Oznaczanie lekowrażliwości kompleksowa oferta firmy

Transkrypt

1 Oznaczanie lekowrażliwości kompleksowa oferta firmy

2 1) Co to jest LEKOWRAŻLIWOŚĆ? Jest to ocena in vitro aktywności leku przeciwdrobnoustrojowego metodą dyfuzyjno-krążkową lub oznaczenie wartości MIC, czyli minimalnego stężenia hamującego badany szczep. Ocena ta pozwala na zakwalifikowanie szczepu do kategorii wrażliwy, średniowrażliwy lub oporny na podstawie wartości granicznych. 2) Jaki jest cel wykonania badania? Indywidualny wrażliwość/oporność kliniczna Epidemiologiczny wrażliwość/oporność epidemiologiczna Wynik badania lekowrażliwości pozwala na dobranie odpowiedniej terapii antybiotykowej in vivo. 3) Kto wyznacza międzynarodowe standardy oznaczania lekowrażliwości? Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI) - amerykańska organizacja, podająca metodyki i interpretację wyników oznaczania lekowrażliwości dla szczepów klinicznych oraz weterynaryjnych. ( European Committee for Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST) - europejski komitet podający metodyki i interpretację wyników oznaczania lekowrażliwości dla szczepów klinicznych. ( 4) Jak postępować w danej metodzie oznaczania lekowrażliwości? metoda dyfuzyjno-krążkowa a) Doprowadź podłoża mikrobiologiczne i krążki antybiotykowe do temperatury pokojowej. b) Przygotuj zawiesinę bakteryjną (inokulum) o gęstości 0,5 McFarlanda ze świeżej 18-24h czystej hodowli bakteryjnej pobranej z podłoża nieselektywnego (zawieś kolonie badanego szczepu w jałowym roztworze soli fizjologicznej).

3 c) Reguluj gęstość poprzez dodanie większej ilości bakterii lub roztworu soli fizjologicznej. Najlepiej sprawdź pomiar gęstości w densytometrze. d) W ciągu 15 minut od przygotowania zawiesiny bakteryjnej wykonaj za pomocą wymazówki posiew na odpowiednią pożywkę agarową. W tym celu zanurz jałową wymazówkę w zawiesinie, usuń nadmiar płynu, poprzez dociśnięcie wymazówki do ścianki probówki (w przypadku organizmów Gram(+) nie wykonuj tego nadmiernie), dokonaj równomiernego posiewu w trzech kierunkach lub skorzystaj z automatycznego stolika obrotowego. Dla organizmów niewymagających specjalnych czynników wzrostowych stosuj podłoże Mueller-Hinton Agar. Natomiast do oznaczania lekowrażliwości paciorkowców, w tym Streptococcus suis, i Pasteurella multocida, zastosuj podłoże agarowe Mueller-Hintona z 5% krwią baranią. Organizm Podłoże Enterobacteriaceae (inkubacja godz.) Pseudomonas spp. (inkubacja godz.) Stenotrophomonas maltophilia (inkubacja godz.) Acinetobacter spp. (inkubacja godz.) Staphylococcus spp. (inkubacja godz., koagulazo 24 godz.) Enterococcus spp. (inkubacja godz.) Mueller-Hinton Agar Streptococcus pneumoniae (inkubacja godz.) Streptococcus Grupy A, B, C i G (inkubacja godz.) Inne streptokoki (inkubacja godz.) Pasteurella multocida (inkubacja godz.) Mueller-Hinton Agar + 5% krew barania Haemophilus spp. (inkubacja godz.) HTM

4 e) Przed upływem 15 minut od zaszczepienia, nałóż przygotowane krążki antybiotykowe na podłoże za pomocą jałowej pęsety lub dyspensera. Zaleca się nakładanie na płytce Petriego o średnicy 90mm nie więcej niż 6 krążków antybiotykowych, a na płytce 150mm nie więcej 12 krążków. f) Rozpocznij inkubację w ciągu 15 minut od nałożenia krążków antybiotykowych. Inkubuj płytki w pozycji odwróconej w temperaturze 35ºC ± 2 C przez godzin lub dla wybranych mikroorganizmów przez godziny (zg. z CLSI). Płytki z podłożem MH inkubuj w warunkach tlenowych, natomiast podłoże MH z krwią baranią inkubuj w atmosferze o zawartości 4-6% CO2 g) Po inkubacji odczytaj strefy zahamowania wzrostu. Strefy na podłożu MH odczytuj od spodu płytki, na czarnym tle z oświetleniem, na MH z 5% krwią baranią od przodu płytki ze zdjętym wieczkiem, na jasnym tle. Czytaj zahamowanie wzrostu, nie hemolizę. h) Zmierz średnicę każdej strefy zahamowania wzrostu drobnoustroju za pomocą linijki albo suwmiarki lub skorzystaj z czytników automatycznych. Wynik podaj w mm. i) Podczas stosowania metody dyfuzyjno-krążkowej obowiązuje zasada minut.

5 metoda rozcieńczeń a) Określa minimalne stężenie hamujące antybiotyku (MIC) b) Wykonywana na płytkach titracyjnych metoda mikrorozcieńczeń c) Wykonywana w probówkach metoda makrorozcieńczeń d) Odczyt wizualny (kolor/zmętnienie) lub automatyczny (fluorescencja). metoda z zastosowaniem pasków z gradientem stężeń a) Łączy metodę dyfuzyjną z metodą rozcieńczeń. b) Paski nasączone są antybiotykiem w gradiencie stężeń. c) Na powierzchni paska znajduje się podziałka oznaczająca kolejne stężenie antybiotyku. d) Określamy wartość MIC na podstawie odczytu wartości stężenia z podziałki w miejscu, w którym brzeg strefy zahamowania wzrostu przecina się z paskiem. e) Pojedyncze kolonie i podrost w obrębie strefy zahamowania traktować jako oporność na dane stężenie antybiotyku. 5) Co oznaczają skróty S, I, R? S (ang. sensitive - wrażliwy) oznacza wrażliwość drobnoustroju na standardowe dawki leku. Wysokie prawdopodobieństwo sukcesu terapeutycznego. I (ang. intermediate - średniowrażliwy) do tej grupy należą szczepy, u których sukces terapeutyczny jest trudny do przewidzenia i zależny od dawki antybiotyku jaką zastosujemy (wyższa dawka lub zwiększona częstotliwość podawania). Wskazane potwierdzenie MIC. R (ang. resistant - oporny) oznacza, że dany szczep posiada mechanizm oporności (niski lub wysoki stopień) i osiągnięcie sukcesu terapeutycznego jest niemożliwe, pomimo zastosowania maksymalnej dawki antybiotyku.

6 BP ang. breakpoint (stężenie graniczne) jest to określona wartość MIC lub określona wielkość strefy zahamowania wzrostu, która stanowi podstawę do zakwalifikowania danego szczepu do jednej z powyższych kategorii klinicznych. 6) Co oznacza wartość MIC i dlaczego jest tak ważna? MIC (ang. minimal inhibitory concentration) określa najmniejsze stężenie leku, wyrażone w mg/l, określone w warunkach in vitro, hamujące wzrost bakterii przy określonej gęstości inokulum i w określonym czasie. Najlepszy pomiar działania przeciwdrobnoustrojowego może pomóc w podejmowaniu decyzji terapeutycznych i zwiększa poziom racjonalnego stosowania antybiotyków.

7 7) Jakie produkty wybrać? Podłoża gotowe Produkt Mueller Hinton Agar Mueller-Hinton Agar z 5% krwią baranią Haemophilus Test Medium (HTM) Numer katalogowy PO5007A PB5007A PO5138A Wielkość opakowania 10 szt. 10 szt. 10 szt. Krążki antybiotykowe Produkt Krążki antybiotykowe Oxoid - Zawartość antybiotyku w zakresie % norma DIN - Temp. przechowywania otwartych opakowań 2-8 C (max. 7 dni) - Temp. przechowywania nieotwartych opakowań -20 C przy dłuższym przechowywaniu - Otwartą fiolkę zużyć w ciągu tygodnia - Certyfikaty zawierają dane dotyczące wysycenia i stref z kontroli ze szczepami - Producent oferuje krążki, nie oferuje stref do krążków - Lista dostępnych krążków dostępna u Przedstawiciela Regionalnego lub na stronie internetowej Wielkość opakowania 5 x 50 krążków Paski gradientowe Produkt MICE Oxoid - Plastikowe - Pojedynczo pakowane - Przechowywanie 2-8 C - Lista dostępnych krążków dostępna u Przedstawiciela Regionalnego lub na stronie internetowej Wielkość opakowania 10 szt.

8 MIC Test Strip Liofilchem - Bibułowe - Pojedynczo pakowane - Przechowywanie 2-8 C, przez dłuższy czas -20 C - Zestawy krążków do oznaczania mechanizmów oporności - Lista dostępnych krążków dostępna u Przedstawiciela Regionalnego lub na stronie internetowej 10 szt. Dodatkowe akcesoria Produkt Wymazówka w probówce transportowej (okrągłe dno), bez podłoża, sterylna, plastikowa 150mm., końcówka sztuczny jedwab Wymazówka sucha, plastikowa, sterylna, indywidualnie pakowana w tzw. listkach, końcówka bawełniana Wymazówka sucha, plastikowa, sterylna, pakowana po 10szt. w tzw. listkach, końcówka bawełniana Ezy 1μl, sterylne, sterylizowane radiacyjnie, pakowane po 20szt. w woreczku strunowym Ezy 10μl, sterylne, sterylizowane radiacyjnie, pakowane po Numer katalogowy Wielkość opakowania szt. CTA90004 CTA90002 MW711/20 MW710/ szt szt szt szt. 20szt. w woreczku strunowym Dyspensery do nanoszenia krążków 6/90 ST szt. Sól fizjologiczna w probówkach PSO40004-AI 50 szt. Stolik obrotowy do płytek Petriego do posiewu zawiesiny szt. Denzytometr DEN-1B 1 szt. Wzorce McFarlanda 0,5, 1, 2, 3, 4, 5 R20421 zestaw Wzorzec McFarlanda 0,5 R szt. Saszetki do wytwarzania CO2 w plastikowych torebkach R szt. Plastikowe torebki AG0020C 20szt. Klipsy do zamykania plastikowych torebek AN0005C 5 szt. Saszetki do wytwarzania CO2 w słoju 2,5l CN0025A 10szt. Słój 2,5l AG0025A 1 szt. Rękawice diagnostyczne niejałowe Nitrylex PF, nitrylowe, bezpudrowe, rozmiary XS, S, M, L, XL Rękawice diagnostyczne jałowe ProHAND nitrylowe, rozmiary S, M, L Inkubator kompaktowy IMC 18 z wymuszonym obiegiem powietrza: zakres temperatur: od +17 C do +40 C, pojemność komory: 18 litrów, ilość półek w komplecie: 2, maksymalna liczba 3, wymiary zew. w cm: dł. 47 x szer. 26 x wys. 41,5. RD RC szt. 50 par

9 8) Jak prowadzić Kontrolę Jakości? Precyzja i dokładność metody powinny być monitorowane za pomocą programu Kontroli Jakości, który jest złożonym procesem mającym na celu wykrywanie i korygowanie błędów pojawiających się w procesie diagnostycznym. Rekomendacje EUCAST i CLSI podają tabele określające strefy dla poszczególnych antybiotyków i szczepów kontrolnych stosowanych do kontroli podłóż i krążków antybiotykowych oraz do kontroli mechanizmów oporności. Zestawy szczepów producenta Microbiologics do kontroli lekowrażliwości. Możliwy zakup pojedynczych szczepów wzorcowych (KwikStik w opakowaniu 2 wymazówki).

10 po 2 wymazówki Szczepy wzorcowe Produkt Numer katalogowy Wielkość opakowania - CLSI (NCCLS); Disk Diffusion QC Set Escherichia coli ATCC * Pseudomonas aeruginosa ATCC * Staphylococcus aureus subsp. aureus ATCC * Escherichia coli ATCC * - CLSI (NCCLS); MIC QC Set Escherichia coli ATCC * Pseudomonas aeruginosa ATCC * Staphylococcus aureus subsp. aureus ATCC * Enterococcus faecalis ATCC * Escherichia coli ATCC * - CLSI (NCCLS); Disk Diffusion and MIC, Plus QC Set Escherichia coli ATCC * Haemophilus influenzae ATCC * Neisseria gonorrhoeae ATCC * Haemophilus influenzae ATCC * Streptococcus pneumoniae ATCC * Enterococcus faecalis ATCC * - CLSI (NCCLS); Fastidious Microorganism Disk Diffusion QC Set Haemophilus influenzae ATCC * Neisseria gonorrhoeae ATCC * Haemophilus influenzae ATCC * Streptococcus pneumoniae ATCC * - CLSI (NCCLS); Fastidious Microorganism MIC QC Set Haemophilus influenzae ATCC * Haemophilus influenzae ATCC * Streptococcus pneumoniae ATCC * 5001P 5002P 5003P 5173P 5174P

11 9) Jaki system automatyczny wybrać? - lider w oznaczaniu lekowrażliwości i identyfikacji drobnoustrojów (AST/ID) - jedyny system wykorzystujący rzeczywiste wartości MIC Produkt Numer katalogowy Sensititre - system do oznaczania lekowrażliwości i identyfikacji drobnoustrojów firmy Trek Diagnostic Systems - rzeczywiste wartości MIC pełne zakresy rozcieńczeń - opcjonalny manualny - Vision półautomatyczny - Optiread automatyczny Aris 2X - Zestaw komputerowy (komputer, system Windows, czytnik) - automatyczny inokulator płytek- AIM - denzytometr (nefelometr) - przystosowany do potrzeb płytki standardowe- 1op. a.10 szt. płytki pod potrzeby klienta custom - płytki titracyjne 96 dołkowe - płytki do lekowrażliwości możliwość odczytu manualnego i automatycznego zgodne z rekomendacjami EUCAST, CLSI płytki dla weterynarii - oprogramowanie SWIN łączy manualny, półautomatyczny i automatyczny odczyt możliwość konsolidacji badań w oparciu o rekomendacje EUCAST, CLSI konfigurowalny system Expert pełna kaskadowość i ukrywanie wyników własne reguły eksperckie dodatkowy moduł SWIN Epidemiologia pozwala wciągu kilku minut stworzyć kompletny raport epidemiologiczny V2020 V3030 V3090 SW100 V3020 V3011 SW120 Automatyzacja zwiększa precyzję i minimalizuje błędy operatora.

12 Bulion Mueller-Hinton z dodatkiem kationów i buforu TES, 100 x 11 ml Bulion VFM dla organizmów wymagających do płytek weterynaryjnych, 10 x 11 ml (używany w przypadku izolatów Histophilus somni i Actinobacillus Pleuropneumoniae) T3462 T3460 Dostępne rodzaje standardowych płytek - Płytka do oznaczania MIC Salmonella i E. coli- odczyt manualny - Płytka do oznaczania MIC Salmonella i E. coli ESBL - odczyt manualny - Płytka do oznaczania MIC dwóch izolatów Campylobacter- odczyt manualny - Płytka do oznaczania MIC Staphylococcus- odczyt manualny - Płytka do oznaczania MIC Enterococcus- odczyt manualny - Płytka do oznaczania MIC izolatów od bydła/świń- odczyt manu. i auto. - Płytka do oznaczania MIC dwóch izolatów mastitis- odczyt manu. i auto. - Płytka do oznaczania MIC jednego izolatu z ptaków- odczyt manu. i auto. - Płytka do oznaczania MIC dwóch izolatów z moczu- odczyt manu. i auto. - Płytka do oznaczania MIC dwóch izolatów od koni- odczyt manu. i auto. - Płytka do oznaczania MIC zwierząt towarzyszących- odczyt manu. i auto. - Płytka do oznaczania MIC organizmów Gram ujemnych- odczyt manu. i auto. - Płytka do oznaczania MIC organizmów Gram dodatnich- odczyt manu. i auto. EUVSEC EUVSEC2 EUCAMP2 EUST EUVENC BOPO6F CMV1AMAF AVIAN 1F CMV1BURF EQUIN1F COMPAN1F CMV3AGNF CMV3AGPF

13 SERDECZNIE ZAPRASZAMY DO WSPÓŁPRACY