8 Ziemniak Polski 2014 nr 3 PORAŻENIE BULW ZIEMNIAKA WIRUSEM NEKROTYCZNEJ KĘDZIERZAWKI TYTONIU TOBACCO RATTLE VIRUS (TRV) PROBLEM CIĄGLE AKTUALNY prof. dr hab. Mirosława Chrzanowska, mgr Krystyna Michalak, dr Zhimin Yin IHAR PIB, Pracownia Fitopatologii w Młochowie, ul. Platanowa 19, 05-831 Młochów e-mail: k.michalak@ihar.edu.pl Streszczenie Wirus rattle, sprawca czopowatości bulw, występuje na znacznym obszarze Polski, szczególnie na lżejszych glebach, wyraźnie w chłodniejszym klimacie. Objawem porażenia są nekrotyczne zmiany w miąższu bulw. Obecnie, kiedy znaczna część ziemniaków kierowana jest do przetwórstwa na chipsy, frytki itp., a także do bezpośredniej konsumpcji, nekrozy w miąższu psują jakość surowca w dużym stopniu. Gospodarzami wirusa są niektóre chwasty, a jego wektorami nicienie z rodzaju Trichodorus i Paratrichodorus. Metody oceny gleby pod uprawę ziemniaków na obecność tych nicieni są dobrze znane i skuteczne. Natomiast ocena reakcji odmian ziemniaka na porażenie została zaniechana 20 lat temu z uwagi na koszty badań. Obecnie oddział IHAR-PIB w Młochowie wykonuje ocenę na życzenie producenta. Słowa kluczowe: tobacco rattle wirus, wirus nekrotycznej kędzierzawki tytoniu, ziemniak W ostatnich latach występowanie czopowatości bulw ziemniaka nasiliło się i w związku z tym producenci ponoszą straty w produkcji ziemniaków na cele przetwórcze, konsumpcyjne i na sadzeniaki. W 2004 r. na polu produkcyjnym w pobliżu Chojnic zebrano bulwy jadalnej odmiany Orlik z silnymi nekrozami, charakterystycznymi dla porażenia wirusem nekrotycznej kędzierzawki tytoniu Tobacco rattle virus (TRV) wywołującym czopowatość. W próbkach gleby pobranych z tego pola wysadzono siewki tytoniu Nicotiana tabacum odm. Samsun i wysadzone rośliny poraziły się w 40%. Było to pierwsze od lat doniesienie o stratach w produkcji spowodowanych przez TRV. Ciekawym przypadkiem było porażenie ziemniaków w 2012 r. na polu wygospodarowanym w zaniedbanym sadzie w pobliżu Skierniewic, gdzie nigdy ziemniaki nie były sadzone. TRV wystąpił we wszystkich zbadanych próbkach gleby, a najsilniej porażone były odmiany Courlan i Atlantic uprawiane dla przetwórstwa na chipsy. W 2005 r. w oddziale IHAR w Młochowie został podjęty temat Badanie wirusów wywołujących nekrotyzację bulw ziemniaka: wirusa nekrotycznej kędzierzawki tytoniu (TRV) i wirusa miotlastości wierzchołków ziemniaka (PMTV). Od 2008 r. prace są prowadzone w ramach zadania 6.1. Programu Wieloletniego finansowanego przez MRiRW Monitorowanie i ocena zmian w populacjach gospodarczo ważnych patogenów pochodzenia wirusowego, bakteryjnego i grzybowego oraz szkodliwych owadów na plantacjach ziemniaka. Podzadanie 5. Monitorowanie i ocena zmian w populacjach wirusów ziemniaka ważnych gospodarczo i/lub objętych kwarantanną w wybranych krajach UE. Zadanie to realizują dr Z. Yin i mgr K. Michalak.
Ziemniak Polski 2014 nr 3 9 W ramach badań corocznie pozyskiwano próby 100 bulw wielu odmian ziemniaka z przechowalni na północy i w centrum Polski. Bulwy krojono w poszukiwaniu nekroz charakterystycznych dla porażenia wymienionymi wirusami. W latach 2005-2010 na ponad 18 tys. zbadanych bulw 0,1% miała nekrozy charakterystyczne dla czopowatości. Narastający problem TRV w produkcji ziemniaków na frytki i chipsy podkreślali też Hurej i Twardowski (2013). Celem pracy jest przedstawienie charakterystyki wirusa nekrotycznej kędzierzaki tytoniu, sposobów jego przenoszenia, symptomów porażenia ziemniaka i niektórych innych roślin, metod wykrywania w glebie, roślinach i nicieniach oraz metod zapobiegania jego rozprzestrzenianiu się. Ponadto nieco uwagi poświęcono zagadnieniu odporności odmian ziemniaka na TRV, a także historii dotychczasowych badań w Polsce i najnowszym osiągnięciom w badaniach nad występowaniem wirusa na terenie naszego kraju. Charakterystyka wirusa nekrotycznej kędzierzawki tytoniu sprawcy czopowatości bulw ziemniaka Tobacco rattle virus (TRV) należy do rodzaju Tobrawirus, składa się z dwóch cząstek o średnicy 23 nm i różnej długości: dłuższa ma 185-196 nm, krótsza 50-115 (Robinson, Harrison 1989). Dłuższa cząstka to RNA-1, krótsza RNA-2 i mają różne właściwości: dłuższa jest konserwatywna, warunkuje takie właściwości wirusa jak infekcyjność i przemieszczanie w roślinie oraz replikazę i niestrukturalne białka; cząsteczka RNA-2 natomiast jest zmienna, jeśli chodzi o długość, koduje białko płaszcza, określa wykrywalność serologiczną i odgrywa rolę w przenoszeniu wirusa przez nicienie. RNA-1 może się namnażać w komórce, ale nie wytwarza białka płaszcza i dlatego cząstki te są niestabilne i nie są wykrywane serologicznie. TRV ma bardzo duży zakres roślin gospodarzy, infekuje naturalnie lub eksperymentalnie ponad 400 gatunków z 50 różnych rodzin. Wirus został znaleziony w Europie, Rosji, Japonii, Nowej Zelandii i Ameryce Północnej (Weingartner 2001). Częściej występuje na glebach lekkich, wilgotnych i najlepiej przenosi się w temperaturze 15-20 o C, gdy jest największa aktywność jego wektorów nicieni. Przez sadzeniaki przenosi się słabo i możemy mówić o częściowej eliminacji wirusa w kolejnych rozmnożeniach bulwowych. W toku licznych badań stwierdzono, że gospodarzami dla wirusa są niektóre chwasty: szarłat prosty (Amaranthus powellii), tasznik pospolity (Capsella bursa-pastoris), komosa biała (Chenopodium album), rogownica polna (Cerastium arvense), rdest ptasi (Polygonum aviculare), rdestówka powojowata (Polygonum convolvulus), portulaka pospolita (Portulaca oleracea), psianka czarna (Solanum nigrum), gwiazdnica pospolita (Stellaria media), jednak jest on przenoszony przez ich nasiona w niewielkim stopniu. Wśród chwastów, których nasiona mogą przenosić TRV, Harrison (1970) wymienia tasznik pospolity i niezapominajkę polną (Myosotis arvensis) oraz bratka polnego (Viola arvensis). TRV jest przenoszony przez 11 gatunków nicieni z rodzajów Trichodorus i Paratrichodorus (rodzina Trichodoridae krępaki), ale nie wszystkie te gatunki żerują na ziemniakach. W Polsce dotychczas odnotowano 9 gatunków krępaków, z których 6 może przenosić TRV. Krępaki występują w glebie do głębokości 100 cm. Nicienie, żerując na korzeniach ziemniaka, przenoszą wirus rattle powodujący nekrozy na bulwach. Krępaki zachowują zdolność przenoszenia wirusa nawet przez kilkanaście miesięcy od jego nabycia. Na efektywność przenoszenia ma wpływ skład mechaniczny, wilgotność i temperatura gleby. Najwrażliwsze na zakażenie są rośliny ziemniaka w fazie formowania bulw, a zwłaszcza wtedy, gdy stosuje się w tym czasie nawadnianie pól. Objawy porażenia ziemniaka TRV powoduje przede wszystkim nekrotyczne plamki (ang. spraing) lub nekrotyczne łuki (ringspot) w bulwach, widoczne na ich przekroju, a często także na skórce (fot. 1). Nekrozy wewnątrz miąższu kształtem i wyglądem różnią się od tych, które są objawem porażenia przez szczepy nekrotyczne PVY NTN na powierzchni bulw i bardzo płytko pod skórką. Na częściach nadziemnych ziemniaka można czasem obserwować mozaikę, zahamowanie wzrostu pojedynczych
10 Ziemniak Polski 2014 nr 3 pędów, a także deformację liści i nekrotyczne plamki w kształcie litery V. Nekrozy przyczyniają się bezpośrednio do pogorszenia jakości bulw przeznaczanych na rynek lub do przetwórstwa. Aby nekrozy wystąpiły w bulwach, muszą być spełnione trzy warunki: obecność wirusa, obecność nicieni wektorów wirusa i odmiana ziemniaka reagująca nekrozami. Objawy na bulwach są wyraźniejsze w chłodnym klimacie i zależą od odmiany ziemniaka, szczepu wirusa i wilgotności gleby. W ostatnim czasie stwierdzono szczególną wrażliwość zagranicznych odmian, np. Innovator, Courlan, Atlantic, Lady Anna. Także w odmianach polskich można znaleźć objawy TRV w bulwach, ostatnio w odmianie Skawa i Jurek. Odmiana Elanda (Zamarte) Fot. 1. Objawy TRV na przekroju bulw ziemniaka (fot. Z.Yin) Sposoby wykrywania TRV w glebie, roślinach i nicieniach Do wykrywania i identyfikacji wykorzystywano nekrotyczną reakcję roślin testowych S. demissum i mieszańca A-6 (S. demissum x S. tuberosum Aquila) (De Bokx, Chrzanowska 1972). Błaszczak (1964) podkreśla, że szczepy wirusa różnią się zdolnością do przenoszenia mechanicznego na rośliny testowe. Rośliny testowe takie jak Chenopodium amaranticolor i C. quinoa (komosa ryżowa) reagują lokalnymi plamami po inokulacji TRV, ale ostatnio okazało się, że zależnie od szczepu wirusa komosy mogą reagować albo tylko lokalnie, albo lokalnie i systemicznie. Odmiana Innovator (Słupsk) Najczęściej używaną rośliną testową jest tytoń Nicotiana tabacum cv. Samsun, który reaguje charakterystycznymi nekrozami i deformacją rośliny. Rośliny tytoniu są używane jako chwytne (bait plants), gdyż wysadzone na testowanej glebie po 2-3 tygodniach wykazują objawy infekcji TRV i tym samym wskazują na infekcyjność gleby. Próbki gleby do badań pobiera się, wg instrukcji Borejko i Cieślewicz (1990), z głębokości ok. 20-40 cm, następnie miesza się je ze sterylną mieszaniną ziemi kompostowej i piasku w stosunku 1:1 i wysadza w skrzynkach siewki tytoniu (odm. Samsun) w rozstawie np. 5 x 5 cm. Po 3-4 tygodniach ocenia się liczbę siewek z objawami porażenia wirusem rattle (fot. 2). Wynik pozytywny wskazuje, że w badanej próbce gleby są nicienie zainfekowane wirusem, a więc źródło infekcji dla ziemniaka. Fot. 2. Siewki tytoniu w badanej glebie (Słupsk) (fot. Z. Yin)
Ziemniak Polski 2014 nr 3 11 Metoda wykrywania TRV immunoenzymatycznym testem ELISA może być przydatna tylko w przypadku systemicznej infekcji rośliny, w przypadku reakcji lokalnej test go nie wykrywa (Weidemann 1995). Metoda wykrywania TRV w nicieniach techniką molekularną RT-PCR została wykorzystana w Szkocji w latach 2005-2007. Wyniki zaprezentowano na 13. konferencji EAPR (Evans i in. 2007). Odporność ziemniaka na TRV i sposoby ograniczania jego rozprzestrzeniania Nie jest znana odporność na krępaki, a odporność ziemniaka na TRV jest dziedziczona w sposób prosty. Dla celów komercyjnych wystarczy, że odmiana nie ma objawów, nawet jeśli jest zakażona latentnie, to znaczy gdy infekcja nie prowadzi do wystąpienia objawów chorobowych. W latach 1994-1996 prowadzono badania w stanie Oregon (USA). Wśród 21 klonów ziemniaka zakażanych TRV znalazły się polskie odmiany Cisa i Bzura, które wykazały do 16% bulw z objawami, podczas gdy Kennebec i Russet Burbank po 46%, a Bintje 0,5% (Koepsell i in. 1974). Wirus może przeżyć wiele lat w glebie, która jest siedliskiem nicieni wektorów TRV i siedliskiem chwastów. Jest przenoszony na inne pola z zanieczyszczeniami ziemią. Koszt i toksyczność nematocydów ogranicza ich stosowanie. W badaniach w stanie Oregon po potraktowaniu pola przeciw nicieniom tylko w pierwszym roku było mniej przypadków porażenia bulw, a w następnym już efektów zwalczania nie było widać (Koepsell i in. 1974). Przeciwdziałać stratom powodowanym przez TRV można poprzez uprawę w płodozmianie roślin, które nie są gospodarzami TRV, np. jęczmienia i pszenicy, odpornych odmian ziemniaka oraz przez staranne zwalczanie chwastów. Z historii badań nad TRV w Polsce W latach 1964-1985 były prowadzone obserwacje choroby ziemniaka wywoływanej przez wirus kędzierzawki tytoniu. Pierwsza praca ukazała się w Biuletynie IHAR (Błaszczak 1964), ostatnia zaś w Rocznikach Nauk Rolniczych i dotyczyła miejsc występowania wirusa w Polsce (Gładysiak, Maciejewski 1985). Błaszczak wyizolował TRV z bulw odmiany Dar z objawami choroby. Czopowatością bulw, zwaną także pstrą plamistością pędów ziemniaka, zajmowali się również Rysiewicz i Rysiewiczowa (1970) w Stacji Hodowli Zamarte. W latach 1973-1978 obszerne badania prowadziła dr Mirosława Waś (1973, 1974, 1978), która opisała właściwości izolatów wirusa, ich stabilność i reakcję roślin testowych na infekcję. W roku 1990 podjęto dalsze badania wirusa w ramach tematów statutowych Instytutu Ziemniaka. Ciskowska i Cieślewicz (1990) opisały głównie reakcję różnych odmian ziemniaka na infekcję TRV, a Borejko i Cieślewicz (1990) wydały instrukcję upowszechnieniową pt. Oznaczanie zagrożenia pól wirusem nekrotycznej kędzierzawki tytoniu (TRV) i badanie odporności odmian i rodów na chorobę czopowatości bulw (1990). Muchalski (Muchalski, Kryszczuk 1999) zajął się oceną czasu przeżywania wirusa na polach, na których uprawia się ziemniaki z dłuższymi przerwami, a także oceną porażenia wybranych genotypów ziemniaka w teście szklarniowym (Muchalski 1997). Obecność wirusa w roślinach wykrywano serologicznie i za pomocą testu RT-PCR (Mierzwa 1974, Muchalski 1997). W SGGW w Warszawie badano ultrastrukturalne zmiany w tkankach ziemniaka i tytoniu na skutek infekcji TRV (Otulak i in. 2012). Wyniki najnowszych badań W latach 2008-2012 w oddziale IHAR PIB w Młochowie oceniono wizualnie 15 079 bulw 114 odmian i 17 linii ziemniaka pod kątem występowania nekroz charakterystycznych dla TRV. Oceniane 100-bulwowe próby pochodziły z 12 województw: zachodniopomorskiego, pomorskiego, kujawsko-pomorskiego, mazowieckiego, łódzkiego, opolskiego, lubelskiego, podlaskiego, dolnośląskiego, lubuskiego, warmińsko-mazurskiego, wielkopolskiego i reprezentowały 24 miejscowości. Znaleziono 1550 bulw z objawami wskazującymi na obecność wirusa. Próbki reprezentujące poszczególne regiony testowano metodą RT-PCR specyficznego dla genomu TRV (RNA1, 16Kgene). Obecność wirusa potwierdzono w bulwach pochodzących z województw: pomorskiego (Lębork, Słupsk), zachodniopomorskiego
12 Ziemniak Polski 2014 nr 3 (Tucze), kujawsko-pomorskiego (Zamarte), łódzkiego (Skierniewice) i mazowieckiego (Młochów, Jadwisin, Pęcice). Zbadano również 71 prób ziemi, które pochodziły z województw: mazowieckiego (Młochów), pomorskiego (Słupsk, Lębork, Dębnica Kaszubska, Suchorze, Siemianice) i łódzkiego (Kamion). Objawy na tytoniu zaobserwowano w 37 próbach. Reakcję pozytywną w teście RT-PCR, potwierdzającą obecność wirusa w glebie, otrzymano dla prób z miejscowości: Słupsk, Lębork, Dębnica Kaszubska, Suchorze (woj. pomorskie), Młochów (woj. mazowieckie) i Kamion (woj. łódzkie) Mapę wyników badań gleby i bulw przedstawiła Z. Yin na 15. konferencji Sekcji Wirusologicznej EAPR w Turcji (Yin i in. 2013). Badania te stanowią cenne uzupełnienie mapy Gładysiaka i Maciejewskiego (1985). Ponadto Hurej (inf. ustna) wymienia miejscowości w południowo-zachodniej części Polski, zaznaczając, że firmy produkujące frytki i chipsy od kilku lat zgłaszają problem złej jakości bulw dostarczanych do zakładów z niektórych pól. Efektem prac prowadzonych w ostatnich latach w Młochowie jest poznanie sekwencji 4 izolatów TRV z roślin tytoniu wysadzonych na glebie z pól, na których występowały nicienie wektory zainfekowane TRV (Yin i in. 2014). Sekwencja RNA1 tych izolatów była homologiczna do izolatów holenderskich i niemieckich. Sekwencja RNA2 wykazała, że dwa izolaty (Deb57 i Slu24) z północy Polski (Dębnica, Słupsk) były podobne do izolatów holenderskich PSG i PLB, a inne dwa (11r21 i Mlo7), z centralnej Polski, należały do odrębnej grupy SYM, izolatów angielskich. W tych dwóch izolatach wykryto nowe fragmenty RNA2, niepodobne do sekwencji zamieszczonych w GenBanku, ale podobne do angielskich SYM RNA2. Podsumowanie Wirus nekrotycznej kędzierzawki tytoniu, zwany wirusem rattle, występuje na znacznym obszarze Polski, szczególnie na lżejszych glebach, wyraźnie w chłodniejszym klimacie. Ostatnio powoduje straty z uwagi na nekrotyczne objawy w miąższu bulw. W czasach, kiedy ziemniaki były w znacznym procencie wykorzystywane na paszę lub do produkcji skrobi czy alkoholu, nekrozy w miąższu bulw nie były istotne. Obecnie, gdy znaczna część bulw idzie do przetwórstwa na chipsy, frytki itp., a także do bezpośredniej konsumpcji, nekrozy w miąższu psują jakość surowca w dużym stopniu. Trudno określić straty, ale dla poszczególnych producentów mogą one być znaczące. Metody oceny gleby pod uprawę ziemniaków na obecność nicieni niosących wirus rattle są dobrze znane i skuteczne. Natomiast ocena reakcji odmian ziemniaka na porażenie wirusem została zaniechana 20 lat temu z uwagi na koszty badań. Wyrywkowe dane o reakcji odmian pochodzą z obserwacji próbek bulw, których liczba jest ograniczona. Nie ma zatem pełnego obrazu sytuacji w ocenie odmian. W związku z obecnie prowadzonymi pracami oddział IHAR PIB w Młochowie informuje, że istnieje możliwość oceny prób ziemniaków i/lub gleby na obecność wirusa rattle (TRV). Producent, który zauważył nekrozy w bulwach i wydaje mu się celowe badanie na porażenie wirusem lub chciałby uzyskać ocenę zainfekowania gleby, może skontaktować się ze specjalistą w Młochowie (tel. 22 729 92 48, e-mail k.michalak@ihar. edu.pl) i przesłać 50-bulwowe próby różnych odmian ziemniaka lub próby gleby. Badania są nieodpłatne, poza kosztem wysyłki bulw. Literatura 1. Błaszczak W. 1964. Czopowatość bulw ziemniaka. Biul. IHAR 4: 11-17; 2. Bokx J. A. de, Chrzanowska M. 1972. Symptom development on A6 following inoculation with various viruses. Potato Res. 15: 146- -159; 3. Borejko T., Cieślewicz I. 1990. Oznaczanie zagrożenia pól wirusem nekrotycznej kędzierzawki tytoniu (TRV) i badanie odporności odmian i rodów na chorobę czopowatości bulw. Instr. upowsz. Inst. Ziemn. Bonin: 1-11; 4. Ciskowska E., Cieślewicz I. 1990. Reakcja roślin ziemniaka porażonych wirusem nekrotycznej kędzierzawki tytoniu (tobacco rattle virus). Biul. Inst. Ziemn. 40: 5-14; 5. Evans K. A., Stanley K., Blackwell A. 2007. Tobacco rattle virus detection in Trichodorid nematodes and changes in Trichodorid populations over the last decade. 13th Virology Section Meeting of EAPR, 17-22.07.2007. Coylumbridge Aviemore Scotland. Abstr. 25; 6. Gładysiak S., Maciejewski T. 1985. Występowanie wirusa nekrotycznej kędzierzawki tytoniu Tobacco rattle virus TRV. Rocz. Nauk Rol., ser. E, 15, 1-2: 99-
Ziemniak Polski 2014 nr 3 13-106; 7. Harrison B. D. 1970. Tobacco rattle virus. C.M.I./A.A.B. Descriptions Plant Vir. 12: 4 s.; 8. Hurej M., Twardowski J. 2013. Nicienie wolnożyjące narastający problem w ochronie ziemniaka. [W:] Nasiennictwo i ochrona ziemniaka. Konf. nauk.-szkol. Dźwirzyno, 16-17.05.2013. IHAR-PIB ZNiOZ Bonin: 46-47; 9. Koepsell P. A., Allen T. C., Jensen. H. J. 1974. Tobacco rattle virus in Oregon Potatoes. Extension Circular 844; 10. Mierzwa Z. 1974. Przygotowanie antygenu wirusa nekrotycznej kędzierzawki tytoniu (TRV). Biul. Inst. Ziemn. 13: 65-71; 11. Muchalski T. 1997. Ocena porażenia wybranych genotypów ziemniaka wirusem nekrotycznej kędzierzawki tytoniu (TRV) w teście szklarniowym. Biul. Inst. Ziemn. 48: 107-115; 12. Muchalski T., Kryszczuk A. 1999. Występowanie w glebie nicieni zainfekowanych TRV po kilkunastu latach od uprawy ziemniaków. [W:] Ochrona ziemniaka. Konf. nauk. Kołobrzeg, 23-24.03.1999. IHAR Oddz. Bonin: 86-89; 13. Otulak K., Chouda M., Chrzanowska M., Garbaczewska G. 2012. Ultrastructural effects of infection caused by Tobacco rattle virus transmitted by Trichodorus primitivus in potato and tobacco tissues. Can. J. Plant Pathol. 34: 126-138; 14. Robinson D. J., Harrison B. D. 1989. Tobacco rattle virus. AAB Descriptions Plant Vir. 346 (No 12 revised): 6 s.; 15. Rysiewicz W., Rysiewiczowa S. 1970. Objawy wywoływane na różnych roślinach rozpoznawczych przez wirus pstrej plamistości pędów uzyskany z odmiany Zorza. Biul. Inst. Ziemn. 6: 53- -63; 16. Waś M. 1973. Wpływ temperatury na ujawnianie się objawów powodowanych przez wirus nekrotycznej kędzierzawki tytoniu na roślinach testowych. Zesz. Probl. Post. Nauk Rol. 142: 61-67; 17. Waś M. 1974. Niektóre właściwości dwóch izolatów wirusa nekrotycznej kędzierzawki tytoniu (Tobacco rattle virus). Zesz. Probl. Post. Nauk Rol. 156: 77-87; 18. Waś M. 1978. Stabilne i niestabilne izolaty wirusa nekrotycznej kędzierzawki tytoniu w roślinach ziemniaka. Biul. Inst. Ziemn. 21: 47-61; 19. Weidemann H. L. 1995. Detection of Tobacco Rattle Virus in potato tubers and roots by Polymerase Chain Reaction (PCR). J. Phytopath. 143: 455-458; 20. Weingartner D. P. 2001. Potato viruses with soil-borne vectors. [W:] Loebenstein G., Berger P. H., Brunt A. A., Lawson R. H. (eds). Virus and virus-like diseases of potatoes and production of seed-potatoes. Kluwer Acad. Publ.: 177- -194; 21. Yin Z., Pawełkowicz M., Michalak K., Chrzanowska M., Zimnoch-Guzowska E. 2013. Monitoring of Tobacco rattle virus in Poland from 2008 to 2012 and sequence feature of the selected isolates. Trienn Meet. Virol. Sec. EAPR, 28-31 May 2013, Antalya Turkey. Abstr. 15; 22. Yin Z., Pawełkowicz M., Michalak K., Chrzanowska M., Zimnoch-Guzowska E. 2014. Recombination, single nucleotide polymorphism and reading frame shifts in the genomes of Tobacco rattle virus isolates found in Poland. Virus Research Manuskrypt Ref. Nr VIRUS-D-13-00568): 1-25 M. Chrzanowska, K. Michalak, Z. Yin Ziemn. Pol. 2014 nr 3, s. 8-13 Ziemniaki pieczone po normandzku 1,5 kg ziemniaków, 15 dag tartego ostrego sera, 2 łyżki śmietany, 3 żółtka, sól, pieprz, łyżka oliwy lub oleju, 4 łyżki posiekanej zielonej pietruszki Wybrać zdrowe, duże owalne ziemniaki równej wielkości (6-8 sztuk). Umyć je starannie szczotką, opłukać, ułożyć w żaroodpornym naczyniu, wstawić do nagrzanego piekanika. Upieczone bulwy nieco przestudzić. Przekroić każdą na pół, wydrążyć łyżeczką, pozostawiając ścianki grubości ok. ½ cm. Miąższ rozetrzeć widelcem na gładką masę, ucierając dodać żółtka i śmietanę, tak by powstała jednolita masa. Wymieszać ją z zieloną pietruszką i tartym serem, przyprawić do smaku solą i pieprzem. Napełnić z czubkiem wydrążone połówki ziemniaków, wyrównać powierzchnię. Ułożyć w żaroodpornym naczyniu przekrojem do góry i ponownie wstawić do nagrzanego piekarnika. Zrumienić powierzchnię nadzienia. Wyłożyć na ogrzany półmisek i od razu podawać z dodatkiem surówki z zielonej sałaty ze śmietaną lub z pomidorów. Potrawa jest podstawowym drugim daniem na obiad lub kolację. Z. Zawistowska. Ziemniaki. Watra Warszawa 1983