Immunoregulacyjne aktywności wybranych pochodnych izoksazolu o potencjalnej przydatności terapeutycznej

Transkrypt

1 Instytut Immunologiii Terapii Doświadczalnej PAN we Wrocławiu Zakład Terapii Doświadczalnej Laboratorium Immunobiologii Kierownik: prof. Michał Zimecki Immunoregulacyjne aktywności wybranych pochodnych izoksazolu o potencjalnej przydatności terapeutycznej

2 Oferta Laboratorium Ocena przydatności potencjalnych leków o działaniu supresorowym w chorobach autoimmunologicznych i alergicznych, przeciwbakteryjnym i przeciwzapalnym oraz immunostymulującym

3 Próby kliniczne Prof. Prusek (TFX- młodzieńcze zapalenie stawów) Dr Właszczyk, Dr Wojciechowski (BLF u pacjentów po operacji tarczycy) IITD dwie próby na ochotnikach (preparaty zawierające BLF) Dr Kruzel (stwardnienie rozsiane)

4 Współpraca z firmami Tonipharm (Francja), preparat BLF Finepharm (Polska), preparat TFX PharmaReview (USA), preparaty BLF i rhlf Polfarma (Polska), izoksazol RM33 Immune@Work (USA), peptydy z mleka Peptaderm (Polska), pochodne CLA

5 Aktywność RM11 w wybranych modelach immunologicznych

6 Wpływ RM11 na odpowiedź humoralną splenocytów myszy immunokompetentnych RM11 i LV podawane i.p. RM11 i LV podawane p.o. 6 Liczba PFC/1 6 splenocytów K LV RM11 Liczba PFC/1 6 splenocytów K LV RM11 RM11 i LV podawano w dawkach: 1 i 1 (i.p.) lub 2 i 2µg/mysz (p.o.) K vs LV 1 p<,1 K vs LV 1 p<,1 K vs RM11 1 p<,1 K vs RM11 1 p<,1 K vs LV 2 p<,1 K vs LV 2 p<,1 K vs RM11 2 p<,1 K vs RM11 2 p<,1 Ryng i wsp., Arch. Immunol. Ther. Exp., 2

7 Wpływ RM11 na odpowiedź komórkową myszy immunokompetentnych RM11 i LV podawane i.p. RM11 i LV podawane p.o Jednostki DTH Jednostki DTH K K LV RM11 LV RM11 Jedn. DTH=,1mm RM11 i LV podawano w dawkach: 1, 1 lub 5µg/mysz K vs LV 5 p<,5 K vs RM11 1 p<,5 K vs RM11 1 p<,1 K vs RM11 5 p<,1 K vs LV 5 p<,5 K vs RM11 5 p<,1 Ryng i wsp., Arch. Immunol. Ther. Exp., 2

8 Wpływ RM11 na skład procentowy limfocytów w narządach limfatycznych myszy Śledziona % komórek K RM11 2 RM11 2 CD19+ CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+ kom órki RM11 podawano p.o. w dawkach 2 lub 2µg/mysz Zimecki i wsp., Pharmacol. Rep. 28

9 Wpływ RM11 na odpowiedź humoralną splenocytów myszy w immunosupresji po CY PFC/1 6 splenocytów K CY RM11 CY/RM11 RM11 podawano w dawce 1µg/mysz CY vs CY/RM11 p<,1 K vs RM11 p<,1 Zimecki i wsp., Pharmacol. Rep. 28

10 Wpływ RM11 na odpowiedź komórkową myszy w immunosupresji po CY Jednostki DTH K CY RM11 CY/RM11 RM11 podawano w dawce 1µg/mysz CY vs CY/RM11 p<,1 Zimecki i wsp., Pharmacol. Rep. 28

11 Wpływ RM11 na skład leukocytów krwi obwodowej u myszy w immunosupresji po CY Doba od podania CY 1% Limfocyty 8% Eozynofile Segmenty % leu ko cytów 6% 4% Pałki Doba 4 od podania CY 2% % K CY RM11 CY/RM11 % leuk oc ytów 1% 8% 6% 4% Limfocyty Eozynofile Segmenty Pałki Doba 11 od podania CY 2% % K CY RM11 CY/RM11 % leukocytów 1% 8% 6% 4% Limfocyty Eozynofile Segmenty Pałki 2% Zimecki i wsp., Pharmacol. Rep. 28 % K CY RM11 CY/RM11

12 Wpływ RM11 na wtórną odpowiedź humoralną myszy w immunosupresji po MTX 25 PFC/1 6 splenocytów K RM11,25,5 1,25,5 1 MTX Stężenie MTX (mm) MTX/RM11 RM11 zastosowano w stężeniu 1µg/ml MTX,25 vs MTX,25/RM11 p<,5 MTX,5 vs MTX,5/RM11 p<,1 MTX 1 vs MTX 1/RM11 p<,1 Zimecki i wsp., Pharmacol. Rep. 28

13 Aktywność RM33 w wybranych modelach immunologicznych

14 Wpływ RM33 na odpowiedź humoralną mysich splenocytów PFC/1 6 splenocytów K CsA LV RM33 K vs RM33 p<,1 RM33 podawano i.p. w dawce 1 µg/mysz 2h przed immunizacją Ryng i wsp., Pharmacol. Rep. 25

15 Wpływ RM33 na rozwój odpowiedzi komórkowej u myszy Jednostki DTH K CsA LV RM33 K vs RM33 p<,1 RM33 podawano i.p. w dawce 1 µg/mysz 2h przed immunizacją za pomocą SRBC Ryng i wsp., Pharmacol. Rep. 25

16 Wpływ RM33 na rozwój odpowiedzi komórkowej u myszy Jednostki DTH K RM33 K vs RM33 25 p<,1 K vs RM p<,1 RM33 podano s.c. w dawce 25 lub 125 µg/mysz razem z uczulającą dawką antygenu (cfa+ova) Ryng i wsp., Pharmacol. Rep. 25

17 Wpływ RM33 na fazę efektorową odpowiedzi komórkowej u myszy Jednostki DTH K 2 2 RM33 K vs RM33 p<,1 RM33 podawano i.p. w dawce 2 µg/mysz 2h przed podaniem dawki wywołującej antygenu (OVA) Ryng i wsp., Pharmacol. Rep. 25

18 Wpływ RM33 na indukowany adiuwantem obrzęk łapy u myszy Zw iększenie obrzęku łapy (mm) 1,4 1,2 1,8,6,4,2 K RM33 K RM33 K RM33 K RM33 Dzień 1 Dzień 2 Dzień 3 Dzień 4 K vs RM33 5 (wszystkie dni) p<,1 RM33 podano s.c. w dawce 5µg/mysz łącznie z adiuwantem (cfa) Ryng i wsp., Pharmacol. Rep. 25

19 Wpływ RM33 na indukowane LPS surowicze poziomy TNF-α i IL-6 u myszy TNF-α IL TNF-α (pg/ml) IL-6 (pg/ml) K LPS LPS + RM33 K LPS LPS + RM33 K LPS vs LPS+RM33 p<,2 RM33 podano s.c. w dawce 25µg/mysz 2h przed i.v. podaniem LPS, krew pobrano 2h później Ryng i wsp., Pharmacol. Rep. 25

20 Wpływ RM33 na zapalenie indukowane karageniną u szczurów RM11 podawano i.p. RM33 podawano p.o. 7 8,5 Obrzęk łapy (mm) 6,5 6 5,5 5 Obrzęk łapy (mm) 8 7,5 7 6,5 4,5 6 K 25 5 RM33 5,5 K 5 1 RM33 podawano i.p. lub p.o. w dawkach 25, 5 lub 1 µg/szczura K vs RM3325 p<,5 K vs RM33 5 p<,1 K vs RM33 5 p<,1 K vs RM33 1 p<,1 Zimecki i wsp., Pharmacol. Rep. 26

21 Wpływ RM33 na surowicze poziomy TNF-α u szczurów z zapaleniem indukowanym karageniną 12 1 TNF-α (pg/ml) K RM33 5 K vs RM335 p<,1 Zimecki i wsp., Pharmacol. Rep. 26

22 Aktywność R11 w wybranych modelach immunologicznych

23 Badanie toksyczności R11 względem ludzkich PBMC.35.3 OD (55/63nm) K DMSO R11 R11 dodano do hodowli komórek we skazanych stężeniach, rozpuszczalnik - DMSO Zimecki i wsp., Pharmacol. Rep. 211

24 Wpływ R11 na skład procentowy limfocytów w narządach limfatycznych myszy Śledziona % komórek CD19+ CD3+ CD4+ komórki * p<.5 R11 podano myszom p.o. w dawce 2µg/mysz * K R11 % komórek Węzły chłonne * K R11 CD19+ CD3+ CD4+ komórki

25 Wpływ R11 na odpowiedź humoralną splenocytów myszy w immunosupresji po CY 25 PFC/1 6 splenocytów K CY R11 CY/R11 R11 podawano i.p. w dawce 2 µg/mysz CY vs CY/RM11 p<,1

26 Wpływ R11 na odpowiedź komórkową myszy w immunosupresji po CY Jednostki D TH K CY R11 CY/R11 R11 podawano i.p. w dawce 2 µg/mysz CY vs CY/RM11 p<,1

27 Wpływ R11 na liczbę krążących leukocytów u myszy w immunosupresji po CY 1 8 L. komórek/mm K CY R11 CY/R11 R11 podawano i.p. w dawce 2 µg/mysz CY vs CY/RM11 p<,1

28 Wpływ R11 na skład leukocytów krwi obwodowej myszy w immunosupresji po CY 1% % leukocytów 8% 6% 4% 2% Mono L mł. L E S P % K CY R11 CY/R11 P (pałki): CY vs CY/RM11 p<,1 S (segmenty): CY vs CY/RM11 p<,1 E (eozynofile): CY vs CY/RM11 NS L (limfocyty): CY vs CY/RM11 p<,1 Lmł (limfocyty p. młode): CY vs CY/RM11 p<,1 R11 podawano i.p. w dawce 2 µg/mysz

29 Wpływ R11 na liczbę splenocytów u myszy w immunosupresji po CY L. komórek x K CY R11 CY/R11 R11 podawano i.p. w dawce 2 µg/mysz CY vs CY/RM11 NS (p=.6)

30 Aktywność R13 w wybranych modelach immunologicznych

31 Badanie toksyczności R13 względem ludzkich PBMC.3.25 OD (55/63nm) K DMSO R13 R13 dodano do hodowli komórek we skazanych stężeniach, rozpuszczalnik - DMSO

32 Wpływ R13 na skład procentowy limfocytów w narządach limfatycznych myszy Grasica 3 25 K R13 % komórek Śledziona 5 Węzły chłonne CD4+ komórki % komórek * * * K R * * * K R13 CD19+ CD3+ CD4+ komórki % komórek 4 3 * p< R13 podano myszom p.o. w dawce 2µg/mysz CD19+ CD3+ CD4+ komórki

33 Wpływ R13 na proliferację splenocytów myszy w immunosupresji po CY Proliferacja indukowana PMW.4.35 OD (55/63nm) K R13 CY CY/R13 Proliferacja indukowana ConA 1.2 R13 podawano myszom w ilości 2µg/mysz w 5 dawkach co 2. dzień, i.p. OD (55/63nm) K R13 CY CY/R13

34

35

36

37