EnVision FLEX, High ph (Dako Omnis)

EnVision FLEX, High ph (Dako Omnis) Nr kat. GV800 Wydanie 2. Zestaw zawiera odczynniki wystarczające do wykonania 600 testów. Dla urządzeń Dako Omnis. Odczynniki opcjonalne: Nr kat. Nazwa produktu Testy GV804 GV805 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (Dako Omnis) EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (Dako Omnis) 225 225 GC807 Wash Buffer (20x) (Dako Omnis) GC808 Hematoxylin (Dako Omnis) 600 GV809 EnVision FLEX+ Rabbit LINKER (Dako Omnis) 75 GV821 EnVision FLEX+ Mouse LINKER (Dako Omnis) 75 GV825 EnVision FLEX DAB+ Substrate Chromogen System (Dako Omnis) 150 Pozostałe narzędzia: K8020 FLEX IHC Microscope Slides 500 (128714-001) P04120PL_001_GV800/ 2015.05 p. 1/11

Spis treści Strona/ Przeznaczenie... 3 Streszczenie i informalcje ogólne... 3 Odczynniki... 4 A. Dostarczane materiały... 4 B. Materiały wymagane, ale niedostarczane... 4 C. Odczynniki opcjonalne... 5 Środki ostroŝności... 6 Przechowywanie... 7 Przygotowanie odczynników... 7 Pobieranie i przygotowanie próbek... 8 Procedura... 8 Procedura barwienia... 8 Kontrola jakości... 10 Interpretacja wyników... 11 Ograniczenia... 11 Objaśnienie symboli... 11 (128714-001) P04120PL_001_GV800/ 2015.05 p. 2/11

Przeznaczenie Do badań diagnostycznych in vitro. Układ wizualizacji EnVision FLEX, High ph (Dako Omnis) jest przeznaczony do stosowania w immunohistochemii z narzędziami Dako Omnis. System wykrywa pierwotne przeciwciała mysie i królicze, a zachodząca reakcja jest wizualizowana przy uŝyciu chromogenu EnVision FLEX DAB+ Chromogen. W przypadku zastosowania z odczynnikiem EnVision FLEX+ Rabbit LINKER (nr kat. GV809) lub z odczynnikiem EnVision FLEX+ Mouse LINKER (nr kat. GV821) istnieje moŝliwość wzmocnienia sygnału odpowiednio pierwotnych przeciwciał króliczych lub pierwotnych przeciwciał mysich. Odczynniki EnVision FLEX są przeznaczone do stosowania na skrawkach tkankowych utrwalanych w formalinie i zatopionych w parafinie. Streszczenie i informalcje ogólne Układ wizualizacji EnVision FLEX jest systemem wszechstronnym z optymalnym wykonaniem odczytów w aparatach Dako Omnis zgodnie z protokołem zalecanym w niniejszej ulotce. Przed przystąpieniem do wykonywania odczynu utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie skrawki tkankowe są poddawane procedurom odparafinowania, nawodnienia, a następnie cieplnego odmaskowania epitopu (HIER) przy uŝyciu odczynnika wskazanego w ulotce dołączonej do opakowania przeciwciał pierwotnych. Zestaw zawiera EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (DM848). Zamiast tych odczynników moŝna uŝywać zalecanych produktów EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (nr kat. GV804) albo EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (nr kat. GV805). W przypadku niektórych pierwotnych przeciwciał zamiast cieplnego odmaskowania epitopu naleŝy przeprowadzić trawienie enzymatyczne. Aktywność peroksydazy endogennej naleŝy zablokować odczynnikiem EnVision FLEX Peroxidase- Blocking Reagent (DM841) wchodzącym w skład zestawu. Z uwagi na zastosowanie wysoce skutecznej procedury płukania i obecność białek stabilizujących w składzie odczynników Dako, nie jest konieczne wykonywanie dodatkowych procedur blokujących w celu osłabienia nieswoistego odczynu tła. Zaleca się stosowanie buforu Wash Buffer (20x) (GC807), dostępnego jako odczynnik opcjonalny. Zestaw nie zawiera przeciwciał pierwotnych. Zaleca się stosowanie Dako FLEX Ready-to-Use Primary Antibodies lub Dako concentrated Primary Antibodies (moŝna znaleźć w odpowiednich ulotkach dołączonych do wytycznych). W celu opcjonalnego wzmocnienia sygnału króliczych przeciwciał pierwotnych moŝna zastosować odczynnik EnVision FLEX+ Rabbit LINKER (nr kat. GV809). System EnVision FLEX+ Mouse LINKER (nr kat. GV821) moŝna stosować do wzmacniania sygnału mysich przeciwciał. Orientacyjnie: EnVision FLEX+ Rabbit LINKER zapewnia 2- do 3-krotne wzmocnienie sygnału a EnVision FLEX+ Mouse LINKER zapewnia 4- do 5-krotne wzmocnienie sygnału. Odczynnik Dako EnVision FLEX /HRP (DM842) wchodzący w skład zestawu zawiera szkielet dekstranowy, z którym sprzęŝonych jest wiele cząsteczek peroksydazy chrzanowej (HRP) i przeciwciał wtórnych. Do przeprowadzenia reakcji sprzęŝenia stosowany jest specjalny odczynnik umoŝliwiający związanie do 100 cząsteczek HRP i do 20 cząsteczek przeciwciał z jednym szkieletem. System substratów w zestawie składa się z dwóch odczynników: EnVision FLEX DAB+ Chromogen (DM847), roztworu diaminobenzydyny (DAB) o wysokim stęŝeniu, oraz EnVision FLEX Substrate Buffer (DM843) zawierającego nadtlenek wodoru. Przed uŝyciem EnVision FLEX DAB+ Chromogen naleŝy rozcieńczyć w buforze EnVision FLEX Substrate Buffer. Produkt reakcji systemu substratu ma kolor intensywnie brązowy i zlokalizowany jest w miejscu występowania antygenu. Odpowiednie wymieszanie chromogenu z buforem odbywa się automatycznie w Dako Omnis. Do barwienia kontrastowego zaleca się uŝycie odczynnika Hematoxylin (nr kat. GC808). Odczynnik ten daje wyrazisty niebieski odczyn jądrowy. Wybarwione skrawki tkankowe powinny być zatopione w środku opartym na rozpuszczalniku organicznym. (128714-001) P04120PL_001_GV800/ 2015.05 p. 3/11

Odczynniki A. Dostarczane materiały DM841 DM842 DM847 DM843 DM848 EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent (Dako Omnis) 8 x 22,5 ml, gotowy do uŝycia Bufor fosforanowy zawierający nadtlenek wodoru, 15 mmol/l NaN 3 i detergent. EnVision FLEX /HRP (Dako Omnis) 8 x 22,5 ml, gotowy do uŝycia Dekstran sprzęŝony z peroksydazą i wtórnymi przeciwciałami kozimi przeciwko immunoglobulinom króliczym i mysim. W buforowanym roztworze zawierającym białko stabilizujące i konserwant. EnVision FLEX DAB+ Chromogen (Dako Omnis) 8 x 1 ml Tetrachlorowodorek 3,3'-diaminobenzydyny w rozpuszczalniku organicznym. Odczynnik ten moŝe mieć róŝny kolor, od wyraźnie fioletowego do bezbarwnego, nie ma to jednak wpływu na działanie zestawu. EnVision FLEX Substrate Buffer (Dako Omnis) 16 x 26 ml Roztwór buforowany zawierający nadtlenek wodoru i konserwant. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (Dako Omnis) 9 x 68 ml, koncentrat 50x Bufor Tris/EDTA, ph 9 B. Materiały wymagane, ale niedostarczane Rozcieńczalnik do przeciwciał, np. Dako Antibody Diluent (nr kat S0809) Środek czyszczący Clearify Clearing Agent (nr kat. GC810) Gotowe do uŝycia przeciwciała pierwotne Dako FLEX Ready-to-Use Primary Antibodies lub odpowiednio rozcieńczone stęŝone pierwotne przeciwciała królicze lub mysie dostarczone przez firmę Dako Urządzenie Dako Omnis Przybory do urządzenia Dako Omnis Dako Proteinase K, Ready-to-Use (w razie potrzeby) (nr kat S3020) FLEX Universal Negative Control, Rabbit, Ready-to-Use (nr kat. GA600), FLEX Universal Negative Control, Mouse, Ready-to-Use (nr kat GA750), lub inny stosowny odczynnik kontroli ujemnej dla przeciwciał pierwotnych Hematoxylin (Dako Omnis) (nr kat. GC808) lub odpowiedni odczynnik hematoksylinowy do barwienia kontrastowego Szkiełka mikroskopowe, np. Dako FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020) Środek do zatapiania (oparty na rozpuszczalniku organicznym) i szkiełka nakrywkowe (128714-001) P04120PL_001_GV800/ 2015.05 p. 4/11

Bufor płuczący Wash Buffer (20x) (Dako Omnis) (nr kat. GC807) Kwas siarkowy 0.3 M (nr kat. GC203) C. Odczynniki opcjonalne GV804 DM848 GV805 DM849 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (Dako Omnis) 3 x 68 ml, koncentrat 50x Bufor Tris/EDTA, ph 9 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (Dako Omnis) 3 x 68 ml, koncentrat 50x Bufor cytrynianowy, ph 6,1 GC807 DM851 GC808 DM846 GV809 DM845 GV821 DM844 GV825 DM847 + DM843 Wash Buffer (20x) (Dako Omnis) 20 x 175 ml, koncentrat 20x Roztwór soli fizjologicznej z buforem TRIS zawierający Tween 20, ph 7,6 (±0,1). Hematoxylin (Dako Omnis) 8 x 22,5 ml, gotowy do uŝycia Wodny roztwór hematoksyliny. EnVision FLEX+ Rabbit LINKER (Dako Omnis) 1 x 22,5 ml, gotowy do uŝycia Buforowany roztwór zawierający białko stabilizujące i środek przeciwbakteryjny. EnVision FLEX+ Mouse LINKER (Dako Omnis) 1 x 22,5 ml, gotowy do uŝycia Buforowany roztwór zawierający białko stabilizujące i środek przeciwbakteryjny. EnVision FLEX DAB+ Substrate Chromogen System (Dako Omnis) EnVision FLEX DAB+ Chromogen (Dako Omnis) 2 x 1 ml Tetrachlorowodorek 3,3'-diaminobenzydyny w rozpuszczalniku organicznym. Odczynnik ten moŝe mieć róŝny kolor, od wyraźnie fioletowego do bezbarwnego, nie ma to jednak wpływu na działanie zestawu. EnVision FLEX Substrate Buffer (Dako Omnis) 4 x 26 ml Roztwór buforowany zawierający nadtlenek wodoru i konserwant. (128714-001) P04120PL_001_GV800/ 2015.05 p. 5/11

Środki ostroŝności 1. Do stosowania przez wyszkolony personel. 2. Odczynnik EnVision FLEX /HRP zawiera materiał pochodzenia zwierzęcego, a biorąc pod uwagę procedury wytwarzania, nie moŝna wykluczyć, Ŝe znajdują się w nim śladowe ilości materiału pochodzenia ludzkiego. Podobnie jak w przypadku kaŝdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŝy stosować odpowiednie procedury postępowania. 3. Nie wystawiać odczynników EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent, EnVision FLEX /HRP, EnVision FLEX Substrate Buffer, EnVision FLEX DAB+ Chromogen i EnVision FLEX Substrate Working Solution na silne światło. 4. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) zawiera 5-10% trometamol, 1-5% nonylofenol, oksyetylenowany, i 1-5% acetic acid, (ethylenedinitrilo)tetra-, disodium salt, dihydrate. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) jest oznaczony: H319 H411 P280 Uwaga P273 P264 P305 + P351 + P338 P337 + P313 P501 Działa draŝniąco na oczy. Działa toksycznie na organizmy wodne, powodując długotrwałe skutki. Stosować rękawice ochronne. Nosić okulary ochronne lub ochronę twarzy. Stosować odzieŝ ochronną. Unikać uwolnienia do środowiska. Dokładnie umyć ręce po uŝyciu. W PRZYPADKU DOSTANIA SIĘ DO OCZU: OstroŜnie płukać wodą przez kilka minut. Wyjąć soczewki kontaktowe, jeŝeli są i moŝna je łatwo usunąć. Nadal płukać. Jeśli podraŝnienie oczu się utrzymuje: Zgłosić się do lekarza po poradę. Zawartość i pojemnik usuwać zgodnie z lokalnymi, regionalnymi, krajowymi i międzynarodowymi przepisami. 5. Karta Charakterystyki Substancji Niebezpiecznej dla odczynnika EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent jest dostępna na Ŝądanie. 6. EnVision FLEX DAB+ Chromogen zawiera 1 5% bifenyl-3,3 ', 4,4'-tetrayltetraammonium czterochlorek i jest oznaczony jako: Niebezpieczeństwo H350 MoŜe powodować raka. H341 Podejrzewa się, Ŝe powoduje wady genetyczne. P201 Przed uŝyciem zapoznać się ze specjalnymi środkami ostroŝności. P202 Nie uŝywać przed zapoznaniem się i zrozumieniem wszystkich środków bezpieczeństwa. P280 Stosować rękawice ochronne. Nosić okulary ochronne lub ochronę twarzy. Stosować odzieŝ ochronną. P308 + P313 W PRZYPADKU naraŝenia lub styczności: Zwrócić się o pomoc lekarską. P405 Przechowywać pod zamknięciem. P501 Zawartość i pojemnik usuwać zgodnie z lokalnymi, regionalnymi, krajowymi i międzynarodowymi przepisami. Jako zasadę naleŝy przyjąć zakaz pracy z produktem osobom w wieku poniŝej 18 lat. UŜytkownicy muszą być szczegółowo przeszkoleni w zakresie prawidłowej procedury postępowania, niebezpiecznych właściwości produktu i niezbędnych środków ostroŝności. Dodatkowe informacje zawiera Karta Charakterystyki Substancji Niebezpiecznej. 7. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŝy nosić odpowiednie osobiste wyposaŝenie ochronne. 8. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z rozporządzeniami lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi. (128714-001) P04120PL_001_GV800/ 2015.05 p. 6/11

Przechowywanie Przechowywać odczynnik EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) w miejscu zaciemnionym w temperaturze 2-8 C. Przechowywać odczynniki EnVision FLEX Peroxidase- Blocking Reagent, EnVision FLEX /HRP, EnVision FLEX DAB+ Chromogen oraz EnVision FLEX Substrate Buffer w miejscu zaciemnionym w temperaturze 2-8 C. Przechowywać z zamkniętą pokrywką. Stabilność odczynników EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent, EnVision FLEX /HRP, EnVision FLEX DAB+ Chromogen oraz EnVision FLEX Substrate Buffer wynosi 75 godzin. Stabilność rozcieńczonego roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph i Low ph wynosi 7 dni. Pozostała stabilność systemu jest kontrolowana przez oprogramowanie Dako Omnis. Nie naleŝy uŝywać odczynników po upływie terminu waŝności podanego na fiolce. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŝ podane powyŝej, uŝytkownik musi zweryfikować takie warunki. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŝna wyjaśnić róŝnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z produktem, naleŝy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Przygotowanie odczynników A.1 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (DM848, nr kat. GV804) lub EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (DM849, nr kat. GV805) Przygotować roztwór roboczy poprzez rozcieńczenie koncentratu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) lub Low ph (50x) w proporcji 1:50 w wodzie destylowanej lub dejonizowanej. Zaleca się zastosowanie następującej procedury: 1. Wypełnić butelkę zbiorczą Dako Omnis wodą destylowaną lub dejonizowaną do zaznaczonej kreski (3,325 L). Przed wypełnieniem umieścić butelkę na płaskiej powierzchni. 2. Przelać zawartość jednej butelki 68 ml koncentratu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) lub Low ph (50x) (Dako Omnis) do butelki zbiorczej. 3. Przenieść etykietę z butelki po koncentracie i umieścić na butelce zbiorczej. 4. Dokręcić nakrętkę i delikatnie odwrócić butelkę do góry dnem 2-3 razy. Niewykorzystany rozcieńczony roztwór moŝna przechowywać w temperaturze 2-8 C przez jeden miesiąc. Jeśli rozcieńczony roztwór jest przechowywany w urządzeniu Dako Omnis, naleŝy go zuŝyć w ciągu 7 dni. W przypadku zmętnienia roztwór nie nadaje się do uŝycia. A.2 Wash Buffer (20x) (DM851, nr kat. GC807) Przygotować roztwór roboczy, rozcieńczając w butelce zbiorczej Dako Omnis koncentrat Wash Buffer (20x) (Dako Omnis) z wodą destylowana lub dejonizowaną w stosunku 1:20. W celu zminimalizowania tworzenia się piany zalecana jest następująca procedura: 1. Wypełnić butelkę zbiorczą Dako Omnis wodą destylowaną lub dejonizowaną do zaznaczonej kreski (3,325 L). Przed wypełnieniem umieścić butelkę na płaskiej powierzchni. 2. Przelać zawartość jednej butelki 175 ml koncentratu Wash Buffer (20x) (Dako Omnis) do butelki zbiorczej. 3. Przenieść etykietę z butelki po koncentracie i umieścić na butelce zbiorczej. 4. Dokręcić nakrętkę i delikatnie odwrócić butelkę do góry dnem 2-3 razy. Niewykorzystany rozcieńczony roztwór moŝna przechowywać w temperaturze 2-8 C przez jeden miesiąc. Jeśli rozcieńczony roztwór jest przechowywany w urządzeniu Dako Omnis, naleŝy go zuŝyć w ciągu 7 dni. Pozostała stabilność systemu jest kontrolowana przez oprogramowanie Dako Omnis. W przypadku zmętnienia roztwór nie nadaje się do uŝycia. A.3 EnVision FLEX Substrate Working Solution (128714-001) P04120PL_001_GV800/ 2015.05 p. 7/11

Roztwór roboczy substratów EnVision FLEX Substrate Working Solution zawierający DAB przygotowuje się w urządzeniu Dako Omnis. 1 jednostka roztworu EnVision FLEX DAB+ Chromogen (DM847) zostaje automatycznie wymieszana z 50 jednostkami buforu EnVision FLEX Substrate Buffer (DM843). Roztwór roboczy substratów przygotowywany jest kaŝdorazowo dla jednego statywu (zawierającego 1-5 preparatów). Dostarczone pojemności wystarczają na załadowanie 200 statywów. Pobieranie i przygotowanie próbek Próbki powinny mieć postać skrawków utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie. Czas utrwalania zaleŝy od rodzaju utrwalacza oraz typu/grubości tkanki. Przykładowo, bloczki tkankowe o grubości 3-4 mm powinny być utrwalane w obojętnej zbuforowanej formalinie przez 18-24 godziny. Optymalna grubość skrawków zatopionych w parafinie wynosi 4 µm. Próbki naleŝy zatapiać na szkiełkach mikroskopowych. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020). Próbki powinny być umieszczone na szkiełkach maksymalnie płasko i bez fałdowania. Zbyt duŝe pofałdowanie będzie miało wpływ na wynik odczynu. UWAGA: NaleŜy uŝywać szkiełek mikroskopowych o szerokości odpowiedniej dla urządzenia Dako Omnis. Informacje na temat wymaganych parametrów szkiełek mikroskopowych moŝna znaleźć w Podstawowym podręczniku uŝytkownika Dako Omnis. Skrawki parafinowe naleŝy zatapiać z podgrzanej łaźni wodnej z wodą destylowaną lub dejonizowaną. Łaźnia wodna nie powinna zawierać Ŝadnych dodatków (takich jak Ŝelatyna, poli-l-lizyna itp.). Skrawki naleŝy osuszyć poprzez ogrzewanie w temperaturze nie wyŝszej niŝ 60 C, w czasie nie dłuŝszym niŝ 60 minut. Aby zapewnić właściwe przyleganie skrawków do szkiełek, waŝne jest osuszenie wody spod skrawków przed rozpoczęciem suszenia. Procedura System wizualizacji EnVision FLEX został opracowany z myślą o uŝytkowaniu Dako Omnis wraz z pierwotnymi przeciwciałami Dako. Automatyczna procedura w Dako Omnis obejmuje odparafinowanie skrawków tkankowych, cieplne odmaskowanie antygenu, barwienie immunohistochemiczne oraz barwienie kontrastowe skrawków utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie. Poszczególne kroki protokołu dla automatycznych procedur mogą być wyświetlane, drukowane i edytowane zgodnie z informacjami zawartymi w Podstawowym i Zaawansowanym przewodniku uŝytkownika Dako Omnis. Wykonanie protokołu obróbki wstępnej i barwienia zaleŝy od przeciwciała. Odpowiednie instrukcje moŝna znaleźć w ulotce dołączonej do opakowania uŝywanych przeciwciał pierwotnych Dako. Przed zastosowaniem wybranego protokołu w urządzeniu Dako Omnis naleŝy dokładnie zapoznać się z Podstawowym podręcznikiem uŝytkownika Dako Omnis. Protokół EnVision FLEX został wstępnie umieszczony w oprogramowaniu Dako Omnis. Dokładne instrukcje przygotowania urządzenia do barwienia znajdują się w Podstawowym podręczniku uŝytkownika, natomiast dokładnych instrukcji wykonania protokołów naleŝy szukać w Szczegółowym podręczniku uŝytkownika. Procedura barwienia Optymalny protokół barwienia przy uŝyciu przeciwciał pierwotnych FLEX RTU dla Dako Omnis znajduje się w oprogramowaniu Dako Omnis. W celu zapoznania się z optymalną metodą obróbki wstępnej i czasem inkubacji dla danego przeciwciała pierwotnego FLEX RTU lub koncentratu przeciwciała pierwotnego Dako naleŝy odnieść się do ulotki dołączonej do opakowania. Do prostej konfiguracji nowego protokołu zalecane jest zastosowanie jednego z poniŝszych szablonów. (128714-001) P04120PL_001_GV800/ 2015.05 p. 8/11

Ze stacji roboczej Dako Omnis wybierz jeden z trzech szablonów protokołów zawierających zalecane etapy barwienia i czasy inkubacji dla systemu wizualizacji EnVision FLEX (Tabela 2): FLEX FLEX+ Mouse FLEX+ Rabbit Szablony protokołów mogą być wykorzystywane do generowania protokołów niestandardowych dla poszczególnych przeciwciał pierwotnych. W zaleŝności od potrzeb moŝna dostosować następujące etapy protokołu: Odczynnik do odmaskowania antygenu (cieplne odmaskowanie antygenu), temperatura i czas inkubacji Przeciwcialo pierwotne i czas inkubacji Czas inkubacji preparatów Labeled Polymer (tylko zmniejszenie) Odczynnik do barwienia kontrastowego i czas inkubacji UŜytkownik musi zweryfikować stosowany protokół. Jeśli protokoły są niedostępne w uŝywanym urządzeniu Dako Omnis, naleŝy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. (128714-001) P04120PL_001_GV800/ 2015.05 p. 9/11

Tabela 2. Przegląd systemu EnVision FLEX/FLEX + szablony protokołów. Faza Krok Odczynnik Szablon protokołu barwienia FLEX FLEX+ Mouse FLEX+ Rabbit Dewax Clearify Clearing Agent Tak Tak Tak Dewax Odmaskowan ie antygenu Odczyn Barwienie kontrastowe Odmaskowanie antygenu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph lub EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph lub 97±2 C* 30 min* 97±2 C* 30 min* 97±2 C* 30 min* Odczynnik niestandardowy Przeciwciała 20 min* 20 min* 20 min* 20 min* pierwotne Bloker enzymów EnVision FLEX Peroxidase- 3 min 3 min 3 min endogennych Blocking Reagent Drugi odczynnik EnVision FLEX+ Mouse lub - Mouse LINKER Rabbit LINKER Rabbit LINKER 10 min 10 min Płukanie Wash Buffer (Dako Omnis) - płukanie płukanie Labeled Polymer EnVision FLEX /HRP 20 min* 20 min* 20 min* Substrat chromogen EnVision FLEX Substrate Working Solution 5 min 5 min 5 min Barwnik Hematoxylin (Dako Omnis)* 3 min* 3 min* 3 min* kontrastowy Płukanie Woda dejonizowana płukanie płukanie płukanie * MoŜliwe jest dostosowanie. Procedura po barwieniu 1. Po zakończeniu procesu naleŝy usunąć statyw do szkiełek ze stacji rozładunkowej i umieścić statywy w świeŝo destylowanej wodzie. 2. Odwodnić, wyczyścić, zatopić preparaty za pomocą środka do trwałego zatapiania, przykryć szkiełka. Kontrola jakości W kaŝdej serii odczynów naleŝy uwzględnić jedną dodatnią próbkę kontrolną, co pozwoli potwierdzić prawidłowe działanie wszystkich zastosowanych odczynników. JeŜeli za pomocą kontroli dodatniej nie udaje się potwierdzić dodatniego odczynu, naleŝy uznać, Ŝe wyniki preparatów badanych są niewaŝne. Do kaŝdej próbki naleŝy zastosować odczynnik kontroli ujemnej w celu wykrycia ewentualnego odczynu nieswoistego. Jeśli nie jest moŝliwe jednoznaczne odróŝnienie odczynu nieswoistego od swoistego, naleŝy uznać, Ŝe wyniki preparatów badanych są niewaŝne. (128714-001) P04120PL_001_GV800/ 2015.05 p. 10/11

Interpretacja wyników Roztwór roboczy substratów zawierający diaminobenzydynę powoduje brązowe zabarwienie w miejscach występowania wykrywanych antygenów rozpoznawanych przez przeciwciała pierwotne. Brązowe zabarwienie powinno być widoczne w dodatniej próbce kontrolnej w oczekiwanych miejscach występowania wykrywanego antygenu. Jeśli dojdzie do powstania odczynu nieswoistego, moŝna będzie go rozpoznać jako rozmyte, brązowe odczyny na szkiełkach poddanych działaniu odczynnika kontroli ujemnej. Jądra komórkowe w barwieniu kontrastowym hematoksyliną barwią się na niebiesko. Ograniczenia 1. Do uŝutku zautomatyzowanego wyłącznie w urządzeniach Dako Omnis. Podczas barwienia z uŝyciem koncentratu przeciwciała pierwotnego Dako konieczne jest określenie i zweryfikowanie przez uŝytkownika optymalnej procedury. 2. Stosować wyłącznie do skrawków utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie. W przypadku zastosowania skrawków mroŝonych i rozmazów komórkowych konieczne jest określenie i zweryfikowanie przez uŝytkownika optymalnej procedury., chyba Ŝe wskazano w ulotce dołączonej do opakowania danego przeciwciała pierwotnego Dako. Zmiany w procedurze mogą mieć wpływ na ilość testów znajdujących się w zestawie. Objaśnienie symboli Numer katalogowy Temperatura przechowywania Numer serii Piktogram GHS (dział środki stroŝności) Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Przechowywać w ciemności ZuŜyć przed Piktogram GHS (dział środki stroŝności) Sprawdzić w instrukcji stosowania Zawiera odczynnik w ilooci wystarczaj1cej na <n> testów Producent Systemy Dako EnVision są chronione patentem USA nr 5,543,332 i patentem europejskim nr 594,772. Producent: Dako Denmark A/S Produktionsvej 42 DK-2600 Glostrup Dania/ Danemark/ Dänemark Tel.:+45 44 85 95 00 Faks+45 44 85 95 95 (128714-001) P04120PL_001_GV800/ 2015.05 p. 11/11