Monitoring zmian zdolności chorobotwórczych populacji organizmów szkodliwych i kwarantannowych ziemniaka

Transkrypt

1 Zadanie 3.1. Monitoring zmian zdolności chorobotwórczych populacji organizmów szkodliwych i kwarantannowych ziemniaka Cel Analiza zmian w populacjach waŝniejszych patogenów ziemniaka dla potrzeb prowadzenia hodowli odpornościowej oraz produkcji Ewa Zimnoch-Guzowska, Jadwiga Śliwka,, Sylwester Sobkowiak, Renata Lebecka, Zhimin Yin, Krystyna Michalak, Anna Grupa IHAR-PIB Radzików,

2 1. Zbieranie i izolacjęsprawcy zarazy ziemniaka Phytophthora infestans z różnych miejscowości na terenie Polski, włączanie wybranych izolatów do kolekcji (współpraca z COBORU) Niechronione pola w 8 lokalizacjach 10odmian: Altesse, Denar, Jelly, Kuras, Malaga, Mondeo, Riviera, Tajfun, Vineta, Zuzanna 3 powtórzenia, 3 listki, Suma: 720 izolatów Lokalizacja Liczba prób Objawy w bulwach KarŜniczka 20 0 Wrócikowo 32 1 Przecław (7) Węgrzce 28 8 (5) Uhnin 80 0 Sulejów 5 0 Bobrowniki 40 0 Łącznie Uzyskano: 12 czystych kultur P. infestans (+1 z Boguchwały), 10 izolatów włączono do kolekcji

3 Charakterystyka izolatów P. infestans pod względem wirulencji względem testerów Black a i potencjalnych źródełodporności, test listkowy, 55 izolatów z roku 2014, 6600 testów Odmiany: Craigs Royal Tarpan poraŝone przez wszystkie izolaty

4 Charakterystyka izolatów P. infestans pod względem innych cech, 84 izolaty z roku 2014

5 Utrzymywanie kolekcji P. infestans Aktualny stan: 1010 izolatów (67 zagranicznych i 943 polskich) 968 izolatów jest przechowywanych w ciekłym azocie 19 zamroŝono w ciekłym azocie Z ciekłego azotu wyjęto i namnoŝono do róŝnych celów 72 izolaty Zaktualizowano dane izolatów dostępnych online na stronie IHAR-PIB, : ka.php?panel=1#pracownia Patogenów Ziemniaka

6 2. Utrzymywanie reprezentatywnej kolekcji roboczej bakterii zrodzaju Pectobacteriumi Dickeyaw stanie zamroŝenia i jej wzbogacanie o nowe wirulentne izolaty 50 izolatów bakterii zregenerowano i zamroŝono w dwóch kopiach (T -35 o C, -80 o C). Kolekcja została wzbogacona o cztery izolaty: Pectobacterium wasabiae, IHAR Denar1/1/2013, Pectobacterium carotovorumsubsp. carotovorum, IHAR Ewelina 1/1/2013, Pectobacterium atrosepticum, IHAR Oberon 1/1/2014 Pectobacterium atrosepticum, IHAR Bard 1/1/2014

7 3. Badanie wirulencji izolatów Dickeya solanii dobór izolatów do oceny odporności ziemniaka w latach Masa zgniłej tkanki bulwy [G] po inokulacji bakteriami -inkubacja 3 dni w T 26 o C.

8 c.d. badanie wirulencji izolatów bakterii pektynolitycznych ziemniaka

9 4. Charakterystyka patogeniczności nowych izolatów PVM i PVY. Ocena reakcji odmian ziemniaka na izolaty PVM, oraz szczepy PVY 10 izolatów PVY testowano na trzech odmianach ziemniaka rekomendowanych przez Singh`a: King Edward, Desiree, Pentland Ivory, na odmianie Nicolaoraz dwóch polskich odmianach Etola i Gwiazda i na tytoniu odm. Samsun Na podstawie reakcji trzech odmian King Edward, Desiree, Pentland Ivory oraz reakcji tytoniu izolaty zaliczono do grup: 3 izolaty PVY E (podatnośćna zakażenie odmian oraz brak nekroz na liściach tytoniu) 7 izolatów PVY N (podatnośćna zakażenie odmian oraz nekrozy nerwów na tytoniu) 6 izolatów wywoływało objawy choroby PTNRDna bulwach odmian Nicola, Desiree, Pentland Ivory, Etola, Gwiazda 1 izolat należący do serotypu N nie poraziłodmian Etola i Gwiazda, natomiast poraził 3 odmiany rekomendowane przez Singh`a

10 Objawy poraŝenia roślin ziemniaka i tytoniu po zakaŝeniu róŝnymi izolatami PVY (2015) HR MO,DEF ST VCL VN PTNRD D 10

11 4. Charakterystyka patogeniczności nowych izolatów PVM Scharakteryzowano patogeniczność 36 izolatów PVM na roślinach testowych: Chenopodium quinoa, Datura metel, Gomphrena globosa, Lycopersicon chilense, Solanum lycopersicum (pomidor, odm. Najwcześniejszy), S. rostratum, 1. Izolaty PVM wykazały duŝe zróŝnicowanie biologiczne. 2. Stwierdzono pozytywnąreakcjęwszystkich ocenianych izolatów wirusa z przeciwciałami przeciwko PVM.

12 kontrola Rośliny Datura metel (10 dni po inokulacji PVM) S-1 I-64 I-38

13 Rośliny Lycopersicon chilense (18 dni po inokulacji PVM) K-1 kontrola S-1

14 4. cd. Ocena reakcji odmian ziemniaka na izolaty PVM i PVY Oceniono reakcję 5 odmian ziemniaka (po 20 roślin) na inokulację silnym szczepem PVM (Uran). Odm.: Bogatka i Malaga, nie podległy infekcji, Odm.: Honorata i Jurata, średnia reakcja, Odm. Jubilat(80% silne objawy). Oceniono reakcję 5 odmian ziemniaka na zakaŝenie dwoma szczepami nekrotycznymi PVY: PVY N W i PVY NTN. Odm.: Honorata, Jubilat, Kaszub, Lascara podatnena oba szczepy (reagowały mozaikąo róŝnym nasileniu, nekrozy na łodygach zaobserwowano tylko u odmiany Honoratapo zakaŝeniu PVY NTN ) Odm. Malaga odporna na oba szczepy.

15 5. Prowadzenie kolekcji izolatów wirusów ziemniaka w roślinach ziemniaka pod indywidualnymi izolatorami oraz w szklarni, wliofilizatach, -20 o C i roślinach invitro Utrzymywana była: kolekcja wirusów ziemniaka w roślinach pod indywidualnymi izolatorami w polu: PVY, PVX, PLRV, PVM, PVS, TRV, PVA, AMV, PAMV, TBRV, CMV, BMYV, PSTVd 43 obiekty kolekcja szczepów PVY, PVM, PVS, PLRV w roślinach w szklarni 220 obiektów kolekcja wirusów w roślinach in vitro: PVA, PVY 10 obiektów kolekcja wirusów w liofilizatach 100 obiektów kolekcja roślin testowych do wykrywania wirusów w testach biologicznych: Nicotiana tabacum odm. Samsun, Nicotiana clevelandi, Nicotiana benthamiana, Datura stramonium, Datura metel, L. esculentum odm. Najwcześniejszy

16 ZEBRANO do zamroŝenia (-25 o C; -80 o C) do zliofilizowania 220 izolatów (600 próbek) WIRUS Liczba PVY 119 PVM 13 PVS 33 PLRV 12 TRV, PVA, AMV, PAMV, TBRV, CMV, BMYV 43 Razem izolatów Udostępnianie patogenów ziemniaka odbiorcom zewnętrznym zgodnie z zapotrzebowaniem Udostępniono 17 izolatów P. infestans i 9 izolatów Pectobacterium

17 Cel Śledzenie zmian wirulencji patotypów w populacji grzyba Synchytriumendobioticum(Schilb.) Perc. oraz w populacjach nicieni (G. rostochiensis, G. pallida) na terenie Polski 1.Utrzymywanie i namnaŝanie stałej, wzorcowej kolekcji patotypów grzyba S. endobioticum. 2.Utrzymywanie i rozmnaŝanie odmian róŝnicujących ziemniaka do identyfikacji patotypów S. endobioticumoraz odmian krańcowo podatnych do namnaŝania narośli rakowych S. endobioticum. 3.Pozyskiwanie z WIORiN prób gleby i poraŝonych rakiem roślin ziemniaka, namnaŝanie i utrzymanie izolatów S. endobioticumw postaci narośli rakowych; identyfikacja izolatów S. endobioticum. 4.Ocena odporności odmian ziemniaka na wirulentne patotypy S. endobioticum(do 10 odmian).

18 cd. Cel Pozyskiwanie gleby zasiedlonej cystami mątwika o niezidentyfikowanym patotypie mątwika od WIORiN z terenów Polski, na których wykryte zostały nowe ogniska choroby. Przygotowanie prób gleby do dalszych analiz, namnaŝanie oraz identyfikacja patotypu z wykorzystaniem róŝnicujących genotypów ziemniaka zgodnie z procedurą Kort a. 6. Przekazywanie certyfikatów potwierdzających identyfikacjępatotypu po zakończeniu badańinspektorom PIORiN oraz stronie przekazującej materiały do badań. 7. NamnaŜanie bulw odmian i genotypów ziemniaka róŝnicujących patotypy mątwika oraz prowadzenie kolekcji zidentyfikowanych patotypów mątwika. 8. Opracowanie wyników, w tym uaktualnianie mapy występowania patotypów mątwików na terenie kraju.

19 Reakcja odmian róŝnicujących na patotypy i izolaty S. endobioticum Odmiany róŝnicujr nicującece Synchytrium endobioticum Patotypy wzorcowe Izolaty 1(D1) 2(Ch1) 3(M1) 18(T1) 39(P1) #1/13 #2/13 #3/13 Deodara / Tomensa / Eersteling Producent / Combi / Irga / Talent Delcora / Desiree ± + - Miriam - ± ± ± - Karolin ± Ulme / Gawin / Saphir Asche SämlingS Sissi Bałtyk Giewont Universal Blanik Nicola reakcja pozytywna (widoczne duŝe narośla rakowe po 4 tyg. inkubacji), ±- reakcja pośrednia (proliferacja jest znacznie słabsza, widoczne są równieŝ liczne nekrozy), --reakcje negatywna (brak proliferacji),

20 Reakcja odm. Asche Sämling na testowane izolaty S. endobioticum #1/1 3 #2/1 3 #3/1 3 Izolat #3/13 reaguje identycznie jak patotyp 3(M1). Izolat #1/13 moŝe naleŝeć do patotypu 4(P1) lub 5(K1).

21 Reakcja odm. Otolia na polskie patotypy S. endobioticum 2(Ch1) 3(M1) 18(T1) 39(P1) Odmiana Otolia reaguje krańcową odpornością na w/w patotypy.

22 Identyfikacja patotypów mątwika (Kort,1977) Forma ziemniaka Ro- 1 Odporność na patotyp Ro- 2 Ro3 Ro4 Ro5 Pa1 Pa2 Pa3 Odmiana Desiree Odmiana Maris Piper S. kurtzianum hybr S. vernei hybr / S. vernei hybr S. vernei hybr / S. multidissectum hybr. P55/ Prowadzenie hodowli genotypów ziemniaka poraŝonych cystami nieznanego patotypu mątwika

23 Uaktualniona mapa występowania patotypów mątwika Kolor czerwony - patotyp Ro1 G. rostochiensis - identyfikacja w latach Kolor Ŝółty - patotyp Ro5 G. rostochiensis - identyfikacja w latach Kolor pomarańczowy - patotypy Ro1 i Ro5 G. rostochiensis - identyfikacja w latach Kolor zielony - patotyp Ro1 G. rostochiensis - identyfikacja w roku 2015.

24 Wymierne rezultaty realizacji celu Utrzymano kolekcjępatotypów S. endobioticumz regionu EPPO i Polski i odmian ziemniaka do róŝnicowania patotypów Wśród badanych izolatów sprawcy raka ziemniaka zidentyfikowano 3 patotypy S. endobioticum. WyróŜniono odmianę Otolia, która charakteryzuje się krańcową odpornościąna polskie patotypy S. endobioticum. Wśród badanych izolatów mątwika ziemniaczanego zidentyfikowano patotyp Ro1. Wykonano 10 analiz mikologicznych i oznaczeń do gatunku. Wykonano 1270 testów charakteryzujących chorobotwórczośćizolatów S. endobioticum i Globodera sp. Zgromadzono w kolekcji roboczej 120 izolatów i ras/patotypów S. endobioticum, G. rostochiensis i G. pallida. Opublikowano 4 raporty o identyfikacji patotypów i odporności odmian na wirulentne patotypy raka ziemniaka. Wyniki identyfikacji patotypów S. endobioticum, G. rostochiensisi G.pallidaprzekazano do PIORiN i COBORU

25 Cel Monitorowanie i ocena zmian w populacjach najważniejszych gospodarczo patogenów pochodzenia wirusowego i grzybowego oraz szkodników na potrzeby zrównoważonej i efektywnej ochrony ziemniaka Sławomir Wróbel, Józefa Kapsa Zakład Nasiennictwa i Ochrony Ziemniaka w Boninie

26 1. Ustalenie punktów badawczych w rejonach największej koncentracji produkcji ziemniaka wpolsce Mechowo Rumsko Sławutówko Karwno Bonin Szymankowo Partnerami w realizacji celu 3, byli producenci ziemniaka w wybranych miejscowościach: Bonin (punkt własny w Zakładzie Nasiennictwa i Ochrony Ziemniaka IHAR-PIB), Karwno (gospodarstwo indywidualne), Mechowo (gospodarstwo indywidualne), Rumsko (Grupa Producentów Rolnych NATURA Sp. z o.o.), Sławutówko (gospodarstwo indywidualne), Szymankowo (Agriana Sp. z o.o.),

27 2. Monitoring mszyc (wektorów wirusów) w północnych rejonach kraju na podstawie ich odłowów do żółtych naczyńi identyfikacja gatunków Terminy odłowu pierwszych mszyc Bonin Karwno Mechowo Rumsko Sławutówko Szymankowo Maj Czerwiec Lipiec Myzus persicae Aphis nasturtii Aphis fabae - mszyca nieziemniaczana Odłowy mszyc prowadzono na plantacjach towarowych ziemniaka, z wyjątkiem Bonina, gdzie Ŝółte szalki były ustawione na czarnym ugorze w łanie ziemniaków (poletko mszycowe). Monitoring prowadzono w okresie od maja do końca sierpnia. Oznaczone ilości i gatunki mszyc publikowano na bieŝąco na stronie w zakładce Monitoring.

28 2. Monitoring mszyc (wektorów wirusów) w północnych rejonach kraju na podstawie ich odłowów do żółtych naczyńi identyfikacja gatunków 400 Liczebności odłowionych mszyc w sezonie wegetacyjnym w poszczególnych miejscowościach Suma mszyc [szt] Bonin Karwno Mechowo Sławutówko Szymankowo Wodzierady Myzus persicae Aphis nasturtii Aphis fabae

29 3. Monitorowanie terminów występowania, określanie presji infekcyjnej grzybów (Alternariasp., Phytophthora infestans)wuprawach ziemniaka w wybranych lokalizacjach na terenie Polski północnej Występowanie pierwszych infekcji zarazowych na wybranych plantacjach ziemniaka w Polsce Województwo Gmina Miejscowość Odmiana BBCH Termin wystąpienia Łódzkie Wróblew ORACZEW Gala Mazowieckie Ostrów Mazowiecka JASIENICA Rudawa Wielkopolskie Kórnik PIERZCHNO Lady Rosetta Zachodniopomorskie Manowo BONIN Irga MIERZYM Irga

30 3. Monitorowanie terminów występowania, określanie presji infekcyjnej grzybów (Alternariasp., Phytophthora infestans)wuprawach ziemniaka w wybranych lokalizacjach na terenie Polski północnej Na podstawie wyników obserwacji rozwoju patogenów na poletkach doświadczalnych w Boninie i Mierzymiu moŝna stwierdzić, Ŝe: w rejonie Polski płn. presja infekcyjna grzybów z rodzaju Alternaria oraz sprawcy zarazy ziemniaka Phytophthora inestans nie była wysokaw sezonie 2015 (tab.). Poziom presji infekcyjnej sprawcy zarazy ziemniaka w sezonie 2015 Patogen Miejscowość Data wystąpienia choroby raudpc Wielkość zniszczenia % Alternaria spp. BONIN , ,5 MIERZYM , ,0 Phytophthora infestans BONIN , ,0 MIERZYM , ,1

31 Sucha plamistość liści - sprawca Alternaria solani Sorauer (syn. Macrosporium solani /ELL. et Mart./. Choroba pojawia się w końcu czerwca lub na początku lipca. Gatunki grzyba Alternaria, sprawcy alternariozy Brunatna plamistośćliści -sprawcaalternaria alternata (Fr) Keissler (syn. A. tenuis Nees).Choroba pojawia sięw okresie kwitnienia (skala BBCH fazy 50-69).

32 4. Analiza składu gatunkowego grzybów z rodzaju AlternariazporaŜonego materiału roślinnego pozyskanego z Polski północnej, próba zastosowania nowych technik w róŝnicowaniu gatunku grzyba, izolacje wybranych patogenów (Alternariasp., Phytophthora infestans) do kolekcji roboczych Zbiór izolatów z 3 wybranych odmian (Miłek, Irga, Kuras) do oceny składu gatunkowego sprawców alternariozy przeprowadzono w terminie od do Badania prowadzono w odstępach 7-dn. Z zebranego materiału z objawami choroby zgromadzono izolaty gat. Alternaria alternatai Alternaria solani. Ocena składu gatunkowego przeprowadzona na podstawie oceny mikroskopowej zarodników i wstępnie met. PCR. Potwierdzenie metodąpcr zostanie wykonana w terminie późniejszym (I III. 2016). Ogółem zebrano 37 izolatówgrzyba z rodzaju Alternaria: 25 izolatów A.alternatai 12 izolatów A. solani. Z poletek doświadczalnych w 2015, zebrano i oczyszczono do kolekcji roboczych: 6 izolatów Ph. infestansi 2 izolaty Helminthosporium solani.

33 4. Analiza składu gatunkowego grzybów z rodzaju AlternariazporaŜonego materiału roślinnego pozyskanego z Polski północnej, próba zastosowania nowych technik w róŝnicowaniu gatunku grzyba, izolacje wybranych patogenów (Alternariasp., Phytophthora infestans) do kolekcji roboczych ZróŜnicowanie gatunkowe grzybów z rodzaju Alternaria w sezonie wegetacyjnym 2015 Odmiany Terminy wystąpienia alternariozy w sezonie Miłek AA AA AA AA AA AA+AS AA+AS AA+AS AA+AS AA+AS BRAK izolatów, naturalne Irga - - AA AA AA AA AA AA+AS AA+AS AA+AS zniszczenie roślin Kuras AA AA AA+AS AA+AS AA+AS AS AA+AS AA+AS AA- Alternaria alternata, AS- Alternaria solani

34 5. Cząstkowy raport do europejskiej sieci monitorowania zmian wpopulacjach sprawców zarazy ziemniaka i alternariozy (Euroblight) podsumowanie i analiza stopnia realizacji celów cząstkowych, opracowanie raportu oraz upowszechnianie uzyskanych wyników Cząstkowy raport do europejskiej sieci monitorowania zmian wpopulacjach sprawców zarazy ziemniaka i alternariozy (Euroblight) z Polski zostałprzygotowany i zostanie wykorzystany przez osoby odpowiedzialne za tworzenie europejskiego raportu zbiorczego (J.G. Hansen Dania) wraz z wynikami z innych krajów w roku 2016, podobnie jak wcześniejsze raporty, np raport z lat ( Ocena zagroŝenia występowania alternariozy i zarazy na plantacjach ziemniaka w Polsce w sezonie 2015 Choroba Nasilenie choroby w ciągu sezonu wegetacyjnego 2015 maj czerwiec lipiec sierpień wrzesień alternarioza zaraza ziemniaka brak zagroŝenia zagroŝenie średnie duŝe zagroŝenie

35 Cel Optymalizacja metod zwalczania i ocena chorobotwórczości Clavibacter michiganensis ssp. sepedonicus na terenie Polski 1. pozyskiwanie z Wojewódzkich Inspektoratów Ochrony Roślin izolatów Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus (Cms) 2.przeprowadzenie doświadczenie mikropoletkowego z wykorzystaniem róŝnych profili glebowych, monitorowanych pod względem temperatury i wilgotności. Ocena wpływu tych czynników na poziom poraŝenia bulw potomnych ziemniaków sztucznie zakaŝanych wybranymi szczepami Cms, 3.izolację Ŝywych komórek bakteryjnych z badanego materiału mikropoletkowego na poŝywki półselektywne MNTA i NCP-88 oraz poŝywki wzrostowe YGM, 4.prowadzenie testów immunologicznych IF z uŝyciem przeciwciałpoliklonalnych i monoklonalnych w celu diagnostyki poraŝenia przez Clavibacter michiganensis ssp. sepedonicusmateriałów z doświadczenia mikropoletkowego, 5.przeprowadzenie w fitotronie oceny chorobotwórczości na roślinie bioindykatorowej (bakłaŝan) z zastosowaniem inokulum sporządzonego z pozyskanych izolatów Cms zgodnie z obowiązującą procedurą EPPO, 6.opracowanie metody badańskuteczności działania bakteriobójczego środków dezynfekcyjnych, zastosowanych na powierzchnie sztucznie zakaŝone zawiesiną szczepów Cms, 7. aktualizację broszury dla rolników dotycząca integrowanej produkcji ziemniaka w zakresie Cms.

36 1. Z siedmiu Wojewódzkich Laboratoriów Państwowej Inspekcji Ochrony Roślin i Nasiennictwa pozyskano po pięć ekstraktów z bulw ziemniaka, poraŝonych latentnie przez Clavibacter michiganensis ssp. sepedonicus (Cms), razem 35 ekstraktów. L.p Nazwa ekstraktu z bulw ziemniaka Odmiana ziemniaka Potwierdzona obecność Cms(test PCR i IFAS) Test biologiczny 1 Koszalin 1 Cykada Koszalin 2 Denar 3 Koszalin 3 Vineta 4 Koszalin 4 Bryza Koszalin 5 Tajfun Katowice 1 Bryza 7 Katowice 2 Vineta 8 Katowice 3 Bellarosa 9 Katowice 4 Tajfun 10 Katowice 5 Bryza 11 Kraków 3237 Tajfun 12 Kraków 3647 Irga 13 Kraków 3437 Ibis Kraków 3326 Owacja 15 Kraków 3002 Bellarosa Białystok 1435/14 Kuras 17 Białystok 1649/14 Ametyst 18 Białystok 1513/14 Irys Białystok 1541/14 Irga 20 Białystok 1190/14 Kuba Pruszcz G. 2131/15 bd 22 Pruszcz G. 1144/15 bd 23 Pruszcz G /14 bd Pruszcz G /14 bd 25 Pruszcz G. 6054/14 bd 26 Kielce 1991 Owacja 27 Kielce 1924 Tajfun Kielce 1701 Irga Kielce 1981 Bellarosa Kielce 1834 Lord Wrocław 1871 Tajfun Wrocław 1966 Vineta 33 Wrocław 1953 Vineta 34 Wrocław 1955 Vineta 35 Wrocław 1831 Kuba

37 BPIOR 527-Ref. Kraków 3437 Molekularna charakterystyka szczepów bakterii CMS Kielce 1834 ReakcjąPCR, z użyciem pary specyficznych starterów PSA- 1 i PSA-R : Pruszcz 13419/14 Koszalin 4 Koszalin 1 Białystok 1190 Kraków 3002 Koszalin 5 Kielce 1924 Kielce 1981 Kielce 1701 Wrocław 1871 Białystok 1513 zidentyfikowano 13 czystych kultur bakterii pozyskanych z 35ekstraktów z WIORiN.

38 2. i 4.Celem doświadczenia mikropoletkowego była ocena chorobotwórczości wybranych izolatów Clavibacter michiganensisssp. sepedonicusw stosunku do roślin ziemniaka uprawianych w różnych warunkach glebowych. Odmiany ziemniaka Irys Tetyda 4 izolaty Cms, którymi inokulowano sadzeniaki 9742/12 Warszawa 1/3542/12 Łódź 1604 Kraków 5853 Gorzów Wielkopolski Warstwa orna profilu glebowego piasek (I) piasek gliniasty (V) 192 rośliny ziemniaka

39 Objawy porażenia roślin i bulw ziemniaka przez Cms Izolat Cms 9742/12 Warszawa 1/3542/12 Łódź Liczba ROŚLIN ziemniaka z objawami Cms Piasek (I) Piasek gliniasty (V) Irys Tetyda Irys Tetyda Kraków Gorzów Wielkopolski Izolat Cms 9742/12 Warszawa 1/3542/12 Łódź Liczba BULW ziemniaka z objawami Cms Piasek (I) Piasek gliniasty (V) Irys Tetyda Irys Tetyda Kraków Gorzów Wielkopolski Fot. IHAR-PIB O/ Jadwisin

40 Indeks porażenia bulw* badanych odmian w zależności od izolatu Cms, którym inokulowano sadzeniaki oraz profilu glebowego *-obliczony na podstawie testu IFAS przeciwciała poliklonalne, z uwzględnieniem liczby komórek Cms w preparacie w rozcieńczeniu ekstraktu z bulw 100 x X- liczony według Townsenda Heubergera

41 3.Po zbiorze bulw potomnych z doświadczenia mikropoletkowego wykonano zawiesiny ekstrak-tów roślinnych i poddano je krioprezerwacji zgodne z procedurą dla testu IF. Izolacja komórek bakteryjnych z materiału mikropoletkowego przeprowadzona została metodąposiewów na poŝywkach półselektywnych MNTA i NCP-88 oraz reakcjąpcr. Liczba prób Profil glebow y Izolat Cms Odmiana V Tetyda b2 V Irys c 3 V Irys a3 Irys c 4 V Irys a3 V Tetyda b3 I Tetyda d2 Irys a2 I Tetyda b2 Irys c1 I Tetyda b2 V Irys a4 I Tetyda d1 V Irys a2 V Tetyda d1 V Irys c4 V Tetyda d1 I Tetyda d3 Z32 zawiesin otrzymano 23 czyste kultury Cms V Tetyda d4 V Tetyda b1 Irys a3 V Tetyda d3 Irys c3 V Tetyda d2 Irys c3 Irys a1 V Tetyda d2 Irys a4 1* I 9742/12 Warszawa Irys 2 I 9742/12 Warszawa Irys 3 I 1/3542/12 Łódź Irys 4 I 1/3542/12 Łódź Irys 5 I 1604 Kraków Irys 6 I 1604 Kraków Irys 7 I 5853 Gorzów Wlkp. Irys 8 I 5853 Gorzów Wlkp. Irys 9 I 9742/12 Warszawa Tetyda 10 I 9742/12 Warszawa Tetyda 11 I 1/3542/12 Łódź Tetyda 12 I 1/3542/12 Łódź Tetyda 13 I 1604 Kraków Tetyda 14 I 1604 Kraków Tetyda 15 I 5853 Gorzów Wlkp. Tetyda 16 I 5853 Gorzów Wlkp. Tetyda 17 V 9742/12 Warszawa Irys 18 V 9742/12 Warszawa Irys 19 V 1/3542/12 Łódź Irys 20 V 1/3542/12 Łódź Irys 21 V 1604 Kraków Irys 22 V 1604 Kraków Irys 23 V 5853 Gorzów Wlkp. Irys 24 V 5853 Gorzów Wlkp. Irys 25 V 9742/12 Warszawa Tetyda 26 V 9742/12 Warszawa Tetyda 27 V 1/3542/12 Łódź Tetyda 28 V 1/3542/12 Łódź Tetyda 29 V 1604 Kraków Tetyda 30 V 1604 Kraków Tetyda 31 V 5853 Gorzów Wlkp. Tetyda 32 V 5853 Gorzów Wlkp. Tetyda

42 5. Ocena chorobotwórczości 4 izolatów: Cms 9742/12 Warszawa, Cms1/3542/12 Łódź, Cms 1604 Kraków, Cms 5853 Gorzów Wielkopolski. Metodyka: Siewki bakłaŝana odmiany Black Beauty, 40 dni obserwowacji objawów, 5-cio stopniowa skala objawów, dwa testy inokulując kaŝdorazowo po 10 siewek bakłaŝana w stadium trzeciego liścia dla kaŝdego izolatu. Izolat wirulencja, wyraŝona w % powierzchni liści z charakterystycznymi zmianami chorobowymi Ocena wg 5-cio stopniowej skali objawów* Cms 1/3542/12 Łódź Cms 9742/12 Warszawa Cms 1604 Kraków Cms 5853 Gorzów Wlkp *-1 brak objawów; 2 lekkie tłuste plamy na liściach; 3 jasnozielone przebarwienia na liściach; 4 chlorozy pomiędzy wiązkami przewodzącymi w liściu; 5 nekrozy

43 6.Opracowanie metody badańskuteczności działania bakteriobójczego środków dezynfekcyjnych, zastosowanych na powierzchnie sztucznie zakaŝone zawiesiną szczepów Cms związki utleniające (nadtlenek wodoru kwas nadoctowy nadsiarczan potasu) aldehyd glutarowy czwartorzędowe związki amoniowe związki chloru alkohole nanosrebro związki jodu Virkon S Lysoformin 3000 Timsen Roko Agro Chloral Steridial K Agro-Des Sansept 0200 DM CID S Bactosan HuwaSan Rapicid Hysepta Alc Jodat Oxykol Licosil 03 Viropol Peroxat Quatosept Kryteria wyboru środka do zastosowania w produkcji ziemniaka i przemyśle ziemniaczanym: -niska cena (przeznaczenie rolnictwo i przemysł spoŝywczy). -róŝne grupy substancji czynnej (nabywanie odporności przez Cms -zjawisko efflux), -brak wiedzy dotyczącej skuteczności działania środka dezynfekującego przeciwko Cms, w obecności substancji organicznej pochodzenia ziemniaczanego, -działanie środka dezynfekującego na powierzchnie pokryte biofilmem-formąwystępowania bakterii Cmsna powierzchniach roślinnych oraz powierzchniach spotykanych w miejscu produkcji i przemyśle przetwórczym ziemniaka.

44 Badania środków dezynfekujących: -przygotowanie powierzchni doświadczalnych, -opracowanie, sprawdzenie toksyczności substancji neutralizującej, -opracowanie otrzymywania substancji obciąŝającej homogenizat z tkanki bulwy ziemniaka, sprawdzenie toksyczności na Cms -doświadczenie wstępne określające zdolność tworzenia przez bakterie Cms biofilmu Skupiska bakterii Cms na powierzchni stali nierdzewnej

45 7.Przygotowano broszurędla rolników dotyczącąintegrowanej produkcji ziemniaka uwzględniającązasady postępowania w gospodarstwie pozwalające na zmniejszenie ryzyka rozprzestrzeniania siębakteriozy pierścieniowej ziemniaka