cobas 4800 HPV Test DO STOSOWANIA W DIAGNOSTYCE IN VITRO.

Transkrypt

1 cobas 4800 HPV Test DO STOSOWANIA W DIAGNOSTYCE IN VITRO. cobas 4800 System Sample Preparation Kit c4800 SMPL PREP 960 Tests P/N: Tests P/N: cobas 4800 HPV Amplification/Detection Kit c4800 HPV AMP/DET 960 Tests P/N: Tests P/N: cobas 4800 HPV Controls Kit c4800 HPV CTLS 10 Sets P/N: cobas 4800 System Liquid Cytology Preparation Kit c4800 LIQ CYT 960 Tests P/N: Tests P/N: cobas 4800 System Wash Buffer Kit c4800 WB 960 Tests P/N: Tests P/N: UWAGA: Zakup niniejszego produktu umo liwi nabywcy zastosowanie go do amplifikacji i detekcji sekwencji kwasu nukleinowego z zastosowaniem reakcji a cuchowej polimerazy (PCR) oraz zwi zanych z ni procesów w ramach diagnostyki in vitro z u yciem materia u ludzkiego. Wraz z nabyciem niniejszego produktu nabywca nie otrzymuje adnego patentu ogólnego ani innej licencji, oprócz prawa do okre lonego, szczególnego zastosowania produktu. ZASTOSOWANIE Test cobas 4800 Human Papillomavirus (HPV) jest jako ciowym testem in vitro s u cym do wykrywania wirusa brodawczaka ludzkiego w próbkach pacjentek. Do detekcji 14 typów wirusa HPV o wysokim stopniu ryzyka (ang. high-risk HR) w te cie tym, w ramach pojedynczej analizy, wykorzystuje si amplifikacj docelowego DNA przez reakcj a cuchowej polimerazy (PCR) oraz hybrydyzacj kwasów nukleinowych. Test pozwala na oznaczenie szczególnie typów wirusa HPV 16 i HPV 18 i równoczesne wykrycie innych typów o wysokim stopniu ryzyka (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 i 68) przy klinicznie istotnych poziomach zaka no ci. Próbki s ograniczone do komórek szyjki macicy pobieranych do pod o a do przechowywania pobranych komórek cobas PCR Cell Collection Media (Roche Molecular Systems, Inc.), p ynnego pod o a PreservCyt (Hologic Corp.) oraz p ynu konserwuj cego SurePath TM (BD Diagnostics-TriPath). Wskazania do stosowania testu cobas 4800 HPV s nast puj ce: (a) Test cobas 4800 HPV jest wskazany do u ycia jako badanie przesiewowe u pacjentek, których wyniki cytologii szyjki macicy wykaza y ASC-US (atypowe komórki nab onka p askiego szyjki macicy o nieokre lonym znaczeniu, ang. atypical squamous cells of undetermined significance), w celu okre lenia potrzeby skierowania ich na kolposkopi. (b) Test cobas 4800 HPV jest wskazany do u ycia jako badanie przesiewowe u pacjentek, których wyniki cytologii szyjki macicy wykaza y ASC-US w celu oceny obecno ci lub braku genotypów 16 i 18 wirusa HPV o wysokim stopniu ryzyka. (c) Test cobas 4800 HPV jest wskazany do u ycia dodatkowo obok cytologii szyjki macicy w celu oceny obecno ci lub braku typów wirusa HPV o wysokim stopniu ryzyka. (d) Test cobas 4800 HPV jest wskazany do u ycia dodatkowo obok cytologii szyjki macicy w celu oceny obecno ci lub braku genotypów 16 i 18 wirusa HPV. (e) Test cobas 4800 HPV jest wskazany do u ycia jako pierwotne badanie przesiewowe pierwszego rzutu w celu identyfikacji kobiet, u których wyst puje zwi kszone ryzyko rozwoju raka szyjki macicy lub obecno ci choroby w wysokim stopniu zaawansowania. (f) Test cobas 4800 HPV jest wskazany do u ycia jako pierwotne badanie przesiewowe pierwszego rzutu w celu oceny obecno ci lub braku genotypów 16 i 18 wirusa HPV. Wyniki testu cobas HPV cznie z dokonan przez lekarza ocen wcze niejszych bada cytologicznych, innych czynników ryzyka i znanych lekarzowi wytycznych mog s u y jako wskazówka do wyboru sposobu leczenia pacjentki. Wyniki testu cobas HPV nie powinny by powodem rezygnacji z kolposkopii u kobiet. PODSUMOWANIE ORAZ OPIS TESTU D ugotrwa e zaka enie wirusem brodawczaka ludzkiego (HPV) jest przyczyn raka szyjki macicy oraz jego prekursora neoplazji ródnab onkowej szyjki macicy (ang. cervical intraepithelial neoplasia CIN) 1-3. Obecno zaka enia wirusem HPV mo na domniemywa w ponad 99% przypadków raka szyjki macicy na ca ym wiecie 3. HPV jest ma ym wirusem pozbawionym otoczki, zawieraj cym dwie nici DNA, którego genom sk ada si z oko o 8000 nukleotydów. Istnieje przesz o 118 ró nych typów HPV 4,5 i oko o 40 ró nych gatunków wirusa HPV, które mog zaka a b on luzow w okolicy odbytowo-p ciowej cz owieka 6,7. Jednak tylko cz spo ród typów od 13 do 18 jest uwa ana za wirusy wysokiego ryzyka dla rozwini cia si raka szyjki macicy i jego zmian prekursorowych 3,8-13. W analizie danych wieloo rodkowego badania porównawczego przypadków Mi dzynarodowej Agencji Bada nad Rakiem (International Agency of Research on Cancer, IARC) iloraz szans (ang. Odds Ratio OR) dla raka p askonab onkowego z powodu zaka enia wirusem HPV wynosi 158,2, przy czym analiza by a ograniczona do bada z zastosowaniem zatwierdzonych technik detekcji wirusa HPV 12. W badaniu tym iloraz szans dla raka szyjki macicy wynosi od 109 do 276 w badaniach z ró nych cz ci wiata 12. Chocia d ugotrwa e zaka enie wirusem HPV o wysokim stopniu ryzyka (HR) stanowi niezb dny czynnik powstania raka szyjki macicy i jego zmian prekursorowych, bardzo niewielki procent tych zaka e prowadzi do rozwini cia si opisanych stanów chorobowych. Zaka enie wirusem HPV przenoszone drog p ciow jest niezwykle cz ste, przy szacunkowej cz sto ci dochodz cej do 75% wszystkich kobiet nara onych na ekspozycj na wirusa 14. Jednak > 90% zaka onych kobiet rozwinie skuteczn odpowied immunologiczn i zwalczy zaka enie w okresie od 6 do 24 miesi cy, bez wyst pienia jakichkolwiek nast pstw zdrowotnych Zaka enie dowolnym typem wirusa HPV mo e wywo a neoplazj ródnab onkow szyjki macicy (CIN), cho po zwalczeniu zaka enia wirusem HPV takie niebezpiecze stwo zwykle tak e zanika 21. Cz Informacje na temat wersji dokumentu znajduje si na ko cu tego dokumentu PL 1 Doc Rev. 13.0

2 W krajach rozwini tych, prowadz cych przesiewowe programy wykrywania raka szyjki macicy, od po owy lat 50. stosuje si rozmaz Pap jako podstawowe narz dzie wykrywania wczesnych prekursorów raka szyjki macicy. Chocia badanie to spektakularnie zmniejszy o w tych krajach wska niki umieralno ci z powodu raka szyjki macicy, jednak rozmaz Pap wymaga interpretacji przez bardzo do wiadczonego cytopatologa i jest to test o relatywnie niskiej dok adno ci, z wysokim odsetkiem wyników fa szywie ujemnych. Nieprawid owe cechy cytologiczne, obserwowane w rozmazie Pap, s wywo ywane przede wszystkim przez infekcj wirusem HPV, jednak ró norodne zmiany o pod o u zapalnym b d zwi zane ze sposobem pobierania próbek mog skutkowa fa szywie dodatnimi wynikami rozmazu Pap. W przypadku nieprawid owego wyniku rozmazu Pap post powanie z wyboru obejmuje: powtórzenie badania, kolposkopi oraz biopsj. Histologicznie potwierdzone zmiany wysokiego stopnia wymagaj usuni cia chirurgicznego w celu zapobie enia rozwojowi inwazyjnego raka szyjki macicy. Wirus brodawczaka ludzkiego jest niezwykle trudny do hodowania in vitro, a nie wszyscy pacjenci zaka eni HPV wykazuj mo liw do zaobserwowania reakcj z wytworzeniem przeciwcia. Badanie kwasu nukleinowego (DNA) za pomoc reakcji PCR jest nieinwazyjn metod stwierdzenia obecno ci zaka enia szyjki macicy wirusem HPV. Wprowadzenie badania DNA w kierunku obecno ci wirusa HPV zwi kszy o skuteczno programów bada przesiewowych dotycz cych wykrywania raka szyjki macicy dzi ki wcze niejszemu wykrywaniu zmian wysokiego ryzyka u kobiet po 30. roku ycia z wynikiem NILM badania cytologicznego oraz zmniejszeniu zapotrzebowania na niepotrzebn kolposkopi i leczenie u pacjentek po 21. roku ycia z wynikiem ASC-US badania cytologicznego. Ponadto dobrze udokumentowano wy sz czu o badania na obecno wirusa HPV w porównaniu z rozmazami Pap w wykrywaniu choroby o wysokim stopniu zaawansowania w populacji poddawanej badaniom przesiewowym 22,23. Badanie DNA w kierunku obecno ci wirusa HPV o udowodnionej wy szej czu o ci zaproponowano i zastosowano jako pierwotne badanie przesiewowe pierwszego rzutu w niektórych programach bada przesiewowych. ZASADY PROCEDURY Test cobas 4800 HPV oparty jest na dwóch g ównych procesach: (1) zautomatyzowanym przygotowaniu próbek w celu jednoczesnej ekstrakcji DNA wirusa HPV i DNA komórkowego; (2) amplifikacji 24 PCR docelowych sekwencji DNA z wykorzystaniem zarówno par primerów komplementarnych swoistych dla HPV i -globiny, jak i detekcji w czasie rzeczywistym oznaczonych fluorescencyjnie, rozszczepionych detekcyjnych sond oligonukleotydowych swoistych dla HPV i -globiny. Ta jednoczesna ekstrakcja, amplifikacja i detekcja -globiny w te cie cobas 4800 HPV pozwala na kontrolowanie ca ego procesu oznaczania. Odczynnik Master Mix do testu cobas 4800 HPV zawiera pary primerów i próby swoiste dla DNA 14 typów wirusów HPV wysokiego ryzyka oraz dla DNA -globiny. Detekcja DNA (amplikonu) poddanego amplifikacji jest przeprowadzana podczas cyklu termicznego z zastosowaniem sond oligonukleotydowych oznaczanych przy u yciu czterech ró nych barwników fluorescencyjnych. Poddany amplifikacji sygna pochodz cy od dwunastu typów wirusa HPV wysokiego ryzyka (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 i 68) jest wykrywany przy u yciu tego samego barwnika fluorescencyjnego, natomiast ka dy z sygna ów pochodz cych od wirusa HPV16, HPV18 i -globiny jest wykrywany przy u yciu przypisanego mu barwnika fluorescencyjnego. Przygotowanie próbki Przygotowanie próbek do testu cobas 4800 HPV jest zautomatyzowane za pomoc aparatu cobas x 480. Próbki z szyjki macicy, pobrane do po ywki do przechowywania pobranych komórek cobas PCR, p ynnego pod o a PreservCyt lub p ynu konserwuj cego SurePath TM, s poddawane trawieniu w warunkach denaturuj cych w podwy szonych temperaturach, a nast pnie poddawane lizie w obecno ci odczynnika chaotropowego. Uwolnione kwasy nukleinowe wirusa HPV, razem z DNA -globiny s u cym jako kontrola procesu, s oczyszczane przez ich absorpcj do cz stek szk a magnetycznego, czyszczone i oddzielane od tych cz stek, po czym s gotowe do procesu amplifikacji i detekcji PCR. Amplifikacja PCR Wybór sekwencji docelowej W te cie cobas 4800 HPV wykorzystano primery do okre lenia sekwencji o d ugo ci oko o 200 nukleotydów w obr bie polimorficznego regionu L1 genomu HPV. Pula primerów HPV zawarta w odczynniku Master Mix zosta a zaprojektowana w celu amplifikacji DNA wirusów HPV z grupy 14 typów wysokiego ryzyka (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 i 68) 3,8-13,25. Fluorescencyjne sondy oligonukleotydowe wi si z polimorficznymi regionami w obr bie sekwencji okre lonej przez te primery. Dodatkowa para primerów i sonda ukierunkowana na ludzki gen -globiny (amplikon o d ugo ci 330 par zasad) umo liwiaj kontrol procesu. Amplifikacja sekwencji docelowej Polimeraz DNA 26 EagleZ05, chemicznie zmodyfikowan wersj polimerazy DNA Thermus species Z05 27, wykorzystuje si do wyzwalanej wysok temperatur amplifikacji docelowych fragmentów wirusa HPV oraz kontrolnej -globiny. Mieszanina zawieraj ca substraty do reakcji PCR jest najpierw podgrzewana w celu uaktywnienia polimerazy DNA EagleZ05, denaturacji DNA wirusa i DNA genomu oraz ods oni cia docelowych sekwencji dla primerów. W miar och adzania si mieszaniny primery sensowne oraz antysensowne hybrydyzuj z docelowymi sekwencjami DNA. Polimeraza DNA EagleZ05 w obecno ci jonu dwuwarto ciowego metalu oraz nadmiaru dezoksyrybonukleotydów (dntp) wyd u a primer(y) i nast puje synteza drugiej nici DNA. Proces ten ko czy pierwszy cykl PCR, dostarczaj c dwuniciowej kopii DNA docelowego regionu genomu HPV oraz genu -globiny. Polimeraza DNA wyd u a przy czone primery wzd u docelowych matryc, wytwarzaj c docelowy fragment dwuniciowej cz steczki DNA wirusa HPV o d ugo ci oko o 200 par zasad lub fragment cz steczki DNA o d ugo ci 330 par zasad, koduj cy -globin, okre lany jako amplikon. Proces ten jest powtarzany wielokrotnie, przy czym w ka dym z cykli ilo zwielokrotnionego DNA (amplikonu) ulega podwojeniu. Amplifikacja odbywa si wy cznie w tych obszarach genomu HPV i/lub genu -globiny, które zawarte s pomi dzy par odpowiednich primerów. Ca o genomu nie ulega amplifikacji PL 2 Doc Rev. 13.0

3 Zautomatyzowana detekcja w czasie rzeczywistym Test cobas 4800 HPV wykorzystuje technologi reakcji PCR w czasie rzeczywistym 29,30. Ka da sonda oligonukleotydowa w tej reakcji jest oznaczana barwnikiem fluorescencyjnym, s u cym jako reporter, i wygaszaczem wygaszaj cym emisje fluorescencyjne pochodz ce od barwnika w sondzie jako ca o ci. W miar post powania procesu sondy komplementarne do amplikonu wi si ze swoistymi jednoniciowymi sekwencjami DNA i ulegaj rozszczepieniu przez aktywno nukleazy od 5' do 3' polimerazy DNA EagleZ05. Po oddzieleniu si barwnika reporterowego od wygaszacza za spraw aktywno ci nukleazy, po wzbudzeniu odpowiednim widmem wiat a, emituje on promieniowanie fluorescencyjne o charakterystycznej d ugo ci fali. Ta d ugo fali charakterystyczna dla ka dego z barwników umo liwia niezale ne oznaczanie amplikonu HPV16, amplikonu HPV18, innych amplikonów HR (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 i 68) oraz kontroli -globiny, poniewa swoiste dla tych poszczególnych sekwencji sondy s oznaczane ró nymi barwnikami. Amplifikacja wybiórcza Amplifikacj wybiórcz badanego kwasu nukleinowego z próbki klinicznej przy u yciu testu cobas 4800 HPV uzyskuje si dzi ki zastosowaniu enzymu AmpErase (uracylo-n-glikozylaza) i trójfosforanu dezoksyurydyny (dutp). Enzym AmpErase rozpoznaje i katalizuje niszczenie nici DNA zawieraj cych dezoksyurydyn 28, lecz nie a cuchów DNA zawieraj cych dezoksytymidyn. Dezoksyurydyny nie stwierdza si w wyst puj cym naturalnie DNA, natomiast jest ona zawsze obecna w amplikonie z uwagi na stosowanie trójfosforanu dezoksyurydyny zamiast trójfosforanu tymidyny jako jednego spo ród dntp w odczynniku Master Mix; dlatego jedynie amplikon zawiera dezoksyurydyn. Dezoksyurydyna powoduje wra liwo zanieczyszczaj cego amplikonu na rozk ad przez enzym AmpErase przed amplifikacj docelowego DNA. Enzym AmpErase, zawarty w odczynniku Master Mix, katalizuje rozszczepienie DNA zawieraj cego dezoksyurydyn w miejscu reszt dezoksyurydynowych przez otwarcie pier cienia dezoksyrybozy w pozycji C1. Podczas ogrzewania w pierwszym cyklu termicznym a cuch amplikonu DNA p ka w miejscu, gdzie znajduje si dezoksyurydyna, w ten sposób wykluczaj c dalsz amplifikacj DNA. Enzym AmpErase jest nieczynny w temperaturach powy ej 55 C, tj. w czasie trwania ca ego cyklu termicznego, dlatego nie niszczy on amplikonu docelowego. Wykazano, e enzym AmpErase w te cie cobas 4800 HPV inaktywuje co najmniej 10 3 kopii amplikonu HPV zawieraj cego dezoksyurydyn na jedn reakcj PCR. ODCZYNNIKI cobas 4800 System Sample Preparation Kit Zestaw do przygotowania próbek systemu cobas 4800 (P/N: ) MGP (Cz steczki szk a magnetycznego systemu cobas 4800) Cz steczki szk a magnetycznego 93% izopropanolu Xi 93% (udzia wagowy) izopropanolu c4800 SMPL PREP 240 testów 10 x 4,5 ml Produkt dra ni cy F 93% (udzia wagowy) izopropanolu Produkt wysoce atwopalny R: , S: /25-26 EB (Bufor do elucji systemu cobas 4800) Bufor Tris-HCl 0,09% azydku sodu cobas 4800 System Sample Preparation Kit Zestaw do przygotowania próbek systemu cobas 4800 (P/N: ) MGP (Cz steczki szk a magnetycznego systemu cobas 4800) Cz steczki szk a magnetycznego 93% izopropanolu Xi 93% (udzia wagowy) izopropanolu c4800 SMPL PREP 10 x 18 ml 960 testów 10 x 13,5 ml Produkt dra ni cy F 93% (udzia wagowy) izopropanolu Produkt wysoce atwopalny R: , S: / PL 3 Doc Rev. 13.0

4 EB (Bufor do elucji systemu cobas 4800) Bufor Tris-HCl 0,09% azydku sodu cobas 4800 System Wash Buffer Kit Zestaw buforów p ucz cych systemu cobas 4800 (P/N: ) WB (Bufor p ucz cy systemu cobas 4800) Dwuwodny cytrynian sodu 0,05% N-metyloizotiazolonu HCl cobas 4800 System Wash Buffer Kit Zestaw buforów p ucz cych systemu cobas 4800 (P/N: ) WB (Bufor p ucz cy systemu cobas 4800) Dwuwodny cytrynian sodu 0,05% N-metyloizotiazolonu HCl cobas 4800 System Liquid Cytology Preparation Kit Zestaw do przygotowania p ynu do bada cytologicznych systemu cobas 4800 (P/N: ) PK (Proteinaza K cobas 4800) Bufor Tris-HCl < 0,05% EDTA Glicerol Chlorek wapnia Octan wapnia < 2% proteinazy K Xn < 2% (udzia wagowy) proteinazy K c4800 WB c4800 WB c4800 LIQ CYT 10 x 18 ml 240 testów 10 x 55 ml 960 testów 10 x 200 ml 240 testów 10 x 0,9 ml Produkt szkodliwy SDS (Odczynnik SDS systemu cobas 4800) Bufor Tris-HCl 0,2% odczynnika SDS 0,09% azydku sodu LYS (Bufor do lizy systemu cobas 4800) Bufor Tris-HCl 37% chlorowodorku guanidyny < 5% polidokanolu Xn 37% (udzia wagowy) chlorowodorku guanidyny 10 x 3 ml 10 x 10 ml Produkt szkodliwy R: 22-36/38, S: N < 5% (udzia wagowy) polidokanolu Produkt niebezpieczny dla rodowiska R: , S: PL 4 Doc Rev. 13.0

5 cobas 4800 System Liquid Cytology Preparation Kit Zestaw do przygotowania p ynu do bada cytologicznych systemu cobas 4800 (P/N: ) PK (Proteinaza K cobas 4800) Bufor Tris-HCl < 0,05% EDTA Glicerol Chlorek wapnia Octan wapnia < 2% proteinazy K Xn < 2% (udzia wagowy) proteinazy K c4800 LIQ CYT 960 testów 20 x 1,2 ml Produkt szkodliwy SDS (Odczynnik SDS systemu cobas 4800) Bufor Tris-HCl 0,2% odczynnika SDS 0,09% azydku sodu LYS (Bufor do lizy systemu cobas 4800) Bufor Tris-HCl 37% chlorowodorku guanidyny < 5% polidokanolu Xn 37% (udzia wagowy) chlorowodorku guanidyny 10 x 9 ml 10 x 36 ml Produkt szkodliwy R: 22-36/38, S: N < 5% (udzia wagowy) polidokanolu Produkt niebezpieczny dla rodowiska R: , S: cobas 4800 HPV Amplification/Detection Kit Zestaw do amplifikacji/detekcji cobas 4800 (P/N: ) HPV MMX (Odczynnik Master Mix cobas 4800 HPV) Bufor Tricine Octan potasu Wodorotlenek potasu Glicerol < 0,13% datp, dctp, dgtp, dutp < 0,01% sensownych i antysensownych primerów HPV < 0,01% sensownych i antysensownych primerów -globiny < 0,01% oznaczanych fluorescencyjnie sond HPV < 0,01% oznaczanych fluorescencyjnie sond -globiny < 0,10% polimerazy DNA EagleZ05 (bakteryjnej) < 0,10% enzymu AmpErase (uracylo-n-glikozylaza) (bakteryjna) 0,09% azydku sodu HPV Mg/Mn (Roztwór Mg/Mn cobas 4800 HPV) Octan magnezu Octan manganu < 0,02% lodowatego kwasu octowego 0,09% azydku sodu c4800 HPV AMP/DET 240 testów 10 x 0,5 ml 10 x 1,0 ml PL 5 Doc Rev. 13.0

6 cobas 4800 HPV Amplification/Detection Kit c4800 HPV AMP/DET 960 testów Zestaw do amplifikacji/detekcji cobas 4800 (P/N: ) HPV MMX 20 x 1,0 ml (Odczynnik Master Mix cobas 4800 HPV) Bufor Tricine Octan potasu Wodorotlenek potasu Glicerol < 0,13% datp, dctp, dgtp, dutp < 0,01% sensownych i antysensownych primerów HPV < 0,01% sensownych i antysensownych primerów -globiny < 0,01% oznaczanych fluorescencyjnie sond HPV < 0,01% oznaczanych fluorescencyjnie sond -globiny < 0,10% polimerazy DNA EagleZ05 (bakteryjnej) < 0,10% enzymu AmpErase (uracylo-n-glikozylaza) (bakteryjna) 0,09% azydku sodu HPV Mg/Mn 10 x 1,0 ml (Roztwór Mg/Mn cobas 4800 HPV) Octan magnezu Octan manganu < 0,02% lodowatego kwasu octowego 0,09% azydku sodu cobas 4800 HPV Controls Kit c4800 HPV CTLS 10 zestawów Zestaw kontroli cobas 4800 HPV (P/N: ) HPV (+) C 10 x 0,5 ml (Kontrola dodatnia cobas 4800 HPV Bufor Tris-HCl EDTA 0,05% azydku sodu < 0,00001% poly ra RNA (syntetycznego) < 0,00001% niezaka nego plazmidu DNA (bakteryjnego) zawieraj cego sekwencje 16, 18, 39 HPV < 0,00001% niezaka nego plazmidu DNA (bakteryjnego) zawieraj cego sekwencje ludzkiej -globiny ( ) C 10 x 0,5 ml (Kontrola ujemna systemu cobas 4800) Bufor Tris-HCl EDTA 0,05% azydku sodu < 0,00001% poly ra RNA (syntetycznego) UWAGA: Oznakowanie bezpiecze stwa produktu jest zasadniczo zgodne z wytycznymi GHS UE. UWAGA: W razie potrzeby nale y odnie si do odpowiedniego podr cznika u ytkownika. U ytkownicy oprogramowania w wersji 2.1 i nowszej powinni odnie si do Podr cznika systemu cobas 4800 oraz Podr cznika u ytkownika testu cobas HPV. OSTRZE ENIA I RODKI OSTRO NO CI A. DO STOSOWANIA W DIAGNOSTYCE IN VITRO. B. Test s u y do stosowania z próbkami z szyjki macicy pobranymi przy u yciu po ywki do przechowywania pobranych komórek cobas PCR, p ynnego pod o a PreservCyt oraz p ynu konserwuj cego SurePath TM. C. Nie nale y pipetowa za pomoc ust. D. Nie wolno je, pi ani pali w obszarach roboczych laboratorium. Pos uguj c si próbkami i odczynnikami z zestawów, nale y stosowa jednorazowe r kawice, fartuchy laboratoryjne oraz odpowiedni ochron oczu. Nale y dok adnie umy r ce po pracy z próbkami i odczynnikami testowymi. E. Nale y unika zaka enia odczynników: bakteryjnego i przez DNA. F. Nale y wyrzuci wszystkie nieu yte odczynniki, post puj c zgodnie z przepisami krajowymi, federalnymi, stanowymi i lokalnymi. G. Nie wolno u ywa odczynników po up ywie ich dat przydatno ci. H. Nie nale y poddawa odczynników pulowaniu. I. Karty charakterystyki substancji niebezpiecznych (Material Safety Data Sheets MSDS) s dost pne na danie w miejscowym przedstawicielstwie firmy Roche. J. W celu zapobie enia zanieczyszczeniu konieczne jest noszenie r kawic i ich zmiana przed przyst pieniem do ponownej pracy z próbkami i odczynnikami cobas K. Z próbkami nale y obchodzi si tak jak z materia em zaka nym, stosuj c laboratoryjne procedury bezpiecze stwa, takie jak okre lone w dokumentach Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 31 oraz CLSI Document M29-A PL 6 Doc Rev. 13.0

7 L. Odczynnik LYS zawiera chlorowodorek guanidyny. Nie dopu ci do bezpo redniego kontaktu mi dzy chlorowodorkiem guanidyny i podchlorynem sodu (wybielacz) lub innymi wysoko reaktywnymi odczynnikami, takimi jak kwasy lub zasady. Takie mieszaniny mog wydziela truj ce gazy. Je li p yn zawieraj cy chlorowodorek guanidyny ulegnie rozlaniu, do czyszczenia nale y u ywa odpowiedniego detergentu laboratoryjnego i wody. W przypadku rozlania p ynu zawieraj cego potencjalne czynniki zaka ne do czyszczenia nale y u ywa NAJPIERW detergentu laboratoryjnego i wody, a nast pnie 0,5-procentowego roztworu podchlorynu sodu. M. Odczynnik MGP zawiera izopropanol i jest wysoce atwopalny. Nale y przechowywa go z dala od otwartego ognia i potencjalnych róde iskier. N. Odczynniki EB, SDS, HPV MMX, HPV Mg/Mn, ( ) C i HPV (+) C zawieraj azydek sodu. Azydek sodu mo e reagowa z instalacjami wodno-kanalizacyjnymi wykonanymi z o owiu lub miedzi, tworz c silnie wybuchowe azydki metali. Usuwaj c roztwory zawieraj ce azydek sodu do zlewów laboratoryjnych, nale y sp uka rury du ilo ci zimnej wody, aby zapobiec nagromadzeniu azydków. O. Podczas pracy z jakimikolwiek odczynnikami nale y u ywa os on na oczy oraz fartuchów laboratoryjnych i r kawic jednorazowych. Nale y unika kontaktu wymienionych materia ów ze skór, oczami i b onami luzowymi. Je eli dojdzie do kontaktu, nale y natychmiast sp uka du ilo ci wody. Je eli nie zostan podj te odpowiednie rodki, mo e doj do oparze. W razie rozlania nale y przed wytarciem rozcie czy wod. P. Wszystkie przedmioty jednorazowego u ytku s przeznaczone do jednokrotnego u ycia. Nie nale y ich u ywa powtórnie. Q. Do czyszczenia aparatu cobas x 480 lub analizatora cobas z 480 nie wolno u ywa roztworu podchlorynu sodu (wybielacza). Czyszczenie aparatu cobas x 480 lub analizatora cobas z 480 nale y przeprowadza zgodnie z procedurami opisanymi w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu cobas R. Dodatkowe ostrze enia, rodki ostro no ci oraz procedury maj ce na celu zredukowanie ryzyka zaka enia, dotycz ce aparatu cobas x 480 lub analizatora cobas z 480 mo na znale w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu cobas WYMAGANIA DOTYCZ CE PRZECHOWYWANIA I U YTKOWANIA A. Nie nale y zamra a odczynników. B. Odczynniki MGP, EB, PK, SDS, LYS, HPV MMX, HPV Mg/Mn, HPV (+) C oraz ( ) C nale y przechowywa w temperaturze 2 8 C. Odczynniki te zachowuj stabilno do wskazanej daty wa no ci. C. Odczynnik WB nale y przechowywa w temperaturze C. Odczynnik zachowuje stabilno do podanej daty przydatno ci. DOSTARCZONE MATERIA Y A. cobas 4800 System Sample Preparation Kit c4800 SMPL PREP 240 testów Zestaw do przygotowania próbek systemu cobas 4800 (P/N: ) MGP (Cz steczki szk a magnetycznego systemu cobas 4800) EB (Bufor do elucji systemu cobas 4800) B. cobas 4800 System Sample Preparation Kit c4800 SMPL PREP 960 testów Zestaw do przygotowania próbek systemu cobas 4800 (P/N: ) MGP (Cz steczki szk a magnetycznego systemu cobas 4800) EB (Bufor do elucji systemu cobas 4800) C. cobas 4800 System Wash Buffer Kit c4800 WB 240 testów Zestaw buforów p ucz cych systemu cobas 4800 (P/N: ) WB (Bufor p ucz cy systemu cobas 4800) D. cobas 4800 System Wash Buffer Kit c4800 WB 960 testów Zestaw buforów p ucz cych systemu cobas 4800 (P/N: ) WB (Bufor p ucz cy systemu cobas 4800) E. cobas 4800 HPV Amplification/Detection Kit c4800 HPV AMP/DET 240 testów Zestaw do amplifikacji/detekcji cobas 4800 HPV (P/N: ) HPV MMX (Odczynnik Master Mix cobas 4800 HPV) HPV Mg/Mn (Roztwór Mg/Mn cobas 4800 HPV) PL 7 Doc Rev. 13.0

8 F. cobas 4800 HPV Amplification/Detection Kit Zestaw do amplifikacji/detekcji cobas 4800 HPV c4800 HPV AMP/DET 960 testów (P/N: ) HPV MMX (Odczynnik Master Mix cobas 4800 HPV) HPV Mg/Mn (Roztwór Mg/Mn cobas 4800 HPV) G. cobas 4800 System Liquid Cytology Preparation Kit c4800 LIQ CYT 240 testów Zestaw do przygotowania p ynu do bada cytologicznych systemu cobas 4800 (P/N: ) PK (Proteinaza K cobas 4800) SDS (Odczynnik SDS systemu cobas 4800) LYS (Bufor do lizy systemu cobas 4800) H. cobas 4800 System Liquid Cytology Preparation Kit c4800 LIQ CYT 960 testów Zestaw do przygotowania p ynu do bada cytologicznych systemu cobas 4800 (P/N: ) PK (Proteinaza K cobas 4800) SDS (Odczynnik SDS systemu cobas 4800) LYS (Bufor do lizy systemu cobas 4800) I. cobas 4800 HPV Controls Kit c4800 HPV CTLS 10 zestawów Zestaw kontroli cobas 4800 HPV (P/N: ) HPV (+) C (Kontrola dodatnia cobas 4800 HPV) ( ) C (Kontrola ujemna systemu cobas 4800) MATERIA Y WYMAGANE, LECZ NIEDOSTARCZANE Obs uga próbek i odczynników Po ywka do przechowywania pobranych komórek cobas PCR (Roche P/N , opcjonalna) Ko cówki CO-RE, 1000 µl, statyw 96 (Roche P/N lub Hamilton P/N ) Pojemnik na odczynniki 50 ml (Roche P/N ) Pojemnik na odczynniki 200 ml (Roche P/N ) W przypadku HPV ASAP v2.0.1 zastosuj p ytk (z g bokimi do kami) do ekstrakcji systemu cobas 4800 o pojemno ci 1,6 ml (Roche P/N ) W przypadku HPV ASAP v2.1 zastosuj p ytk (z g bokimi do kami) do ekstrakcji systemu cobas 4800 o pojemno ci 2,0 ml (Roche P/N: ) P ytka AD 0,3 ml (z mikrodo kami) i film uszczelniaj cy system cobas 4800 (Roche P/N ) Trwa a torba na odpady [Roche P/N (ma a) lub (du a)] Plastikowa zsuwnia Hamilton STAR (Roche P/N ) Probówki okr g odenne 13 ml, (Sarstedt P/N ) do u ytku jako wtórne probówki na próbki Korki, kolor naturalny (Sarstedt P/N , do ponownego zamykania przetworzonych próbek w okr g odennych probówkach typu Sarstedt 13 ml) R kawice jednorazowe bezpudrowe Przyrz dy i oprogramowanie Aparat cobas x 480 Analizator cobas z 480 Jednostka steruj ca systemu cobas 4800 z oprogramowaniem systemu w wersji 2.1 lub nowszej System cobas 4800 cobas HPV AP z oprogramowaniem w wersji 2.0 lub nowszej PL 8 Doc Rev. 13.0

9 Wyposa enie i materia y opcjonalne Bufor do przygotowywania próbek cobas (Roche P/N ; bufor Tris-HCl, 0,4% SDS, 0,09% azydku sodu) Pipety: dostarczaj ce do 1000 µl Ko cówki z barier aerozolow bez DNazy: dostarczaj ce do 1000 µl Wirówka laboratoryjna, wyposa ona w b ben wirówki o minimalnej warto ci RCF równej 1500 Osobna p ytka magnetyczna (Roche P/N ) Mieszad o wibracyjne (do mieszania jednej probówki) Mieszad o wibracyjne typu vortexer do mieszania wielu probówek [np. VWR P/N ] Etykiety z kodami kreskowymi odporne na dzia anie ciep a (RACO Industries; nr kat. RAC ) Termometr 20/150 C (VWR, nr kat ) lub odpowiednik Cyfrowy blok grzejny 120 V (VWR, nr kat ) lub odpowiednik Modu bloku grzejnego z 12 otworami 16 mm (VWR, nr kat ) lub odpowiednik POBIERANIE, TRANSPORT I PRZECHOWYWANIE PRÓBEK UWAGA: Ze wszystkimi próbkami nale y obchodzi si jak z materia em potencjalnie zaka nym. A. Pobieranie próbek Próbki z szyjki macicy, pobrane do po ywki do przechowywania pobranych komórek cobas PCR, p ynnego pod o a PreservCyt lub p ynu konserwuj cego SurePath TM, zosta y zatwierdzone do u ycia z testem cobas 4800 HPV. Próbki z szyjki macicy nale y pobiera zgodnie z instrukcjami producenta. B. Transport próbek Próbki z szyjki macicy, pobrane do po ywki do przechowywania pobranych komórek cobas PCR, p ynnego pod o a PreservCyt lub p ynu konserwuj cego SurePath TM, mo na transportowa w temperaturze 2 30 C. Próbki zawieraj ce HPV musz by transportowane zgodnie z przepisami krajowymi, federalnymi, stanowymi i lokalnymi dotycz cymi transportu czynników etiologicznych 33. UWAGA: Próbki SurePath musz by transportowane w temperaturze 2 8 C, je eli badania nie poprzedza obróbka przedanalityczna w celu usuni cia wi za krzy owych indukowanych matryc. C. Przechowywanie próbek Próbki z szyjki macicy pobrane do po ywki do przechowywania pobranych komórek cobas PCR, p ynnego pod o a PreservCyt lub p ynu konserwuj cego SurePath TM mo na przechowywa w temperaturze 2 30 C przez okres do 6 miesi cy od daty pobrania. Próbki z szyjki macicy, pobrane na p ynne pod o e konserwuj ce SurePath TM, mo na przechowywa w temperaturze 2 8 C do 6 miesi cy od daty pobrania. Próbki z szyjki macicy pobrane do p ynu konserwuj cego SurePath TM mo na przechowywa w temperaturze C przez okres maksymalnie 6 tygodni od daty pobrania pod warunkiem usuni cia przed wykonaniem testu na obecno wirusa HPV indukowanych matryc p ynu konserwuj cego SurePath TM wi za krzy owych poprzez obróbk z u yciem buforu do przygotowywania próbek cobas (patrz cz Próbki oraz wyniki dotycz ce stabilno ci próbek). INSTRUKCJA U YTKOWANIA UWAGA: Wszystkie odczynniki oprócz odczynników HPV MMX i HPV Mg/Mn przed za adowaniem do aparatu cobas x 480 musz znajdowa si w temperaturze pokojowej. Odczynniki HPV MMX i HPV Mg/Mn mo na adowa bezpo rednio z temperatury przechowywania 2 8 C, poniewa ich temperatura zrównowa y si z temperatur otoczenia wewn trz aparatu cobas x 480 podczas procesu ich przetwarzania. UWAGA: Próbki pobrane do po ywki do przechowywania pobranych komórek cobas PCR, p ynnego pod o a PreservCyt lub p ynu konserwuj cego SurePath TM przed ich za adowaniem do aparatu cobas x 480 musz znajdowa si w temperaturze pokojowej. UWAGA: Dok adne instrukcje u ytkowania mo na znale w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu cobas Liczba testów w serii: System cobas 4800 jest przeznaczony do obs ugi testu cobas 4800 HPV o liczbie próbek i kontroli od 1 do 94 (do 96 testów w jednym cyklu pracy). Ka dy zestaw do przygotowania próbek systemu cobas 4800, zestaw do przygotowania p ynu do bada cytologicznych systemu cobas 4800 i zestaw buforu p ucz cego systemu cobas 4800 HPV zawiera ilo odczynników wystarczaj c na 10 cykli pracy 24 testów (240 testów w zestawie) lub 96 testów (960 testów w zestawie). Ka dy zestaw do amplifikacji/detekcji cobas 4800 HPV zawiera ilo odczynników wystarczaj c na 10 cykli pracy 24 testów (240 testów w zestawie) lub 96 testów (960 testów w zestawie); w celu optymalizacji wykorzystania odczynników dla 48 lub 72 testów mo na u y wielu zestawów 240 testów. Zestaw kontroli cobas 4800 HPV zawiera ilo odczynników wystarczaj c na 10 cykli pracy (10 kompletów w zestawie). Minimalna liczba dla jednego cyklu pracy w systemie cobas 4800 to 1 próbka plus kontrole. Do przeprowadzenia ka dego cyklu pracy konieczne jest jedno powtórzenie kontroli ujemnej systemu cobas 4800 [( ) C] i jedno powtórzenie kontroli dodatniej systemu cobas 4800 HPV [HPV (+) C] (patrz cz Kontrola jako ci ). Przebieg pracy: UWAGA: Chocia nie stanowi to optymalnego zu ycia odczynników, do cyklu pracy 24 próbek mo na u y zestawu do przygotowania 960 testów, a do cyklu pracy 24, 48 lub 72 próbek mo na u y zestawu do amplifikacji/detekcji 960 testów HPV. Test cobas 4800 HPV mo na przeprowadza z zastosowaniem dwóch przebiegów pracy, nazywanych w oprogramowaniu cobas 4800: Full Workflow i Recovery Workflow PL 9 Doc Rev. 13.0

10 HPV Full Workflow: HPV Full Workflow obejmuje przygotowanie próbek w aparacie cobas x 480 oraz amplifikacj /detekcj w analizatorze cobas z 480. Cykl pracy mo e obejmowa 24 testy (z 1 22 próbek plus 2 kontrole) lub 96 testów (z 1 94 próbek plus 2 kontrole). Szczegó owe informacje mo na znale w cz ci Przeprowadzanie przebiegu pracy Full Workflow poni ej oraz w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu cobas HPV Recovery Workflow: HPV Recovery Workflow obejmuje r czne przygotowanie p ytek PCR przy u yciu eluatu z przetworzonej p ytki g bokodo kowej, a nast pnie amplifikacj /detekcj na analizatorze cobas z 480. Szczegó owe informacje mo na znale w cz ci Przeprowadzanie przebiegu pracy Recovery Workflow poni ej oraz w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu cobas Próbki: Istniej trzy rodzaje próbek z szyjki macicy, które mo na oznacza przy u yciu testu cobas 4800 HPV: a) próbki z szyjki macicy w p ynnym pod o u PreservCyt, b) próbki z szyjki macicy w pod o u do przechowywania pobranych komórek cobas PCR oraz c) próbki z szyjki macicy w p ynie konserwuj cym SurePath TM. P ynne pod o e PreservCyt i próbki w pod o u do przechowywania pobranych komórek cobas PCR mo na przetwarza w aparacie cobas x 480 bezpo rednio po ich wyj ciu z podstawowych pojemników opatrzonych w a ciwym kodem kreskowym lub po wyj ciu z opatrzonej w a ciwym kodem kreskowym okr g odennej probówki Sarstedt 13 ml. Próbki SurePath, które nie wymagaj obróbki wst pnej za pomoc buforu do przygotowywania próbek cobas mo na przetwarza w aparacie cobas x 480 bezpo rednio po ich wyj ciu z podstawowych pojemników (bez wk adek z tworzywa sztucznego) opatrzonych w a ciwym kodem kreskowym lub po wyj ciu z opatrzonej w a ciwym kodem kreskowym okr g odennej probówki Sarstedt 13 ml. Próbek w p ynie konserwuj cym SurePath TM w pojemnikach podstawowych z plastikowymi wk adkami nie mo na przetwarza bezpo rednio po ich wyj ciu z pojemników podstawowych. Te próbki SurePath musz zosta przeniesione do opatrzonej w a ciwym kodem kreskowym okr g odennej probówki Sarstedt 13 ml w celu ich przetworzenia w aparacie cobas x 480. W celu uzyskania informacji na temat procedur w a ciwego kodowania kreskowego nale y zapozna si z odpowiednim Podr cznikiem u ytkownika systemu cobas 4800 oraz list kodów kreskowych dopuszczalnych w systemie cobas UWAGA: Dodatkowa obróbka próbek w p ynie konserwuj cym SurePath nie jest wymagana, je li zostan one przebadane w ci gu 6 miesi cy w przypadku przechowywania w temperaturze 2 8 C. W przypadku przechowywania w temperaturze C próbki SurePath nale y przed przeprowadzeniem testu na obecno wirusa HPV podda obróbce w systemie cobas 4800 w celu usuni cia wi za krzy owych indukowanych matryc. UWAGA: Badanie wirusa HPV bezpo rednio z pojemników podstawowych SurePath bez wk adek plastikowych mo na wykona jedynie przed badaniem cytologicznym. Badanie próbek SurePath po badaniu cytologicznym b dzie wymaga o przeniesienia przynajmniej 1 ml próbki do opatrzonej w a ciwym kodem kreskowym okr g odennej probówki Sarstedt 13 ml. Obróbka próbek podstawowych w p ynie konserwuj cym SurePath z u yciem buforu do przygotowywania próbek cobas w celu usuni cia wi za krzy owych indukowanych matryc UWAGA: UWAGA: W przypadku probówek u ywanych w procedurze usuwania wi za krzy owych indukowanych matryc (patrz cz Wyposa enie i materia y opcjonalne) konieczne jest zastosowanie etykiet z kodem kreskowym odpornych na dzia anie ciep a. Zaleca si przeprowadzenie czynno ci opisanych w punktach B, C, G i H poni ej w komorze z przep ywem laminarnym, aby zminimalizowa ryzyko zaka enia krzy owego. A. Przygotuj po jednej okr g odennej probówce Sarstedt o pojemno ci 13 ml oznaczonej kodem kreskowym zawieraj cej 0,5 ml buforu do przygotowywania próbek cobas na ka d próbk w p ynie konserwuj cym SurePath TM przeznaczon do przebadania. B. Zworteksuj przez 10 sekund próbki w p ynie konserwuj cym SurePath TM przed ich przeniesieniem. Przenie po 0,5 ml ka dej próbki w p ynie konserwuj cym SurePath TM do przygotowanej w punkcie A okr g odennej probówki Sarstedt o pojemno ci 13 ml. Przed przej ciem do kolejnego etapu na ó z powrotem korki na wszystkie probówki. W przypadku ka dej z próbek zmieniaj ko cówk pipety. C. Mieszaj ka d probówk na mieszadle wibracyjnym przez 1 sekund. D. Przenie probówki do modu u grzejnego (patrz cz Wyposa enie i materia y opcjonalne). W jednej partii mo na przetworzy maksymalnie 48 probówek. E. Prowad ogrzewanie w temperaturze 120 C przez 20 minut. F. Po zako czeniu ogrzewania wyjmij probówki i umie je w statywie, a nast pnie pozostaw je do sch odzenia przez 10 minut w temperaturze otoczenia. G. Wymieszaj ka d probówk na mieszadle wibracyjnym przez 5 sekund. H. Przenie próbki do statywów cobas 4800 z 24 pozycjami, wyrzu korki i przeprowad przetwarzanie w systemie cobas 4800 w celu wykonania testu na obecno wirusa HPV. Próbki w p ynie konserwuj cym SurePath TM poddane dzia aniu buforu do przygotowywania próbek cobas mo na przechowywa w celu wykonania testu na obecno wirusa HPV w przysz o ci, je li przyk adowo w pierwszej kolejno ci wymagane jest przeprowadzenie oceny cytologicznej. Nale y post powa zgodnie z poni sz procedur : A. Wykonaj kolejne czynno ci z powy szej procedury obróbki do punktu G. B. Probówki z próbkami w p ynie konserwuj cym SurePath TM poddane obróbce z u yciem buforu do przygotowywania próbek cobas nale y przechowywa przed wykonaniem testów na obecno wirusa HPV w systemie cobas 4800 przez maksymalnie 4 tygodnie w temperaturze 2 30 C. UWAGA: Minimalna obj to wype nienia, jaka musi znajdowa si w podstawowych pojemnikach zawieraj cych pod o e do przechowywania pobranych komórek cobas PCR i p ynne pod o e PreservCyt, wynosi 3,0 ml. Minimalna obj to wype nienia, jaka musi znajdowa si w podstawowych pojemnikach SurePath bez wk adek plastikowych wynosi 5,0 ml. Stosuj c wtórne okr g odenne probówki 13 ml nale y nape nia je minimaln obj to ci 1,0 ml i maksymaln obj to ci 10 ml PL 10 Doc Rev. 13.0

11 UWAGA: Do pobierania próbek z szyjki macicy do testu cobas 4800 HPV nale y u ywa wy cznie pod o a do przechowywania pobranych komórek cobas PCR, p ynnego pod o a PreservCyt i p ynu konserwuj cego SurePath TM. U ywanie testu cobas 4800 HPV z innymi przyrz dami do pobierania próbek i innymi rodzajami po ywek nie zosta o zatwierdzone. U ywanie testu cobas 4800 HPV z innymi przyrz dami do pobierania próbek i/lub innymi rodzajami po ywek mo e prowadzi do otrzymania wyników fa szywie ujemnych, fa szywie dodatnich i/lub niewa nych. UWAGA: Mo e by konieczne podzielenie próbek na alikwoty do opatrzonych w a ciwym kodem kreskowym okr g odennych probówek Sarstedt 13 ml w celu ich przetworzenia w aparacie cobas x 480. Do post powania z próbkami nale y u ywa pipetorów z ko cówkami z barier aerozolow lub dodatnim wypieraniem. Aby zapobiec ska eniu krzy owemu przetworzonych próbek, do ponownego zatykania próbek po ich przetworzeniu nale y u ywa dodatkowych korków do tych probówek w innym kolorze (neutralnym; patrz rozdzia Materia y wymagane, lecz niedostarczane). UWAGA: Podczas przenoszenia próbek z podstawowych pojemników do wtórnych, okr g odennych probówek 13 ml, nale y zachowa ostro no. Przed przeniesieniem nale y zamiesza próbki w mieszadle wibracyjnym. Nale y zmienia ko cówki pipet po zako czeniu post powania z ka d z próbek. UWAGA: Nie nale y przetwarza próbek, które zawieraj widoczn krew lub maj ciemnobr zowy kolor. Pojedynczy przebieg pracy mo e obejmowa ró ne kombinacje próbek (pod o a do przechowywania pobranych komórek cobas PCR, p ynne pod o e PreservCyt i/lub p yn konserwuj cy SurePath TM ), a ka da próbka mo e zosta poddana oznaczeniu zarówno przy u yciu podtypu testu metod genotypowania HPV wysokiego ryzyka, jak i HPV wysokiego ryzyka Plus. Przebiegi pracy Przeprowadzanie przebiegu pracy Full Workflow: A. Testowi cobas 4800 HPV mo na poddawa cykle pracy od 1 do 94 próbek plus jedna kontrola ujemna systemu cobas 4800 i jedna kontrola dodatnia systemu cobas 4800 HPV. B. Uruchom system i wykonaj procedury konserwacyjne, post puj c zgodnie z instrukcjami opisanymi w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu cobas C. Uruchom nowy cykl pracy, klikaj c przycisk New run. D. W oknie Selection test jako przebieg pracy wybierz Full, a nast pnie wybierz test HPV. E. Wprowad nazw cyklu pracy lub pozostaw domy ln nazw cyklu pracy, a nast pnie kliknij OK, aby kontynuowa. F. Post puj zgodnie ze wskazówkami kreatora konfiguracyjnego oprogramowania, dotycz cymi adowania próbek. UWAGA: Próbki mog by w dowolnej kolejno ci adowane do opatrzonych kodami kreskowymi probówek podstawowych lub wtórnych. UWAGA: Je eli pojemniki podstawowe na próbki w pod o u do przechowywania pobranych komórek cobas PCR, pod o u p ynnym PreservCyt lub p ynie konserwuj cym SurePath s przeznaczone do przetwarzania (pojemniki podstawowe SurePath bez wk adek plastikowych), przed za adowaniem nale y je zamiesza w mieszadle wibracyjnym. Wybierz rodzaj próbki dla ka dej z próbek. Wybierz PC w przypadku zlecania próbek w pod o u p ynnym PreservCyt lub pod o u do przechowywania pobranych komórek cobas PCR Cell Collection Media. Wybierz SP w przypadku zlecania próbek w p ynie konserwuj cym SurePath TM. G. Wybierz dany wynik dla ka dej z próbek. Aby raportowa pojedyncze wyniki lub kombinacje testów typów wirusa HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 wysokiego ryzyka, wybierz dany wynik HPV High Risk Panel. Aby raportowa pojedyncze wyniki lub kombinacje testów typów wirusa HPV 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 wysokiego ryzyka oraz oddzielnie raportowa wyniki testu typu wirusa HPV 16 wysokiego ryzyka i wyniki testu typu wirusa HPV 18 wysokiego ryzyka, wybierz dany wynik HPV High Risk Panel Plus Genotyping. H. Post puj zgodnie ze wskazówkami kreatora konfiguracyjnego oprogramowania, dotycz cymi adowania wszystkich produktów. I. Post puj zgodnie ze wskazówkami kreatora konfiguracyjnego oprogramowania, dotycz cymi adowania wszystkich odczynników. UWAGA: Kontrole [HPV (+) C i ( ) C] nie s adowane wraz z próbkami. S one adowane do no nika na odczynniki podczas adowania odczynnika. Kontrolom HPV (+) i ( ) s przydzielone odpowiednio dwie pozycje (A1 i B1) ka dej z p ytek do ekstrakcji i p ytek z mikrodo kami. UWAGA: System cobas 4800 ma wewn trzny zegar, kontroluj cy czas, przez jaki odczynniki znajduj si w systemie. Po zeskanowaniu WB na zako czenie procesu adowania jest przeznaczona 1 godzina. Nast pnie nale y klikn przycisk Start. Na zak adce Workplace wy wietlany jest zegar odliczaj cy czas. System nie zezwoli na rozpocz cie kolejnego cyklu pracy, je eli zegar aparatu przeterminowa si. UWAGA: Aby zapewni w a ciwe przeniesienie odczynnika MGP, zamieszaj w mieszadle wibracyjnym lub energicznie wstrz nij butelk MGP przed umieszczeniem jej w pojemniku na odczynniki. K. Za aduj odczynniki do przygotowywania próbek (WB, MGP, EB, SDS i LYS) do pojemników na odczynniki opatrzonych kodem kreskowym, stosuj c metod zeskanuj, zeskanuj, w ó, umie : Zeskanuj kod kreskowy butelki odczynnika. Zeskanuj kod kreskowy pojemnika na odczynniki. W ó odczynnik do pojemnika. Umie wype niony pojemnik na odczynniki w przypisanej mu pozycji w no niku na odczynniki PL 11 Doc Rev. 13.0

12 L. Pojemniki na odczynniki s dost pne w dwóch rozmiarach: 200 ml i 50 ml. Post puj zgodnie ze wskazówkami kreatora konfiguracyjnego oprogramowania, dotycz cymi wyboru pojemnika na odczynniki odpowiednich rozmiarów. Kody kreskowe pojemnika na odczynniki musz znajdowa si po prawej stronie no nika. UWAGA: Odczynniki do amplifikacji/detekcji (HPV MMX i HPV Mg/Mn), kontrole [HPV (+) C i ( ) C] oraz PK s adowane bezpo rednio do no nika na odczynniki i automatycznie skanowane przez aparat cobas x 480. UWAGA: Wszystkie odczynniki i pojemniki na odczynniki s opatrzone kodem kreskowym i s przeznaczone do jednokrotnego u ycia. Oprogramowanie cobas 4800 umo liwia ledzenie u ycia odczynników oraz pojemników na odczynniki i odrzucenie wcze niej u ywanych odczynników lub pojemników na odczynniki. Oprogramowanie weryfikuje tak e, czy do aparatu za adowano wystarczaj ce ilo ci odczynników. UWAGA: Oprogramowanie cobas 4800 monitoruje dat wa no ci wszystkich odczynników. Odczynniki po up ywie daty wa no ci nie zostan dopuszczone do stosowania w systemie cobas M. Rozpocznij przygotowanie próbek, klikaj c przycisk Start Run. N. Po pomy lnym zako czeniu procesu przygotowania próbek kliknij przycisk ** Unload, aby wy adowa no nik na p ytki. ** Stan przygotowania próbki mo na sprawdzi w tym momencie, przed klikni ciem przycisku Unload. Patrz odpowiedni Podr cznik u ytkownika systemu cobas O. Aby uszczelni p ytk z mikrodo kami, przenie p ytk do analizatora cobas z 480 i rozpocz cykl pracy amplifikacji i detekcji, post puj zgodnie z instrukcj opisan w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu cobas UWAGA: System cobas 4800 ma wewn trzny zegar, kontroluj cy czas, jaki up ywa od momentu dodania przygotowanych próbek do odczynnika Master Mix b d cego w u yciu. Amplifikacj i detekcj nale y rozpocz jak najszybciej, jednak nie pó niej ni 90 minut od zako czenia przebiegu w aparacie cobas x 480. Na zak adce Workplace wy wietlany jest zegar odliczaj cy czas. P. Po zako czeniu procesu amplifikacji i detekcji wy aduj p ytk z mikrodo kami z analizatora cobas z 480. Q. Aby przegl da i akceptowa poszczególne wyniki, post puj zgodnie z instrukcj opisan w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu cobas Przeprowadzanie przebiegu pracy Recovery Workflow UWAGA: Przebieg pracy Recovery jest dost pny jako opcja przywracania, w przypadku gdy pe ny przebieg pracy nie mo e zosta zako czony z powodu okoliczno ci, na które u ytkownik nie ma wp ywu (np. wy czenie zasilania podczas cyklu amplifikacji/detekcji). UWAGA: Tylko próbki, których przetwarzanie w aparacie cobas x 480 zako czy o si pomy lnie, mog zosta poddane procesowi amplifikacji/detekcji z zastosowaniem cyklu pracy Recovery. Podczas cyklu pracy Recovery kontrola systemu dotycz ca odczynników i innych produktów jest ograniczona. Podczas przebiegu pracy Recovery nie zachodzi ledzenie pozycji próbek u ytkownik ko cowy musi si upewni, e bie ca pozycja próbki w p ytce z mikrodo kami odpowiada przypisanej jej pozycji w pliku harmonogramu pracy raportu uk adu p ytki Recovery. Podczas przygotowywania p ytki z mikrodo kami konieczne jest zachowanie maksymalnej ostro no ci, aby zapewni w a ciwe przygotowanie reakcji PCR oraz w celu unikni cia zaka enia. UWAGA: Próbki przetworzone w aparacie cobas x 480 maj ograniczon stabilno. Musz one zosta poddane amplifikacji/detekcji w przebiegu pracy Recovery Workflow w ci gu 24 godzin, je li s przechowywane w temperaturze od 2 C do 30 C. A. Rozpocznij cykl pracy Recovery, klikaj c przycisk New run. B. W oknie Test Selection wybierz Recovery, a nast pnie jako typ testu wybierz HPV. C. Wprowad nazw cyklu pracy lub pozostaw domy ln nazw cyklu pracy, a nast pnie kliknij OK, aby kontynuowa. D. Wybierz cykl pracy do odzyskania. E. W przypadku stosowania HPV ASAP v2.1 zeskanuj oryginalny identyfikator DWP z pe nego przebiegu pracy. F. Wprowad nowy identyfikator MWP. G. Wprowad identyfikatory odczynników Master Mix oraz Metal Ions dla wszystkich fiolek odczynników do amplifikacji/detekcji w zestawie. H. Przygotuj odczynnik Master Mix dla testu cobas 4800 HPV: 1. W przypadku zestawu 240 testów dodaj 240 µl odczynnika HPV Mg/Mn do jednej fiolki HPV MMX (fiolka 0,5 ml z zestawu 240 testów). 2. W przypadku zestawu 960 testów dodaj 450 µl odczynnika HPV Mg/Mn do ka dej z dwóch fiolek HPV MMX (fiolki 1,0 ml z zestawu 960 testów). UWAGA: Cykl pracy Recovery musi si rozpocz w ci gu 90 minut od dodania odczynnika HPV Mg/Mn do HPV MMX. System nie kontroluje czasu, jaki up ywa od momentu dodania przygotowanych próbek do roboczego odczynnika Master Mix, b d cego w u yciu w przebiegu pracy Recovery. U ytkownik ko cowy musi zapewni, e amplifikacja i detekcja rozpocz a si w wyznaczonym czasie. I. Dok adnie zmieszaj odczynnik roboczy Master Mix, ostro nie odwracaj c fiolk (-ki). Nie mieszaj roboczego odczynnika Master Mix w mieszadle wibracyjnym. J. Przenie 25 µl odczynnika roboczego Master Mix do odpowiednich pozycji w p ytce z mikrodo kami. K. Umie p ytk do ekstrakcji cyklu pracy, który ma zosta powtórzony, na osobn p ytk magnetyczn. L. R cznie przenie 25 µl eluatu z pozycji w p ytce do ekstrakcji do odpowiednich pozycji w p ytce z mikrodo kami. Upewnij si, e zosta y zachowane w a ciwe pozycje (np. eluat w pozycji A1 p ytki do ekstrakcji jest przeniesiony do pozycji A1 p ytki z mikrodo kami). Upewnij si, e do p ytki z mikrodo kami nie zosta przeniesiony odczynnik MGP PL 12 Doc Rev. 13.0

13 M. Aby uszczelni p ytk z mikrodo kami, post puj zgodnie z instrukcj opisan w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu cobas N. Odwiruj p ytk z mikrodo kami za pomoc b bna wirówki przez co najmniej 5 sekund przy warto ci RCF wynosz cej O. Przenie p ytk do analizatora cobas z 480 i rozpocznij cykl amplifikacji i detekcji. P. Po zako czeniu procesu amplifikacji i detekcji wy aduj p ytk z mikrodo kami z analizatora cobas z 480. Q. Aby przegl da i akceptowa poszczególne wyniki, post puj zgodnie z instrukcj opisan w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu cobas Interpretacja wyników UWAGA: Ca y proces walidacji testu i cyklu pracy jest przeprowadzany przez oprogramowanie cobas UWAGA: Wa ny cykl pracy mo e obejmowa zarówno wa ne, jak i niewa ne wyniki próbek. W przypadku prawid owego cyklu wyniki próbek interpretuje si w sposób przedstawiony w tabelach 1 i 2. Tabela 1 Interpretacja wyników testu cobas 4800 HPV na obecno DNA wirusa HPV cobas 4800 Raport wyniku i jego interpretacja HPV Test dany wynik HPV High Risk Panel : Dodatnie HPV wysokiego stopnia ryzyka POS HR HPV Wynik próbki jest dodatni dla DNA któregokolwiek typu lub kombinacji nast puj cych typów wirusa HPV wysokiego stopnia ryzyka: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. Ujemne HPV wysokiego stopnia ryzyka* NEG HR HPV DNA HPV typu 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 i 68 by o niewykrywalne lub poni ej wcze niej ustawionego progu. Niewa ne HPV wysokiego ryzyka Wyniki dla HPV wysokiego ryzyka s niewa ne. W przypadku próbek PreservCyt oryginalna próbka nie powinna by Invalid HR HPV poddawana testowi wi cej ni dwa razy, aby otrzyma wa ne wyniki. Je eli wyniki nadal s niewa ne, nale y pozyska now próbk. W przypadku próbek SurePath oryginalna próbka powinna by badana ponownie, je eli pozosta a wystarczaj ca obj to. Je eli wyniki nadal s niewa ne, nale y pozyska now próbk. Brak wyników dla próbki Instrukcje dotycz ce przegl dania znaczników cyklu pracy i zalecanych czynno ci mo na znale w odpowiednim Failed Podr czniku u ytkownika systemu cobas W celu otrzymania wa nego wyniku ponownie przeprowad test oryginalnej próbki. dany wynik HPV High Risk Panel Plus Genotyping : Dodatnie inne HPV wysokiego stopnia ryzyka POS Other HR HPV Wynik próbki jest dodatni dla DNA któregokolwiek typu lub kombinacji nast puj cych typów wirusa HPV wysokiego stopnia ryzyka: 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. Ujemne inne HPV wysokiego stopnia ryzyka* NEG Other HR HPV DNA HPV typu 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 i 68 by o niewykrywalne lub poni ej wcze niej ustawionego progu. Niewa ne inne HPV wysokiego ryzyka Wynik innego HPV wysokiego ryzyka jest niewa ny. W przypadku próbek PreservCyt oryginalna próbka nie Invalid Other HR HPV powinna by poddawana testowi wi cej ni dwa razy, aby otrzyma wa ne wyniki. Je eli wyniki nadal s niewa ne, nale y pozyska now próbk. W przypadku próbek SurePath oryginalna próbka powinna by badana ponownie, je eli pozosta a wystarczaj ca obj to. Je eli wyniki nadal s niewa ne, nale y pozyska now próbk. Dodatnie HPV16 POS HPV16 W próbce wykryto obecno DNA HPV typu 16. Ujemne HPV16* NEG HPV16 DNA HPV typu 16 by o niewykrywalne lub poni ej wcze niej ustawionego progu. Niewa ne HPV16 Wynik HPV16 jest niewa ny. W przypadku próbek PreservCyt oryginalna próbka nie powinna by poddawana Invalid HPV16 testowi wi cej ni dwa razy, aby otrzyma wa ne wyniki. Je eli wyniki nadal s niewa ne, nale y pozyska now próbk. W przypadku próbek SurePath oryginalna próbka powinna by badana ponownie, je eli pozosta a wystarczaj ca obj to. Je eli wyniki nadal s niewa ne, nale y pozyska now próbk PL 13 Doc Rev. 13.0

14 cobas 4800 HPV Test POS HPV18 NEG HPV18 Invalid HPV18 Failed Raport wyniku i jego interpretacja Dodatnie HPV18 W próbce wykryto obecno DNA HPV typu 18. Ujemne HPV18* DNA HPV typu 18 by o niewykrywalne lub poni ej wcze niej ustawionego progu. Niewa ne HPV18 Wynik HPV18 jest niewa ny. W przypadku próbek PreservCyt oryginalna próbka nie powinna by poddawana testowi wi cej ni dwa razy, aby otrzyma wa ne wyniki. Je eli wyniki nadal s niewa ne, nale y pozyska now próbk. W przypadku próbek SurePath oryginalna próbka powinna by badana ponownie, je eli pozosta a wystarczaj ca obj to. Je eli wyniki nadal s niewa ne, nale y pozyska now próbk. Brak wyników dla próbki Instrukcje dotycz ce przegl dania znaczników cyklu pracy i zalecanych czynno ci mo na znale w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu cobas W celu otrzymania wa nych wyników ponownie przeprowad test oryginalnej próbki. * Wynik ujemny nie wyklucza obecno ci zaka enia wirusem HPV, gdy wyniki zale ne s od odpowiedniego pobrania próbki, nieobecno ci inhibitorów oraz obecno ci ilo ci DNA wystarczaj cej do detekcji. Tabela 2 Interpretacja wyników testu cobas 4800 HPV dla pacjentów z nieprawid owo ciami cytologicznymi Wyniki NEG Other HR HPV*, NEG HPV16, NEG HPV18 POS Other HR HPV*, NEG HPV16, NEG HPV18 Interpretacja Bardzo ma e prawdopodobie stwo dla CIN2. Zwi kszone prawdopodobie stwo, e CIN2 zostanie wykryte podczas kolposkopii. POS HPV16 i/lub POS HPV18 Najwy sze prawdopodobie stwo, e CIN2 zostanie wykryte podczas kolposkopii 34,35. *Inne DNA HR HPV obejmuj nast puj ce typy: 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. UWAGA: Ujemne wyniki HPV nie powinny by powodem rezygnacji z kolposkopii u kobiet. UWAGA: Oprócz wyników wyszczególnionych w tabeli powy ej mo liwe s tak e wyniki niewa ne dla jednej lub wielu kombinacji. W razie otrzymania takich wyników, jak na przyk ad: Other HR HPV NEG, HPV16 POS, HPV18 Invalid Wyniki dodatnie i ujemne powinny by interpretowane tak jak to przedstawiono w Tabeli 1. W tym przyk adzie wyniki HPV 18 s niewa ne. Oryginalna próbka nie powinna by poddawana testowi wi cej ni dwa razy, aby otrzyma wa ne wyniki. Je eli wyniki nadal s niewa ne, nale y pozyska now próbk. UWAGA: Ujemne wyniki wskazuj, e st enia DNA HPV s niewykrywalne lub poni ej wcze niej ustawionego progu. UWAGA: Dodatnie wyniki testu wskazuj na obecno któregokolwiek lub wi cej typów wirusa, jednak poniewa pacjentki s cz sto wspó zaka one jego typami niskiego ryzyka, nie wyklucza to obecno ci typów niskiego ryzyka u pacjentek z zaka eniami mieszanymi. UWAGA: Wyniki tego testu powinny by interpretowane wy cznie w po czeniu z informacjami pochodz cymi z oceny klinicznej pacjentki i jej historii choroby. KONTROLA JAKO CI Ka dy cykl pracy obejmuje jeden zestaw kontroli dodatnich i ujemnych testu cobas 4800 HPV. W przypadku ka dego cyklu pracy, aby przez oprogramowanie cobas 4800 zosta y wy wietlone mo liwe do odnotowania wyniki testu cobas 4800 HPV tego cyklu pracy, musz zosta uzyskane wa ne wyniki zarówno dla kontroli dodatniej, jak i ujemnej. Kontrola dodatnia Wynik kontroli HPV (+) musi by oznaczony jako Valid. Je eli wyniki kontroli HPV (+) s stale niewa ne, skontaktuj si z miejscowym biurem firmy Roche w celu uzyskania pomocy technicznej. Kontrola ujemna Wynik kontroli ( ) musi by oznaczony jako Valid. Je eli wyniki kontroli ( ) s stale niewa ne, skontaktuj si z miejscowym biurem firmy Roche w celu uzyskania pomocy technicznej. RODKI OSTRO NO CI DOTYCZ CE PROCEDURY Jak w przypadku ka dej procedury testowej, dla prawid owego przeprowadzenia badania kluczowe znaczenie ma zachowanie zasad dobrej praktyki laboratoryjnej. Z uwagi na wysok czu o analityczn niniejszego testu nale y przedsi wzi wyj tkow ostro no, u ywaj c odczynników oraz mieszanin do amplifikacji, aby zapobiec kontaminacji PL 14 Doc Rev. 13.0

15 OGRANICZENIA METODY 1. Test cobas 4800 HPV wykrywa DNA typów 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 i 68 wysokiego ryzyka. Test ten nie wykrywa DNA wirusa HPV typów niskiego ryzyka (np. 6, 11, 42, 43, 44), gdy takie testy nie maj warto ci klinicznej Test cobas 4800 HPV do wykrywania wirusa brodawczaka ludzkiego typu 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 oraz 68 nie jest zalecany do weryfikacji podejrze molestowania seksualnego. 3. Wykonywanie testu cobas 4800 HPV nie zosta o dostatecznie zbadane u pacjentów zaszczepionych przeciwko wirusowi HPV Cz sto wyst powania zaka enia wirusem HPV w populacji mo e wp ywa na skuteczno testu. Dodatnie warto ci predykcyjne ulegaj zmniejszeniu przy badaniu populacji z nisk cz sto ci zachorowa lub osób, u których nie wyst puje ryzyko zaka enia. 5. Zaka enie wirusem HPV nie jest wska nikiem wyniku cytologicznego HSIL ani CIN wysokiego stopnia, nie wskazuje równie na rozwój CIN2-3 lub raka. U wi kszo ci kobiet zaka onych jednym lub wi ksz ilo ci typów wirusa HPV wysokiego ryzyka nie rozwinie si CIN2-3 ani rak. 6. Ujemny wynik testu wirusa HPV wysokiego ryzyka nie wyklucza mo liwo ci wyst pienia wyniku cytologicznego HSIL lub CIN2-3 albo raka. 7. Do bada nale y u ywa tylko okre lonych rodzajów próbek. Test cobas 4800 HPV zosta zatwierdzony wy cznie do u ycia z próbkami z szyjki macicy pobranymi do po ywki do przechowywania pobranych komórek cobas PCR, p ynnego pod o a PreservCyt i p ynu konserwuj cego SurePath TM. 8. Fiolki podstawowe Surepath, które zawieraj plastikow wk adk rozdzielaj c nie mog by umieszczane bezpo rednio w aparacie cobas x 480. Próbki pobrane do tych fiolek musz by przenoszone do wtórnej probówki 13 ml Sarstedt w celu umieszczenia w aparacie cobas x 480, aby przetwarza próbk. 9. Detekcja HPV wysokiego ryzyka zale y od liczby jego kopii obecnych w próbce, na któr wp ywa mog metody pobierania próbek, czynniki zwi zane z pacjentem, faza zaka enia i obecno substancji wp ywaj cych na detekcj. 10. Test cobas 4800 HPV obejmuje amplifikacj i detekcj beta-globiny w celu zró nicowania próbek HPV-ujemnych od tych, które nie wykazuj sygna u HPV z powodu niewystarczaj cej masy komórkowej w próbce. Wszystkie próbki HPV-ujemne musz mie wa ny sygna beta-globiny w uprzednio zdefiniowanym zakresie, aby mog y zosta okre lone jako wa ne ujemne przez system cobas Uzyskanie wiarygodnych wyników zale y od w a ciwego pobrania próbki, transportu, przechowywania oraz przetwarzania. Nale y przestrzega procedur opisanych w niniejszej ulotce, do czonej do opakowania testu oraz w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu cobas Dodanie do odczynnika Master Mix cobas 4800 HPV enzymu AmpErase umo liwia selektywn amplifikacj docelowego DNA; jednak aby unikn ska enia odczynników, konieczne jest stosowanie dobrej praktyki laboratoryjnej i dok adne przestrzeganie procedur wyszczególnionych w niniejszej instrukcji. 13. Tego produktu mog u ywa wy cznie osoby przeszkolone w zakresie technik PCR i u ywania systemu cobas Zatwierdzono u ycie tego produktu tylko z aparatem cobas x 480 i analizatorem cobas z 480. Z tym produktem nie mo na stosowa adnych innych urz dze do przygotowania próbek ani systemów do PCR. 15. Z uwagi na ró nice pomi dzy technologiami zaleca si, aby przed zmian stosowanych metod u ytkownik przeprowadzi w laboratorium badanie korelacji stosowanych metod w celu okre lenia ró nic wyst puj cych pomi dzy nimi. 16. Nie oceniano równie wp ywu innych potencjalnych zmiennych, takich jak up awy, stosowanie tamponów, irygacje itd., ani zmiennych zwi zanych z pobieraniem wymazu. 17. Mutacje w obr bie wysoko konserwatywnych regionów DNA genomowego wirusa brodawczaka ludzkiego, z którym wi si primery i/lub sondy u ywane w te cie cobas 4800 HPV, chocia rzadkie, mog spowodowa niewykrycie obecno ci DNA wirusa. 18. Obecno inhibitorów PCR mo e prowadzi do uzyskiwania wyników fa szywie ujemnych lub niewa nych. 19. W próbkach z szyjki macicy cz sto s obecne wykrywalne wzrokowo ilo ci krwi pe nej, widoczne jako ró owe lub jasnobr zowe zabarwienie. Próbki te s przetwarzane w systemie cobas 4800 w zwyk y sposób. Je li st enie krwi pe nej przekracza 2% (ciemnoczerwone lub br zowe zabarwienie) w próbkach w pod o u cobas PCR Cell Collection Media, p ynnym pod o u PreservCyt lub p ynie konserwuj cym SurePath TM, b d 4% w przypadku próbek w p ynie konserwuj cym SurePath TM poddanych obróbce z u yciem buforu do przygotowywania próbek cobas, istnieje prawdopodobie stwo uzyskania fa szywie ujemnych wyników. Szczegó owe informacje zawieraj wyniki dotycz ce wp ywu ró nych czynników na wyniki testu. 20. U ycie dopochwowego rodka nawil aj cego Replens powi zano z fa szywie ujemnymi wynikami próbek w p ynie konserwuj cym SurePath TM. 21. Usuwanie krwinek czerwonych z próbek PreservCyt lub SurePath przez obróbk przy u yciu lodowatego kwasu octowego (GAA) nie by o zatwierdzane z testem cobas 4800 HPV. Jakakolwiek obróbka za pomoc GAA w po czeniu z testem cobas 4800 HPV musi by zatwierdzona przez laboratorium wykonuj ce badanie PL 15 Doc Rev. 13.0

16 CHARAKTERYSTYKA SKUTECZNO CI Porównanie z testem porównawczym HPV z oznaczeniem CE Czu o kliniczna i swoisto testu w wykrywaniu stanów chorobowych ( CIN2) zosta a okre lona dla testu cobas 4800 HPV oraz testu porównawczego HPV z oznaczeniem CE 38 w populacji kobiet w wieku co najmniej 21 lat z wynikami ASC-US badania cytologicznego okre lonymi w rutynowym badaniu przesiewowym w kierunku raka szyjki macicy. Wszystkie testy przeprowadzono z u yciem próbek z szyjki macicy w p ynnej po ywce PreservCyt. W przypadku wszystkich 1578 pacjentek z pocz tkowym wynikiem ASC-US badania cytologicznego wykonano kolposkopi i uzyskano wa ne wyniki testów HPV oraz biopsji szyjki macicy. Stan zdrowia pacjentek zosta stwierdzony przez wykonanie panelu g ównych bada patologicznych próbek z biopsji uzyskanych podczas zabiegu kolposkopii. W tabeli 3 podsumowano wyniki dla populacji z wynikiem ASC-US badania cytologicznego i wykazano, e skuteczno testu cobas 4800 HPV by a porównywalna z testem referencyjnym. Tabela 3 Porównanie skuteczno ci testu cobas 4800 HPV i testu porównawczego HPV z oznaczeniem CE w wykrywaniu stanów CIN2 i CIN3 w populacji z wynikiem ASC-US Test cobas 4800 HPV Estymacja punktowa 95% CI CIN2 Test HPV z oznaczeniem CE Estymacja punktowa 95% CI Czu o (%) 90,0 (72/80) (81,5, 94,8) 87,2 (68/78) 1 (78,0, 92,9) Swoisto (%) 70,5 (1056/1498) (68,1, 72,7) 71,1 (1056/1485) 2 (68,8, 73,4) PPV (%) 14,0 (72/514) (12,8, 15,3) 13,7 (68/497) (12,4, 15,1) NPV (%) 99,2 (1056/1064) (98,6, 99,6) 99,1 (1056/1066) (98,3, 99,5) Cz sto wyst powania (%) 5,1 (80/1578) (4,1, 6,3) 5,0 (78/1563) (4,0, 6,2) CIN3 Czu o (%) 93,5 (43/46) (82,5, 97,8) 91,3 (42/46) (79,7, 96,6) Swoisto (%) 69,3 (1053/1517) (66,9, 71,5) 70,0 (1062/1517) (67,7, 72,3) PPV (%) 8,4 (43/514) (7,6, 9,2) 8,5 (42/497) (7,6, 9,4) NPV (%) 99,7 (1061/1064) (99,2, 99,9) 99,6 (1062/1066) (99,0, 99,9) Cz sto wyst powania (%) 2,9 (43/1578) (2,2, 3,9) 3,0 (46/1563) (2,2, 3,9) 1 Wyniki dla dwóch pacjentek z rozpoznaniem CIN2 nie mog y zosta okre lone za pomoc testu porównawczego HPV z oznaczeniem CE z powodu niewystarczaj cej obj to ci próbki b d cej wynikiem wielokrotnego wykonania testów. 2 Wyniki dla trzynastu pacjentek z rozpoznaniem < CIN2 nie mog y zosta okre lone za pomoc testu porównawczego HPV z oznaczeniem CE z powodu niewystarczaj cej obj to ci próbki b d cej wynikiem wielokrotnego wykonania testów. Ryzyko wyst pienia raka szyjki macicy ( CIN2) u kobiet w wieku 30 lat z prawid owymi wynikami badania cytologicznego jest 7,29 razy wy sze w przypadku otrzymania dodatniego wyniku testu cobas 4800 HPV na obecno wirusa HPV wysokiego ryzyka ni w przypadku ujemnego wyniku testu cobas 4800 HPV. Oceny wzgl dnego ryzyka i ich 95% przedzia y ufno ci przedstawiono w tabeli 4. W przypadku kobiet w wieku 30 lat lub starszych test cobas 4800 HPV mo na zastosowa do oceny obecno ci lub braku genotypów 16 i 18 wirusa HPV. Ryzyko wyst pienia raka szyjki macicy ( CIN2) jest 13,71 razy wy sze w przypadku dodatniego wyniku testu cobas 4800 HPV dla wirusa HPV typu 16 i/lub 18 ni w przypadku ujemnego wyniku oraz 2,51 razy wy sze w przypadku dodatniego wyniku testu cobas 4800 HPV dla wirusa HPV typu 16 i/lub 18 w porównaniu z dodatnim wynikiem testu cobas 4800 HPV dla 12 pozosta ych typów wysokiego ryzyka. W ka dym przypadku, gdy dolna granica przedzia u ufno ci 95% przekracza warto 1, sugeruje to statystycznie wysokie ryzyko rozwoju raka szyjki macicy w przypadku uzyskania dodatniego wyniku testu HPV PL 16 Doc Rev. 13.0

17 Tabela 4 Wzgl dne ryzyko raka szyjki macicy ( CIN2 w g ównym badaniu patologicznym) u kobiet w wieku 30 lat z wynikami badania cytologicznego w normie* Wynik HPV Ocena wzgl dnego ryzyka 95% CI* Porównanie dodatniego i ujemnego 7,29 (3,99, 22,11) 16+/18+ w por. do ujemnego 13,71 (7,31, 41,92) 16+/18+ w por. do 12 innych HR+ 2,51 (1,73, 3,61) Uwaga: Do komórki zerowej szacowanej liczby chorych pacjentek w ka dej z 1000 prób bootstrap dodano 0,5 * 95% CI wynosi od 2,5 do 97,5 percentylowego przedzia u ufno ci typu bootstrap na podstawie 1000 prób bootstrap Populacja NILM ( 30 lat) ocena skuteczno ci W przypadku populacji z wynikiem NILM ( 30 lat) szacunkowe warto ci czu o ci i swoisto ci wraz z 95% przedzia ami ufno ci dla dodatnich wyników HR HPV w porównaniu z ujemnymi wynikami HR HPV przedstawiono w tabeli 5 dla wyników nieskorygowanych. Nieskorygowane wyniki czu o ci i swoisto ci testu w wykrywaniu rozpoznania histologicznego CIN2 wynosi y odpowiednio 83,2% (109/131) z 95% przedzia em ufno ci: od 75,9% do 88,6% i 60,4% (2492/4127) z 95% przedzia em ufno ci: od 58,9% do 61,9%. Nieskorygowane wyniki czu o ci i swoisto ci testu cobas HPV Test w wykrywaniu rozpoznania histologicznego CIN3 wynosi y odpowiednio 90,0% (72/80) z 95% przedzia em ufno ci: od 81,5% do 94,8% i 60,0% (2506/4178) z 95% przedzia em ufno ci: od 58,5% do 61,5%. Tabela 5 Skuteczno testu cobas 4800 HPV w populacji z wynikiem NILM ( 30 lat) (nieskorygowane warto ci szacunkowe) Rozpoznanie CPR Skuteczno Warto szacunkowa 95% CI CIN2 Czu o (%) 83,2 (109/131) (75,9; 88,6) Swoisto (%) 60,4 (2492/4127) (58,9; 61,9) PPV (%) 6,3 (109/1744) (5,8; 6,8) NPV (%) 99,1 (2492/2514) (98,7; 99,4) Cz sto wyst powania (%) 3,1 (131/4258) (2,6; 3,6) CIN3 Czu o (%) 90,0 (72/80) (81,5; 94,8) Swoisto (%) 60,0 (2506/4178) (58,5; 61,5) PPV (%) 4,1 (72/1744) (3,8; 4,5) NPV (%) 99,7 (2506/2514) (99,4; 99,8) Cz sto wyst powania (%) 1,9 (80/4258) (1,5; 2,3) Populacja ogólna ( 25 lat) porównanie skuteczno ci testów HPV z badaniami cytologicznymi Skuteczno kliniczn testu cobas HPV i badania cytologicznego na pod o u p ynnym (PreservCyt) okre lono w populacji kobiet w wieku 25 lat i starszych, niezale nie od wyniku badania cytologicznego (populacja ogólna). W populacji ogólnej ( 25 lat) szacunkowe wyniki dotycz ce czu o ci i swoisto ci testu cobas HPV w porównaniu z badaniem cytologicznym w wykrywaniu CIN2 i CIN3 przedstawiono 38 w Tabeli 6. Nieskorygowane warto ci czu o ci testu cobas HPV i badania cytologicznego w przypadku wykrywania CIN2 wynosi y odpowiednio 88,2% (380/431) z 95% przedzia em ufno ci 84,8 90,9% i 51,5% (222/431) z przedzia em ufno ci 46,8 56,2%. Nieskorygowane warto ci czu o ci testu cobas HPV i badania cytologicznego w przypadku wykrywania CIN3 wynosi y odpowiednio 92,0% (252/274) z 95% przedzia em ufno ci 88,1 94,6% i 53,3% (146/274) z przedzia em ufno ci 47,4 59,1%. Skorygowane pod k tem b du weryfikacji warto ci swoisto ci testu cobas HPV i badania cytologicznego w przypadku wykrywania CIN2 wynosi y odpowiednio 90,5% (36 343/40 163) z przedzia em ufno ci 90,2 90,8% i 94,1% (37 811/40 163) z przedzia em ufno ci 93,9 94,4% PL 17 Doc Rev. 13.0

18 Tabela 6 Porównanie skuteczno ci testu cobas 4800 HPV i badania cytologicznego w przypadku wykrywania CIN2 i CIN3 w populacji ogólnej ( 25 lat) CIN2 Czu o Swoisto PPV NPV CIN3 Czu o Swoisto PPV NPV Badanie cytologiczne Test cobas HPV % (n) 95% CI % (n) 95% CI 51,5 (222/431) 73,4 (5428/7392) 10,2 (222/2186) 96,3 (5428/5637) 53,3 (146/274) 73,0 (5509/7549) 6,7 (146/2186) 97,7 (5509/5637) (46,8 56,2) (72,4 74,4) ( ) (95,9 96,6) (47,4 59,1) (72,0 74,0) 88,2 (380/431) 57,8 (4270/7392) 10,9 (380/3502) 98,8 (4270/4321) 92,0 (252/274) 56,9 (4299/7549) (84,8 90,9) (56,6 58,9) (10,4 11 3) (98,5 99,1) (88,1 94,6) (55,8 58,1) (6,0 7,4) 7,2 (252/3502) (6,9 7,5) (97,4 98,0) 99,5 (4299/4321) (99,2 99,7) Granica wykrywalno ci Granica detekcji (LOD) genotypów wysokiego ryzyka HPV16, HPV18 i HPV31 wirusa HPV zosta a okre lona dla testu cobas 4800 HPV. Granice detekcji (LOD) oszacowano z u yciem: 1) plazmidów HPV typu 31, HPV typu 16 i HPV typu 18 w tle poddanych pulowaniu HPVujemnych próbek pacjentów pobranych do p ynnego pod o a PreservCyt i p ynu konserwuj cego SurePath TM oraz 2) HPV linii komórkowych dodatnich dla SiHa (HPV16) i HeLa (HPV18) w p ynnym pod o u PreservCyt i p ynie konserwuj cym SurePath TM, zawieraj cych t o HPVujemnej linii komórkowej (HCT-15). Plazmid oraz linie komórkowe zosta y rozcie czone do st e poni ej, powy ej oraz na przewidywanych poziomach granicy detekcji (LOD). Dla ka dego z 3 zestawów odczynników, zarówno w p ynnym pod o u PreservCyt, jak i p ynie konserwuj cym SurePath TM, dla ka dego plazmidu lub linii komórkowej przetestowano co najmniej 60 kopii. Wyniki dotycz ce próbek w p ynie konserwuj cym SurePath TM podawane s w po przeprowadzeniu obróbki z u yciem buforu do przygotowywania próbek cobas oraz bez niej. Granica detekcji (LOD) to granica zawarto ci DNA wirusa HPV w próbce, której wyniki testowania s co najmniej w 95% dodatnie. Tabele 7, 8 i 9 zawieraj wyniki dla zestawu odczynników, wykazuj cego najbardziej konserwatywn (najwy sz ) granic detekcji (LOD) w analizie odpowiednio p ynnego pod o a PreservCyt Solution i p ynu konserwuj cego SurePath TM. Tabela 7 Poziomy granicy detekcji dla HPV typu 31, 16, 18 oraz linii komórkowych SiHa (HPV16) i HeLa (HPV18) w p ynnym pod o u PreservCyt Typ HPV Miano (kopie lub komórki/ml) Liczba dodatnich/ przetestowanych % wyników dodatnich 95% przedzia ufno ci Dolny Górny /60 100% 94% 100% /61 97% 89% 100% /60 82% 70% 90% /60 100% 94% 100% /60 100% 94% 100% /61 90% 80% 96% /60 100% 94% 100% /60 100% 94% 100% /61 69% 56% 80% SiHa (HPV 16) /66 100% 95% 100% SiHa (HPV 16) /65 98% 92% 100% SiHa (HPV 16) 50 57/60 95% 86% 99% HeLa (HPV 18) 80 60/60 100% 94% 100% HeLa (HPV 18) 40 60/60 100% 94% 100% HeLa (HPV 18) 20 56/60 93% 84% 98% PL 18 Doc Rev. 13.0

19 Tabela 8 Poziomy granicy detekcji dla HPV typu 31, 16, 18 oraz linii komórkowych SiHa (HPV16) i HeLa (HPV18) w p ynie konserwuj cym SurePath TM Typ HPV Miano (kopie lub komórki/ml) Liczba dodatnich/ przetestowanych % wyników dodatnich 95% przedzia ufno ci Dolny Górny /60 100% 94% 100% /60 95% 86% 99% /60 77% 64% 87% /60 100% 94% 100% /60 100% 94% 100% /60 85% 73% 93% 18 1,500 60/60 100% 94% 100% /60 100% 94% 100% /60 93% 84% 98% SiHa (HPV 16) /60 98% 91% 100% SiHa (HPV 16) 50 57/60 95% 86% 99% SiHa (HPV 16) 25 42/60 70% 57% 81% HeLa (HPV 18) 80 60/60 100% 94% 100% HeLa (HPV 18) 40 60/60 100% 94% 100% HeLa (HPV 18) 20 59/60 98% 91% 100% Tabela 9 Poziomy granicy wykrywalno ci wirusa HPV typu 31, 16, 18 oraz linii komórkowych SiHa (HPV 16) i HeLa (HPV 18) w p ynie konserwuj cym SurePath TM po przeprowadzeniu obróbki z u yciem buforu do przygotowywania próbek cobas Typ HPV Miano (kopie lub komórki/ml) Liczba dodatnich/ przetestowanych % wyników dodatnich 95% przedzia ufno ci Dolny Górny /60 100% 94% 100% /59 100% 94% 100% /60 90% 80% 96% /60 100% 94% 100% /60 98% 91% 100% /60 67% 53% 78% /60 100% 94% 100% /60 100% 94% 100% /59 93% 84% 98% SiHa (HPV 16) /60 100% 94% 100% SiHa (HPV 16) /60 100% 94% 100% SiHa (HPV 16) /60 92% 82% 97% HeLa (HPV 18) 80 60/60 100% 94% 100% HeLa (HPV 18) 40 59/60 98% 91% 100% HeLa (HPV 18) 20 43/60 72% 59% 83% PL 19 Doc Rev. 13.0

20 Weryfikacja reprezentatywno ci Aby dokona weryfikacji, czy test cobas 4800 HPV jest zdolny do precyzyjnej detekcji wszystkich genotypów HPV wysokiego ryzyka, okre lono granic detekcji (LOD) (tabele 10, 11 i 12) dla genotypów 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 i 68. Czu o testu cobas 4800 HPV dla genotypów 16, 18 i 31 HPV zosta a okre lona w badaniu granicy detekcji, opisanym wcze niej w tej ulotce do czonej do opakowania. Ilo ciowo okre lone ilo ci plazmidu ka dego z genotypów HPV zosta y rozcie czone do st e poni ej, powy ej oraz na przewidywanych poziomach granicy detekcji (LOD), zarówno w p ynnym pod o u PreservCyt, jak i w p ynie konserwuj cym SurePath TM, zawieraj cym HPV ujemne komórki HCT-15. Jedna seria odczynników zosta a u yta do wytworzenia co najmniej 48 kopii dla ka dego z poziomów dodatnich dla ka dej z po ywek. W przypadku badania próbek w p ynie konserwuj cym SurePath TM poddanych obróbce z u yciem buforu do przygotowywania próbek cobas (tabela 12) materia t a zosta przygotowany z próbek pobranych z szyjki macicy do p ynu konserwuj cego SurePath TM, które zosta y przebadane w 24 powtórzeniach z u yciem dwóch serii odczynników. Dla ka dego typu wirusa HPV zaraportowan granic (LOD) okre lono jako najni sze st enie oznaczenia z 95-procentowym odsetkiem trafie wyników dodatnich oraz z co najmniej 95-procentowym odsetkiem trafie wszystkich wy szych st e. Tabela 10 Podsumowanie granicy detekcji genotypu wysokiego ryzyka w badaniu reprezentatywno ci genotypu HPV cobas 4800 HPV (p ynne pod o e PreservCyt ) Typ DNA HPV LOD (kopie/ml) Liczba dodatnich/ przetestowanych Odsetek trafie 95% przedzia ufno ci Dolny Górny /48 96% 86% 99% /48 100% 93% 100% /48 100% 93% 100% /48 96% 86% 99% /48 96% 86% 99% /48 100% 93% 100% /48 100% 93% 100% /48 98% 89% 100% /48 96% 86% 99% /48 100% 93% 100% /48 100% 93% 100% Tabela 11 Podsumowanie granicy detekcji genotypu wysokiego ryzyka w badaniu reprezentatywno ci genotypu HPV cobas 4800 HPV (p yn konserwuj cy SurePath TM ) Typ DNA HPV LOD (kopie/ml) Liczba dodatnich/ Odsetek 95% przedzia ufno ci przetestowanych trafie Dolny Górny /49 96% 93% 100% /48 100% 93% 100% /53 100% 93% 100% /49 100% 93% 100% /48 98% 89% 100% /51 100% 93% 100% /50 100% 93% 100% /49 100% 93% 100% /48 96% 86% 99% /48 98% 89% 100% /48 100% 93% 100% PL 20 Doc Rev. 13.0

21 Tabela 12 Podsumowanie granicy wykrywalno ci genotypu wysokiego ryzyka w badaniu reprezentatywno ci genotypu wirusa HPV w systemie cobas 4800 (p yn konserwuj cy SurePath TM po obróbce z u yciem buforu do przygotowywania próbek cobas ) Typ DNA HPV LOD (kopie/ml) Liczba dodatnich/ przetestowanych Odsetek trafie 95% przedzia ufno ci Dolny Górny /48 100% 93% 100% /48 100% 89% 100% /48 100% 93% 100% /48 100% 93% 100% /48 96% 86% 99% /48 100% 93% 100% /48 96% 86% 99% /48 100% 93% 100% /48 100% 93% 100% /48 100% 93% 100% /48 100% 93% 100% Precyzja Wewn trzna precyzja zosta a poddana kontroli z zastosowaniem cz onów panelu przygotowanego dla badania granicy detekcji, opisanego w tej ulotce do czonej do opakowania. W analizie precyzji wykorzystano poziomy równe i wy sze od granicy detekcji. Panele przygotowano przez wprowadzenie emituj cych impulsy plazmidów HPV31, HPV16 i HPV18 do t a HPV-ujemnych próbek pacjentów pobranych do p ynnego pod o a PreservCyt i p ynu konserwuj cego SurePath TM. Warto ci odsetka trafie dodatnich dla cz onów paneli (p ynne pod o e PreservCyt i p yn konserwuj cy SurePath TM ) równych i powy ej granicy detekcji (LOD) przedstawiono odpowiednio w tabelach 13 i 14. Warto ci odsetka trafie by y powy ej 95% dla wszystkich poziomów paneli plazmidu. Zmienno warto ci Ct dla testu poddano analizie oraz obliczono udzia czynników losowych dotycz cych zestawu odczynników, systemów, pomi dzy cyklami pracy oraz wewn trz cykli i podsumowano w tabeli 15 dla p ynnego pod o a PreservCyt, a w tabeli 16 dla p ynu konserwuj cego SurePath TM. Tabela 17 przedstawia warto SD i %CV dla Ct w przypadku ró nych czynników, od których zale y zmienno p ynnego pod o a PreservCyt. Tabela 18 przedstawia warto Ct SD i %CV dla czynników, od których zale y zmienno p ynu konserwuj cego SurePath TM. Tabela 13 Podsumowanie odsetka trafie dla badania precyzji testu cobas 4800 HPV równego lub wi kszego od granicy detekcji (LOD) (w p ynnym pod o u PreservCyt ) Docel. typ HPV31 HPV16 HPV18 St enie panelu St enie (kopie lub komórki/ml) Liczba testów Liczba wyn. dod. Odsetek trafie 95% CI dla odsetka trafie Dolny Górny > LOD % 98% 100% = LOD % 95% 100% > LOD % 98% 100% = LOD % 98% 100% > LOD % 98% 100% = LOD % 98% 100% Tabela 14 Podsumowanie odsetka trafie dla badania precyzji testu cobas 4800 HPV równego lub wi kszego od granicy detekcji (LOD) (w p ynie konserwuj cym SurePath TM ) Docel. typ HPV31 HPV16 HPV18 St enie panelu St enie (kopie lub komórki/ml) Liczba testów Liczba wyn. dod. Odsetek trafie 95% CI dla odsetka trafie Dolny Górny > LOD % 98% 100% = LOD % 94% 99% > LOD % 98% 100% = LOD % 98% 100% > LOD % 98% 100% = LOD % 98% 100% PL 21 Doc Rev. 13.0

22 Tabela 15 Analiza czynników zmienno ci warto ci Ct dla poziomów panelu badania precyzji testu cobas 4800 HPV, przygotowanych w p ynnym pod o u PreservCyt Docel. typ HPV16 HPV18 HPV31 St enie panelu Liczba rednia piku > LOD ,3 = LOD ,5 > LOD ,6 = LOD ,8 > LOD ,5 = LOD ,6 Czynniki zmienno ci/procent udzia u Seria odczynnika System Seria Losowe Razem 0, ,111 0,079 0,228 17% 0% 49% 35% 100% 0, ,042 0,161 0,228 11% 0% 18% 71% 100% 0, ,149 0,067 0,259 16% 0% 58% 26% 100% 0, ,050 0,184 0,261 10% 0% 19% 71% 100% 0,003 0,002 0,105 0,187 0,297 1% 1% 35% 63% 100% 0, ,157 0,489 0,666 3% 0% 24% 73% 100% Tabela 16 Analiza czynników zmienno ci warto ci Ct dla poziomów panelu badania precyzji testu cobas 4800 HPV, przygotowanych w p ynie konserwuj cym SurePath TM Docel. typ HPV16 HPV18 HPV31 St enie panelu Liczba rednia piku > LOD ,2 = LOD ,2 > LOD ,3 = LOD ,7 > LOD ,2 = LOD ,1 Czynniki zmienno ci/procent udzia u Seria odczynnika System Seria Losowe Razem 0, ,039 0,157 0,209 7% 0% 18% 75% 100% 0 0 0,090 0,316 0,405 0% 0% 22% 78% 100% 0, ,119 0,073 0,204 5% 0% 58% 36% 100% 0 0 0,148 0,219 0,366 0% 0% 40% 60% 100% 0 0 0,099 0,393 0,493 0% 0% 20% 80% 100% 0,026 0,015 0,038 0,684 0,764 3% 2% 5% 90% 100% Tabela 17 Analiza SD i %CV warto ci Ct dla poziomów panelu badania precyzji testu cobas 4800 HPV, przygotowanych w p ynnym pod o u PreservCyt Docel. typ HPV16 HPV18 HPV31 St enie panelu Liczba rednia piku > LOD ,3 = LOD ,5 > LOD ,6 = LOD ,8 > LOD ,5 = LOD ,6 Czynniki SD/%CV Seria odczynnika System Seria Losowe Razem 0,19 0 0,33 0,28 0,48 0,50% 0,00% 0,90% 0,80% 1,30% 0,16 0 0,20 0,40 0,48 0,40% 0,00% 0,50% 1,10% 1,30% 0,21 0 0,39 0,26 0,51 0,60% 0,00% 1,10% 0,70% 1,40% 0,16 0 0,22 0,43 0,51 0,40% 0,00% 0,60% 1,10% 1,30% 0,05 0,05 0,32 0,43 0,54 0,10% 0,10% 0,90% 1,20% 1,50% 0,14 0 0,40 0,70 0,82 0,40% 0,00% 1,10% 1,90% 2,20% PL 22 Doc Rev. 13.0

23 Tabela 18 Analiza SD i %CV warto ci Ct dla poziomów panelu badania precyzji testu cobas 4800 HPV, przygotowanych w p ynie konserwuj cym SurePath TM Docel. typ HPV16 HPV18 HPV31 St enie panelu Liczba rednia piku > LOD ,2 = LOD ,2 > LOD ,3 = LOD ,7 > LOD ,2 = LOD ,1 Czynniki SD/%CV Seria odczynnika System Seria Losowe Razem 0,12 0 0,20 0,40 0,46 0,30% 0,00% 0,50% 1,10% 1,20% 0 0 0,30 0,56 0,64 0,00% 0,00% 0,80% 1,50% 1,70% 0,11 0 0,34 0,27 0,45 0,30% 0,00% 1,00% 0,70% 1,20% 0 0 0,38 0,47 0,61 0,00% 0,00% 1,00% 1,20% 1,60% 0 0,02 0,32 0,63 0,70 0,00% 0,10% 0,80% 1,70% 1,90% 0,16 0,12 0,20 0,83 0,87 0,40% 0,30% 0,50% 2,20% 2,30% Swoisto analityczna Panel bakterii, grzybów i wirusów, w tym takich, które mo na powszechnie znale w drogach moczowo-p ciowych kobiet, a tak e kilka typów wirusa brodawczaka ludzkiego, sklasyfikowanych jako niskiego lub nieokre lonego ryzyka, poddano testowi cobas 4800 HPV w celu okre lenia jego specyficzno ci analitycznej. Organizmy wyszczególnione w tabeli 19 zosta y wprowadzone w wysokich st eniach ( 1 x 10 3 jednostek/reakcj ) do HPV-ujemnej próbki t a w p ynnym pod o u PreservCyt oraz do HPV-ujemnej próbki w p ynnym pod o u PreservCyt zawieraj cym plazmidowe DNA wirusa HPV 31, HPV 16 i HPV 18 w ilo ci stanowi cej 3-krotno granicy wykrywalno ci (LOD). W przypadku organizmów oznaczonych gwiazdk przeprowadzono równie w tych samych warunkach badanie pod k tem ich obecno ci w próbkach t a w p ynie konserwuj cym SurePath TM. W przypadku organizmów oznaczonych dwiema gwiazdkami przeprowadzono badanie pod k tem ich obecno ci tylko w próbkach t a w p ynie konserwuj cym SurePath TM. Wszystkie testy z u yciem próbek w p ynie konserwuj cym SurePath TM zosta y przeprowadzone po obróbce z u yciem buforu do przetwarzania próbek cobas. Wyniki wykaza y, e obecno adnego z tych organizmów nie zak óci a detekcji plazmidowego DNA wirusa HPV 31, HPV 16 i HP V18 ani nie powodowa a fa szywie dodatniego wyniku w próbce HPV-ujemnej. Tabela 19 Drobnoustroje badane pod k tem swoisto ci analitycznej Achromobacter xerosis Haemophilus ducreyi Streptococcus agalactiae* Acinetobacter calcaceticus Wirus zapalenia w troby typu B (HBV) Streptococcus anginosus Acinetobacter lwoffi Wirus Herpes simplex 1* Streptococcus faecalis** Acinetobacter sp. genospecies 3 Wirus Herpes simplex 2* Streptococcus pyogenes* Actinomyces israelii Ludzki wirus upo ledzenia odporno ci (HIV-1) Streptococcus sanguis Adenowirus* Kingella kingae SV40 Aerococcus viridans Klebsiella pneumoniae ss ozaenae* Treponema pallidum Alcaligenes faecalis Lactobacillus acidophilus* Trichomonas vaginalis* Bacillus thuringiensis Lactobacillus crisptus Ureaplasma urealyticum Bacteroides caccae** Lactobacillus delbrueckii s. lactis Veillonella parvula Bacteroides fragilis Lactobacillus jensenii Vibrio parahaemolyticus Bacteroides ureolyticus Lactobacillus vaginalis Weissella paramesenteroides Bifidobacterium longum Lactococcus lactis cremoris Yersinia enterocolitica Bifidobacterium adolescentis* Legionella pneumophila HPV 6* Bifidobacterium brevi Micrococcus luteus HPV 11* Campylobacter jejuni Mobiluncus curtisii s. curtisii HPV 26* Candida albicans* Moraxella osloensis HPV 30** Chlamydia trachomatis* Morganella morganii HPV 34** Chromobacter violaceum Mycobacterium avium HPV 40 Citrobacter braakii Mycobacterium smegmatis HPV 42 Clostridium adolescentis Mycoplasma genitalium HPV 53** Clostridium beijerinckii** Mycoplasma hominis HPV 54 Clostridium perfringens Neisseria gonorrhoeae* HPV 55B Corynebacterium genitalium** Neisseria meningitidis, serogrupa A HPV PL 23 Doc Rev. 13.0

24 Corynebacterium glutamicum Pasteurella multocida HPV 62 Wirus cytomegalii* Pediococcus acidilactici HPV 64 Eikenella corrodens Peptostreptococcus anaerobius* HPV 67* Enterobacter aerogenes** Propionibacterium acnes HPV 69* Enterobacter cloacae Proteus mirabilis* HPV 70* Enterococcus faecalis Proteus vulgaris HPV 71 Enterococcus faecium* Providencia stuartii HPV 72 Wirus Epsteina-Barr* Pseudomonas aeruginosa HPV 73* Erysipelothrix rhusiopathiae Pseudomonas fluorescens** HPV 81 Escherichia coli* Ruminococcus productus HPV 82* Ewingella americana Salmonella minnesota HPV 83 Fusobacterium nucleatum Serratia marcescens HPV 84 Fusobacterium varium** Staphylococcus aureus* HPV 85** Gemella morbillorum Staphylococcus epidermidis* HPV 89 (CP6108) Gardnerella vaginalis Staphylococcus saprophyticus * Badanie przeprowadzono zarówno w próbkach t a w p ynnym pod o u PreservCyt, jak i w p ynie konserwuj cym SurePath ** Badanie przeprowadzono wy cznie w próbce t a w p ynie konserwuj cym SurePath Substancje wp ywaj ce na wynik testu Do oszacowania wp ywu endogennych i egzogennych substancji wp ywaj cych na wynik testu, które potencjalnie mog by obecne w próbkach z szyjki macicy, u yto HPV-dodatnich i HPV-ujemnych próbek z szyjki macicy, a tak e próbek spreparowanych. Materia y badawcze zastosowane w opisanych badaniach przedstawiono w tabeli 20. St enia badanych endogennych i egzogennych substancji odpowiadaj warunkom, jakie mog yby panowa podczas pobierania próbki. Jako potencjalne substancje endogenne wp ywaj ce na wynik testu, znajduj ce si w próbkach z szyjki macicy, przetestowano pe n krew, jednoj drzaste krwinki krwi obwodowej (ang. Peripheral Blood Mononuclear Cells PBMC) i luz szyjkowy. Poziomy ka dej z przetestowanych potencjalnych substancji wp ywaj cych na wynik testu oraz obserwacje dotycz ce tego badania opisano w tabeli 21. W przypadku komórek PBMC i luzu szyjkowego w badanych poziomach nie zaobserwowano wp ywu na wyniki testu. Krew pe na w ilo ci do 2% stwierdzanej wzrokowo w próbkach pobranych do pod o a cobas PCR Cell Collection Media, p ynnego pod o a PreservCyt oraz p ynu konserwuj cego SurePath TM nie wp ywa a na wyniki testu. Krew pe na w ilo ci do 4% stwierdzanej wzrokowo w próbkach pobranych do p ynu konserwuj cego SurePath TM poddanego obróbce z u yciem buforu do przygotowywania próbek cobas nie wp ywa a na wyniki testu. Tabela 20 Opisy próbek badania wp ywu na wyniki testu Rodzaj próbki Opis HPV-dodatnie próbki z szyjki macicy HPV-ujemne próbki z szyjki macicy Spreparowana HPV-dodatnia próbka z szyjki macicy Pule p ynnego pod o a PreservCyt i p ynu konserwuj cego SurePath TM 3 x granica detekcji (LOD) 10 pojedynczych HPV-dodatnich próbek w p ynnym pod o u PreservCyt podzielono na alikwoty w celu poddaniu ich testom z udzia em i bez udzia u endogennych substancji wp ywaj cych na wynik testu 10 pojedynczych HPV-ujemnych próbek w p ynnym pod o u PreservCyt podzielono na alikwoty w celu poddaniu ich testom z udzia em i bez udzia u endogennych substancji wp ywaj cych na wynik testu HPV-dodatnie (kana 1) próbki w p ynnym pod o u PreservCyt rozcie czono próbk HPV-ujemn do poziomu oko o 3 x granicy detekcji (LOD). Plazmidy HPV typu 16 (kana 2) i 18 (kana 3) dodano nast pnie w ilo ci ~ 3 x granica detekcji (LOD). Ka dy z plazmidów typu 31, 16, 18 HPV rozcie czono do ilo ci 3 x granica detekcji (LOD) w pulach próbki w pod o u PreservCyt i p ynie koserwuj cym SurePath. Próbka w p ynie konserwuj cym SurePath TM zosta a przebadana zarówno po przeprowadzeniu obróbki z u yciem buforu do przygotowywania próbek cobas, jak i bez niej PL 24 Doc Rev. 13.0

25 Badana substancja Krew pe na Tabela 21 Wyniki badania wp ywu na wyniki testu substancji endogennych Badane st enia 1%, 1,5%, 2%, 3%, 4%, 6%, 8% udzia obj to ciowy PreservCyt Obserwowany wp yw na wynik testu SurePath Próbka w p ynie SurePath po obróbce z u yciem buforu do przygotowywania próbek cobas Powy ej 2% Powy ej 2% Powy ej 4% PBMC 10 4, 10 5, 10 6 komórki/ml Brak Brak Brak luz szyjkowy luz pochodz cy ze standardowej procedury oczyszczania ze luzu szyjkowego Brak Brak Brak Wszystkie 18 produktów do higieny intymnej i antykoncepcyjnych dla kobiet, sprzedawanych bez recepty (ang. over-the-counter OTC), przetestowano jako potencjalne substancje wp ywaj ce na wynik testu. Typy potencjalnych substancji wp ywaj cych na wynik testu i obserwacje dotycz ce tego badania w pulach p ynnego pod o a PreservCyt i p ynu konserwuj cego SurePath TM w ilo ciach 3 x granica detekcji (LOD) przedstawiono w tabeli 22. Tabela 22 Wyniki badania wp ywu na wyniki testu dla substancji egzogennych Opis substancji Obserwowany wp yw na wynik testu ele i pianki antykoncepcyjne Brak Dopochwowe preparaty nawil aj ce *Tak Irygator dopochwowy Brak Kremy przeciwgrzybicze zawieraj ce: 1% klotrimazol, chlorowodorek fenazopirydyny, 1% hydrokortyzon, Brak 2% azotan mikonazolu, 6,5% ma zawieraj ca tiokonazol, 20% benzokaina * rodek Replens (miejscowy el nawil aj cy) wywo a wyniki fa szywie ujemne w powtórzeniach w puli p ynu konserwuj cego SurePath TM obejmuj cej 3-krotno granicy wykrywalno ci (LOD). Ten wp yw na wynik testu by równie obserwowany po poddaniu próbek w p ynie konserwuj cym SurePath TM obróbce z u yciem buforu do przygotowywania próbek cobas. Porównywalno matrycy czn liczb 1752 pacjentek w czono do udzia u w badaniu obejmuj cego pobranie dwóch próbek z szyjki macicy po jednej do p ynnego pod o a PreservCyt i p ynu konserwuj cego SurePath TM. Ka da z par próbek z szyjki macicy zosta a poddana oznaczeniu z u yciem testu cobas 4800 HPV w celu okre lenia zgodno ci wyników. Próbki w p ynie konserwuj cym SurePath TM zosta y przebadane bez wykonywania obróbki z u yciem buforu do przygotowywania próbek cobas. W tabeli 23 próbki o dodatnich wynikach dla któregokolwiek z trzech kana ów detekcji wirusa HPV traktowano jako dodatnie, natomiast próbki o ujemnym wyniku dla wszystkich kana ów detekcji wirusa HPV uznawano za ujemne. Dodatnia zgodno pomi dzy próbkami w p ynie konserwuj cym SurePath TM i p ynnym pod o u PreservCyt wynosi a 96,4%; ujemna zgodno wynosi a 95,1%, a ogólna zgodno 95,4%. Tabela 23 Podsumowanie wyników testu cobas 4800 HPV dla próbek pobieranych jednocze nie do p ynnego pod o a PreservCyt i p ynu konserwuj cego SurePath TM z u yciem wyniku testu HPV High Risk Panel Pary próbek z szyjki macicy N = 1752 P yn konserwuj cy SurePath TM (10 ml) P ynne pod o e PreservCyt (20 ml) Dodatni Ujemny Razem Dodatni Ujemny Razem Zgodno wyników dodatnich = 407/422 = 96,4% (95% CI 94,2%, 98,0%) Zgodno wyników ujemnych = 1265/1330 = 95,1% (95% CI 93,8%, 96,2%) Ca kowita zgodno wyników = 1672/1752 = 95,4% (95% CI 94,3%, 96,4%) Wyniki badania 1752 pacjentek zosta y poddane tak e analizie polegaj cej na po czeniu wyników dla wszystkich trzech kana ów detekcji wirusa HPV. W analizie tej (tabela 24) po czono wyniki dla ka dego z 1 3 kana ów. Dodatnia zgodno pomi dzy próbkami w p ynie konserwuj cym SurePath TM i p ynnym pod o u PreservCyt wynosi a 96,9%; ujemna zgodno wynosi a 98,0%, a ogólna zgodno 97,9% PL 25 Doc Rev. 13.0

26 Tabela 24 Podsumowanie wyników testu cobas 4800 HPV dla próbek pobieranych jednocze nie do p ynnego pod o a PreservCyt i p ynu konserwuj cego SurePath TM z u yciem wyniku testu HPV High Risk Panel Plus Genotyping Pary próbek z szyjki macicy N = 5256 P yn konserwuj cy SurePath TM (10 ml) P ynne pod o e PreservCyt (20 ml) Dodatni Ujemny Razem Dodatni Ujemny Razem Zgodno wyników dodatnich = 492/508 = 96,9% (95% CI 94,9%, 98,2%) Zgodno wyników ujemnych = 4654/4748 = 98,0% (95% CI 97,6%, 98,4%) Ca kowita zgodno wyników = 5146/5256 = 97,9% (95% CI 97,5%, 98,3%) Stabilno próbek w p ynie konserwuj cym SurePath TM przechowywanych przez 6 tygodni w temperaturze 2 30 C po przeprowadzeniu obróbki z u yciem buforu do przygotowywania próbek cobas Do trzech pul HPV-ujemnych próbek w p ynie konserwuj cym SurePath TM dodano próbk w p ynie konserwuj cym SurePath TM z dodatnim wynikiem na obecno wirusa HPV typu 51 w celu uzyskania pul próbek dodatnich, wysoko dodatnich i nisko dodatnich. Pula nisko dodatnia dawa a wynik w pobli u granicy detekcji (LOD) po wykonaniu testu w dniu 0., a przed przeprowadzeniem obróbki z u yciem buforu do przygotowywania próbek cobas. Pule przechowywano w temperaturze 32 C i badano w odst pach czasu przez maksymalnie 6 tygodni. Próbki w pulach poddano obróbce maj cej na celu usuni cie wi za krzy owych indukowanych przez matryc, a nast pnie przeprowadzono z ich u yciem test cobas 4800 HPV w ka dym punkcie czasowym. W przypadku wszystkich trzech pul warto ci rednie Ct zosta y utrzymane poni ej klinicznej warto ci odci cia dla wirusa HPV typu 51 (40,0 dla kana u 1) w trakcie okresu przechowywania wynosz cego 6 tygodni (patrz tabela 25). Tabela 25 Wyniki dotycz ce stabilno ci próbek w p ynie konserwuj cym SurePath TM w przypadku przechowywania przez 6 tygodni po obróbce z u yciem buforu do przygotowywania próbek cobas Pule próbek w p ynie rednie warto ci Ct* konserwuj cym SurePath TM Dzie 0. Tydzie 1. Tydzie 3. Tydzie 4. Tydzie 6. Wysoko dodatnie 28,7 30,1 30,3 30,6 31,1 Dodatnie 32,9 33,5 34,1 33,9 34,6 Nisko dodatnie (~LOD) 36,9 37,9 38,0 38,8 38,7 * Punkty czasowe w przypadku próbek nisko dodatnich przebadano w 40 powtórzeniach, w przypadku próbek dodatnich testy wykonano w 30 powtórzeniach, natomiast w przypadku próbek wysoko dodatnich w 20 powtórzeniach PL 26 Doc Rev. 13.0

27 PI MIENNICTWO 1. Burd, Eileen M Human Papillomavirus and Cervical Cancer. Clinical Microbiology Reviews. 16: zur Hausen, H Papillomaviruses and Cancer: From Basic Studies to Clinical Application. Nat Rev Cancer. 2(5): Walboomers, Jan M.M., Jacobs, Marcel V., Manos, M.M., et al Human Papillomavirus is a Necessary Cause of Invasive Cervical Cancer Worldwide. Journal of Pathology. 189: Bernard HU. Review: The clinical importance of the nomenclature, evolution and taxonomy of human papillomaviruses. J Clin Virol. 2005; 32S, S Molijn A, Kleter B, Quint W, van Doorn, L. Review: Molecular diagnosis of human papillomavirus (HPV) infections. J Clin Virol. 2005; 32S:S zur Hausen H. Roots and perspectives of contemporary papillomavirus research. J Cancer Res Clin Oncol. 1996; 122: de Villiers EM, Fauguet C, Broker TR, Bernard HU, zur Hausen H. Classification of papillomaviruses. Virology. 2004; 324: Franco EL, Rohan TE, Villa LL. Epidemiologic evidence and human papillomavirus infection as a necessary cause of cervical cancer. J Natl Cancer Inst. 1999; 91: Lorincz AT, Reid R, Jenson AB, et al. Human papillomavirus infection of the cervix: relative risk associations of 15 common anogenital types. Obstet Gynecol. 1992; 79: Bosch, F.X., Manos, M.M., Munoz, N., et al International Biological Study on Cervical Cancer (IBSCC) Study Group. Prevalence of Human Papillomavirus in Cervical Cancer: a Worldwide Perspective. Journal of the National Cancer Institute, Vol. 87, No. 11: Bosch, F.X., A. Lorincz, N. Muñoz, C.J.L.M. Meijer, K.V. Shah (2002) The causal relation between human papillomavirus and cervical cancer J Clin Path 55: Muñoz N, F.X. Bosch, S. de Sanjosé, R. Herrero, X. Castellsagué, K.V. Shah, P.J.F. Snijders, and Chris J.L.M. Meijer, for the International Agency for Research on Cancer Multicenter Cervical Cancer Study Group. (2003) Epidemiologic Classification of Human Papillomavirus Types Associated with Cervical Cancer N Engl J Med 348(6): Clifford GM, Smith JS, Plummer M, Muñoz N, Franceschi S. Human papillomavirus types in invasive cervical cancer worldwide: a metaanalysis. Br J Cancer. 2003; 88: Koutsky, L Epidemiology of genital human papillomavirus infection. American Journal of Medicine. 102(5A): Winer RL, Kiviat NB, Hughes JP, et al. Development and duration of human papillomavirus lesions, after initial infection. J Infect Dis. 2005;191: Moscicki, A, Schiffman M, Kjaer S, Villa L. Updating the natural history of HPV and anogenital cancer. Vaccine 2006; 24(S3); Moscicki AB, Ellenberg JH, Farhat S, Xu J. Persistence of human papillomavirus infection in HIV-infected and uninfected adolescent girls: risk factors and differences, by phylogenetic type. J Infect Dis Jul 1;190(1): Palmer Castle PE, Schiffman M, Herrero R, Hildesheim A, Rodriguez AC, Bratti MC, Sherman ME, Wacholder S, Tarone R, Burk RD. A prospective study of age trends in cervical human papillomavirus acquisition and persistence in Guanacaste, Costa Rica. J Infect Dis Jun 1;191(11): Zielinski GD, Snijders PJF, Rozendaal l, et al. High-risk HPV testing in women with borderline and mild dyskaryosis; long term follow-up data and clinical relevance. J Pathol 2001;195: Holowaty P, Miller AB, Rohan T, To T. Natural history of dysplasia of the uterine cervix, J Natl Cancer Inst 1999; 91: Nobbenhuis MA, Helmerhorst TJ, van den Brule AJ, Rozendaal L, Voorhorst FJ, Bezemer PD, Verheijen RH, Meijer CJ. Cytological regression and clearance of high-risk human papillomavirus in women with an abnormal cervical smear. Lancet. 2001;358(9295): Cuzick J, Clavel C, Petry KU, et al. Overview of the European and North American studies on HPV testing in primary cervical cancer screening. Int J Cancer 2006;119: Whitlock EP, Vesco KK, Eder M, Lin JS, Senger CA, Burda BU. Liquid-based cytology and human papillomavirus testing to screen for cervical cancer: a systematic review for the U.S. Preventive Services Task Force. Ann Intern Med 2011;155:687,697, W Myers, T.W. and Gelfand, D.H Reverse transcription and DNA amplification by a Thermus thermophilus DNA polymerase. Biochemistry. 30: Davies, P., Kornegay, J., Iftner, T Current methods of testing for human papillomavirus. Best Practice and Research Clinical Obstetrics and Gynaecology. Vol. 15, No. 5: Birch, D.E., et al The use of a thermally activated DNA polymerase PCR gives improved specificity, sensitivity and product yield without additives or extra process steps. Nature. Vol 381, No 6581: Meng, Q., et al Automated Multiplex Assay System for Simultaneous Detection of Hepatitis B Virus DNA, Hepatitis C Virus RNA, and Human Immunodeficiency Virus Type 1 RNA. J Clin Microbiol. Vol 39, No 8: PL 27 Doc Rev. 13.0

28 28. Longo, M.C., Berninger, M.S. and Hartley, J.L Use of uracil DNA glycosylase to control carry-over contamination in polymerase chain reactions. Gene. 93: Higuchi, R., Dollinger, G., Walsh, P.S., and Griffith, R Simultaneous amplification and detection of specific DNA sequences. Bio/Technology 10: Heid, C.A., Stevens, J., Livak, J.K., and Williams, P.M Real time quantitative PCR. Genome Research 6: Richmond, J.Y. and McKinney, R.W. eds Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. HHS Publication Number (CDC) Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections. Approved Guideline-Third Edition. CLSI Document M29-A3 Villanova, PA:CLSI, International Air Transport Association. Dangerous Goods Regulations, 48 th Edition Wheeler, C.M., Hunt, W.C., Joste, N.E., Key, C.R., Quint, W.G.V. and Castle, P.E Human Papillomavirus Genotype Distributions: Implications for Vaccination and Cancer Screening in the United States. J Natl Cancer Inst. 101: Khan, M.J., Castle, P.E., Lorincz, A.T., Wacholder, S., Sherman, M., Scott, D.R., Rush, B.B., Glass, A.G. and Schiffman, M The Elevated 10-Year Risk of Cervical Precancer and Cancer in Women With Human Papillomavirus (HPV) Type 16 and 18 and the Possible Utility of Type-Specific HPV Testing in Clinical Practice. J Natl Cancer Inst. 97: Wright TC, Jr., Massad LS, Dunton CJ, Spitzer M, Wilkinson EJ, and Solomon D Consensus Guidelines for the Management of Women with Abnormal Cervical Cancer Screening Tests, Am J Obstet Gynecol 197 (4); Saslow D, Runowicz CD, Solomon D, Moscicki A-B, Smith RA, Eyre HJ, Cohen C. 2002, American Cancer Society Guideline for the Early Detection of Cervical Neoplasia and Cancer. CA Can Jour Clin 53: Stoler MH, Wright TC Jr, Sharma A, Apple R, Gutekunst K, Wright TL; ATHENA(Addressing THE Need for Advanced HPV Diagnostics) HPV Study Group. High-risk human papillomavirus testing in women with ASC-US cytology: results from the ATHENA HPV study. Am J Clin Pathol Mar;135(3): PL 28 Doc Rev. 13.0

29 Informacje dotycz ce wersji dokumentu Doc Rev /2015 Doc Rev /2016 Zredagowano CZ B: w cz ci MATERIA Y WYMAGANE, LECZ NIEDOSTARCZANE zawiera p ytk (z g bokimi do kami) do ekstrakcji o pojemno ci 2,0 ml. W cz ci Przeprowadzanie przebiegu pracy Recovery Workflow dodano etap skanowania identyfikatora DWP w przypadku stosowania HPV ASAP v2.1. Zaktualizowano opisy na stronie z ujednoliconymi symbolami, znajduj cej si na ko cu ulotki do czonej do opakowania. W razie jakichkolwiek pyta prosimy o kontakt z miejscowym przedstawicielstwem firmy Roche. Cz ci POBIERANIE, TRANSPORT I PRZECHOWYWANIE PRÓBEK, INSTRUKCJA U YTKOWANIA oraz CHARAKTERYSTYKA SKUTECZNO CI zosta y zredagowane o nowe instrukcje dotycz ce przechowywania i obróbki próbek SurePath. Cz A zosta a usuni ta,aby wspiera obowi zkow aktualizacj do wersji 2.2 oprogramowania. W razie jakichkolwiek pyta prosimy o kontakt z miejscowym przedstawicielstwem firmy Roche PL 29 Doc Rev. 13.0

30 Roche Molecular Systems, Inc US Highway 202 South Branchburg, NJ USA Distributed by Roche Diagnostics (Schweiz) AG Roche Diagnostics Industriestrasse 7 2, Avenue du Vercors 6343 Rotkreuz, Switzerland Meylan, France Roche Diagnostics GmbH Distributore in Italia: Sandhofer Strasse 116 Roche Diagnostics S.p.A Mannheim, Germany Viale G. B. Stucchi Monza, Milano, Italy Roche Diagnostics, SL Avda. Generalitat, Distribuidor em Portugal: E Sant Cugat del Vallès Roche Sistemas de Diagnósticos Lda. Barcelona, Spain Estrada Nacional, Amadora, Portugal Roche Diagnostics 201, boulevard Armand-Frappier Roche Diagnostica Brasil Ltda. H7V 4A2 Laval, Québec, Canada Av. Engenheiro Billings, 1729 (For Technical Assistance call: Jaguaré, Building 10 Pour toute assistance technique, São Paulo, SP Brazil appeler le: ) Znaki towarowe i patenty Patrz Roche Molecular Systems, Inc. 06/2016 ( ENGL) Doc Rev PL 30 Doc Rev. 13.0

31 Na etykietach produktów diagnostycznych Roche PCR stosuje si obecnie nast puj ce oznaczenia. Oprogramowanie pomocnicze Wyrób do diagnostyki in vitro Autoryzowany Przedstawiciel we Wspólnocie Europejskiej Wytwórca Kod partii Przechowywa z dala od wiat a Zagro enie biologiczne Zawarto wystarczaj ca na <n> testów Numer katalogowy Przestrzega zakresu temperatury Sprawd w instrukcji obs ugi Plik definicji testów Zawarto zestawu Termin wa no ci Dystrybucja przez Numer pozycji handlu globalnego Ten produkt spe nia wymogi dyrektywy Wspólnoty Europejskiej 98/79/WE dotycz cej diagnostycznych urz dze medycznych do stosowania in vitro. Linia pomocy technicznej dla klientów w Stanach Zjednoczonych PL 31 Doc Rev. 13.0