osiowego (EMD ) zakwalifikowano pacjentów, u których za pomocą testu EGFR pharmdx stwierdzono obecność komórek dodatnich ze względu na EGFR. We wszystkich nowotworach objętych badaniem odsetek komórek EGFR-dodatnich wynosił co najmniej 1% i nowotwory takie opisywano jako wykazujące ekspresję EGFR. Pacjenci z nowotworami wykazującymi ekspresję EGFR otrzymywali cetuximab w monoterapii lub cetuximab łącznie z irinotekanem. Badano 577 preparatów nowotworów. W 474 z 577 (82%, 95% przedział ufności = 78,1%, 86,1%) preparatów raka jelita grubego stwierdzono dodatni wynik badania na ekspresję EGFR. 329 pacjentów badanych testem EGFR pharmdx rozdzielono w sposób losowy w stosunku 2:1 do dwóch grup badania osiowego leku. W grupie pacjentów otrzymujących irinotekan i cetuximab uzyskano odsetek odpowiedzi klinicznych wynoszący 50/218 (22,9%, 95% przedział ufności = 17,5%, 29,1%). W grupie pacjentów otrzymujących wyłącznie cetuximab uzyskano odsetek odpowiedzi klinicznych wynoszący 12/111 (10,8%, 95% CI = 5,7%, 18,1%). Cetuximab stosowano tylko u pacjentów, u których test Dako wykazał ekspresję EGFR, zgodnie z powyższą definicją. Procentowa wartość odpowiedzi klinicznych w przypadku pacjentów bez ekspresji EGFR jest nieznana i jako taka nie może być uwzględniona w porównaniach. Nie stwierdzono korelacji między nasileniem odpowiedzi nowotworu na leczenie a odsetkiem komórek wykazujących dodatni odczyn EGFR lub nasileniem odczynu na EGFR (patrz Tabela 3). Tabela 3: Badanie osiowe cetuximabu (EMD ) odsetkowe wartości odpowiedzi Całkowita liczba badanych pacjentów Odsetkowa wartość odpowiedzi # pacjentów otrzymujących cetuximab i irinotekan Odsetkowa wartość odpowiedzi # pacjentów otrzymujących cetuximab EGFR pharmdx + ( 1%) 474* 50/218 (22,9%, 12/111 (10,8%, 95% CI = 17,5%, 29,1%) 95% CI = 5,7%, 18,1%) EGFR pharmdx Nie leczeni Nie leczeni *329 pacjentów rozdzielono w sposób losowy w stosunku 2 :1 do dwóch grup badania leku. # Ustalono, że odsetek odpowiedzi klinicznych oznacza procentowy udział pacjentów, u których uzyskano zmniejszenie o 50% sumy prostopadłych średnic mierzalnej tkanki nowotworowej (tj. zmniejszenie rozmiarów guza obliczane na podstawie jego powierzchni o co najmniej 50%), utrzymujące się przez co najmniej 28 dni. Procentowy udział określano w odniesieniu do całej populacji badania. Badania dodatkowe cetuximabu W fazie badań cetuximabu test EGFR pharmdx stosowano w ramach kryteriów włączania pacjentów do badania osiowego EMD oraz jednego badania dodatkowego (IMCL CP ). W badaniu IMCL CP testowano 140 preparatów. Z tej liczby stwierdzono dodatni wynik badania EGFR pharmdx w 105 z 140 (75%, 95% CI = 66,9%, 83,1%) preparatów raka jelita grubego. Do badania włączono w sumie 61 pacjentów, a cetuximab otrzymywało 57 pacjentów. W drugim badaniu dodatkowym (IMCL CP ), prototypowy zestaw EGFR pharmdx, w skład w którego wchodziły przeciwciała pierwotne identyczne do opisywanych powyżej, stosowano w celu włączenia pacjentów do badania. Testowano w sumie 412 preparatów pobranych od 401 pacjentów. Dodatni wynik badania stwierdzono u 292 z 401 (72,8%, 95% CI = 68,0%, 77,6%) pacjentów. Do badania zakwalifikowano 139 pacjentów; 138 pacjentów otrzymywało leczenie skojarzone za pomocą cetuximabu i irinotekanu. Tabela 4: Podsumowanie wartości procentowych dodatniego wyniku EGFR u pacjentów z rakiem jelita grubego Nr badania Badanie osiowe EMD Badanie dodatkowe IMCL CP Badanie prototypowe EGFR IMCL CP Odsetek EGFR-dodatnich (l. Dodatnich/l. Badanych) % EGFRdodatnich 95% przedziały ufności 474/577 82,1% 78,1 86,1% 105/140 75,0% 66,9 83,1% 292/401 72,8% 68,0 77,6% Badania kliniczne panitumumabu Dane o skuteczności uzasadniające stosowanie panitumumabu w leczeniu pacjentów z odpornym na leczenie przerzutowym rakiem okrężnicy (mcrc) uzyskano z badań pacjentów, u których nowotwory były EGFR-dodatnie w badaniu za pomocą testu Dako EGFR pharmdx. Kontrolowana randomizowana próba kliniczna panitumumabu Wieloośrodkowe, randomizowane, otwarte badanie porównawcze panitumumabu ( , towarzyszące badanie w okresie wydłużonym: ) z najlepszym leczeniem podtrzymującym (BSC) w porównaniu z samym najlepszym leczeniem podtrzymującym chorych na przerzutowego raka okrężnicy, u których nieskuteczna była chemioterapia środkami zawierającymi oksaliplatynę i irynotekan, i u których odczyn błonowy EGFR występował w 1% badanych komórek nowotworu. W obu grupach leczenia mediana odsetka komórek nowotworowych z dodatnim odczynem błonowym EGFR wynosiła 20% (zakres: od 1% do 100%). W badaniu w grupie leczonej panitumumabem z towarzyszącym BSC zaobserwowano znamienną statystycznie poprawę w pierwotnym punkcie końcowym (zdefiniowanym jako czas przeżycia bez progresji, PFS) w porównaniu z grupą objętą tylko BSC (p < 0,0001, próba warstwowa log-rank). W tej randomizowanej próbie kontrolowanej odsetek odpowiedzi klinicznych wynosił 8,3% (19/229, 95% przedział ufności: 5,1%, 12,6%), przy czym uwzględniano odpowiedzi pełne albo częściowe (zmodyfikowane kryteria RECIST) o potwierdzonym czasie trwania co najmniej 4 tygodnie. Odpowiedni odsetek odpowiedzi u 174 pacjentów przeniesionych z leczenia BSC do leczenia panitumumabem w towarzyszącym badaniu w okresie przedłużonym wynosił 9,8% (17/174, 95% przedział ufności: 5.8%,15.2%). ( ) PL_005 tr. 10/14

11 Nie stwierdzono korelacji między wpływem leczenia na czas przeżycia bez progresji a odsetkiem komórek wykazujących dodatni odczyn błonowy EGFR lub nasileniem odczynu z EGFR. (Zobacz tabelę 5 poniżej). Tabela 5: Wpływ leczenia na czas przeżycia bez progresji a odczyn z EGFR Badanie Liczba pacjentów / zdarzeń Stopień ryzyka a 95-procentowy przedział ufności dla stopnia ryzyka Wartość p Wszyscy randomizowani 463 / 401 0,54 (0,44; 0,66) <0,0001 % odczynów błonowych z EGFR b 1-<10% 114 / 91 0,46 (0,30; 0,71) 0, % 182 / 157 0,55 (0,40; 0,76) 0,0004 >35% 164 / 150 0,56 (0,40; 0,78) 0,0007 Maksymalne nasilenie odczynu błonowego z EGFR / 113 0,61 (0,41; 0,90) 0, / 206 0,49 (0,37; 0,65) <0, / 80 0,61 (0,39; 0,97) 0,0379 a Stopnie ryzyka dla panitumumabu z leczeniem BSC względem samego leczenia BSC oszacowano na podstawie modelu proporcjonalnego ryzyka Coxa skorygowanego dla punktacji ECOG i regionu geograficznego. Wartość < 1,0 oznacza niższą średnią częstość zdarzeń i dłuższy czas do wystąpienia zdarzenia dla grupy leczonej panitumumabem z BSC względem grupy objętej tylko BSC. b wykluczono 3 pacjentów, u których nowotwór wykazywał odczyn błonowy z EGFR w < 1% komórek (naruszenia protokołu) c wykluczono 2 pacjentów, u których nowotwór wykazywał odczyn błonowy z EGFR w < 1% komórek i maksymalne nasilenie odczynu błonowego z EGFR < 1+ (naruszenia protokołu) Tabela 6: Podsumowanie wartości procentowych przypadków ekspresji EGFR u pacjentów z rakiem jelita grubego Nr badania Badanie osiowe Stosunek ekspresji EGFR (l. dodatnich/l. badanych) % EGFRdodatnich 95-procentowe przedziały ufności 735/ ,2% 70,4 75,9% Powtarzalność Powtarzalność między seriami odczynów Powtarzalność między seriami odczynów testowano w ciągu 3 dni przy użyciu manualnej metody badania w dwóch pracowniach. W każdej pracowni dwóch patologów badało 5 różnych preparatów po 4 dodatnie i 1 ujemny. Zróżnicowane nasilenie odczynu preparatów randomizowano i maskowano. Uzyskano znakomitą powtarzalność (100%), dla wyników dodatnich i ujemnych ze względu na EGFR odpowiednio 0 oraz 1+, 2+ i 3+. Nasilenie odczynu różniło się o 1+ w dwóch spośród dodatnich preparatów i o 2+ w jednym preparacie. W jednym z testów dodatni fragment tkankowy został niemal całkowicie spłukany ze szkiełka. Dwa preparaty z ujemnym wynikiem badania pozostały ujemne. Powtarzalność odczynów między pracowniami Powtarzalność między pracowniami testowano w trzech pracowniach położonych w różnych obszarach geograficznych, przy użyciu 30 randomizowanych i maskowanych preparatów zawierających tkanki o różnych nasileniach odczynu IHC. Świeżo przygotowane preparaty przesłano do każdej z pracowni w celu wykonania odczynów ręcznych i automatycznych oraz oceny przez histopatologa. Wartość procentowa powtarzalności między pracowniami wyniosła 100% dla dychotomicznego badania dodatnie/ujemne; zarówno w badaniu metodą manualną jak i automatyczną 0 oznaczało wynik ujemny, a 1+, 2+ i 3+ dodatni dla ekspresji białka EGFR. Immunoreaktywność W tabeli 7. przedstawiono podsumowanie immunoreaktywności testu EGFR pharmdx w panelu prawidłowych tkanek. Zaleca się stosowanie podanych tkanek. Wszystkie skrawki utrwalano w formalinie i zatapiano w parafinie. ( ) PL_005 tr. 11/14

12 Tabela 7: Podsumowanie odczynów uzyskanych w prawidłowych tkankach przy użyciu przeciwciał EGFR pharmdx* Rodzaj tkanki (liczba testowanych przypadków) Nadnercza (2) Szpik kostny (3) Gruczoły sutkowe (2) Mózg/móżdżek (3) Mózg/mózgowie (3) Szyjka macicy (3) Jelito grube (3) Przełyk (2) Serce (3) Nerki (3) Wątroba (3) Płuca (3) Komórki międzybłonka (3) Jajniki (3) Trzustka (3) Przytarczyce (1) Nerwy obwodowe (3) Przysadka mózgowa (3) Gruczoł krokowy (3) Ślinianki (3) Mięśnie szkieletowe (3) Skóra (3) Jelito cienkie (3) Śledziona (3) Żołądek (3) Jądra (3) Grasica (3) Tarczyca (3) Migdałki (3) Macica (3) Struktura wykazująca dodatnią ekspresję EGFR oraz rodzaj odczynu Komórki kory (2+): Odczyn cytoplazmatyczny Komórki nabłonka zrazików (2+): Odczyn błonowy i cytoplazmatyczny Warstwa drobinowa (1+): Odczyn przestrzeni pozakomórkowej Komórki warstwy podstawnej nabłonka wielowarstwowego płaskiego (2+): Odczyn błonowy ** Komórki warstwy podstawnej nabłonka wielowarstwowego płaskiego (2+): Odczyn błonowy Cewki (1+): Odczyn cytoplazmatyczny (ziarnisty) Hepatocyty (sinusoidy) (3+); Przewodziki żółciowe (3+): Odczyn błonowy i cytoplazmatyczny Komórki wyścielające pęcherzyki płucne/komórki podstawne nabłonka płaskiego (komórki mioepitelialne) (2+): Odczyn błonowy i cytoplazmatyczny Komórki międzybłonka (2+): Odczyn błonowy i cytoplazmatyczny Przewody trzustkowe (2+): Odczyn błonowy Wypustki komórek nerwowych (1+): Odczyn włókienkowy Komórki nabłonka gruczołowego (2+): Odczyn błonowy Struktury przewodzików (1+): Odczyn cytoplazmatyczny Komórki podstawne nabłonka płaskiego (2+): Odczyn błonowy i cytoplazmatyczny Nabłonek płaski (3+): Odczyn błonowy i cytoplazmatyczny Nabłonek gruczołów endometrium (2+): Odczyn błonowy i cytoplazmatyczny Komórki podścieliska endometrium (2+): Odczyn błonowy i cytoplazmatyczny Warstwa mięśniowa: * W przypadku większości testowanych tkanek stwierdzono odczyn fibroblastów w tkance podścieliska (1+), onerwia i komórek mioepitelialnych. Niekiedy obserwowano endogenny odczyn eozynofilów wywoływany przez peroksydazę. **Obserwowano zmienny odczyn immunologiczny prawidłowego nabłonka jelita grubego. ( ) PL_005 tr. 12/14

13 Rozwiązywanie problemów Tabela 8.: Rozwiązywanie problemów Problem Prawdopodobna przyczyna Zalecane postępowanie 1. barwienia preparatów. 2. Słabe barwienie preparatów. 3. Nadmierne barwienie tła we wszystkich preparatach. 4. Tkanka oddziela się od szkiełka. 5. Nadmiernie silny odczyn swoisty. 6. Słaby odczyn 2+ kontrolnej linii komórkowej. 7. Nadmierne trawienie preparatu tkankowego. 1a. Błąd programowania. Odczynniki nie są używane we właściwej kolejności. 1b. Fiolki z odczynnikami nie zostały wprowadzone we właściwe położenia w statywach odczynników. 1c. Niedostateczna ilość odczynników w fiolce. 1d. Azydek sodu obecny w kąpieli z buforem płuczącym. 1a. Sprawdzić tabelę programowania zweryfikować, czy seria odczynów została prawidłowo zaprogramowana. 1b. Sprawdzić mapę odczynników zweryfikować odpowiednie położenie fiolek z odczynnikami. 1c. Przed rozpoczęciem serii, należy dopilnować by w fiolce znajdowała się odpowiednia ilość odczynników. Wymagane objętości przedstawiono w Mapie odczynników. 1d. Stosować świeży bufor płuczący dostarczany z zestawem. 2a. Niedostateczny czas inkubacji. 2a. Przejrzeć instrukcje podane w części Wykonanie odczynu. 2b. Użyto niewłaściwej metody utrwalania. 2c. Zbyt długi czas inkubacji z Proteinase K. 2b. Dopilnować, by tkanki pacjenta nie były poddawane nadmiernemu utrwalaniu i że jest stosowana zatwierdzona substancja utrwalająca (zobacz część Przygotowanie materiału). 2c. Dopilnować, by roztwór Proteinase K był inkubowany przez nie dłużej niż 5 min. 3a. Niecałkowicie usunięta parafina. 3a. Stosować świeże roztwory do przemywania; postępować zgodnie z opisem procedury w części Usuwanie parafiny i ponowne uwadnianie. 3b. Podczas zatapiania skrawków zastosowano pochodne skrobi. 3c. Preparaty nie są odpowiednio przemywane. 3d. Wysychanie skrawków podczas wykonywania odczynu. 3e. Dochodzi do wysuszenia szkiełek podczas wkładania do aparatu Dako Autostainer. 3f. Nieswoiste wiązanie odczynników do skrawka tkanki. 4a. Zastosowano niewłaściwe szkiełka mikroskopowe. 5a. Użyto niewłaściwej metody utrwalania. 5b. Zbyt długie czasy inkubacji odczynników. 5c. Użyto niewłaściwego roztworu płuczącego. 6a. Niedostateczne trawienie enzymatyczne Proteinase K. 3b. Unikać stosowania jakichkolwiek dodatków zwiększających przyczepność skrawków do szkiełek mikroskopowych. Wiele takich preparatów wykazuje reaktywność immunologiczną. 3c. Dopilnować, by aparat Autostainer został odpowiednio przygotowany do serii. Dopilnować, aby dostępna była wystarczająca ilość buforu, wystarczająca na przeprowadzenie całej serii. Jeżeli to konieczne, po etapie wizualizacji może być konieczne dodatkowe płukanie. 3d. Dopilnować, by na szkiełka były nanoszone odpowiednie objętości odczynnika. Należy dopilnować, by podczas pracy aparatu Autostainer, pokrywa była zamknięta, a aparat nie był narażony na działanie nadmiernie wysokich temperatur lub przeciągów. 3e. Należy dopilnować, by szkiełka pozostały zwilżone buforem podczas wkładania do aparatu i przed rozpoczęciem badania serii. 3f. Dopilnować właściwego utrwalania preparatów i (lub) upewnić się, że preparat nie zawiera obszarów martwicy. 4a. Stosować szkiełka elektrostatyczne (Fisher SuperFrost Plus) lub silanilizowane (Dako Silanized Slides, nr kat. S3003). 5a. Dopilnować, by były stosowane jedynie zatwierdzone substancje utrwalające i metody utrwalania (zobacz część Przygotowanie materiału). 5b. Przejrzeć instrukcje podane w części Wykonanie odczynu. 5c. Stosować wyłącznie rozcieńczony bufor płuczący dostarczany z zestawem. 6a. Dopilnować, by zaprogramowany czas inkubacji roztworu Proteinase K wynosił 5 min. 6b. Niedostateczny czas inkubacji. 6b. Zweryfikować, czy dla danej serii zaprogramowano właściwe czasy inkubacji. 6c. Nastąpiła utrata własności preparatu kontrolnego. 7a. Zbyt długi czas inkubacji z Proteinase K. 6c. Sprawdzić datę ważności i warunki przechowywania zestawu podane na etykiecie opakowania. 7a. Dopilnować, by roztwór Proteinase K był inkubowany nie dłużej niż przez 5 min. 7b. Niewłaściwe utwalanie. 7b. Po zakończeniu utrwalania stosować procedurę opisaną w protokole wykonywania odczynu dla nowych preparatów; wykonać barwienie przy użyciu standardowej procedury. Uwaga: Więcej informacji podano w części Troubleshooting w publikacji Dako Handbook: Immunochemical Staining Methods, 3rd Edition, 16 the Atlas of Immunohistology, 23 or Immunoperoxidase Techniques. A Practical Approach to Tumor Diagnosis. 20 W razie wystąpienia niezwykłego odczynu należy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. ( ) PL_005 tr. 13/14

14 Piśmiennictwo 1. Carpenter G, Cohen S. Epidermal growth factor. J Biol Chem 1990; 265: Riese DJ, Stern DF. Specificity within the EGF family/erbb receptor family signaling network. Bioessays 1998; 20:41 3. Coussens L, Yang-Feng TL, Liao Y-C, Chen E, Gray A, McGrath J, Seeburg PH, Libermann TA, Schlessinger J, Francke U, Levinson A, Ullrich A. Tyrosine kinase receptor with extensive homology to EGF receptor shares chromosomal location with neu oncogene. Science 1985; 230: Yamamoto T, Ikawa S, Akiyama T, Semba K, Nomura N, Miyajima N, Saito T, Toyoshima K. Similarity of protein encoded by the human c-erb-b-2 gene to epidermal growth factor receptor. Nature 1986; 319: Schechter AL, Hung M-C, Vaidyanathan L, Weinberg RA, Yang-Feng TL, Francke U, Ullrich A, Coussens L. The neu gene: An erbbhomologous gene distinct from and unlinked to the gene encoding the EGF receptor. Science 1985; 229: Gusterson B, Cowley G, Smith JA, Ozanne B. Cellular localization of human epidermal growth factor receptor. Cell Biol Intl Rpts 1984; 8(8): Gullick WJ. Prevalence of aberrant expression of the epidermal growth factor receptor in human cancers. Br Med Bull 1991; 47(1):87 8. Sainsbury JRC, Farndon JR, Sherbet GV, Harris AL. Epidermal-growth-factor receptors and oestrogen receptors in human breast cancer. Lancet 1985; 1(8425): Ozanne B, Richards CS, Hendler F, Burns D, Gusterson B. Over-expression of the EGF receptor is a hallmark of squamous cell carcinomas. J Pathol 1986; 149:9 10. Werner MH, Nanney LB, Stoscheck CM, King LE. Localization of immunoreactive epidermal growth factor receptors in human nervous system. J Histochem Cytochem 1988; 36: Pii K, Andersen FG, Jensen S, Spaulding B. Characterization of a new monoclonal antibody, clone 2-18C9, for the measurement of Epidermal Growth Factor Receptor expression in solid tumors. Am Assoc Canc Res 95 th annual meeting, Abst #5029 Orlando, Fl Mar Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988: Final Rule, 57 FR7163, February 28, Sheehan DC, Hrapchak BB. Theory and practice of histotechnology. St. Louis: The C. V. Mosby Co Atkins D, Reiffen KA, Tegtmeier CL, Winther H, Bonato MS and Störkel S. Immunohistochemical detection of EGFR in paraffinembedded tumor tissues: Variation in staining intensity due to choice of fixative and storage time of tissue sections. J Histochem Cytochem 2004; 52: Kiernan JA. Histological and histochemical methods: Theory and practice. New York: Pergamon Press Boenisch T, Farmilo AJ, Stead RH. Handbook: Immunochemical Staining Methods. 3rd Edition. Dako Department of Health, Education and Welfare, National Institute for Occupational Safety and Health, Rockville, MD. Procedures for the decontamination of plumbing systems containing copper and/or lead azides. DHHS (NIOSH) Publ. No , Current 13. August 16, CLSI (formerly NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards)). Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections; Approved guideline. Villanova, PA Order code M29-A2 19. CLSI (formerly NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards)). Quality assurance for immunocytochemistry; Approved guideline. Villanova, PA Order code MM4-A. 20. Nadji M, Morales AR. Immunoperoxidase techniques. A practical approach to tumor diagnosis. Chicago: Amer Soc Clin Pathol Press Elias JM, Gown AM, Nakamura RM, Wilbur DC, Herman GE, Jaffe ES, Battifora H, Brigati DJ. Special report: quality control in immunohistochemistry. Amer J Clin Pathol 1989; 92: Herman GE, Elfont EA. The taming of immunohistochemistry: The new era of quality control. Biotech Histochem 1991; 66: Tubbs RR, Gephardt GN, Petras RE. Specimen processing and quality assurance. In: Atlas of immuno-histology. Chicago: Amer Soc Clin Pathol Press 1986; Goldstein NS, Armin M. Epidermal growth factor receptor immunohistochemical reactivity in patients with American Joint Committee on Cancer Stage IV colon adenocarcinoma: implications for a standardized scoring system. Cancer 2001; 92: Omata M, Liew CT, Ashcavai M, Peters RL. Nonimmunologic binding of horseradish peroxidase to hepatitis B surface antigen: A possible source of error in immunohistochemistry. Amer J Clin Pathol 1980; 73: Press MF, Hung G, Godolphin W, Slamon DJ. Sensitivity of HER-2/neu antibodies in archival tissue samples: Potential source of error in immunohistochemical studies of oncogene expression. Cancer Res 1994; 54:2771 ( ) PL_005 tr. 14/14

Procedura pobrania i transportu materiału do badania

Procedura pobrania i transportu materiału do badania Procedura pobrania i transportu materiału do badania A. Do badań cytogenetycznych - hematoonkologia A1. KARIOTYP - żywe komórki A2. FISH - żywe komórki A3. FISH materiał z bloczków parafinowych B. Do badań

Bardziej szczegółowo

Immunologia komórkowa

Immunologia komórkowa Immunologia komórkowa ocena immunofenotypu komórek Mariusz Kaczmarek Immunofenotyp Definicja I Charakterystyczny zbiór antygenów stanowiących elementy różnych struktur komórki, związany z jej różnicowaniem,

Bardziej szczegółowo

Materiał i metody. Wyniki

Materiał i metody. Wyniki Abstract in Polish Wprowadzenie Selen jest pierwiastkiem śladowym niezbędnym do prawidłowego funkcjonowania organizmu. Selen jest wbudowywany do białek w postaci selenocysteiny tworząc selenobiałka (selenoproteiny).

Bardziej szczegółowo

StayRNA bufor zabezpieczający RNA przed degradacją wersja 0215

StayRNA bufor zabezpieczający RNA przed degradacją wersja 0215 StayRNA bufor zabezpieczający RNA przed degradacją wersja 0215 100 ml, 250 ml, 500 ml Nr kat. 038-100, 038-250, 038-500 Nietosyczny roztwór wodny do przechowywania i zabezpieczania różnego rodzaju tkanek

Bardziej szczegółowo

+ ± ± + + + (+) + + (+) Jak uzyskać dobry wynik patomorfologiczny? Virchow 2020(50) Andrzej Marszałek. utrwalanie ROZPOZNANIE.

+ ± ± + + + (+) + + (+) Jak uzyskać dobry wynik patomorfologiczny? Virchow 2020(50) Andrzej Marszałek. utrwalanie ROZPOZNANIE. Virchow 2020(50) Jak uzyskać dobry wynik patomorfologiczny? Andrzej Marszałek makroskopowo + ± mikroskopowo ± + + + (+) IHC + + (+) badania genetyczne + + (?) Katedra I Zakład Pathomorfologii Klinicznej

Bardziej szczegółowo

ROTA-ADENO Virus Combo Test Device

ROTA-ADENO Virus Combo Test Device Kod produktu: 8.04.73.0.0020 ROTA-ADENO Virus Combo Test Device Tylko do diagnostyki in vitro Przechowywać w 2-30 C ZASTOSOWANIE Wykrywanie antygenów Rotawirusów i Adenowirusów w próbkach kału. WSTĘP Rotawirusy

Bardziej szczegółowo

PathogenFree DNA Isolation Kit Zestaw do izolacji DNA Instrukcja użytkownika

PathogenFree DNA Isolation Kit Zestaw do izolacji DNA Instrukcja użytkownika PathogenFree DNA Isolation Kit Zestaw do izolacji DNA Instrukcja użytkownika Spis treści 1. Zawartość 2 1.1 Składniki zestawu 2 2. Opis produktu 2 2.1 Założenia metody 2 2.2 Instrukcja 2 2.3 Specyfikacja

Bardziej szczegółowo

Opis przedmiotu zamówienia wraz z wymaganiami technicznymi i zestawieniem parametrów

Opis przedmiotu zamówienia wraz z wymaganiami technicznymi i zestawieniem parametrów Załącznik nr 1 do SIWZ Nazwa i adres Wykonawcy Opis przedmiotu zamówienia wraz z wymaganiami technicznymi i zestawieniem parametrów Przedmiot zamówienia; automatyczny system do diagnostyki molekularnej:

Bardziej szczegółowo

BIOLOGIA KOMÓRKI KOMÓRKI EUKARIOTYCZNE W MIKROSKOPIE ŚWIETLNYM JASNEGO POLA I KONTRASTOWO- FAZOWYM; BARWIENIA CYTOCHEMICZNE KOMÓREK

BIOLOGIA KOMÓRKI KOMÓRKI EUKARIOTYCZNE W MIKROSKOPIE ŚWIETLNYM JASNEGO POLA I KONTRASTOWO- FAZOWYM; BARWIENIA CYTOCHEMICZNE KOMÓREK BIOLOGIA KOMÓRKI KOMÓRKI EUKARIOTYCZNE W MIKROSKOPIE ŚWIETLNYM JASNEGO POLA I KONTRASTOWO- FAZOWYM; BARWIENIA CYTOCHEMICZNE KOMÓREK KOMÓRKI EUKARIOTYCZNE W MIKROSKOPIE ŚWIETLNYM JASNEGO POLA I KONTRASTOWO-FAZOWYM;

Bardziej szczegółowo

Służba Zdrowia nr 24-26 z 23 marca 2000. Znaczenie badań przesiewowych w zwalczaniu raka piersi. Zbigniew Wronkowski, Wiktor Chmielarczyk

Służba Zdrowia nr 24-26 z 23 marca 2000. Znaczenie badań przesiewowych w zwalczaniu raka piersi. Zbigniew Wronkowski, Wiktor Chmielarczyk Służba Zdrowia nr 24-26 z 23 marca 2000 Znaczenie badań przesiewowych w zwalczaniu raka piersi Zbigniew Wronkowski, Wiktor Chmielarczyk Korzystny wpływ skryningu na zmniejszenie umieralności z powodu raka

Bardziej szczegółowo

Genomic Midi AX Direct zestaw do izolacji genomowego DNA (procedura bez precypitacji) wersja 1215

Genomic Midi AX Direct zestaw do izolacji genomowego DNA (procedura bez precypitacji) wersja 1215 Genomic Midi AX Direct zestaw do izolacji genomowego DNA (procedura bez precypitacji) wersja 1215 20 izolacji Nr kat. 895-20D Pojemność kolumny do oczyszczania DNA wynosi 100 µg 1 Skład zestawu Składnik

Bardziej szczegółowo

Ocena ekspresji genu ABCG2 i białka oporności raka piersi (BCRP) jako potencjalnych czynników prognostycznych w raku jelita grubego

Ocena ekspresji genu ABCG2 i białka oporności raka piersi (BCRP) jako potencjalnych czynników prognostycznych w raku jelita grubego Aleksandra Sałagacka Ocena ekspresji genu ABCG2 i białka oporności raka piersi (BCRP) jako potencjalnych czynników prognostycznych w raku jelita grubego Pracownia Biologii Molekularnej i Farmakogenomiki

Bardziej szczegółowo

Oznaczanie mocznika w płynach ustrojowych metodą hydrolizy enzymatycznej

Oznaczanie mocznika w płynach ustrojowych metodą hydrolizy enzymatycznej Oznaczanie mocznika w płynach ustrojowych metodą hydrolizy enzymatycznej Wprowadzenie: Większość lądowych organizmów kręgowych część jonów amonowych NH + 4, produktu rozpadu białek, wykorzystuje w biosyntezie

Bardziej szczegółowo

IMMUNOHISTOCHEMICZNA OCENA MERKERÓW PROLIFERACJI KOMÓRKOWEJ W RAKU JELITA GRUBEGO

IMMUNOHISTOCHEMICZNA OCENA MERKERÓW PROLIFERACJI KOMÓRKOWEJ W RAKU JELITA GRUBEGO IMMUNOHISTOCHEMICZNA OCENA MERKERÓW PROLIFERACJI KOMÓRKOWEJ W RAKU JELITA GRUBEGO EWA STĘPIEŃ ZAKŁAD PATOMORFOLOGII OGÓLNEJ AKADEMII MEDYCZNEJ W BIAŁYMSTOKU KIEROWNIK I OPIEKUN PRACY: Dr KATARZYNA GUZIŃSKA-USTYMOWICZ

Bardziej szczegółowo

badanie moczu Zwierzę Typ cewnika moczowego Rozmiar (jedn. francuskie) * gumy lub dla kocurów polietylenowy Elastyczny winylowy, z czerwonej

badanie moczu Zwierzę Typ cewnika moczowego Rozmiar (jedn. francuskie) * gumy lub dla kocurów polietylenowy Elastyczny winylowy, z czerwonej badanie moczu Rozmiary cewników... 139 Rutynowe postępowanie przy badaniu moczu... 140 Ogólne badanie moczu... 141 Badanie osadu moczu... 142 Tabela ph moczu dla kryształów moczu 142 Komórki i wałeczki...

Bardziej szczegółowo

PODSTAWY IMMUNOHISTOCHEMII. Odpowiedź immunologiczna. Determinanty antygenowe (epitopy) Surowice. Antygeny

PODSTAWY IMMUNOHISTOCHEMII. Odpowiedź immunologiczna. Determinanty antygenowe (epitopy) Surowice. Antygeny PODSTAWY IMMUNOHISTOCHEMII Odpowiedź immunologiczna zachodzi pomiędzy antygenem, a układem odpornościowym wyróżniamy dwa rodzaje odpowiedzi: humoralną i komórkową Antygeny substancje obce dla organizmu,

Bardziej szczegółowo

Działania niepożądane radioterapii

Działania niepożądane radioterapii Działania niepożądane radioterapii Powikłania po radioterapii dzielimy na wczesne i późne. Powikłania wczesne ostre występują w trakcie leczenia i do 3 miesięcy po jego zakończeniu. Ostry odczyn popromienny

Bardziej szczegółowo

SPOSÓB PRZEDSTAWIANIA DOKUMENTACJI DOŁĄCZANEJ DO WNIOSKU O DOPUSZCZENIE DO OBROTU PRODUKTU LECZNICZEGO WETERYNARYJNEGO IMMUNOLOGICZNEGO

SPOSÓB PRZEDSTAWIANIA DOKUMENTACJI DOŁĄCZANEJ DO WNIOSKU O DOPUSZCZENIE DO OBROTU PRODUKTU LECZNICZEGO WETERYNARYJNEGO IMMUNOLOGICZNEGO Załącznik nr 2 SPOSÓB PRZEDSTAWIANIA DOKUMENTACJI DOŁĄCZANEJ DO WNIOSKU O DOPUSZCZENIE DO OBROTU PRODUKTU LECZNICZEGO WETERYNARYJNEGO IMMUNOLOGICZNEGO CZĘŚĆ I - STRESZCZENIE DOKUMENTACJI I A IB I B 1 I

Bardziej szczegółowo

Ocena jakościowa reakcji antygen - przeciwciało. Mariusz Kaczmarek

Ocena jakościowa reakcji antygen - przeciwciało. Mariusz Kaczmarek Ocena jakościowa reakcji antygen - przeciwciało Mariusz Kaczmarek Antygeny Immunogenność - zdolność do wzbudzenia przeciwko sobie odpowiedzi odpornościowej swoistej; Antygenowość - zdolność do reagowania

Bardziej szczegółowo

Warto wiedzieć więcej o swojej chorobie, aby z nią walczyć

Warto wiedzieć więcej o swojej chorobie, aby z nią walczyć Warto wiedzieć więcej o swojej chorobie, aby z nią walczyć Kilka ważnych porad dla kobiet chorych na raka piersi Konsultacja merytoryczna: dr hab. n. med. Lubomir Bodnar Warto wiedzieć więcej o swojej

Bardziej szczegółowo

S T R E S Z C Z E N I E

S T R E S Z C Z E N I E STRESZCZENIE Cel pracy: Celem pracy jest ocena wyników leczenia napromienianiem chorych z rozpoznaniem raka szyjki macicy w Świętokrzyskim Centrum Onkologii, porównanie wyników leczenia chorych napromienianych

Bardziej szczegółowo

KARTA BEZPIECZEŃSTWA PRODUKTU

KARTA BEZPIECZEŃSTWA PRODUKTU KARTA BEZPIECZEŃSTWA PRODUKTU Zgodnie z normą 9 l/155/ecc (93/112/EC) Data wystawienia: 21.02.2003 Zmiany dnia: 16.01.2003 Podstawa: Rozporządzenie MZ, Dz. U. Nr 140, poz. 1171 z dnia 3 września 2002 z

Bardziej szczegółowo

Europejski Tydzień Walki z Rakiem

Europejski Tydzień Walki z Rakiem 1 Europejski Tydzień Walki z Rakiem 25-31 maj 2014 (http://www.kodekswalkizrakiem.pl/kodeks/) Od 25 do 31 maja obchodzimy Europejski Tydzień Walki z Rakiem. Jego celem jest edukacja społeczeństwa w zakresie

Bardziej szczegółowo

Ocena immunologiczna i genetyczna białaczkowych komórek macierzystych

Ocena immunologiczna i genetyczna białaczkowych komórek macierzystych Karolina Klara Radomska Ocena immunologiczna i genetyczna białaczkowych komórek macierzystych Streszczenie Wstęp Ostre białaczki szpikowe (Acute Myeloid Leukemia, AML) to grupa nowotworów mieloidalnych,

Bardziej szczegółowo

Spółka z o.o. UCZESTNICY WARSZTATÓW: Lekarze rezydenci i specjaliści, technicy w pracowniach diagnostycznych i histopatologicznych

Spółka z o.o. UCZESTNICY WARSZTATÓW: Lekarze rezydenci i specjaliści, technicy w pracowniach diagnostycznych i histopatologicznych e-mail: kawaska@kawaska.pl WARSZTATY: TECHNIKI MIKROSKOPOWE I INFORMATYCZNE W BADANIU PRÓBEK BIOLOGICZNYCH, CZ. 1 Objęte patronatem Polskiego Towarzystwa Patologów pod przewodnictwem Prezes Zarządu Głównego

Bardziej szczegółowo

ZAŁĄCZNIK Nr 2 WZÓR WNIOSEK O DOPUSZCZENIE DO OBROTU PRODUKTU HOMEOPATYCZNEGO, W TYM PRODUKTU HOMEOPATYCZNEGO WETERYNARYJNEGO

ZAŁĄCZNIK Nr 2 WZÓR WNIOSEK O DOPUSZCZENIE DO OBROTU PRODUKTU HOMEOPATYCZNEGO, W TYM PRODUKTU HOMEOPATYCZNEGO WETERYNARYJNEGO ZAŁĄCZNIK Nr 2 WZÓR WNIOSEK O DOPUSZCZENIE DO OBROTU PRODUKTU HOMEOPATYCZNEGO, W TYM PRODUKTU HOMEOPATYCZNEGO WETERYNARYJNEGO 2. DOKUMENTY DOŁĄCZONE DO WNIOSKU Wypełnia pracownik przyjmujący wniosek,

Bardziej szczegółowo

Nanotechnologie w diagnostyce

Nanotechnologie w diagnostyce Nanotechnologie w diagnostyce Diagnostyka endoskopowa Nanotechnologie mogą być przydatne w diagnostyce niedostępnych miejsc w badaniach endoskopowych. Temu mogą służyć mikrokamery wielkości antybiotyku,

Bardziej szczegółowo

LECZENIE CHOROBY GAUCHERA ICD-10 E

LECZENIE CHOROBY GAUCHERA ICD-10 E załącznik nr 19 do zarządzenia Nr 36/2008/DGL Prezesa NFZ z dnia 19 czerwca 2008 r. Nazwa programu: LECZENIE CHOROBY GAUCHERA ICD-10 E 75 Zaburzenia przemian sfingolipidów i inne zaburzenia spichrzania

Bardziej szczegółowo

MATERIAŁY SZKOLENIOWE DLA ZAKŁADÓW HIGIENY WETERYNARYJNEJ W ZAKRESIE LABORATORYJNEJ DIAGNOSTYKI AFRYKAŃSKIEGO POMORU ŚWIŃ

MATERIAŁY SZKOLENIOWE DLA ZAKŁADÓW HIGIENY WETERYNARYJNEJ W ZAKRESIE LABORATORYJNEJ DIAGNOSTYKI AFRYKAŃSKIEGO POMORU ŚWIŃ MATERIAŁY SZKOLENIOWE DLA ZAKŁADÓW HIGIENY WETERYNARYJNEJ W ZAKRESIE LABORATORYJNEJ DIAGNOSTYKI AFRYKAŃSKIEGO POMORU ŚWIŃ Puławy 2013 Opracowanie: Prof. dr hab. Iwona Markowska-Daniel, mgr inż. Kinga Urbaniak,

Bardziej szczegółowo

ROZPORZĄDZENIE MINISTRA ZDROWIA1)2)

ROZPORZĄDZENIE MINISTRA ZDROWIA1)2) Dz.U.07.138.973 ROZPORZĄDZENIE MINISTRA ZDROWIA 1)2) z dnia 16 lipca 2007 r. w sprawie szczegółowych warunków pobierania, przechowywania i przeszczepiania komórek, tkanek i narządów Na podstawie art. 36

Bardziej szczegółowo

LECZENIE ZAAWANSOWANEGO RAKA JELITA GRUBEGO (ICD-10 C 18 C 20)

LECZENIE ZAAWANSOWANEGO RAKA JELITA GRUBEGO (ICD-10 C 18 C 20) Dziennik Urzędowy Ministra Zdrowia 511 Poz. 42 Załącznik B.4. LECZENIE ZAAWANSOWANEGO RAKA JELITA GRUBEGO (ICD-10 C 18 C 20) ZAKRES ŚWIADCZENIA GWARANTOWANEGO ŚWIADCZENIOBIORCY 1. Leczenie zaawansowanego

Bardziej szczegółowo

Dane mikromacierzowe. Mateusz Markowicz Marta Stańska

Dane mikromacierzowe. Mateusz Markowicz Marta Stańska Dane mikromacierzowe Mateusz Markowicz Marta Stańska Mikromacierz Mikromacierz DNA (ang. DNA microarray) to szklana lub plastikowa płytka (o maksymalnych wymiarach 2,5 cm x 7,5 cm) z naniesionymi w regularnych

Bardziej szczegółowo

AmpliTest Salmonella spp. (Real Time PCR)

AmpliTest Salmonella spp. (Real Time PCR) AmpliTest Salmonella spp. (Real Time PCR) Zestaw do wykrywania sekwencji DNA specyficznych dla bakterii z rodzaju Salmonella techniką Real Time PCR Nr kat.: BAC01-50 Wielkość zestawu: 50 oznaczeń Objętość

Bardziej szczegółowo

ZAŁĄCZNIK NR 1. Cena jedn. brutto. netto

ZAŁĄCZNIK NR 1. Cena jedn. brutto. netto PAKIET NR 1 Odczynniki hematologiczne do aparatu ABX MICROS 60 Lp. Nazwa/postać/stężenie Opakowanie Ilość do 1. Roztwór roboczy ( diluent) /8-866/ 1 opakowanie 7 = 20 l. 2. Roztwór roboczy ( diluent) /8-866/

Bardziej szczegółowo

Standardy leczenia wirusowych zapaleń wątroby typu C Rekomendacje Polskiej Grupy Ekspertów HCV - maj 2010

Standardy leczenia wirusowych zapaleń wątroby typu C Rekomendacje Polskiej Grupy Ekspertów HCV - maj 2010 Standardy leczenia wirusowych zapaleń wątroby typu C Rekomendacje Polskiej Grupy Ekspertów HCV - maj 2010 1. Leczeniem powinni być objęci chorzy z ostrym, przewlekłym zapaleniem wątroby oraz wyrównaną

Bardziej szczegółowo

SPOSÓB PRZEDSTAWIANIA DOKUMENTACJI DOŁĄCZANEJ DO WNIOSKU O DOPUSZCZENIE DO OBROTU PRODUKTU LECZNICZEGO WETERYNARYJNEGO IMMUNOLOGICZNEGO

SPOSÓB PRZEDSTAWIANIA DOKUMENTACJI DOŁĄCZANEJ DO WNIOSKU O DOPUSZCZENIE DO OBROTU PRODUKTU LECZNICZEGO WETERYNARYJNEGO IMMUNOLOGICZNEGO Załącznik nr 2 SPOSÓB PRZEDSTAWIANIA DOKUMENTACJI DOŁĄCZANEJ DO WNIOSKU O DOPUSZCZENIE DO OBROTU PRODUKTU LECZNICZEGO WETERYNARYJNEGO IMMUNOLOGICZNEGO CZĘŚĆ I STRESZCZENIE DOKUMENTACJI I A Wniosek o dopuszczenie

Bardziej szczegółowo

Raport z badania Działanie wirusobójcze środka dezynfekującego wobec Feline calicivirus. 25 października 2006

Raport z badania Działanie wirusobójcze środka dezynfekującego wobec Feline calicivirus. 25 października 2006 Raport z badania Działanie wirusobójcze środka dezynfekującego wobec Feline calicivirus 25 października 2006 Dr Tobias J. Tuthill Wydział Nauk Biologicznych Uniwersytet Leeds Leeds LS2 9JT www.fbs.leeds.ac.uk

Bardziej szczegółowo

Nieaktualna wersja Rozdziału 6 Zmieniona i aktualna wersja Rozdziału 6

Nieaktualna wersja Rozdziału 6 Zmieniona i aktualna wersja Rozdziału 6 Zasada [Komentarze: Dodano pierwsze zdanie.] 6.2 Do zadań Działu Kontroli Jakości należy także opracowywanie, walidacja i wdrażanie wszystkich procedur kontroli jakości, przechowywanie prób referencyjnych

Bardziej szczegółowo

ALGALTOXKIT F Procedura testu

ALGALTOXKIT F Procedura testu ALGALTOXKIT F Procedura testu 1 PRZYGOTOWANIE STANDARDOWEJ POŻYWKI A B C D - KOLBKA MIAROWA (1 litr) - FIOLKI Z ROZTWORAMI POŻYWEK A (2 fiolki), B, C, D - DESTYLOWANA (lub dejonizowana) WODA 2 A PRZENIEŚĆ

Bardziej szczegółowo

Mefelor 50/5 mg Tabletka o przedłużonym uwalnianiu. Metoprololtartrat/Felodipi n AbZ 50 mg/5 mg Retardtabletten

Mefelor 50/5 mg Tabletka o przedłużonym uwalnianiu. Metoprololtartrat/Felodipi n AbZ 50 mg/5 mg Retardtabletten ANEKS I WYKAZ NAZW, POSTACI FARMACEUTYCZNYCH, MOCY PRODUKTÓW LECZNICZYCH, DRÓG PODANIA, WNIOSKODAWCÓW, POSIADACZY POZWOLEŃ NA DOPUSZCZENIE DO OBROTU W PAŃSTWACH CZŁONKOWSKICH Państwo członkowskie Podmiot

Bardziej szczegółowo

Pakiet onkologiczny. w podstawowej opiece zdrowotnej

Pakiet onkologiczny. w podstawowej opiece zdrowotnej Pakiet onkologiczny w podstawowej opiece zdrowotnej Agnieszka Jankowska-Zduńczyk Specjalista medycyny rodzinnej Konsultant krajowy w dziedzinie medycyny rodzinnej Profilaktyka chorób nowotworowych Pakiet

Bardziej szczegółowo

RAPORT Z BADAŃ 164/Z/20110825/D/JOGA. Dostarczony materiał: próbki tworzyw sztucznych. Ilość próbek: 1. Rodzaj próbek: tworzywo

RAPORT Z BADAŃ 164/Z/20110825/D/JOGA. Dostarczony materiał: próbki tworzyw sztucznych. Ilość próbek: 1. Rodzaj próbek: tworzywo Blirt S.A. 80-172 Gdańsk, ul. Trzy Lipy 3/1.38 RAPORT Z BADAŃ Dział DNA-Gdańsk Nr zlecenia 164/Z/20110825/D/JOGA NAZWA I ADRES KLIENTA GROUND-Therm spółka z o.o. ul. Stepowa 30 44-105 Gliwice Tytuł zlecenia:

Bardziej szczegółowo

WYCIECZKA DO LABORATORIUM

WYCIECZKA DO LABORATORIUM WYCIECZKA DO LABORATORIUM W ramach projektu e-szkoła udaliśmy się do laboratorium w Krotoszynie na ul. Bolewskiego Mieliśmy okazję przeprowadzić wywiad z kierowniczką laboratorium Panią Hanną Czubak Oprowadzała

Bardziej szczegółowo

Terapeutyczne Programy Zdrowotne 2008 Leczenie choroby Hurler

Terapeutyczne Programy Zdrowotne 2008 Leczenie choroby Hurler Nazwa programu: LECZENIE CHOROBY HURLER ICD-10 E-76.0 - Mukopolisacharydoza typu I (MPS I) Dziedzina medycyny: pediatria załącznik nr 23 do zarządzenia Nr 36/2008/DGL Prezesa NFZ z dnia 19 czerwca 2008

Bardziej szczegółowo

Niezawierający aldehydu, środek do mycia i dezynfekcji instrumentów

Niezawierający aldehydu, środek do mycia i dezynfekcji instrumentów Niezawierający aldehydu, środek do mycia i dezynfekcji instrumentów Testowany zgodnie z najnowszymi wytycznymi i ekspertyzami; Chroni przed korozją, odznacza się wysoką kompatybilnością materiałową; Nadaje

Bardziej szczegółowo

KARTA CHARAKTERYSTYKI PREPARATU

KARTA CHARAKTERYSTYKI PREPARATU PRZEDSIĘBIORSTWO PRODUKCYJNO HANDLOWE AS TOMASZ SŁODOWNIK 05-402 OTWOCK, UL POGODNA 38 NIP 532 102 23 96 22 788 21 73 KARTA CHARAKTERYSTYKI PREPARATU Producent : P.P.H. AS Tomasz Słodownik Adres: ul. Pogodna

Bardziej szczegółowo

Histology FISH Accessory Kit Kod K5599

Histology FISH Accessory Kit Kod K5599 Histology FISH Accessory Kit Kod K5599 Wydanie 2 Stosować do hybrydyzacji fluorescencyjnej in situ (technika FISH) skrawków utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie. Zestaw zawiera odczynniki

Bardziej szczegółowo

FORMULARZ CENOWY CZĘŚĆ I. Jedn. miary

FORMULARZ CENOWY CZĘŚĆ I. Jedn. miary FORMULARZ CENOWY CZĘŚĆ I 1. API 20 E zastosowanie: identyfikacja Salmonella, Yersinia; opakowanie zawiera 25 pasków; 2. Suspension Medium (5ml) zastosowanie: identyfikacja Salmonella; produkt płynny; składowe

Bardziej szczegółowo

Europejska karta charakterystyki produktu zgodna z dyrektywą EWG 2001/58

Europejska karta charakterystyki produktu zgodna z dyrektywą EWG 2001/58 Nazwa handlowa: Tepasol Strona 1 z 5 Europejska karta charakterystyki produktu zgodna z dyrektywą EWG 2001/58 1. Określenie preparatu/materiału i nazwy firmowej Nazwa handlowa: Tepasol Zastosowanie: środek

Bardziej szczegółowo

Karta Charakterystyki Substancji Niebezpiecznych

Karta Charakterystyki Substancji Niebezpiecznych 1. Identyfikacja: - Nazwa komercyjna: - Numer katalogowy: SY101022, SY101032, SY101112, SY101113 - Dostawca: Syngen Biotech Sp. Z o.o. - Adres: 54-512 Wrocław, ul. Ostródzka 13 - Numer telefonu I faks:

Bardziej szczegółowo

Co ma wspólnego ludzka dwunastnica z proszkiem do. prania?

Co ma wspólnego ludzka dwunastnica z proszkiem do. prania? 1 Co ma wspólnego ludzka dwunastnica z proszkiem do prania? Czas trwania zajęć: 45 minut Potencjalne pytania badawcze: 1. Czy lipazy zawarte w proszku do prania rozkładają tłuszcze roślinne? 2. Jaka jest

Bardziej szczegółowo

II. ODŻELAZIANIE LITERATURA. Zakres wiadomości obowiązujących do zaliczenia przed przystąpieniem do wykonania. ćwiczenia:

II. ODŻELAZIANIE LITERATURA. Zakres wiadomości obowiązujących do zaliczenia przed przystąpieniem do wykonania. ćwiczenia: II. ODŻELAZIANIE LITERATURA 1. Akty prawne: Aktualne rozporządzenie dotyczące jakości wody do picia i na potrzeby gospodarcze. 2. Chojnacki A.: Technologia wody i ścieków. PWN, Warszawa 1972. 3. Hermanowicz

Bardziej szczegółowo

Załącznik nr 5 do materiałów informacyjnych PRO

Załącznik nr 5 do materiałów informacyjnych PRO SZCZEGÓŁOWY OPIS ŚWIADCZEŃ I ZASAD ICH UDZIELANIA ORAZ WYMAGANIA WOBEC ŚWIADCZENIODAWCÓW W PROGRAMIE PROFILAKTYKI RAKA SZYJKI MACICY 1. OPIS ŚWIADCZEŃ Porada na etapie podstawowym obejmuje: 1) zarejestrowanie

Bardziej szczegółowo

ANEKS III UZUPEŁNIENIA DO CHARAKTERYSTYKI PRODUKTU LECZNICZEGO ORAZ ULOTKI PLA PACJENTA

ANEKS III UZUPEŁNIENIA DO CHARAKTERYSTYKI PRODUKTU LECZNICZEGO ORAZ ULOTKI PLA PACJENTA ANEKS III UZUPEŁNIENIA DO CHARAKTERYSTYKI PRODUKTU LECZNICZEGO ORAZ ULOTKI PLA PACJENTA 42 UZUPEŁNIENIA ZAWARTE W ODPOWIEDNICH PUNKTACH CHARAKTERYSTYKI PRODUKTU LECZNICZEGO DLA PRODUKTÓW ZAWIERAJĄCYCH

Bardziej szczegółowo

Diagnostyka mikrobiologiczna zakażeń krwi Paweł Zwierzewicz

Diagnostyka mikrobiologiczna zakażeń krwi Paweł Zwierzewicz Diagnostyka mikrobiologiczna zakażeń krwi Paweł Zwierzewicz Diagnostyka mikrobiologiczna sepsy oferta firmy biomerieux Automatyczne analizatory do posiewów krwi Automatyczne analizatory do identyfikacji

Bardziej szczegółowo

Lublin, 26 maja, 2015 roku

Lublin, 26 maja, 2015 roku Lublin, 26 maja, 2015 roku Recenzja pracy doktorskiej lek. Iwony Kubickiej- Mendak pt. Ocena przyczyn niepowodzenia leczenia i ryzyka późnych powikłań brachyterapii LDR i HDR chorych na raka szyjki macicy

Bardziej szczegółowo

Część A Programy lekowe

Część A Programy lekowe Wymagania wobec świadczeniodawców udzielających z zakresu programów zdrowotnych (lekowych) Część A Programy lekowe 1.1 WARUNKI 1. LECZENIE PRZEWLEKŁEGO WZW TYPU B 1.1.1 wymagania formalne Wpis w rejestrze

Bardziej szczegółowo

Jeśli wyniki tego samego badania przeprowadzone dwoma różnymi metodami nie różnią się od siebie

Jeśli wyniki tego samego badania przeprowadzone dwoma różnymi metodami nie różnią się od siebie lek.wet. Agnieszka Dereczeniuk Badania laboratoryjne w hodowli Łódź 24.03.2012 Po co badać? Badania przesiewowe Badania profilaktyczne Badania obowiązkowe dla danej rasy Badania okresowe Badania diagnostyczne

Bardziej szczegółowo

Ćwiczenie 4. Identyfikacja wybranych cukrów w oparciu o niektóre reakcje charakterystyczne

Ćwiczenie 4. Identyfikacja wybranych cukrów w oparciu o niektóre reakcje charakterystyczne Klasyczna Analiza Jakościowa Organiczna, Ćw. 4 - Identyfikacja wybranych cukrów Ćwiczenie 4 Identyfikacja wybranych cukrów w oparciu o niektóre reakcje charakterystyczne Zagadnienia teoretyczne: 1. Budowa

Bardziej szczegółowo

Diagnostyka i monitorowanie cukrzycy i chorób nerek

Diagnostyka i monitorowanie cukrzycy i chorób nerek Diagnostyka i monitorowanie cukrzycy i chorób nerek Business Development Manager Konferencja naukowo-szkoleniowa Ryn Badania laboratoryjne w chorobach nerek Wyzwaniem dla współczesnej medycyny jest badanie

Bardziej szczegółowo

SZCZEGÓŁOWY OPIS PRZEDMIOTU ZAMÓWIENIA Część I

SZCZEGÓŁOWY OPIS PRZEDMIOTU ZAMÓWIENIA Część I Część I 1. API 20 E zastosowanie: identyfikacja Salmonella, Yersinia; opakowanie zawiera 25 pasków 2. Suspension Medium (5ml) zastosowanie: identyfikacja Salmonella; produkt płynny; składowe do zestawu

Bardziej szczegółowo

Walidacja metod analitycznych Raport z walidacji

Walidacja metod analitycznych Raport z walidacji Walidacja metod analitycznych Raport z walidacji Małgorzata Jakubowska Katedra Chemii Analitycznej WIMiC AGH Walidacja metod analitycznych (według ISO) to proces ustalania parametrów charakteryzujących

Bardziej szczegółowo

B. ULOTKA INFORMACYJNA

B. ULOTKA INFORMACYJNA B. ULOTKA INFORMACYJNA 1 ULOTKA INFORMACYJNA Versifel FeLV 1. NAZWA I ADRES PODMIOTU ODPOWIEDZIALNEGO ORAZ WYTWÓRCY ODPOWIEDZIALNEGO ZA ZWOLNIENIE SERII, JEŚLI JEST INNY Podmiot odpowiedzialny: Zoetis

Bardziej szczegółowo

CZĘŚĆ SZCZEGÓŁOWA NAJCZĘSTSZE NOWOTWORY OBJAWY, ROZPOZNAWANIE I LECZENIE

CZĘŚĆ SZCZEGÓŁOWA NAJCZĘSTSZE NOWOTWORY OBJAWY, ROZPOZNAWANIE I LECZENIE CZĘŚĆ SZCZEGÓŁOWA ROZDZIA 4 NAJCZĘSTSZE NOWOTWORY OBJAWY, ROZPOZNAWANIE I LECZENIE Arkadiusz Jeziorski W Polsce do lekarzy onkologów zgłasza się rocznie ponad 130 tysięcy nowych pacjentów; około 80 tysięcy

Bardziej szczegółowo

KARTA CHARAKTERYSTYKI

KARTA CHARAKTERYSTYKI Zgodnie z Dz.U. Nr 140 poz. 1171 z 2002r. Dystrybutor: Data aktualizacji: 01.12.2004 METTLER-TOLEDO Sp. z o.o. ul. Poleczki 21 02-822 WARSZAWA tel. (22) 545 06 80 fax. (22) 545 06 88 1. Identyfikacja substancji

Bardziej szczegółowo

Wytyczne postępowania dla lekarzy POZ i lekarzy medycyny pracy w zakresie raka nerki, pęcherza moczowego i prostaty 2011

Wytyczne postępowania dla lekarzy POZ i lekarzy medycyny pracy w zakresie raka nerki, pęcherza moczowego i prostaty 2011 Wytyczne postępowania dla lekarzy POZ i lekarzy medycyny pracy w zakresie raka nerki, pęcherza moczowego i prostaty 2011 Wytyczne postępowania dla lekarzy POZ i lekarzy medycyny pracy w zakresie raka nerki,

Bardziej szczegółowo

DIAGNOSTYKA LABORATORYJNA CHORÓB NOWOTWOROWYCH

DIAGNOSTYKA LABORATORYJNA CHORÓB NOWOTWOROWYCH PRZYKŁADOWA PULA PYTAŃ DIAGNOSTYKA LABORATORYJNA CHORÓB NOWOTWOROWYCH Markery nowotworowe nie są powszechnie stosowane w badaniu przesiewowym ludności ze względów finansowych mimo potwierdzonego wpływu

Bardziej szczegółowo

Proteomika: umożliwia badanie zestawu wszystkich lub prawie wszystkich białek komórkowych

Proteomika: umożliwia badanie zestawu wszystkich lub prawie wszystkich białek komórkowych Proteomika: umożliwia badanie zestawu wszystkich lub prawie wszystkich białek komórkowych Zalety w porównaniu z analizą trankryptomu: analiza transkryptomu komórki identyfikacja mrna nie musi jeszcze oznaczać

Bardziej szczegółowo

Analiza wody Oznaczanie liczby progowej zapachu (TON) i liczby progowej smaku (TFN) PN-EN 1622. Karolina Sipa Łódź, 26.03.2014

Analiza wody Oznaczanie liczby progowej zapachu (TON) i liczby progowej smaku (TFN) PN-EN 1622. Karolina Sipa Łódź, 26.03.2014 Analiza wody Oznaczanie liczby progowej zapachu (TON) i liczby progowej smaku (TFN) PN-EN 1622 Karolina Sipa Łódź, 26.03.2014 Zakres normy Opisano następujące dwie metody: - metoda uproszczona stosowana

Bardziej szczegółowo

Lek Avastin stosuje się u osób dorosłych w leczeniu następujących rodzajów nowotworów w skojarzeniu z innymi lekami przeciwnowotworowymi:

Lek Avastin stosuje się u osób dorosłych w leczeniu następujących rodzajów nowotworów w skojarzeniu z innymi lekami przeciwnowotworowymi: EMA/175824/2015 EMEA/H/C/000582 Streszczenie EPAR dla ogółu społeczeństwa bewacyzumab Niniejszy dokument jest streszczeniem Europejskiego Publicznego Sprawozdania Oceniającego (EPAR) dotyczącego leku.

Bardziej szczegółowo

TEST IMMUNOENZYMATYCZNY DO WYKRYWANIA PRZECIWCIAŁ KLASY

TEST IMMUNOENZYMATYCZNY DO WYKRYWANIA PRZECIWCIAŁ KLASY PLATELIA TM VZV IgM 48 testów 72685 TEST IMMUNOENZYMATYCZNY DO WYKRYWANIA PRZECIWCIAŁ KLASY IgM PRZECIWKO WIRUSOWI VARICELLA-ZOSTER W LUDZKIEJ SUROWICY Polski 1/10 1. ZASTOSOWANIE SPIS TREŚCI 2. ZNACZENIE

Bardziej szczegółowo

Audit dawki sterylizacyjnej

Audit dawki sterylizacyjnej Audit dawki sterylizacyjnej Iwona Kałuska Instytut Chemii i Techniki Jądrowej Utrzymywanie skuteczności procesu Ciągła skuteczność ustalonej dawki sterylizacyjnej powinna być wykazana poprzez przeprowadzenie

Bardziej szczegółowo

DEZYNFEKCJA WODY CHLOROWANIE DO PUNKTU

DEZYNFEKCJA WODY CHLOROWANIE DO PUNKTU DEZYNFEKCJA WODY CHLOROWANIE DO PUNKTU PRZEŁAMANIA WPROWADZENIE Ostatnim etapem uzdatniania wody w procesie technologicznym dla potrzeb ludności i przemysłu jest dezynfekcja. Proces ten jest niezbędny

Bardziej szczegółowo

I. STRESZCZENIE Cele pracy:

I. STRESZCZENIE Cele pracy: I. STRESZCZENIE Przewlekłe zapalenie trzustki (PZT) jest przewlekłym procesem zapalnym, powodującym postępujące i nieodwracalne włóknienie trzustki. Choroba przebiega z okresami remisji i zaostrzeń, prowadząc

Bardziej szczegółowo

HOT TOPICS 2014. W GINEKOLOGII ONKOLOGICZNEJ WARSZAWA, 01 marzec 2014 r.

HOT TOPICS 2014. W GINEKOLOGII ONKOLOGICZNEJ WARSZAWA, 01 marzec 2014 r. HOT TOPICS 2014 W GINEKOLOGII ONKOLOGICZNEJ WARSZAWA, 01 marzec 2014 r. NOWOTWORY TRZONU MACICY Przegląd publikacji w International Journal of Gynecological Cancer w 2013 roku Paweł Knapp Klinika Ginekologii

Bardziej szczegółowo

CHARAKTERYSTYKA PRODUKTU LECZNICZEGO

CHARAKTERYSTYKA PRODUKTU LECZNICZEGO CHARAKTERYSTYKA PRODUKTU LECZNICZEGO 1. NAZWA WŁASNA PRODUKTU LECZNICZEGO CROTAMITON FARMAPOL płyn do stosowania na skórę, 100 mg/g 2. SKŁAD JAKOŚCIOWY I ILOŚCIOWY SUBSTANCJI CZYNNEJ 1 g płynu do stosowania

Bardziej szczegółowo

Terapeutyczne Programy Zdrowotne 2008 Leczenie stwardnienia rozsianego

Terapeutyczne Programy Zdrowotne 2008 Leczenie stwardnienia rozsianego załącznik nr 16 do zarządzenia Nr 36/2008/DGL Prezesa NFZ z dnia 19 czerwca 2008 r. Nazwa programu: LECZENIE STWARDNIENIA ROZSIANEGO ICD-10 G.35 - stwardnienie rozsiane Dziedzina medycyny: neurologia I.

Bardziej szczegółowo

Zakład Biologii Molekularnej Materiały do ćwiczeń z przedmiotu: BIOLOGIA MOLEKULARNA

Zakład Biologii Molekularnej Materiały do ćwiczeń z przedmiotu: BIOLOGIA MOLEKULARNA Zakład Biologii Molekularnej Materiały do ćwiczeń z przedmiotu: BIOLOGIA MOLEKULARNA Zakład Biologii Molekularnej Wydział Farmaceutyczny, WUM ul. Banacha 1, 02-097 Warszawa IZOLACJA DNA Z HODOWLI KOMÓRKOWEJ.

Bardziej szczegółowo

WARSZAWSCY LEKARZE ZASTOSOWALI NOWĄ METODĘ LECZENIA RAKA JAJNIKA

WARSZAWSCY LEKARZE ZASTOSOWALI NOWĄ METODĘ LECZENIA RAKA JAJNIKA WARSZAWSCY LEKARZE ZASTOSOWALI NOWĄ METODĘ LECZENIA RAKA JAJNIKA..,WWW.MONEY.PL ( 00:00:00) www.money.pl/archiwum/wiadomosci_agencyjne/pap/artykul/warszawscy;lekarze;zastosowali;nowa;metode;leczenia;raka;j

Bardziej szczegółowo

Nazwa programu: LECZENIE PIERWOTNYCH NIEDOBORÓW ODPORNOŚCI U DZIECI

Nazwa programu: LECZENIE PIERWOTNYCH NIEDOBORÓW ODPORNOŚCI U DZIECI Załącznik nr 11 do Zarządzenia Nr 41/2009 Prezesa NFZ z dnia 15 września 2009 roku Nazwa programu: LECZENIE PIERWOTNYCH NIEDOBORÓW ODPORNOŚCI U DZIECI ICD 10 D80 w tym D80.0, D80.1, D80.3, D80.4, D80.5,

Bardziej szczegółowo

ULOTKA DLA PACJENTA: INFORMACJA DLA UŻYTKOWNIKA. Glimbax, 0,74 mg/ml (0,074%), roztwór do płukania jamy ustnej i gardła (Diclofenacum)

ULOTKA DLA PACJENTA: INFORMACJA DLA UŻYTKOWNIKA. Glimbax, 0,74 mg/ml (0,074%), roztwór do płukania jamy ustnej i gardła (Diclofenacum) ULOTKA DLA PACJENTA: INFORMACJA DLA UŻYTKOWNIKA Glimbax, 0,74 mg/ml (0,074%), roztwór do płukania jamy ustnej i gardła (Diclofenacum) Należy przeczytać uważnie całą ulotkę, ponieważ zawiera ona ważne informacje

Bardziej szczegółowo

LECZENIE STWARDNIENIA ROZSIANEGO (ICD-10 G 35)

LECZENIE STWARDNIENIA ROZSIANEGO (ICD-10 G 35) LECZENIE STWARDNIENIA ROZSIANEGO (ICD-10 G 35) 1. Kryteria kwalifikacji: ŚWIADCZENIOBIORCY 1.1. Leczenie interferonem beta: 1) rozpoznanie postaci rzutowej stwardnienia rozsianego oparte na kryteriach

Bardziej szczegółowo

In vitro gdzie i jak? Sławomir Wołczyński Klinika Rozrodczości i Endokrynologii Ginekologicznej Uniwersytet Medyczny w Białymstoku

In vitro gdzie i jak? Sławomir Wołczyński Klinika Rozrodczości i Endokrynologii Ginekologicznej Uniwersytet Medyczny w Białymstoku In vitro gdzie i jak? Sławomir Wołczyński Klinika Rozrodczości i Endokrynologii Ginekologicznej Uniwersytet Medyczny w Białymstoku Gdzie? Leczenie niepłodności metodami rozrodu wspomaganego medycznie powinno

Bardziej szczegółowo

Z A Ł Ą C Z N I K N R 2 - FORMULARZ CENOWY

Z A Ł Ą C Z N I K N R 2 - FORMULARZ CENOWY PAKIET NR 1 PREPARAT DO DEZYNFEKCJI RAN I BŁON ŚLUZOWYCH Preparat do dezynfekcji ran, błon sluzowych i skóry, do leczenia odleżyn, zawierający chlorowodorek oktenidyny, nie zawierajacy jodu. Działanie:bakteriobójcze,

Bardziej szczegółowo

Załącznik nr 4 do zarządzenia Nr 53/2006 Prezesa Narodowego Funduszu Zdrowia. Program profilaktyki raka piersi

Załącznik nr 4 do zarządzenia Nr 53/2006 Prezesa Narodowego Funduszu Zdrowia. Program profilaktyki raka piersi Program profilaktyki raka piersi 1 I. UZASADNIENIE CELOWOŚCI WDROŻENIA PROGRAMU PROFILAKTYKI RAKA PIERSI, zwanego dalej Programem. 1. Opis problemu zdrowotnego. Rak piersi jest najczęściej występującym

Bardziej szczegółowo

Zadanie 2. (1 pkt) Uzupełnij tabelę, wpisując wzory sumaryczne tlenków w odpowiednie kolumny. CrO CO 2 Fe 2 O 3 BaO SO 3 NO Cu 2 O

Zadanie 2. (1 pkt) Uzupełnij tabelę, wpisując wzory sumaryczne tlenków w odpowiednie kolumny. CrO CO 2 Fe 2 O 3 BaO SO 3 NO Cu 2 O Test maturalny Chemia ogólna i nieorganiczna Zadanie 1. (1 pkt) Uzupełnij zdania. Pierwiastek chemiczny o liczbie atomowej 16 znajduje się w.... grupie i. okresie układu okresowego pierwiastków chemicznych,

Bardziej szczegółowo

* 1 Identyfikacja substancji/preparatu i identyfikacja przedsiębiorstwa

* 1 Identyfikacja substancji/preparatu i identyfikacja przedsiębiorstwa strona: 1/5 * 1 Identyfikacja substancji/preparatu i identyfikacja przedsiębiorstwa Dane produktu Zastosowanie substancji / preparatu utwardzacz Producent/ Dostawca Schomburg Polska Sp. z o.o. ul. Skleczkowska

Bardziej szczegółowo

ĆWICZENIE NR 3 BADANIE MIKROBIOLOGICZNEGO UTLENIENIA AMONIAKU DO AZOTYNÓW ZA POMOCĄ BAKTERII NITROSOMONAS sp.

ĆWICZENIE NR 3 BADANIE MIKROBIOLOGICZNEGO UTLENIENIA AMONIAKU DO AZOTYNÓW ZA POMOCĄ BAKTERII NITROSOMONAS sp. ĆWICZENIE NR 3 BADANIE MIKROBIOLOGICZNEGO UTLENIENIA AMONIAKU DO AZOTYNÓW ZA POMOCĄ BAKTERII NITROSOMONAS sp. Uwaga: Ze względu na laboratoryjny charakter zajęć oraz kontakt z materiałem biologicznym,

Bardziej szczegółowo

Sposób otrzymywania białek o właściwościach immunoregulatorowych. Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania fragmentów witellogeniny.

Sposób otrzymywania białek o właściwościach immunoregulatorowych. Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania fragmentów witellogeniny. 1 Sposób otrzymywania białek o właściwościach immunoregulatorowych Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania fragmentów witellogeniny. Wynalazek może znaleźć zastosowanie w przemyśle spożywczym i

Bardziej szczegółowo

ELISA PeliClass human IgG subclass kit REF M1551

ELISA PeliClass human IgG subclass kit REF M1551 Sanquin Reagents Plesmanlaan 5 0 CX Amsterdam The Netherlands Phone: +.0.5.599 Fax: +.0.5.570 Email: reagents@sanquin.nl Website: www.sanquinreagents.com M55/ November 007 ELISA PeliClass human IgG subclass

Bardziej szczegółowo

Plasmid Mini AX Gravity

Plasmid Mini AX Gravity !"# Plasmid Mini AX Gravity zestaw do izolacji ultraczystego plazmidowego DNA (plazmidy wysokokopijne) wersja 0515/I 100 izolacji Nr kat. 015-100 1 Skład zestawu Składnik Ilość Temp. Przechowywania Kolumny

Bardziej szczegółowo

SZCZEGÓŁOWE KRYTERIA OCENIANIA Z CHEMII DLA KLASY II GIMNAZJUM Nauczyciel Katarzyna Kurczab

SZCZEGÓŁOWE KRYTERIA OCENIANIA Z CHEMII DLA KLASY II GIMNAZJUM Nauczyciel Katarzyna Kurczab SZCZEGÓŁOWE KRYTERIA OCENIANIA Z CHEMII DLA KLASY II GIMNAZJUM Nauczyciel Katarzyna Kurczab CZĄSTECZKA I RÓWNANIE REKCJI CHEMICZNEJ potrafi powiedzieć co to jest: wiązanie chemiczne, wiązanie jonowe, wiązanie

Bardziej szczegółowo

Karta charakterystyki

Karta charakterystyki Strona 1 z 5 SEKCJA 1: Identyfikacja substancji/mieszaniny i identyfikacja przedsiębiorstwa 1.1. Identyfikator produktu Inne nazwa handlowa : 791442; 505534; 505532 1.2. Istotne zidentyfikowane zastosowania

Bardziej szczegółowo

Opis programu Leczenie radioizotopowe

Opis programu Leczenie radioizotopowe Opis programu Leczenie radioizotopowe I. Leczenie radioizotopowe z zastosowaniem 131-I Leczenie dotyczy schorzeń tarczycy (choroby Graves-Basedowa, wola guzowatego, guzów autonomicznych). Polega ono na

Bardziej szczegółowo

dokształcającego prowadzonego przez Centralny Ośrodek Koordynujący lub wojewódzki ośrodek koordynujący w latach 2007 2010 w zakresie

dokształcającego prowadzonego przez Centralny Ośrodek Koordynujący lub wojewódzki ośrodek koordynujący w latach 2007 2010 w zakresie Dziennik Ustaw Nr 52 3302 Poz. 271 2. Program profilaktyki raka szyjki macicy macicy etap podstawowy pobranie materiału z szyjki macicy do przesiewowego badania cytologicznego. macicy etap diagnostyczny

Bardziej szczegółowo

Karta charakterystyki preparatu niebezpiecznego - Zmywacz intensywny WOCA 0. Ogólnie: - oznacza: nie ma zastosowania lub brak danych...

Karta charakterystyki preparatu niebezpiecznego - Zmywacz intensywny WOCA 0. Ogólnie: - oznacza: nie ma zastosowania lub brak danych... Strona 1 z 5 preparatu niebezpiecznego - Zmywacz intensywny WOCA 0. Ogólnie: - oznacza: nie ma zastosowania lub brak danych. 1. Identyfikacja preparatu i firmy: Nazwa produktu: Zmywacz intensywny WOCA

Bardziej szczegółowo