cobas DPX Dupleksowy test kwasu nukleinowego wirusa HAV i parwowirusa B19 do u ytku z cobas 6800/8800 Systems Do stosowania w diagnostyce in vitro

Transkrypt

1 Dupleksowy test kwasu nukleinowego wirusa HAV i parwowirusa B19 do u ytku z cobas 6800/8800 Systems Do stosowania w diagnostyce in vitro cobas DPX 96 P/N: cobas DPX Control Kit P/N: cobas Buffer Negative Control Kit P/N:

2 Spis tre ci Zastosowanie... 4 Podsumowanie oraz opis testu... 4 Odczynniki i materia y... 7 Odczynniki i kontrole do testu cobas DPX... 7 Odczynniki cobas omni do przygotowywania próbek Wymagania dotycz ce przechowywania i u ytkowania odczynników Wymagane materia y dodatkowe Wymagane urz dzenia i oprogramowanie Wymagania dotycz ce rodków ostro no ci i u ytkowania Ostrze enia i rodki ostro no ci U ytkowanie odczynników Dobra praktyka laboratoryjna Pobieranie, transport, przechowywanie i pulowanie próbek Próbki pochodz ce od dawców yj cych Instrukcja u ytkowania Automatyczne pipetowanie i pulowanie próbek (opcjonalne) Ustalanie warto ci odci cia dla parwowirusa B Uwagi proceduralne Wykonywanie testu cobas DPX Wyniki Kontrola jako ci i wa no wyników Interpretacja wyników Powtarzanie testu dla poszczególnych próbek Ograniczenia metody Ocena skuteczno ci w badaniach nieklinicznych Najwa niejsze parametry dzia ania testu próbki od dawców yj cych Granica wykrywalno ci (LoD) Zakres liniowy oznaczalno ci wirusa B Powtarzalno Precyzja Doc Rev

3 Reprezentatywno genotypowa HAV Weryfikacja genotypu dla parwowirusa B Swoisto analityczna Swoisto analityczna substancje wp ywaj ce na wynik testu Korelacja B d ca ego systemu Zanieczyszczenie pomi dzy próbkami Dodatkowe informacje Najwa niejsze cechy oznaczenia Oznaczenia Wytwórca i dystrybutorzy Znaki towarowe i patenty Copyright Pi miennictwo Wersja dokumentu cobas DPX Doc Rev

4 Zastosowanie Test cobas DPX to test in vitro do bezpo redniego ilo ciowego oznaczania DNA genotypów 1, 2 i 3 parwowirusa B19 i bezpo redniego wykrywania jako ciowego RNA genotypów I, II i III wirusa zapalenia w troby typu A (HAV) w osoczu ludzkim. cobas DPX Niniejszy test jest przeznaczony do stosowania jako test procesowy do oznaczania ilo ciowego DNA parwowirusa B19 albo do jednoczesnego oznaczania ilo ciowego DNA parwowirusa B19 oraz wykrywania RNA HAV w przeznaczonym do dalszego przetwarzania osoczu pobranym od dawców krwi pe nej, sk adników krwi lub osocza. Osocze od wszystkich dawców lub pul produkcyjnych mo e by badane w formie pojedynczych próbek lub pul z o onych z równych obj to ci poszczególnych próbek. Ten test nie jest przeznaczony do stosowania z próbkami krwi p powinowej. Test ten nie jest przeznaczony do stosowania jako pomoc w diagnozie parwowirusa B19 lub HAV. Podsumowanie oraz opis testu Informacje podstawowe: Badania przesiewowe krwi pod k tem zaka e wirusowych przenoszonych podczas transfuzji krwi Ludzki parwowirus B19 to niewielki, bezotoczkowy, zawieraj cy jednoniciowy DNA wirus nale cy do rodzaju Erythrovirus rodziny Parvoviridae. 1 Ludzkie erytrowirusy s pogrupowane w trzy ró ne genotypy: genotyp 1 (szczepy B19), genotyp 2 (szczepy A6) oraz genotyp 3 (szczepy V9/D91/1). 2,3 Niemal wszystkie próbki wirusa to genotyp 1. 1 Genotyp 2 wyst puje sporadycznie w Stanach Zjednoczonych, Europie i Ameryce Po udniowej, g ównie u pacjentów urodzonych przed 1940 r. 1 Genotyp 3 wyst puje g ównie w pó nocnej i zachodniej Afryce, ale by tak e identyfikowany we Francji. 1 Parwowirus B19 to powszechny patogen wyst puj cy na ca ym wiecie. Szansa wyst powania kr cych przeciwcia IgG anty-b19, wskazuj cych na przebyte zaka enie, ro nie z wiekiem i waha si od oko o 20% w wieku 1 do 4 lat, do ponad 60% u doros ych i nawet do 85% u osób w podesz ym wieku. 4-6 Chocia przeciwcia a wyst puj w populacji ogólnej, wiremia lub obecno DNA wirusa s rzadkie. 4 Objawy oraz ci ko choroby klinicznej zale od stanu immunologicznego oraz hematologicznego zaka onej osoby. 1,7,8 W przypadku osób immunokompetentnych zaka enie przebiega cz sto bezobjawowo lub objawy s agodne, obejmuj ce rumie zaka ny (choroba pi ta) u dzieci i artropati u doros ych. 1, 7,9,10 Wirus B19 mo e jednak powodowa równie powa ne schorzenia, takie jak przej ciowa niedokrwisto aplastyczna u pacjentów z zaburzeniami hematologicznymi i obrz k uogólniony p odu, niedokrwisto wrodzon oraz utrat p odu u ci arnych. 1,7,11-13 Wyst powanie parwowirusa B19 u dawców krwi i osocza waha si od 0,16% do 0,9%, najcz ciej z bardzo niskimi poziomami DNA wirusa Badania pochodz ce z sektora producentów osocza wskazuj na ni sz cz sto wyst powania. 19 Chocia parwowirus B19 jest normalnie przenoszony drog oddechow, mo e tak e by przenoszony za po rednictwem produktów osocza oraz przetaczania krwinek czerwonych. 1,20 W pi miennictwie dobrze opisano wykrywanie DNA parwowirusa B19 w produktach osocza oraz jego przekazywanie do ich biorców, w tym w koncentracie czynnika VIII, innych czynników krzepni cia oraz pulowanego osocza traktowanego detergentem Przenoszenie zwi zane z produktami osocza by o czone z wielko ci pul osocza, wyst powaniem ostrych, niewidocznych klinicznie zaka e wirusem B19, wysokim (do IU/ml) poziomem DNA wirusa w wiremicznych donacjach i oporno ci parwowirusa B19 na wi kszo standardowych metod inaktywacji lub usuwania wirusa, takich jak traktowanie rozpuszczalnikiem/detergentem (S/D) lub pasteryzacja. 20,21,27-30 Donoszono o bardzo nielicznych przypadkach klinicznych przenoszenia parwowirusa B19 wskutek przetaczania krwinek czerwonych. 20 Ponadto niezwykle rzadkie jest przenoszenie do biorców sk adników krwi zawieraj cych niskie do umiarkowanych poziomy DNA parwowirusa B19 (<10 6 IU/ml). 20 Doc Rev

5 HAV jest ma ym, pozbawionym otoczki wirusem RNA nale cym do grupy hepatowirusów z rodziny Picornaviridae. 31 HAV wyst puje na ca ym wiecie, jest przenoszony drog fekalno-oraln, g ównie w przypadku bliskiego, osobistego kontaktu Zidentyfikowano kilka genotypów i podtypów. 34 Epidemie wyst puj cz sto w krajach rozwijaj cych si, gdzie zaka enia wyst puj g ównie u osób we wczesnym okresie ycia, co skutkuje wysokim odsetkiem osób z przeciwcia ami przeciwko HAV w populacji W krajach uprzemys owionych spadek zapadalno ci oraz dost pno szczepionek spowodowa y, e zaka enia wyst puj g ównie u osób doros ych. 31,34 W pó nocnej Europie oraz w Japonii, Kanadzie i USA cz sto wyst powania w ogólnej populacji jest niewielka (ok. 0,01%), a zachorowania wyst puj g ównie w grupach podwy szonego ryzyka, na przyk ad u osób podró uj cych do regionów endemicznego wyst powania wirusa. 32,33 Zaka enia HAV u ludzi mog mie ró ny przebieg, od bezobjawowych, g ównie u ma ych dzieci, do zapalenia w troby o gwa townym przebiegu, i w niektórych przypadkach prowadz do zgonu. 31,32 HAV powoduje ostre zaka enie ust puj ce bez przewlek ego stanu nosiciela i w konsekwencji HAV rzadko jest zaka eniem zwi zanym z przetaczaniem. Banki krwi nie badaj donacji na obecno wirusa HAV polegaj c zamiast tego na wywiadzie medycznym dawców w celu wyeliminowania dawców z zapaleniem w troby w wywiadzie. 35 Donoszono o tylko kilku zaka eniach HAV, przenoszonych wskutek przetaczania, powoduj cych agodn chorob w troby. 36,37 Zaka ny HAV mo e by wykryty we krwi w okresie okienka serologicznego, jednak ryzyko przeniesienia HAV jest niewielkie podczas transfuzji. 35,38 Donoszono tak e o przenoszeniu HAV od dawców w stanie wiremii bezobjawowej HAV nie ma otoczki lipidowej i dlatego atwo ulega inaktywacji przez traktowanie S/D lub pasteryzacj, na przyk ad podczas wytwarzania produktów z osocza. 35 Dlatego donoszono o przenoszeniu HAV przez produkty osocza, g ównie czynniki krzepni cia. 36,39,40 Wprawdzie pojedyncza donacja mo e zawiera zarówno DNA parwowirusa B19 jak i RNA HAV, jednak cz sto wspó zaka enia parwowirusem B19 i HAV w populacji dawców nie jest dobrze zbadania ani udokumentowana w pi miennictwie Wyst puj rzadkie zg aszane przypadki wspó zaka enia parwowirusem B19 i HAV u niemowl t i dzieci, które nie nale do populacji dawców Ryzyko wspó zaka enia mo na obliczy na podstawie cz sto ci wyst powania ka dego wirusa. Cz sto zaka e HAV nie jest dobrze scharakteryzowana w populacji dawców, natomiast w populacji ogólnej wynosi ona ~0,01% a w populacji dawców osocza wyj ciowego jest mniejsza (~0,0004%). 32,33,44,45 Zwa ywszy, e cz sto zaka e parwowirusem B19 wynosi ~0,9% 14-18, obliczone ryzyko wspó zaka enia parwowirusem B19 i HAV wynosi ~0, % (0,0004% x 0,9%) lub 1 na ~ donacji. Uzasadnienie bada NAT Badania NAT mog by stosowane do wykrywania zaka enia HAV oraz parwowirusa B19. Na pocz tku 2000 r. w odpowiedzi na doniesienia o przenoszeniu obu wirusów z produktami osocza, niektórzy producenci osocza rozpocz li badania przesiewowe przeznaczonego do dalszego przetwórstwa osocza za pomoc testów NAT RNA HAV oraz DNA parwowirusa B Badania NAT, uznawane za testy procesowe, mia y na celu ograniczenie obci enia wirusem B19 pul osocza i wyeliminowanie próbek osocza zaka onych HAV. 47 W 2004 r. Farmakopea Europejska zacz a wymaga, aby wszyscy producenci zapewniali, by poziomy DNA parwowirusa B19 musia y by ni sze ni 10 4 IU/ml w pulach produkcyjnych stosowanych do wytwarzania ludzkiej immunoglobuliny anty-d oraz pulowanym osoczu ludzkim poddawanym inaktywacji wirusów. 48 Podobnie wytyczne FDA z 2009 r. zalecaj, aby producenci produktów z osocza wykonywali test NAT parwowirusa B19 na wszystkich produktach uzyskanych z osocza w celu zapewnienia, e obci enie DNA parwowirusa B19 w pulach produkcyjnych nie przekracza 10 4 IU/ml. 47 Ani ameryka skie, ani te europejskie agencje regulacyjne obecnie nie wymagaj testów NAT HAV pul osocza stosowanych do dalszego przetwórstwa, jednak w przypadku europejskich wymogów regulacyjnych pod warunkiem, e je eli testy NAT HAV s stosowane wobec pul produkcyjnych w ramach testów procesowych, test jest w stanie wykry kontrol zawieraj c 100 IU/ml RNA HAV. 49 Doc Rev

6 Obja nienie testu cobas DPX Test cobas DPX to test dupleksowy, który jest wykonywany z u yciem cobas 6800 System oraz cobas 8800 System. Test cobas DPX umo liwia jednoczesne ilo ciowe oznaczanie DNA genotypów 1, 2 i 3 parwowirusa B19 i wykrywanie jako ciowe RNA genotypów I, II i III wirusa zapalenia w troby typu A (HAV) w ludzkim osoczu. Zasady procedury Test cobas DPX opiera si na ca kowicie zautomatyzowanym przygotowaniu próbek (ekstrakcji i oczyszczaniu kwasów nukleinowych), po którym przeprowadzana jest amplifikacja i detekcja podczas reakcji PCR. cobas 6800/8800 System sk adaj si z modu u dostarczania próbek, modu u transferowego, modu u przetwarzania oraz modu u analitycznego. Automatyczne przetwarzanie danych jest prowadzone przez oprogramowanie cobas 6800/8800, które przypisuje wynik testu o warto ci ilo ciowej (w IU/ml) dla parwowirusa B19 wykorzystuj c standard Quantitation Standard (QS) oparty bezpo rednio na mi dzynarodowym standardzie WHO dla wirusa B Oprogramowanie cobas 6800/8800 przypisuje tak e wynik testu obecno ci wirusa zapalenia w troby typu A jako niereaktywny, reaktywny lub niewa ny. Wyniki mo na analizowa bezpo rednio na ekranie systemu lub wydrukowa w postaci raportu. Próbki mo na bada pojedynczo lub opcjonalnie w puli sk adaj cej si z kilku próbek. Je eli nale y przeprowadzi pulowanie, aparatu cobas p 680 lub oprogramowania cobas Synergy z urz dzeniem Hamilton Microlab STAR IVD (cobas Synergy Core) mo na opcjonalnie u y na etapie przedanalitycznym. Jednocze nie zachodzi ekstrakcja kwasu nukleinowego z próbki dawcy i dodanej kontroli wewn trznej Armored RNA oraz cz steczek standardu ilo ciowego QS DNA (które s u jako kontrola procesów przygotowywania próbek i amplifikacji/detekcji). Kwasy nukleinowe wirusów s uwalniane poprzez dodanie do próbki proteinazy i odczynnika do lizy. Uwolniony kwas nukleinowy wi e si z silikonow powierzchni dodanych szklanych cz stek magnetycznych. Niezwi zane substancje i zanieczyszczenia, takie jak zdenaturowane bia ka, pozosta o ci komórek i potencjalne inhibitory reakcji PCR (np. hemoglobina), s usuwane na kolejnych etapach z u yciem odczynnika p ucz cego, a oczyszczony kwas nukleinowy jest nast pnie wymywany w podwy szonej temperaturze ze szklanych cz stek z u yciem buforu do elucji. Wybiórcza amplifikacja docelowego kwasu nukleinowego z próbki dawcy jest osi gana poprzez zastosowanie swoistych dla wirusa starterów, sensownego (ang. forward) i antysensownego (ang. reverse), które s projektowane w obr bie wysoce konserwatywnych obszarów wirusowego kwasu nukleinowego. Do odwrotnej transkrypcji oraz amplifikacji wykorzystywana jest termostabilna polimeraza DNA. Odczynnik Master Mix zamiast trifosforanu deoksytymidyny (dttp) zawiera trifosforan deoksyurydyny (dutp), który jest wbudowywany do nowo syntetyzowanego DNA (amplikonu) Stanowi ce zanieczyszczenie amplikony z poprzednich reakcji PCR s niszczone na etapie podgrzewania podczas pierwszego cyklu termicznego reakcji za pomoc enzymu AmpErase [uracylo-n-glikozylaza], który znajduje si w mieszaninie Master Mix do reakcji PCR. Jednak nowo powsta e amplikony nie ulegaj degradacji, gdy enzym AmpErase jest inaktywowany w temperaturze przekraczaj cej 55 C. Odczynnik Master Mix cobas DPX zawiera sondy wykrywaj ce, które s swoiste dla kwasów nukleinowych wirusów B19 i HAV oraz standardu QS i kontroli wewn trznej. Swoiste dla wirusów B19, HAV, kontroli wewn trznej oraz standardu QS sondy wykrywaj ce s znakowane jednym z czterech unikatowych barwników fluorescencyjnych, pe ni cych rol barwnika reporterowego. Ka da sonda jest równie wyznakowana pi tym barwnikiem pe ni cym rol wygaszacza. Fluorescencja pochodz ca z ka dego z czterech barwników reporterowych jest mierzona przy okre lonej d ugo ci fali, co umo liwia jednoczesn detekcj oraz rozró nienie zamplifikowanych docelowych sekwencji wirusów B19, HAV, kontroli wewn trznej oraz standardu QS. 53,54 Sygna fluorescencyjny z nienaruszonych sond jest t umiony za pomoc barwnika wygaszaj cego. Podczas amplifikacji PCR hybrydyzacja sond do swoistych sekwencji jednoniciowej matrycy DNA skutkuje ci ciem nici przez polimeraz DNA w wyniku jej aktywno ci nukleazy w kierunku 5' do 3', co powoduje rozdzielenie barwników reporterowych i wygaszaj cego oraz wygenerowanie sygna u fluorescencyjnego. Z ka dym cyklem PCR generowana jest zwi kszaj ca si liczba rozszczepionych sond i jednocze nie wzrasta sumaryczny sygna Doc Rev

7 barwnika reporterowego. Poniewa fluorescencja czterech swoistych barwników reporterowych jest mierzona przy okre lonych d ugo ciach fali, mo liwa jest równoczesna detekcja i rozró nienie zamplifikowanych sekwencji docelowych wirusów B19, HAV oraz standardu QS i kontroli wewn trznej. Odczynniki i materia y Odczynniki i kontrole do testu cobas DPX Wszystkie nieotwarte odczynniki i kontrole nale y przechowywa zgodnie z zaleceniami, które zawiera Tabela 1 do Tabela 4. Tabela 1 Test cobas DPX cobas DPX Test Przechowywa w temperaturze 2 8 C Kaseta na 96 testów (P/N ) Elementy zestawu Sk ad odczynników Ilo na zestaw Roztwór proteinazy (PASE) Bufor Tris, < 0,05% EDTA, chlorek wapnia, octan wapnia, 8% proteinazy EUH210: Karta charakterystyki dost pna na danie. EUH208: Mo e powodowa wyst pienie reakcji alergicznej. Zawiera: subtylizyn, ml Kontrola wewn trzna i standard ilo ciowy DPX(DPX IC/QS) Bufor do elucji (EB) Odczynnik Master Mix 1 (MMX-R1) Odczynnik DPX Master Mix 2 (DPX MMX-R2) Bufor Tris, < 0,05% EDTA, < 0,01% konstruktu kontroli wewn trznej Armored RNA (niezaka nego RNA w bakteriofagu MS2), < 0,01% niezaka nego, syntetycznego DNA standardu ilo ciowego B19 QS op aszczonego bia kiem kapsydowym bakteriofaga lambda, < 0,002% poli-ra RNA (syntetycznego), < 0,1% azydku sodu Bufor Tris, 0,2% metylo-4-hydroksybenzoesan Octan magnezu, wodorotlenek potasu, < 0,1% azydku sodu Bufor trycynowy, octan potasu, glicerol, 18% dimetylosulfotlenku, Tween 20, EDTA, < 0,06% datp, dgtp, dctp, < 0,14% dutp, < 0,01% starterów sensownych i antysensownych dla parwowirusa B19, HAV, kontroli wewn trznej oraz standardu ilo ciowego, < 0,01% znakowanych fluorescencyjnie sond dla parwowirusa B19 i HAV, < 0,01% znakowanych fluorescencyjnie sond dla standardu QS B19 oraz kontroli wewn trznej HAV, < 0,01% aptameru oligonukleotydowego, < 0,01% polimerazy DNA Z05D, < 0,01% enzymu AmpErase (uracylo-n-glikozylazy) (pochodzenia bakteryjnego), < 0,1% azydku sodu 13 ml 13 ml 5,5 ml 6 ml Doc Rev

8 Tabela 2 cobas DPX Control Kit cobas DPX Control Kit Przechowywa w temperaturze 2 8 C (P/N ) Elementy zestawu Sk ad odczynników Ilo na zestaw Symbol bezpiecze stwa i ostrze enie* Podwójna kontrola dodatnia DPX (DPX D(+)C) < 0,001% syntetycznego (Armored) RNA HAV op aszczonego bia kiem kapsydowym bakteriofaga MS2, < 0,001% syntetycznego (plazmidowego) DNA parwowirusa B19 op aszczonego bia kiem kapsydowym bakteriofaga Lambda, prawid owe osocze ludzkie niewykazuj ce reaktywno ci w licencjonowanych testach wzgl dem przeciwcia przeciwko wirusowi B19, przeciwcia przeciwko wirusowi HCV, przeciwcia przeciwko wirusowi HIV-1/2, antygenu HBsAg, przeciwcia przeciwko HBc; RNA HIV-1 oraz RNA HAV niewykrywalnego metodami PCR. DNA B19 niewykrywalny metodami PCR lub poni ej poziomu wp ywaj cego na funkcjonalno kontroli ( 5 IU/ml). 0,1% substancja konserwuj ca ProClin ml (8 x 1 ml) Uwaga H317: Mo e powodowa reakcj alergiczn skóry. P261: Unika wdychania py u/dymu/ gazu/mg y/par/rozpylonej cieczy. P272: Zanieczyszczonej odzie y ochronnej nie wynosi poza miejsce pracy. P280: Stosowa r kawice ochronne. P302 + P352: W PRZYPADKU DOSTANIA SI NA SKÓR : Umy du ilo ci wody z myd em. P333 + P313: W przypadku wyst pienia podra nienia skóry lub wysypki: Zasi gn porady/zg osi si pod opiek lekarza. P363: Wypra zanieczyszczon odzie przed ponownym u yciem. Kontrola wysoko dodatnia DPX (DPX H(+)C) < 0,001% syntetycznego (plazmidowego) DNA parwowirusa B19 op aszczonego bia kiem kapsydowym bakteriofaga lambda, prawid owe osocze ludzkie niewykazuj ce reaktywno ci w licencjonowanych testach wzgl dem przeciwcia przeciwko wirusowi B19, przeciwcia przeciwko wirusowi HCV, przeciwcia przeciwko wirusowi HIV-1/2, HBsAg, przeciwcia przeciwko HBc; RNA HIV-1 oraz RNA HAV niewykrywalnego metodami PCR. DNA B19 niewykrywalny metodami PCR lub poni ej poziomu wp ywaj cego na funkcjonalno kontroli ( 5 IU/ml). 0,1% substancja konserwuj ca ProClin ml (8 x 1 ml) Uwaga H317: Mo e powodowa reakcj alergiczn skóry. P261: Unika wdychania py u/dymu/ gazu/mg y/par/rozpylonej cieczy. P272: Zanieczyszczonej odzie y ochronnej nie wynosi poza miejsce pracy. P302 + P352: W PRZYPADKU DOSTANIA SI NA SKÓR : Umy du ilo ci wody z myd em. P280: Stosowa r kawice ochronne. P333 + P313: W przypadku wyst pienia podra nienia skóry lub wysypki: Zasi gn porady/zg osi si pod opiek lekarza. P363: Wypra zanieczyszczon odzie przed ponownym u yciem. * Oznakowanie bezpiecze stwa produktu jest zasadniczo zgodne z wytycznymi GHS UE. Doc Rev

9 Tabela 3 cobas Buffer Negative Control Kit cobas Buffer Negative Control Kit Przechowywa w temperaturze 2 8 C (P/N ) Element zestawu Sk ad odczynników Ilo na zestaw Buforowa kontrola ujemna (Buffer-NC) Bufor fosforanowy, EDTA, 0,002% poli-ra RNA (syntetycznego), < 0,1% azydku sodu 16 ml (16 x 1 ml) Symbol bezpiecze stwa i ostrze enie Nie dotyczy Doc Rev

10 Odczynniki cobas omni do przygotowywania próbek Tabela 4 Odczynniki cobas omni do przygotowywania próbek* Odczynniki Sk ad odczynników Ilo na zestaw Symbol bezpiecze stwa i ostrze enie** cobas omni MGP Reagent (MGP) Przechowywa w temperaturze 2 8 C (P/N ) cobas omni Specimen Diluent (SPEC DIL) Przechowywa w temperaturze 2 8 C (P/N ) cobas omni Lysis Reagent (LYS) Przechowywa w temperaturze 2 8 C (P/N ) cobas omni Wash Reagent (WASH) Przechowywa w temp C (P/N ) Szklane cz stki magnetyczne, bufor Tris, 0,1% metylo-4-hydroksybenzoesan, < 0,1% azydku sodu Bufor Tris, 0,1% metylo-4-hydroksybenzoesan, < 0,1% azydku sodu 42,56% (udzia wagowy) tiocyjanian guanidyny, 5% (udzia wagowo-obj.) polidokanol, 2% (udzia wagowo-obj.) ditiotreitol, dwuwodny cytrynian sodu Dwuwodny cytrynian sodu, 0,1% metylo-4-hydroksybenzoesan 480 testów Nie dotyczy 4 x 875 ml Nie dotyczy 4 x 875 ml Niebezpiecze stwo H302: Dzia a szkodliwie po po kni ciu. H318: Powoduje powa ne uszkodzenie oczu. H412: Dzia a szkodliwie na organizmy wodne, powoduj c d ugotrwa e skutki. EUH032: W kontakcie z kwasami uwalnia bardzo toksyczne gazy. P301 + P312: W PRZYPADKU PO KNI CIA: W przypadku z ego samopoczucia skontaktowa si z O RODKIEM ZATRU lub z lekarzem. P264: Dok adnie umy skór po u yciu. P270: Nie je, nie pi i nie pali podczas u ywania produktu. P273: Unika uwolnienia do rodowiska. P280: Stosowa r kawice ochronne/ochron oczu/ochron twarzy. P305 + P351 + P338: W PRZYPADKU DOSTANIA SI DO OCZU: Ostro nie p uka wod przez kilka minut. Wyj soczewki kontaktowe, je eli s i mo na je atwo usun. Nadal p uka. P310: Natychmiast skontaktowa si z O RODKIEM ZATRU lub lekarzem. P330: Wyp uka usta. 4,2 l Nie dotyczy * Te odczynniki nie s do czone do zestawu testu cobas DPX. Nale y zapozna si z list wymaganych materia ów dodatkowych (Tabela 7). **Oznakowanie bezpiecze stwa produktu jest zasadniczo zgodne z wytycznymi GHS UE. Doc Rev

11 Wymagania dotycz ce przechowywania i u ytkowania odczynników Odczynniki nale y przechowywa i u ytkowa zgodnie z informacjami, które zawiera Tabela 5 i Tabela 6. Je li odczynniki nie s umieszczone w cobas 6800/8800 Systems, nale y przechowywa je w odpowiedniej temperaturze, zgodnie z informacjami, które zawiera Tabela 5. Tabela 5 Przechowywanie odczynników (umieszczonych poza systemem) Odczynnik cobas DPX 96 cobas DPX Control Kit cobas Buffer Negative Control Kit cobas omni Lysis Reagent cobas omni MGP Reagent cobas omni Specimen Diluent cobas omni Wash Reagent Temperatura przechowywania 2 8 C 2 8 C 2 8 C 2 8 C 2 8 C 2 8 C C Odczynniki umieszczone w cobas 6800/8800 Systems s przechowywane w odpowiedniej temperaturze, a ich data wa no ci jest monitorowana przez system. System umo liwia wykorzystanie odczynników tylko w przypadku spe nienia wszystkich warunków, które zawiera Tabela 6. System automatycznie uniemo liwia wykorzystanie przeterminowanych odczynników. Tabela 6 pozwala na zrozumienie warunków u ytkowania odczynników wymuszanych przez cobas 6800/8800 Systems. Tabela 6 Warunki dotycz ce daty wa no ci odczynników wymuszane przez cobas 6800/8800 Systems Odczynnik cobas DPX 96 Data wa no ci zestawu Stabilno otwartego zestawu Nieprzekroczona 30 dni od pierwszego u ycia Liczba cykli pracy, do których mo na wykorzysta zestaw Maksymalnie 10 przebiegów Stabilno na pok adzie urz dzenia ( czny czas w urz dzeniu poza lodówk ) Maksymalnie 8 godzin cobas DPX Control Kit Nieprzekroczona Nie dotyczy Nie dotyczy Maksymalnie 8 godzin cobas Buffer Negative Control Kit Nieprzekroczona Nie dotyczy Nie dotyczy Maksymalnie 10 godzin cobas omni Lysis Reagent cobas omni MGP Reagent cobas omni Specimen Diluent cobas omni Wash Reagent Nieprzekroczona 30 dni od umieszczenia w systemie* Nieprzekroczona 30 dni od umieszczenia w systemie* Nieprzekroczona 30 dni od umieszczenia w systemie* Nieprzekroczona 30 dni od umieszczenia w systemie* Nie dotyczy Nie dotyczy Nie dotyczy Nie dotyczy * Czas jest mierzony od umieszczenia po raz pierwszy odczynnika w cobas 6800/8800 Systems. Nie dotyczy Nie dotyczy Nie dotyczy Nie dotyczy Doc Rev

12 Wymagane materia y dodatkowe Tabela 7 Materia Materia y i materia y eksploatacyjne do u ytku z cobas 6800/8800 Systems P/N cobas omni Processing Plate cobas omni Amplification Plate cobas omni Pipette Tips cobas omni Liquid Waste Container cobas omni Lysis Reagent cobas omni MGP Reagent cobas omni Specimen Diluent cobas omni Wash Reagent Worek na odpady sta e Pojemnik na odpady sta e Wymagane urz dzenia i oprogramowanie Na urz dzeniu(-ach) nale y zainstalowa oprogramowanie cobas 6800/8800 oraz pakiet oprogramowania do analizy cobas DPX. Z systemem zostanie dostarczony serwer Instrument Gateway (IG). Tabela 8 Urz dzenia cobas 6800/8800 Systems P/N cobas 6800 System (opcja, na ruchomej platformie) i cobas 6800 System (nieruchomy) i cobas 8800 System Modu dostarczania próbek Opcje pipetowania i pulowania P/N Aparat cobas p Oprogramowanie cobas Synergy do stosowania z urz dzeniem Hamilton Microlab STAR IVD i Hamilton Microlab STAR IVD Dodatkowe informacje dotycz ce pierwotnych i wtórnych probówek na próbki akceptowanych przez urz dzenia zawiera podr cznik u ytkownika systemów cobas 6800/8800 i podr cznik u ytkownika aparatu cobas p 680 lub podr cznik u ytkownika oprogramowania cobas Synergy. Uwaga: Szczegó ow list zamówie na statywy na próbki, statywy na niedro ne ko cówki i zasobniki statywów akceptowane przez urz dzenia mo na uzyska po skontaktowaniu si z miejscowym przedstawicielstwem firmy Roche. Doc Rev

13 Wymagania dotycz ce rodków ostro no ci i u ytkowania Ostrze enia i rodki ostro no ci Podobnie jak w przypadku ka dej procedury testowej, dla prawid owego przeprowadzenia badania kluczowe znaczenie ma zachowanie zasad dobrej praktyki laboratoryjnej. Z uwagi na wysok czu o niniejszego testu podczas u ytkowania odczynników oraz mieszanin do amplifikacji nale y zachowa szczególn ostro no, aby zapobiec zanieczyszczeniu. Do stosowania wy cznie w diagnostyce in vitro. Ze wszystkimi próbkami nale y obchodzi si tak jak z materia em zaka nym, stosuj c procedury dobrej praktyki laboratoryjnej, takie jak okre lone w dokumentach Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories oraz CLSI Document M29-A4. 55,56 Procedur t powinien wykonywa wy cznie personel bieg y w u ytkowaniu testu cobas DPX, systemów cobas 6800/8800 i (opcjonalnie) aparatu cobas p 680 lub urz dzenia Hamilton Microlab STAR IVD korzystaj cych z cobas Synergy Core. Wszystkie materia y pochodzenia ludzkiego nale y uwa a za potencjalnie zaka ne i post powa z nimi z zastosowaniem ogólnych rodków ostro no ci. W przypadku rozlania materia u nale y natychmiast zdezynfekowa wie o przygotowanym 0,5% roztworem podchlorynu sodu w destylowanej lub dejonizowanej wodzie (wybielacz rozcie czony w stosunku 1:10) lub post powa zgodnie z procedurami przyj tymi w danej instytucji. Zestaw cobas DPX Control Kit zawiera osocze pochodz ce z krwi ludzkiej. Materia ród owy by badany z wykorzystaniem licencjonowanego testu i nie wykazywa obecno ci przeciwcia przeciwko IgG i IgM B19V, przeciwcia przeciwko HCV, przeciwcia przeciwko HIV-1/2, antygenu HBsAg ani przeciwcia przeciwko antygenowi HBc. Badanie prawid owego osocza ludzkiego metodami PCR wykaza o brak wykrywalnego HIV-1 (grupy M oraz O) RNA, RNA HIV-2, RNA HCV, DNA HBV, RNA HEV, RNA WNV lub DNA CMV, RNA HAV, a poziomy DNA B19 by y niewykrywalne lub na tyle niskie, aby nie wp ywa na funkcjonalno dodatnich kontroli DPX. adna ze znanych metod badania nie mo e zaoferowa ca kowitej pewno ci, e produkty otrzymane z ludzkiej krwi nie b d przenosi czynników zaka nych. Nie zamra a krwi pe nej. Zaleca si u ywanie ja owych jednorazowych pipet oraz ko cówek pipet wolnych od nukleazy. W celu zagwarantowania optymalnego dzia ania testu nale y stosowa wy cznie dostarczone lub wymienione potrzebne materia y eksploatacyjne. Karty charakterystyki (ang. Safety Data Sheet, SDS) s dost pne na danie w miejscowym przedstawicielstwie firmy Roche. ci le przestrzega podanych procedur i wytycznych w celu zapewnienia prawid owego wykonania testu. Wszelkie odchylenia od procedur i wytycznych mog mie wp yw na optymaln skuteczno testu. Je eli w trakcie obchodzenia si z próbkami i ich przygotowywania nie stosuje si odpowiedniej kontroli zanieczyszczenia mi dzy próbkami, mo e doj do wyst pienia fa szywie dodatnich wyników. Doc Rev

14 U ytkowanie odczynników cobas DPX Aby unikn zanieczyszczenia mi dzy próbkami lub kontrolami, z wszystkimi odczynnikami, kontrolami i próbkami nale y post powa zgodnie z zasadami dobrej praktyki laboratoryjnej. Przed u yciem nale y oceni wzrokowo ka d kaset z odczynnikami, rozcie czalnik, odczynnik do lizy i odczynnik p ucz cy, aby upewni si, e nie ma cho by najmniejszego wycieku. W razie wyst pienia wycieku nie wolno u ywa tego materia u do badania. cobas omni Lysis Reagent zawiera izotiocyjanian guanidyny, potencjalnie niebezpieczn substancj chemiczn. Nie dopuszcza do kontaktu odczynników ze skór, oczami i b onami luzowymi. Je eli dojdzie do kontaktu, natychmiast sp uka du ilo ci wody; w przeciwnym razie mog powsta oparzenia. Zestawy testu cobas DPX, cobas omni MGP Reagent oraz cobas omni Specimen Diluent zawieraj azydek sodu jako substancj konserwuj c. Nie dopuszcza do kontaktu odczynników ze skór, oczami i b onami luzowymi. Je eli dojdzie do kontaktu, natychmiast sp uka du ilo ci wody; w przeciwnym razie mog powsta oparzenia. Je eli dojdzie do rozlania wymienionych odczynników, przed wytarciem nale y rozcie czy je wod. Nie wolno dopuszcza do kontaktu cobas omni Lysis Reagent, zawieraj cego tiocyjanian guanidyny, z roztworem podchlorynu sodu (wybielaczem). Po czenie to mo e skutkowa wytworzeniem silnie truj cego gazu. Wszystkie materia y, które przypadkowo wesz y w kontakt z próbkami i odczynnikami, nale y usuwa zgodnie z przepisami krajowymi, stanowymi i lokalnymi. Dobra praktyka laboratoryjna Nie nale y pipetowa za pomoc ust. Nie je, nie pi ani nie pali w obszarach roboczych. Podczas obchodzenia si z próbkami i odczynnikami nale y nosi r kawice laboratoryjne, fartuch oraz os on oczu. W celu unikni cia zanieczyszczenia nale y zmienia r kawice pomi dzy obchodzeniem si z próbkami i u ytkowaniem zestawów cobas DPX oraz odczynników cobas omni. Podczas pracy z próbkami i kontrolami nale y unika zanieczyszczenia r kawic. Nale y dok adnie umy r ce po zako czeniu pracy z próbkami i odczynnikami z zestawu, a tak e po zdj ciu r kawic. Dok adnie oczy ci i odkazi wszystkie laboratoryjne powierzchnie robocze wie o przygotowanym roztworem 0,5% podchlorynu sodu w wodzie destylowanej lub dejonizowanej (rozcie czy domowy wybielacz w stosunku 1:10). Nast pnie nale y przetrze powierzchni 70% etanolem. Je li do rozlania p ynu dojdzie na powierzchni cobas 6800/8800 Systems, nale y post powa zgodnie z instrukcjami zamieszczonymi w podr czniku u ytkownika cobas 6800/8800 Systems w celu prawid owego wyczyszczenia i odka enia powierzchni urz dzenia (urz dze ). Doc Rev

15 Pobieranie, transport, przechowywanie i pulowanie próbek Uwaga: Ze wszystkimi próbkami nale y obchodzi si jak z materia em potencjalnie zaka nym. Wszystkie próbki dawców nale y przechowywa w okre lonych temperaturach. Podwy szona temperatura ma wp yw na stabilno próbek. Próbki pochodz ce od dawców yj cych cobas DPX Z testem cobas DPX mo na u ywa próbek osocza pobranych do próbówek z antykoagulantem EDTA, CPD, CPDA1, CP2D i 4% roztworem cytrynianu sodu. Nale y post powa zgodnie z instrukcjami producenta probówki/worka do pobierania próbek podczas ich u ywania i wirowania. Krew pobran na CPD, CPDA1, CP2D jako antykoagulant lub do probówek EDTA Plasma Preparation Tubes firmy Becton-Dickinson (BD PPT ) mo na przechowywa przez maksymalnie 12 dni w nast puj cych warunkach: o Próbki nale y odwirowa w ci gu 72 godzin po pobraniu. o W przypadku przechowywania w temperaturze powy ej 8 C próbki mo na przechowywa przez 72 godziny w temperaturze nieprzekraczaj cej 25 C i przez 24 godziny w okresie 72 godzin w temperaturze nieprzekraczaj cej 30 C. o W innych ni opisane sytuacjach próbki przechowuje si w temperaturze 2 8 C. Dodatkowo osocze oddzielone od elementów morfotycznych mo na przechowywa przez maksymalnie 30 dni w temperaturze 18 C z trzema cyklami zamra ania/rozmra ania. Nale y zapozna si z Ryc. 1. Ryc. 1 Warunki przechowywania próbek od dawców 30 CPD, CPDA1, CP2D jako antykoagulant lub probówki PPT Temperatura ( C) 25 8 Krew pe na < Zamro one osocze (maksymalnie 3 cykle zamra ania i rozmra ania) 0 30 Dni Doc Rev

16 Krew pobrana na antykoagulant EDTA musi by odwirowana w ci gu 72 godzin od pobrania i mo e by przechowywana w nast puj cych warunkach: o Przechowywanie do 12 dni w temperaturze 2 8 C. W przypadku przechowywania w temperaturze powy ej 8 C próbki mo na przechowywa przez 72 godziny w temperaturze nieprzekraczaj cej 25 C i przez 24 godziny w okresie 72 godzin w temperaturze nieprzekraczaj cej 30 C. Dodatkowo osocze oddzielone od komórek mo e by przechowywane w temperaturze 18 C przez maksymalnie 30 dni z jednym cyklem zamra ania/rozmra ania. Patrz Ryc. 2A. o Przechowywanie do 10 dni w temperaturze 2 8 C. W przypadku przechowywania w temperaturze powy ej 8 C próbki mo na przechowywa przez 72 godziny w temperaturze nieprzekraczaj cej 25 C i przez 24 godziny w okresie 72 godzin w temperaturze nieprzekraczaj cej 30 C. Dodatkowo osocze oddzielone od komórek mo e by przechowywane w temperaturze 18 C przez maksymalnie 30 dni z dwoma cyklami zamra ania/rozmra ania. Patrz Ryc. 2B. Ryc. 2 Warunki przechowywania próbek od dawców EDTA jako antykoagulant A) 30 B) Temperatura ( C) 8 Krew pe na Temperatura ( C) 8 Krew pe na 2 < Zamro one osocze (1 cykl zamra ania i rozmra ania) 2 < Zamro one osocze (Zamra anie/rozmra anie maksymalnie 2 razy) Dni Dni Osocze pobrane na antykoagulant 4% cytrynian sodu mo na przechowywa przez maksymalnie 30 dni w temperaturze 2 8 C. o W przypadku przechowywania w temperaturze powy ej 8 C próbki mo na przechowywa przez 72 godziny w temperaturze nieprzekraczaj cej 25 C i przez 24 godziny w okresie 72 godzin w temperaturze nieprzekraczaj cej 30 C. Je li próbki maj by przesy ane, nale y je opakowa i oznaczy zgodnie z odpowiednimi krajowymi i (lub) mi dzynarodowymi przepisami dotycz cymi transportu próbek i czynników etiologicznych. Doc Rev

17 Instrukcja u ytkowania Automatyczne pipetowanie i pulowanie próbek (opcjonalne) Aparatu cobas p 680 lub cobas Synergy Core mo na u y jako opcjonalnego elementu systemów cobas 6800/8800 do automatycznego pipetowania i mieszania porcji wielu próbek pierwotnych w celu uzyskania puli próbek. Wi cej informacji mo na znale w podr czniku u ytkownika cobas p 680 lub oprogramowania cobas Synergy. Ustalanie warto ci odci cia dla parwowirusa B19 cobas 6800/8800 Systems Kierownik laboratorium okre la warto odci cia miana B19V ustalaj c warto odci cia dla pul z 1. Wprowadzona tu warto jest u ywana przez oprogramowanie do przypisania wyniku B19V < warto ci odci cia lub B19V warto ci odci cia (Tabela 10). Oprogramowanie automatycznie oblicza wynik na podstawie wprowadzonej warto ci odci cia oraz wielko ci puli. Aby przypisa warto odci cia miana B19V: Warto odci cia DPX-B19V mo na znale w interfejsie u ytkownika (UI) wybieraj c Administration (Administracja) --> Settings (Ustawienia) --> Processing settings (Ustawienia przetwarzania) --> Roche tests (Testy Roche). Po wybraniu Settings (Ustawienia) DPX-B19V ASAP za pomoc przycisku Edit (Edytuj) mo na ustawi warto odci cia. Rozwi zanie cobas Synergy Ko cowe wyniki testu B19 i DPX s dost pne jedynie w oprogramowaniu cobas Synergy, ale nie w systemach cobas 6800/8800. Aby przydzieli warto ci odci cia mian B19V (na wielko puli w IU/ml), nale y post powa zgodnie z opisem w podr czniku u ytkownika oprogramowania cobas Synergy. Warto odci cia zaleca si ustawi w oprogramowaniu aparatu cobas 6800/8800 SW na 1. Uwagi proceduralne Nie nale y u ywa odczynników testu cobas DPX, cobas DPX Control Kit, cobas Buffer Negative Control Kit i odczynników cobas omni po up yni ciu ich daty wa no ci. Nie wykorzystywa ponownie materia ów eksploatacyjnych. S one przeznaczone do wy cznie jednorazowego u ytku. Prawid owa konserwacja aparatów, patrz podr cznik u ytkownika systemów cobas 6800/8800 lub oprogramowania cobas Synergy. Doc Rev

18 Wykonywanie testu cobas DPX cobas DPX Procedura testu jest szczegó owo opisana w podr czniku u ytkownika systemów cobas 6800/8800. Szczegó y opcjonalnych procedur pulowania, patrz podr cznik operatora aparatu cobas p 680 lub podr cznik u ytkownika oprogramowania cobas Synergy. Na Ryc 3 podsumowano t procedur. Ryc 3 Procedura testu cobas DPX Doc Rev

19 Wyniki cobas 6800/8800 System automatycznie okre la st enie DNA parwowirusa B19 dla próbek od dawców i kontroli. St enie DNA parwowirusa B19 wyra a si w jednostkach mi dzynarodowych IU (International Units) na mililitr IU/ml. Ponadto cobas 6800/8800 Systems automatycznie wykrywaj RNA HAV dla próbek i kontroli. Kontrola jako ci i wa no wyników W ka dej partii nale y uwzgl dni jedn kontrol ujemn [( )C] i dwie kontrole dodatnie [DPX D (+)C oraz DPX H (+)C]. W celu zagwarantowania wa no ci partii nale y sprawdzi w oprogramowaniu cobas 6800/8800 i (lub) w raporcie obecno oflagowa oraz powi zanych z nimi wyników. Partia jest wa na, je li nie ma oflagowa dla wszystkich trzech kontroli. Wyniki s uniewa niane automatycznie przez oprogramowanie cobas 6800/8800 na podstawie uzyskania niepomy lnych wyników kontroli ujemnej i kontroli dodatnich. Oflagowania kontroli Tabela 9 Oflagowania kontroli ujemnej i kontroli dodatnich Kontrola ujemna Oflagowanie Wynik Interpretacja ( ) C Q02 Invalid Ca a partia zostanie uniewa niona, je li wynik dla kontroli ( ) C b dzie niewa ny. Kontrola dodatnia Oflagowanie Wynik Interpretacja DPX D(+)C Q02 Invalid Wynik niewa ny lub obliczony wynik miana dla parwowirusa B19 nie mie ci si w okre lonym zakresie lub wynik jest niereaktywny dla HAV. Tylko B19: Wynik niewa ny, poniewa odpowiedni standard QS lub obliczony wynik miana dla parwowirusa B19 nie mie ci si w okre lonym zakresie. Tylko HAV: Wynik niewa ny, poniewa odpowiednia kontrola wewn trzna lub wynik HAV jest niereaktywny. DPX H(+)C Q02 Invalid Wynik oznaczony jako niewa ny lub obliczone miano dla kontroli wysoko dodatniej nie mie ci si w okre lonym zakresie. Je li partia zostanie uniewa niona, nale y powtórzy badanie ca ej partii z uwzgl dnieniem próbek i kontroli. Doc Rev

20 Interpretacja wyników W przypadku wa nej partii nale y sprawdzi w oprogramowaniu cobas 6800/8800 i (lub) raportach poszczególne próbki pod k tem oflagowa. Wyniki nale y interpretowa w nast puj cy sposób: cobas DPX Wa na partia mo e zawiera wa ne i niewa ne wyniki próbek dawców w zale no ci od oflagowa uzyskanych w przypadku poszczególnych próbek. Wyniki próbek s wa ne jedynie wtedy, gdy odpowiednie kontrole dodatnie oraz kontrola ujemna danej partii da y wa ny wynik. Dla ka dej próbki mierzone s jednocze nie cztery parametry: jeden dla parwowirusa B19, jeden dla HAV, jeden dla standardu ilo ciowego i jeden dla kontroli wewn trznej. Ostateczne wyniki testu cobas DPX dla próbek s przedstawiane przez oprogramowanie. Próbki od dawców z niewa nych pul nale y przebada ponownie. Oprócz wyników ogólnych w oprogramowaniu cobas 6800/8800 zostan wy wietlone wyniki poszczególnych materia ów docelowych, które nale y interpretowa w nast puj cy sposób: Tabela 10 Interpretacja wyników dla poszczególnych materia ów docelowych Wyniki materia u docelowego HAV Niereaktywny HAV Reaktywny B19 < warto ci odci cia B19 warto ci odci cia Niewa ny Interpretacja Nie wykryto sygna u materia u docelowego dla wirusa HAV przy obecno ci sygna u kontroli wewn trznej. Wykryto sygna materia u docelowego dla wirusa HAV przy obecno ci lub braku sygna u kontroli wewn trznej. Miano B19 jest mniejsze od zdefiniowanej przez u ytkownika warto ci odci cia; miano jest podane. B19 Niereaktywny: nie wykryto sygna u materia u docelowego dla DNA B19 i wykryto sygna QS. B19 < miana min.: wykryto B19 i obliczone miano jest poni ej dolnej granicy oznaczalno ci testu (LLoQ) testu. Uwaga: cobas p 680 warto odci cia B19 jest wy wietlana w oprogramowaniu systemów cobas 6800/8800. cobas Synergy warto odci cia B19 jest wy wietlana w oprogramowaniu cobas Synergy. Miano B19 jest wi ksze od zdefiniowanej przez u ytkownika warto ci odci cia; miano jest podane B19 > miana maks.: obliczone miano jest powy ej górnej granicy oznaczalno ci testu (ULoQ) testu. a Uwaga: cobas p 680 warto odci cia B19 jest wy wietlana w oprogramowaniu systemów cobas 6800/8800. cobas Synergy warto odci cia B19 jest wy wietlana w oprogramowaniu cobas Synergy. Nie wykryto sygna u HAV ani kontroli wewn trznej. Wyniki niereaktywne wobec HAV b d zg aszane jako nieprawid owe, je eli miano B19 jest >10 6 IU/ml. Sygna QS B19 nie zosta wykryty przy obecno ci lub braku sygna u materia u docelowego B19. a Je li wymagany jest wynik ilo ciowy, oryginaln próbk powinno si rozcie czy B19-ujemnym ludzkim osoczem z dodatkiem EDTA, po czym nale y powtórzy test. Otrzymany wynik nale y pomno y przez wspó czynnik rozcie czenia. Doc Rev

21 Powtarzanie testu dla poszczególnych próbek cobas DPX Próbki z ko cowym wynikiem niewa nym dla jednego z materia ów docelowych wymagaj powtórzenia testu niezale nie od uzyskania wyników wa nych dla pozosta ych materia ów docelowych. Powtórny wynik niewa nego HAV z powodu wysokiego miana B19 (>10 6 IU/ml) pozostanie niewa ny. Ograniczenia metody Test cobas DPX zosta oceniony jedynie pod k tem stosowania z cobas DPX Control Kit, cobas Buffer Negative Control Kit, cobas omni MGP Reagent, cobas omni Lysis Reagent, cobas omni Specimen Diluent oraz cobas omni Wash Reagent do u ytku z cobas 6800/8800 Systems. Uzyskanie wiarygodnych wyników zale y od prawid owych procedur pobierania, przechowywania i wykorzystywania próbek. Do przeprowadzenia tego testu nie nale y wykorzystywa heparynizowanego osocza, gdy heparyna hamuje przebieg reakcji PCR. Ten test zosta zatwierdzony wy cznie do badania osocza EDTA. Badanie innych rodzajów próbek mo e dawa nieprawid owe wyniki. Test ten nie jest przeznaczony do stosowania jako pomoc w diagnozie parwowirusa B19 lub HAV. Mutacje w obr bie wysoko konserwatywnych regionów genomu wirusowego, z którymi wi si startery i (lub) sondy u ywane w te cie cobas DPX chocia rzadkie mog wp ywa na wi zanie starterów i (lub) sond oraz spowodowa zani enie miana lub niewykrycie wirusa. Z uwagi na ró nice mi dzy technologiami zaleca si, aby przed zmian stosowanych metod u ytkownik przeprowadzi w laboratorium badania korelacji stosowanych metod w celu okre lenia wyst puj cych mi dzy nimi ró nic jako ciowych. U ytkownicy powinni post powa zgodnie z w asnymi okre lonymi zasadami/procedurami. Doc Rev

22 Ocena skuteczno ci w badaniach nieklinicznych Najwa niejsze parametry dzia ania testu próbki od dawców yj cych Granica wykrywalno ci (LoD) Mi dzynarodowe standardy WHO Granice wykrywalno ci (Limit of Detection, LoD) dla testu cobas DPX zosta y okre lone dla RNA HAV i DNA parwowirusa B19 z zastosowaniem mi dzynarodowych standardów WHO odpowiednio dla HAV (kod NIBSC 00/560) i dla parwowirusa B19 (kod NIBSC 99/802). Trzy niezale ne serie rozcie cze ka dego standardu wirusowego zosta y przygotowane w pulowanym, ujemnym pod wzgl dem obecno ci wirusów, osoczu ludzkim pobranym z antykoagulantem EDTA. Wszystkie serie rozcie cze badano przy u yciu trzech ró nych serii zestawu odczynników testu cobas DPX z oko o 21 powtórzeniami na seri, co da o w sumie oko o 189 powtórze na st enie. Do oszacowania granicy wykrywalno ci i dwustronnego, 95-procentowego znacznikowego przedzia u ufno ci zosta a u yta analiza PROBIT cznych danych ze wszystkich powtórze badanych dla ka dego wirusa. Tabela 11 do Tabela 13 podsumowuj ca kowite wyniki badania granicy wykrywalno ci. Tabela 11 Wyniki analizy PROBIT z wykorzystaniem danych LoD uzyskanych podczas oznacze standardów wirusowych w osoczu pobranym na EDTA Oznaczany sk adnik Jednostki miary LoD Dolna granica 95% przedzia u ufno ci Górna granica 95% przedzia u ufno ci HAV IU/ml 1,1 0,9 1,3 Parwowirus B19 IU/ml 13,9 11,7 17,4 Tabela 12 Zestawienie cz sto ci wyników reaktywnych dla wirusa HAV w osoczu pobranym na EDTA St enie RNA HAV (IU/ml) Liczba reaktywnych próbek Liczba wa nych powtórze testu % wyników dodatnich Dolny zakres 95% przedzia u ufno ci (jednostronny) % 98,1% % 98,1% 1, ,4% 98,9% 0, ,3% 81,7% 0, ,0% 55,7% Doc Rev

23 Tabela 13 Zestawienie cz sto ci wyników reaktywnych dla parwowirusa B19 w osoczu pobranym na EDTA St enie DNA parwowirusa B19 (IU/ml) Liczba reaktywnych próbek Liczba wa nych powtórze testu % wyników dodatnich Dolny zakres 95% przedzia u ufno ci (jednostronny) ,9% 96,2% ,4% 93,9% ,6% 87,9% ,7% 70,0% 2, ,1% 40,8% Zakres liniowy oznaczalno ci wirusa B19 Badanie liniowo ci oznaczalno ci parwowirusa B19 testu cobas DPX przeprowadzono z rozcie czeniami seryjnymi obejmuj cymi 12-elementowy panel obejmuj cy zamierzony zakres liniowy dominuj cego genotypu 1 parwowirusa B19. Przeprowadzono ocen wed ug wytycznych EP6-A CLSI. Trzy serie odczynników analizowano z wykorzystaniem trzech cobas 6800/8800 Systems, trzech operatorów i cznie w 16 powtórzeniach na element panelu i serie przez 12 dni badania. Badanie przeprowadzono z u yciem trzech serii odczynników. Zakres liniowy okre lono jako wynosz cy od 40 IU/ml do 1,00E+09 IU/ml (38,5 1,93E+09 IU/ml) i pokazuje bezwzgl dne odchylenie od lepiej pasuj cej regresji nieliniowej poni ej ±0,3 log 10 w ludzkim osoczu EDTA (patrz Ryc. 4). Ryc. 4 Okre lenie zakresu liniowego dla parwowirusa B19 w osoczu pobranym na EDTA Obserwowane miano log [jednostki st enia] Obserwacje W okre lonym zakresie Linia regresji Model sze cienny Górna granica odchylenia Dolna granica odchylenia Przypisane miano log [jednostki st enia] Doc Rev

24 Powtarzalno cobas DPX Powtarzalno testu cobas DPX oceniono dla trzech serii odczynników, trzech ró nych dni, czterech ró nych systemów/operatorów oraz zmienno ci mi dzyseryjnej. Wyniki dla serii odczynników podsumowuje Tabela 14. Tabela 14 Mi dzyseryjna powtarzalno odczynników Oznaczany sk adnik HAV St enie 2 x LoD 1 x LoD 0,5 x LoD Seria odczynnika Odsetek wyników reaktywnych (wyniki reaktywne / wa ne powtórzenia) Dolna granica 95% przedzia u ufno ci Górna granica 95% przedzia u ufno ci 1 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 2 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 3 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 1 98,4% (62/63) 91,5% 100,0% 2 96,8% (61/63) 89,0% 99,6% 3 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 1 79,4% (50/63) 67,3% 88,5% 2 90,5% (57/63) 80,4% 96,4% 3 92,1% (58/63) 82,4% 97,4% Precyzja Precyzj testu cobas DPX okre lono dla parwowirusa B19 przez analiz rozcie cze seryjnych próbki dodatniej pod wzgl dem parwowirusa B19 w ujemnym osoczu EDTA. Osiem poziomów rozcie cze zbadano w 48 powtórzeniach dla ka dego poziomu w trzech seriach odczynników testu cobas DPX przy u yciu trzech urz dze oraz trzech operatorów przez 12 dni. Ka da próbka przechodzi a ca procedur testu cobas DPX na w pe ni zautomatyzowanych cobas 6800/8800 Systems. Dlatego podana dok adno odzwierciedla wszystkie aspekty procedury badawczej. Wyniki przedstawia Tabela 15. Test cobas DPX dla parwowirusa B19 wykazywa wysok precyzj dla trzech serii odczynników badanych w zakresie st e od 1,00 E+03 do 2,0 E+09 IU/ml. Tabela 15 Precyzja wewn trzlaboratoryjna testu cobas DPX* St enie nominalne (IU/ml) St enie przypisane (IU/ml) Materia ród owy Osocze pobrane na EDTA Seria nr 1 Seria nr 2 Seria nr 3 Wszystkie serie SD SD SD Pulowane SD 2,00E+09 1,93E+09 Próbka kliniczna 0,08 0,05 0,04 0,06 1,00E+09 9,63E+08 Próbka kliniczna 0,05 0,06 0,04 0,05 1,00E+08 9,63E+07 Próbka kliniczna 0,04 0,07 0,04 0,05 1,00E+07 9,63E+06 Próbka kliniczna 0,04 0,04 0,03 0,04 1,00E+06 9,63E+05 Próbka kliniczna 0,12 0,04 0,04 0,08 1,00E+05 9,63E+04 Próbka kliniczna 0,06 0,05 0,02 0,05 1,00E+04 9,63E+03 Próbka kliniczna 0,06 0,12 0,04 0,08 1,00E+03 9,63E+02 Próbka kliniczna 0,05 0,09 0,04 0,06 * Uwa a si, i warto ci miana maj charakter rozk adu logarytmiczno-normalnego i s analizowane po zamianie na log 10. Kolumny odchylenia standardowego (SD) przedstawiaj ca kowite przekszta cone logarytmicznie miano dla ka dej z trzech serii odczynników. Doc Rev

25 Reprezentatywno genotypowa HAV cobas DPX Wydajno testu cobas DPX w wykrywaniu trzech genotypów HAV okre lano badaj c cznie 12 unikatowych próbek klinicznych, standard WHO HAV (kod NIBSC 00/560) oraz osiem izolatów z hodowli HAV o znanych genotypach. Wszystkie próbki kliniczne oraz izolaty z hodowli oznaczano ilo ciowo za pomoc testu cobas DPX wykorzystuj c metod bracketingu kalibratora. Wszystkie próbki kliniczne przebadano bez rozcie czenia i po rozcie czeniu z u yciem prawid owego osocza ludzkiego niezawieraj cego wirusa (HAV) i pobranego na EDTA do st enia na poziomie 3,6-krotno ci warto ci LoD testu cobas DPX. Wszystkie osiem izolatów z hodowli oraz standard WHO HAV przebadano po rozcie czeniu z u yciem prawid owego osocza ludzkiego niezawieraj cego wirusa (HAV) i pobranego na EDTA do st enia na poziomie 3,6-krotno ci warto ci LoD testu cobas DPX. Wszystkie próbki kliniczne i izolaty z hodowli wykryto bez rozcie czenia i (lub) w st eniu wynosz cym 3,6-krotno warto ci LoD (Tabela 16). Tabela 16 Próbki kliniczne i izolaty HAV z hodowli Genotyp Próbki kliniczne Izolaty z hodowli Odsetek wyników reaktywnych (wyniki reaktywne / przebadane próbki) nierozcie czone Odsetek wyników reaktywnych (wyniki reaktywne / przebadane próbki) rozcie czone do st enia 3,6 x LoD Odsetek wyników reaktywnych (wyniki reaktywne / przebadane próbki) rozcie czone do st enia 3,6 x LoD I A 100,0% (11/11) 100,0% (12/12)** Nie przebadano* I B 100,0% (1/1) 100,0% (1/1) 100,0% (1/1) II A Nie przebadano* Nie przebadano* 100,0% (1/1) II B Nie przebadano* Nie przebadano* 100,0% (1/1) III A Nie przebadano* Nie przebadano* 100,0% (3/3) III B Nie przebadano* Nie przebadano* 100,0% (2/2) * Niewystarczaj ca ilo do oznaczenia bez rozcie czenia/z rozcie czeniem ** W tym standard WHO HAV (kod NIBSC 00/560) Doc Rev

26 Weryfikacja genotypu dla parwowirusa B19 Wydajno testu cobas DPX na genotypach parwowirusa B19 oceniano w nast puj cy sposób: Weryfikacja granicy wykrywalno ci dla genotypów 1, 2 i 3 Weryfikacja liniowo ci dla genotypów 2 i 3 Weryfikacja granicy wykrywalno ci dla genotypów od 1 do 3 Próbki kliniczne DNA parwowirusa B19 dla trzech ró nych genotypów (1, 2, 3) rozcie czono do jednego poziomu w osoczu EDTA. Okre lenie wspó czynnika reaktywno ci przeprowadzono w 21 powtórzeniach. Badanie przeprowadzono z jedn seri odczynników cobas DPX. Wyniki dla osocza EDTA przedstawia Tabela 17. Wyniki te weryfikuj, e test cobas DPX wykry DNA parwowirusa B19 dla trzech ró nych genotypów przy st eniach 10,3 17,4 IU/ml ze wspó czynnikiem reaktywno ci wynosz cym 100%. Tabela 17 Reprezentatywno genotypów parwowirusa B19 Genotyp St enie Odsetek wyników reaktywnych (wyniki reaktywne / wa ne powtórzenia) Dolna granica 95% przedzia u ufno ci Górna granica 95% przedzia u ufno ci 1 17,4 IU/ml 100% (21/21) 83,9% 100,0% 2 10,3 IU/ml 100% (21/21) 83,9% 100,0% 3a 10,3 IU/ml 100% (21/21) 83,9% 100,0% Weryfikacja zakresu liniowego dla genotypów 2 i 3 Rozcie czenia seryjne stosowane podczas weryfikacji badania liniowo ci genotypów testu cobas DPX zawieraj siedem elementów panelu rozci gaj cego si na zamierzony zakres liniowy. Elementy panelu o wysokim mianie przygotowano z podstawowego DNA plazmidowego o wysokim mianie, natomiast elementy o niskim mianie przygotowano z panelu 1st WHO International Reference Panel dla genotypów parwowirusa B19 (NIBSC 09/110). Panel liniowo ci opracowano, aby mi dzy dwoma ród ami materia ów wyst powa o na o enie oko o 2 log 10. Zakres liniowy testu cobas DPX rozci ga si od LLoQ (40 IU/ml) do ULoQ (1,00E+09 IU/ml) i obejmowa jeden punkt decyzji medycznej. Badanie przeprowadzono z jedn seri odczynnika cobas DPX; zbadano 11 powtórze na poziom w osoczu EDTA. Zakres liniowy cobas DPX zweryfikowano dla obu genotypów (2 i 3). Maksymalne odchylenie mi dzy regresj liniow oraz lepiej pasuj c regresj nieliniow by o równe lub mniejsze ni 0,3 log 10. Swoisto analityczna Swoisto analityczna testu cobas DPX zosta a oceniona dla reaktywno ci krzy owej przez badanie panelu 27 drobnoustrojów przy 10 6 cz stek, IU, kopii lub CFU/ml jak pokazuje to Tabela 18. Drobnoustroje dodawano do prawid owego, ujemnego pod wzgl dem wirusa, ludzkiego osocza pulowanego i badano bez dodatku wirusa oraz z wirusem HAV lub parwowirusem B19 dodanym do uzyskania st enia wynosz cego 3-krotno warto ci LoD testu cobas DPX w przypadku HAV oraz 5-krotno warto ci LLoQ tego testu w przypadku parwowirusa B19. Wyniki niereaktywne uzyskano z testem cobas DPX w przypadku wszystkich próbek drobnoustrojów bez dodanego wirusa HAV lub parwowirusa B19 oraz wyniki reaktywne uzyskano w przypadku wszystkich próbek drobnoustrojów z dodanym wirusem HAV lub parwowirusem B19. Ponadto redni log 10 miana ka dej próbki dodatniej pod wzgl dem parwowirusa B19 zawieraj cej potencjalnie reaguj cy krzy owo mikroorganizm mie ci si w graniach ±0,5 log 10 redniej log 10 miana odpowiedniej dodanej kontroli. Badane drobnoustroje nie wykazuj reaktywno ci krzy owej ani nie zak ócaj dzia ania testu cobas DPX. Badane drobnoustroje nie zak ócaj dzia ania testu cobas DPX. Doc Rev

27 Tabela 18 Drobnoustroje badane pod k tem swoisto ci analitycznej Wirusy Flawiwirusy Bakterie Dro d aki Adenowirus 5 Wirus gor czki Zachodniego Escherichia coli Candida albicans Wirus Chikungunya Wirus gor czki Denga typu 1 Propionibacterium acnes Cytomegalowirus (CMV) Wirus Usutu Staphylococcus aureus Wirus Epsteina-Barra (EBV) Wirus zapalenia w troby typu B Wirus zapalenia w troby typu C Wirus zapalenia w troby typu E Wirus zapalenia w troby typu G Wirus opryszczki pospolitej typu 1 (HSV-1) Wirus opryszczki pospolitej typu 2 (HSV-2) Ludzki wirus opryszczki typu 6A Ludzki wirus niedoboru odporno ci (podtypy HIV-1M oraz HIV-2) Ludzki wirus T-limfotropowy typu I (HTLV I) Ludzki wirus T-limfotropowy typu II (HTLV II) Wirus grypy typu A Wirus ospy wietrznej pó pa ca Staphylococcus epidermidis Staphylococcus haemolyticus Streptococcus viridans Próbki osocza od ka dego stanu chorobowego, wymienionego Tabela 19, badano z dodatkiem wirusów HAV lub parwowirusów B19 do uzyskania st enia wynosz cego 3-krotno warto ci LoD testu cobas DPX w przypadku HAV, 5-krotno warto ci LLoQ tego testu w przypadku parwowirusa B19 oraz bez dodatku tych wirusów. Test cobas DPX dawa wyniki niereaktywne dla wszystkich próbek stanów chorobowych bez dodanego wirusa HAV lub parwowirusa B19. Test cobas DPX dawa wyniki reaktywne dla wszystkich próbek stanów chorobowych z dodanym wirusem HAV lub parwowirusem B19. Ponadto redni log 10 miana ka dej próbki dodatniej pod wzgl dem parwowirusa B19 zawieraj cej potencjalnie reaguj cy krzy owo mikroorganizm mie ci si w graniach ±0,5 log 10 redniej log 10 miana odpowiedniej dodanej kontroli. Te stany chorobowe nie zak óca y dzia ania testu cobas DPX. Tabela 19 Próbki dla poszczególnych stanów chorobowych przebadane pod k tem swoisto ci analitycznej Stan chorobowy Adenowirus typ 5 Wirus zapalenia w troby typu C Ludzki wirus T-limfotropowy typu I Wirus cytomegalii Wirus zapalenia w troby typu E Ludzki wirus T-limfotropowy typu II Wirus gor czki Denga Wirus opryszczki pospolitej typu 1 Wirus gor czki Zachodniego Nilu Wirus Epsteina-Barr Wirus opryszczki pospolitej typu 2 Wirus zapalenia w troby typu B Ludzki wirus upo ledzenia odporno ci (HIV-1M) Doc Rev

28 Swoisto analityczna substancje wp ywaj ce na wynik testu Endogenne substancje wp ywaj ce na wynik testu Przeprowadzono oznaczenia próbek osocza z nieprawid owo wysokimi st eniami trójglicerydów (do 33 g/l), hemoglobiny (do 2 g/l), bilirubiny niezwi zanej (do 0,2 g/l), bilirubiny zwi zanej (do 0,2 g/l), albuminy (do 60 g/l) oraz ludzkiego DNA (do 1,8 mg/l) po dodaniu wirusa HAV oraz parwowirusa B19 do uzyskania st enia wynosz cego 3-krotno warto ci LoD w przypadku HAV oraz 5-krotno warto ci LLoQ w przypadku parwowirusa B19 dla testu cobas DPX oraz bez dodatku tych wirusów. Próbki zawieraj ce wy ej wymienione substancje endogenne nie wp yn y na czu o ani swoisto testu cobas DPX. Egzogenne substancje wp ywaj ce na wynik testu Próbki prawid owego, ujemnego pod wzgl dem wirusa osocza ludzkiego EDTA zawieraj cego nieprawid owo wysokie st enia leków (Tabela 20) badano z i bez HAV oraz parwowirusa B19 dodanego do uzyskania st enia wynosz cego 3-krotno warto ci LoD w przypadku HAV oraz 5-krotno warto ci LLoQ w przypadku parwowirusa B19 testu cobas DPX. Wy ej wymienione substancje egzogenne nie wp yn y na czu o ani swoisto testu cobas DPX. Tabela 20 Próbki kliniczne badane z dodatkiem leków Nazwa badanego leku Acetaminofen Kwas acetylosalicylowy Kwas askorbinowy Atorwastatyna Fluoksetyna Ibuprofen Loratadyna Nadolol Naproksen Paroksetyna Chlorowodorek fenylefryny Sertralina St enie 1324 µmol/l 3620 µmol/l 342 µmol/l 600 µg Eq/l 11,2 µmol/l 2425 µmol/l 0,78 µmol/l 3,88 µmol/l 2170 µmol/l 3,04 µmol/l 491 µmol/l 1,96 µmol/l Doc Rev

29 Korelacja Ocena skuteczno ci testu cobas DPX w porównaniu z testem cobas TaqScreen DPX Wydajno testu cobas DPX oraz testu cobas TaqScreen DPX porównywano wykorzystuj c 84 próbek osocza dodatniego pod wzgl dem HAV w te cie NAT, 100 próbek osocza dodatniego pod wzgl dem parwowirusa B19 w te cie NAT oraz 100 próbek ujemnych pod wzgl dem wirusa HAV oraz parwowirusa B19. W przypadku próbek ujemnych w obu metodach wykazano swoisto na poziomie 100% poprzez uzyskanie 100 wyników niereaktywnych na 100 przebadane próbki. W przypadku próbek dodatnich pod wzgl dem wirusa HAV, test cobas DPX oraz test cobas TaqScreen DPX wykazywa y zgodno 84 na 84 próbek (Tabela 21). Wynik ten oznacza odsetek zgodno ci wyników dodatnich równy 100%. Tabela 21 Korelacja próbek dodatnich / ujemnych pod wzgl dem HAV Metody Wyniki HAV cobas TaqScreen DPX cobas DPX Próbki dodatnie Próbki ujemne Niereaktywne Niereaktywne Reaktywne Niereaktywne 0 0 Niereaktywne Reaktywne 0 0 Reaktywne Reaktywne 84 0 Ogó em Warto p w te cie McNemara (dwustronny, = 0,05) 1,00 1,00 Wyniki dodatnie pod wzgl dem parwowirusa B19 badano za pomoc testu cobas DPX oraz testu cobas TaqScreen DPX w powtórzeniach. Przeprowadzono analiz regresji Deminga. rednie odchylenie miana próbek badanych dwoma testami wynosi o 0,15 log 10. Ponadto w obr bie zakresu miana 1,0E+03 1,0E+06 IU/ml rednie odchylenie miana w dwóch testach wynosi o 0,14 log 10. Ryc. 5 zawiera wyniki regresji Deminga. Doc Rev

30 Ryc. 5 Analiza regresji testu cobas DPX w porównaniu z testem cobas TaqScreen DPX, 100 próbek dodatnich pod wzgl dem parwowirusa B19 rednia log10 miana testu cobas TaqScreen DPX y = 0,96x + 0,05 R 2 = 0,99 Linia regresji Deminga rednia log10 miana testu cobas DPX B d ca ego systemu Cz stotliwo b du ca ego systemu dla testu cobas DPX okre lono badaj c 100 powtórze osocza EDTA z dodanym wirusem HAV oraz parwowirusem B19. Próbki oznaczono przy st eniach docelowych wynosz cych w przybli eniu 3-krotno warto ci LoD, a oznaczenia wykonywano w pulach z jednej próbki (nierozcie czonych). Badanie zosta o przeprowadzone z wykorzystaniem cobas 8800 System wraz z cobas p 680 instrument (pipetowanie i pulowanie). Wyniki tego badania wykaza y, e we wszystkich powtórzeniach stwierdzono reaktywno wzgl dem parwowirusa B19, co da o cz sto wyst powania b du systemowego na poziomie 0%. Dolna granica dwustronnego 95% dok adnego przedzia u ufno ci wynios a 0%, a górna 3,62% [0%: 3,62%]. Wyniki tego badania wykaza y, e w przypadku 99 na 100 powtórze stwierdzono reaktywno wzgl dem HAV, co da o cz sto wyst powania b du systemowego na poziomie 1%. Dolna granica dwustronnego 95% dok adnego przedzia u ufno ci wynios a 0%, a górna 5,45% [0%: 5,45%]. Zanieczyszczenie pomi dzy próbkami Cz sto wyst powania zanieczyszczenia pomi dzy próbkami w te cie cobas DPX okre lono poprzez oznaczenie w 239 powtórzeniach buforu kontroli ujemnej i 223 powtórze wysokiego miana parwowirusa B19 na poziomie 1,00E+08 IU/ml. Badanie przeprowadzono z wykorzystaniem cobas 8800 System. cznie wykonano pi przebiegów z u yciem próbek dodatnich i ujemnych w uk adzie naprzemiennym. Wszystkie 239 powtórze dla bufora kontroli ujemnej by y niereaktywne, co da o cz sto wyst powania zanieczyszczenia pomi dzy próbkami na poziomie 0%. Dolna granica dwustronnego 95% dok adnego przedzia u ufno ci wynios a 0%, a górna 1,53% [0%: 1,53%]. Doc Rev

31 Dodatkowe informacje Najwa niejsze cechy oznaczenia Rodzaj próbki Osocze Wymagana ilo próbki 1000 µl Przetwarzana ilo próbki 850 µl Czas trwania testu Wyniki s dost pne w ci gu mniej ni 3,5 godziny po umieszczeniu próbki w systemie. Doc Rev

32 Oznaczenia Na etykietach produktów diagnostycznych Roche PCR stosuje si nast puj ce oznaczenia. Tabela 22 Oznaczenia stosowane na etykietach produktów diagnostycznych Roche PCR Oprogramowanie pomocnicze Wyrób do diagnostyki in vitro Autoryzowany Przedstawiciel we Wspólnocie Europejskiej Dolna granica przypisanego zakresu Arkusz kodów kreskowych Wytwórca Kod partii Przechowywa z dala od wiat a Zagro enie biologiczne Zawarto wystarczaj ca na <n> testów Numer katalogowy Przestrzega zakresu temperatury Sprawd w instrukcji obs ugi Plik definicji testów Zawarto zestawu Górna granica przypisanego zakresu Dystrybucja Termin wa no ci Wy cznie do oceny dzia ania w badaniach IVD Numer pozycji handlu globalnego Ten produkt spe nia wymogi dyrektywy Wspólnoty Europejskiej 98/79/WE dotycz cej diagnostycznych urz dze medycznych do stosowania in vitro. Linia pomocy technicznej dla klientów w Stanach Zjednoczonych Doc Rev

33 Wytwórca i dystrybutorzy Tabela 23 Wytwórca i dystrybutorzy Wyprodukowano w Stanach Zjednoczonych Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Strasse Mannheim, Germany Roche Diagnostics (Schweiz) AG Roche Diagnostics Industriestrasse 7 201, boulevard Armand-Frappier 6343 Rotkreuz, Switzerland H7V 4A2 Laval, Québec, Canada (For Technical Assistance call: Roche Diagnostics GmbH Pour toute assistance technique, Sandhofer Strasse 116 appeler le: ) Mannheim, Germany Roche Diagnostics Roche Diagnostics, SL 2, Avenue du Vercors Avda. Generalitat, Meylan, France E Sant Cugat del Vallès Barcelona, Spain Distributore in Italia: Roche Diagnostics S.p.A. Roche Diagnostica Brasil Ltda. Viale G. B. Stucchi 110 Av. Engenheiro Billings, Monza, Milano, Italy Jaguaré, Building São Paulo, SP Brazil Distribuidor em Portugal: Roche Sistemas de Diagnósticos Lda. Estrada Nacional, Amadora, Portugal Znaki towarowe i patenty Patrz Copyright 2016 Roche Molecular Systems, Inc. Doc Rev