CR3000 INFORMACJE O BADANIACH.

Transkrypt

1 TRÓJGLICERYDY 0344 Przeznaczenie Pakiet odczynników do samodzielnej diagnostyki in vitro, służący do ilościowego oznaczania trójglicerydów w krwi pełnej. Wstęp Trójglicerydy są najpowszechniej występującymi substancjami tłuszczowymi w organizmie. W dużych ilościach występują w żywności (w szczególności w maśle, serze i tłuszczach zwierzęcych). Są magazynowane w tkance tłuszczowej i mięśniach, jako rezerwa energetyczna. Jako nierozpuszczalne w wodzie, we krwi są transportowane przez białka, takie jak chylomikrony. Na stężenie trójglicerydów we krwi silnie wpływa pokarm spożyty przed pobraniem próbki; jeśli osoba badana spożyła tłustą potrawę w dniach poprzedzających badanie, stwierdzone u niej stężenie będzie prawdopodobnie wysokie. Podobny wpływ wywiera alkohol. Choć trójglicerydy nie są tak samo ważne jak cholesterol, wysokie stężenia trójglicerydów są często związane z różnorodnymi chorobami, w szczególności chorobami układu krążenia. W szczególności w połączeniu z hipercholesterolemią, wysokie stężenia trójglicerydów związane są z podwyższonym ryzykiem zawału serca i miażdżycy naczyń. Ogólne zalecenia leczenia i zapobiegania chorobom układu krążenia powinny bezwzględnie obejmować pełne badanie profilu lipidowego, obejmujące pomiar stężenia całkowitego cholesterolu, HDL, LDL i trójglicerydów. Zasada testu Metoda opiera się na przekształcaniu trójglicerydów przez lipazę lipoproteinową w kwasy tłuszczowe i glicerol. Następnie, glicerol w obecności kinazy glicerolowej (GK), ATP i oksydazy glicerolu (GPO) rozpada się na nadtlenek wodoru (H 2 O 2 ) i fosforan di-hydroksy-acetonu (DHAP). Nadtlenek wodoru, w obecności 4-aminofenazonu (4-AP) i czułego chromogenu (substancji barwnej), z udziałem peroksydazy (POD) powoduje powstanie czerwonej pochodnej fenolowej. Nasilenie barwy czerwonej substancji jest wprost proporcjonalne do stężenia trójglicerydów w próbce. Trójglicerydy + H 2 O LIPAZA Glicerol + Kwasy tłuszczowe Glicerol + ATP GK Glicerolo-3-fosforan + ADP Glicerolo-3-fosforan + O 2 + H 2 O GPO DHAP + H 2 O 2 2H 2 O AP + R-OH POD Kompleks czerwony + H 2 O Warunki pracy Długość fali: 505 nm Długość optyczna: 1 cm Czas reakcji: 180 sekund Typ reakcji: Punkt końcowy Objętość próbki: 10 µl Ostrzeżenia i środki ostrożności Dokładnie zapoznać się z instrukcją użytkowania. Ustawić czynnik K, znajdujący się na zewnątrz opakowania. Nie używać odczynników po dacie ważności podanej na opakowaniu. Nie używać nadtlenku wodoru (H 2 O 2 ) do dezynfekcji. Nie używać składników zestawu do żadnego innego celu, niż opisany w rozdziale "Przeznaczenie". Strona 1

2 Zastosować konieczne środki ostrożności wymagane podczas posługiwania się wszelkimi substancjami chemicznymi: stosować jednorazowe rękawiczki; dokładnie zamykać kuwety i probówki zawierające próbki materiału biologicznego; nie jeść, nie pić i nie palić podczas wykonywania testu. Usuwać odpady postępując zgodnie z wymaganiami obowiązującego prawa miejscowego. Arkusz danych dotyczących bezpieczeństwa substancji dla odczynników dostępny jest na życzenie. Zawartość opakowania Kod AD PHARMATRIG 40 TEST: 1 pudełko zawierające kuwety PHARMATRIG (kod AD-11106) + 4 szt. liofilizat (kod AD B) + 4 szt. rozcieńczalnik (kod AD A). Kod AD PHARMATRIG 20 TEST: 1 pudełko zawierające kuwety PHARMATRIG (kod AD-11142) + 3 szt. liofilizat (kod AD B) + 3 szt. rozcieńczalnik (kod AD A). Kod AD PHARMATRIG 10 TEST: 1 pudełko zawierające kuwety PHARMATRIG (kod AD-11127) + 2 szt. liofilizat (kod AD B) + 2 szt. rozcieńczalnik (kod AD A). Kod AD PHARMATRIG Cuvettes 40 TEST: 4 blistry zawierające po 10 kuwet; 1 fiolka z POMARAŃCZOWYM korkiem zawierająca kapilary 10 μl; ulotka. Kod AD PHARMATRIG Cuvettes 20 TEST: 2 blistry zawierające po 10 kuwet; 1 fiolka z POMARAŃCZOWYM korkiem zawierająca kapilary 10 μl; ulotka. Kod AD PHARMATRIG Cuvettes 10 TEST: 1 blister zawierający 10 kuwet; 1 fiolka z POMARAŃCZOWYM korkiem zawierająca kapilary 10 μl; ulotka. Fiolki z enzymami są dostarczane osobno. Materiały pakowane osobno Następujące materiały są dostępne odrębnie, na zamówienie: Roztwór kontrolny trójglicerydów. Skład Kuweta 4 mm bufor PIPES 0,5 mm PhOH Niejonowy środek powierzchniowo czynny Stabilizatory 5 mm 4-AP >15 KU/L GPO >0,5 KU/L lipazy >0,5 KU/L GK Enzym >0,5 KU/L POD >0,5 mm ATP 1 g/l albuminy wołowej V Przygotowanie i przechowywanie odczynników Odczynnik znajdujący się w kuwecie zachowuje stabilność do daty wskazanej na opakowaniu, pod warunkiem przechowywania w zamkniętym opakowaniu aluminiowym, w temperaturze pokojowej (15-30 C/59-86 F). Po pierwszym otwarciu, odczynniki znajdujące się w kuwetach zachowują stabilność przez SZEŚĆ MIESIĘCY: po każdym użyciu należy dokładnie zamknąć aluminiowe opakowanie. Odczynniki enzymatyczne, zarówno rozcieńczalnik, jak i liofilizat, należy przechowywać w temperaturze 2-8 C/35,6-46,4 F i zachowują stabilność do dnia wskazanego na etykiecie. Po rozpuszczeniu 15, enzym zachowuje stabilność do 30 dni, pod warunkiem przechowywania w temperaturze 2-8 C/35,6-46,4 F. 15 Rozpuszczanie enzymu: 1. dodać zawartość fiolki A (rozcieńczalnik, AD A) do fiolki B (liofilizat, AD B); 2. dokładnie wymieszać roztwór przechylając kilkukrotnie i pozostawić na co najmniej 10 minut; 3. ponownie dokładnie wymieszać roztwór i przelać zawartość z powrotem do fiolki z zakraplaczem A; 4. na fiolce przykleić etykietę z datą rozpuszczenia. Strona 2

3 Akcesoria konieczne do przeprowadzenia testu Spektofotometr Callegari S.p.A. Wirówka. Rękawiczki, gazik namoczony alkoholem, jałowy suchy gazik - Stosować wyłącznie alkohol lub podobne środki. Jednorazowe, jałowe nakłuwacze (lancety) - Używać wyłącznie wyrobów posiadających znak CE. Szczypce do obsługi kapilar (w zestawie). Kapilary (dostarczane z odczynnikami). Odpowiednie pojemniki na odpady biologiczne. Próbka 10 µl krwi włośniczkowej lub krwi żylnej pobranej na K 2 -EDTA. Próbkę krwi włośniczkowej należy badać niezwłocznie, podczas gdy próbkę krwi żylnej można badać w okresie sześciu godzin. Osoba badana powinna pozostawać na czczo w okresie 9-12 godzin przed pobraniem próbki. Pobieranie próbki krwi włośniczkowej 1. Należy wybrać miejsce z boku opuszka jednego z środkowych palców dowolnej dłoni. Aby wspomóc przepływ krwi, palce i dłoń powinny być ciepłe w dotyku. 2. Przetrzeć gazikiem miejsce nakłucia i odczekać aż alkohol wyparuje. 3. Należy nacisnąć opuszek palca, przyłożyć lancet do skóry i przycisnąć do momentu kliknięcia. (Ostrzeżenie: używać wyłącznie urządzenie do nakłuwania oznaczone znakiem CE) 4. Delikatnie ucisnąć palec i usunąć suchym gazikiem pierwszą kroplę krwi, ponieważ może się w niej znajdować płyn tkankowy. 5. Ponownie, wolno i rytmicznie rozmasowywać nakłuty palec, aż do momentu pojawienia się kropli krwi. Nie uciskać palca zbyt mocno. 6. Dotknąć kapilarą kropli krwi, trzymając ją pod lekko opadającym kątem. Kapilara napełni się dzięki działaniu siły lepkości. Nie pobierać pęcherzyków powietrza. Mogą one wpłynąć na uzyskany wynik. 7. Po pobraniu pełnej kapilary należy jej końcówką przesunąć po suchej skórze palca, w celu pozbycia się nadmiaru krwi. Procedura testu 1. Dodać próbkę krwi (10 μl) do fabrycznie napełnionej kuwety, zamknąć pokrywkę i delikatnie wymieszać przechylając kuwetę, aż do chwili opróżnienia kapilary. 2. Wprowadzić kuwetę do komory pomiarowej w celu dokonania pomiaru zerowego. 3. Wyjąć kuwetę, dodać 2 krople enzymu 16, który został uprzednio rozpuszczony, zamknąć pokrywkę i delikatnie przechylić kuwetę kilkukrotnie do góry dnem. 4. Ponownie wprowadzić kuwetę do tej samej komory pomiarowej. Odczyt odbywa się automatycznie. 16 Sprawdzić, czy roztwór nie jest mętny. Jeśli tak jest, nie używać. Strona 3

4 Wartości referencyjne Do 200 mg/dl (do 2,3 mmol/l). Wartości te wskazywane są jako wytyczne, zgodnie z zaleceniami klinicznymi opublikowanymi przez Narodowy Program Edukacji dotyczącej znaczenia cholesterolu (National Cholesterol Education Program - NCEP), panel ekspertów ds. wykrywania, oceny i leczenia wysokiego stężenia cholesterolu u osób dorosłych (2001) oraz Piątą Wspólną Grupę Roboczą Europejskiego Towarzystwa Kardiologicznego i Innych Towarzystw ds. Zapobiegania Chorobom Serca i Naczyń w Praktyce Klinicznej (2012). Opisano następujące klasyfikacje: <150 mg/dl (<1,7 mmol/l) Norma mg/dl (1,7-2,2 mmol/l) Górna granica normy >200 (>2,3 mmol/l) Wysokie Charakterystyka skuteczności Liniowość mg/dl (1,0-6,7 mmol/l) Jeśli uzyskany wynik znajduje się poza zakresem liniowości, wyświetlany jest komunikat <X lub >Y (X oznacza granicę dolną, a Y granicę górną zakresu). Powtarzalność Powtarzalność, rozumianą jako precyzję w obrębie oznaczenia, ustalono dokonując pomiaru trzech próbek zgodnie z protokołem EP5 NCCLS. mg/dl N Średnia Odchylenie Standardowe %CV Poziom ,748 4,55 Poziom ,045 4,74 Poziom ,488 2,61 Precyzja Precyzję oznaczeń wykonywanych w różnych dniach ustalono dokonując pomiaru dwóch próbek zgodnie z protokołem EP5 NCCLS. mg/dl N Średnia Odchylenie Standardowe %CV Poziom ,958 6,17 Poziom ,358 5,90 Poziom ,713 4,79 Porównanie Porównanie dokonane z zastosowaniem metody Callegari oraz certyfikowanej metody laboratoryjnej (Cobas Integra 400) dało następujące wyniki: Liczba oznaczeń 23 Zakres pomiarowy (mg/dl) Współczynnik korelacji R 0,9904 (p<0,05) Regresja liniowa y = 1,0001x - 1,2717 Liniowy R 2 0,9809 Zakłócenia Strona 4

5 Testy przeprowadzone u osób badanych, których hematokryt nie mieści się w zakresie 37-48% wykazują tendencję do odchyleń wobec testów przeprowadzonych na surowicy pochodzącej z tych samych próbek. Zaleca się sprawdzenie hematokrytu pacjentów. Ponieważ witamina C jest czynnikiem redukującym, jej duże ilości mogą wpływać antagonistycznie na proces utleniania, na którym opiera się test. Obecność wolnego glicerolu w próbce pobranej od pacjenta należy uznać za potencjalne źródło błędnego odczytu i może prowadzić do uzyskania fałszywego wyniku wysokiego. Stężenie wolnego glicerolu może wzrastać w osoczu wykazującym bardzo podwyższone stężenie trójglicerydów, w przypadku próbek, które nie są świeże lub pochodzą od pacjentów stosujących leki zawierające glicerol. Zakłócenia ze strony glicerolu mogą także pochodzić ze źródeł zewnętrznych, takich jak środek odkażający zawierający glicerol, probówki do pobierania krwi z korkami powlekanymi glicerolem, detergentów i produktów do pielęgnacji skóry. Normalne użytkowanie innych substancji aktywnych farmakologicznie nie zakłóca wszelkich testów wykorzystujących reakcję Trindera, szeroko stosowaną w chemii. Kontrola jakości Użytkownicy powinni ustanowić program kontroli jakości (QC) w celu weryfikacji sprawności instrumentu i odczynników, z zastosowaniem zalecanych kontroli. Materiały do kontroli jakości dostarczane są przez producenta na żądanie. Należy zapoznać się z ulotką znajdującą się w każdym opakowaniu kontroli, aby dowiedzieć się, w jaki sposób ich używać i jak je przechowywać. Wartości uzyskane w toku kontroli jakości powinny mieścić się w dopuszczalnych zakresach określonych przez producenta i podanych na opakowaniu odczynników kontrolnych. Jeśli kontrole nie dają oczekiwanych wyników, test należy powtórzyć, dopilnowując, aby wszelkie procedury i instrukcje posługiwania się były ściśle przestrzegane. W przypadku wątpliwości, nie należy podawać wyników uzyskanych z testów próbek pacjenta. W razie konieczności należy skontaktować się z Działem obsługi klienta firmy Callegari. UWAGA: Automatyczne obliczenie stężenia cholesterolu LDL Wartość stężenia cholesterolu LDL jest obliczana automatycznie i drukowana po przeprowadzeniu testów stężenia całkowitego cholesterolu, HDL i trójglicerydów. Jeśli drukowane są więcej niż 2 wyniki tego samego testu (np. dwa wyniki stężenia cholesterolu) obliczenie odnosi się do ostatniego uzyskanego wyniku. Wartości stężenia LDL są wynikiem obliczenia matematycznego (wzór Friedewalda 17 ), które można zastosować wyłącznie, gdy: wartości całkowitego stężenia cholesterolu, HDL i trójglicerydów 18 mieszą się w ich odnośnych zakresach liniowości; 17 Wzór Friedewalda: Jednostki tradycyjne (mg/dl): LDL = TC HDL TG / 5 Jednostki SI (mmol/l): LDL = TC HDL TG / 2, W przypadku oprogramowania CR3000 w wersji 3.18 (1 komora) / 2.18 (3 komory) lub nowszej, wartości stężenia LDL są szacowane na podstawie przybliżenia algebraicznego, gdy odczyt stężenia trójglicerydów wynosi 90 mg/dl. Strona 5

6 wartości stężenia trójglicerydów są poniżej 400 mg/dl. W przeciwnym razie wyświetlane jest ostrzeżenie "N/A!" (nie dotyczy). Wartości referencyjne stężenia cholesterolu LDL mg/dl (1,3-3,6 mmol/l). Piśmiennictwo 1. Richmond W. Ann. Clin. Biochem. 29: 577, Allain, C.C., Poon, L.S., Chan, C.S.G., Richmond, W., and Fu, P.C. Clin. Chem. 20 (4): 470, Doukyu N. et al., Biochem. J. 341: 621:-627, Trinder P, Ann. Clin. Biochem. 6: 24:-27, Friedewald WT, Levy RI, Frederickson DS. Clin. Chem. 18: 449:-502, ATP III Wytyczne NCEP dot. ryzyka choroby wieńcowej serca. JAMA 285: 2486:-2509, Europejskie wytyczne dot. zapobiegania chorobom układu krążenia w praktyce klinicznej. Eur Heart J 33(13): 1635:-1701, Producent Callegari S.p.A. Via Adamello 2/A Parma - Italy Dystrybutor Cambridge Diagnostics Sp. z o.o. Walecznych 56/2 Warszawa - Polska Lista symboli Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Numer serii Data ważności Numer katalogowy 0344 Znak CE - W zgodzie z Dyrektywą WE 98/79 i późniejszymi poprawkami Dlgs 332/2000 Okres stabilności po otwarciu blistra: 6 miesięcy Data otwarcia Producent Uwaga - Patrz instrukcja użytkowania Temperatura przechowywania Nie używać powtórnie Zagrożenia biologiczne Przechowywać z dala od promieni słonecznych Znak recyklingu Usuwać z zachowaniem ostrożności i staranności. Nie śmiecić. Strona 6

7 Przechowywać w suchym miejscu Nie jeść i nie pić Przechowywać w miejscu niedostępnym dla dzieci Strona 7