MONOLISA HBs Ag ULTRA 72408

MONOLISA HBs Ag ULTRA 72408 CONFIRMATORY 25 testów TEST DO POTWIERDZENIA OBECNOŚCI HBsAg W LUDZKIEJ SUROWICY LUB OSOCZU Kontrola jakości producenta Wszystkie produkty wyprodukowane i wprowadzane do obrotu przez firmę Bio-Rad, podlegają pełnemu systemowi kontroli jakości, od momentu otrzymania surowców aż do chwili wprowadzenia produktu finalnego do sprzedaży. Każda seria odczynników poddawana jest kontroli jakości i jest dopuszczona do sprzedaży, po spełnieniu określonych kryteriów jakości. Dane dotyczące procesu produkcji oraz kontroli jakości każdej serii produkcyjnej są przez nas archiwizowane.

SPIS TREŚCI 1 - PRZEZNACZENIE 2 - ZASADA TESTU MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY 3 - SKŁAD ZESTAWU 4 - ZALECENIA DLA UŻYTKOWNIKA 5 - HIGIENA I BEZPIECZEŃSTWO PRACY 6 - INNE NIEZBĘDNE MATERIAŁY 7 - PRZECHOWYWANIE I TRWAŁOŚĆ ODCZYNNIKÓW 8 - PRÓBKI 9 - PROCEDURA BADANIA 10 - OBLICZANIE I INTERPRETACJA WYNIKÓW 11 - CHARAKTERYSTYKA TESTU 12 - OGRANICZENIA TESTU 13 - LITERATURA

1 PRZEZNACZENIE Test MONOLISA HBsAg ULTRA CONFIRMATORY przeznaczony jest do potwierdzenia obecności antygenu powierzchniowego wirusa zapalenia wątroby typu B (HBsAg) w próbkach ludzkiej surowicy lub osocza, które zostały uznane za reaktywne w teście przesiewowym MONOLISA HBsAg ULTRA (nr kat. 72346/72348). 2 - ZASADA TESTU MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY Test MONOLISA HBsAg ULTRA CONFIRMATORY wykorzystuje zasadę neutralizacji antygenu HBsAg występującego w próbkach surowicy lub osocza krwi przez nadmiar przeciwciał anty-hbs (rozcieńczalnik anty-hbs: czynnik neutralizujący). Zalecane jest, aby próbki, które są powtarzalnie dodatnie w badaniu za pomocą testu przesiewowego MONOLISA HBsAg ULTRA, przebadane zostały za pomocą odczynników zestawu potwierdzającego MONOLISA HBsAg ULTRA CONFIRMATORY. Jeżeli próbka jest pozytywna pod względem obecności antygenu HBs, przeciwciała anty-hbs wysycają determinanty antygenowe, które nie mogą następnie związać się z przeciwciałami opłaszczonymi na fazie stałej. Można zaobserwować zmniejszenie wartości gęstości optycznej podczas porównania gęstości optycznej studzienki z dodanym odczynnikiem neutralizacyjnym, ze studzienką zawierającą kontrolę ujemną - rozcieńczalnik bez przeciwciał anty-hbs. Analizuje się kilka rozcieńczeń próbki, według potrzeby, aby uwzględnić zmienność stężenia HBsAg. Wykonanie testu obejmuje następujące etapy: 1) Inkubacja surowicy kontrolnej i próbek dodatnich z odczynnikiem neutralizującym oraz koniugatem w obecności przeciwciał anty-hbs opłaszczonych na fazie stałej. Dla każdej surowicy wykonuje się kontrolę w studzience, w której odczynnik neutralizujący zastępuje się kontrolą ujemną - rozcieńczalnikiem. Dalsza część procedury jest identyczna jak dla zestawu MONLISA HBsAg ULTRA: 2) Płukanie studzienek, przeprowadzenie reakcji enzymatycznej związanej z fazą stałą przez dodanie substratu. 3) Zatrzymanie reakcji i odczyt gęstości optycznej przy długości fali 450/620-700 nm. 3 - SKŁAD ZESTAWU OZNACZENIE SKŁAD ODCZYNNIKA OPAKOWANIE RA Odczynnik neutralizujący Bufor Tris NaCl (ph 8,0), zawierający surowicę owczą oraz 1 fiolka surowicę ludzką ujemną pod względem antygenu HBs oraz 0,7 ml przeciwciał anty-hvc i anty-hiv1/2, z dodatkiem przeciwciał anty-hbs. Odczynnik gotowy do użycia. Środek konserwujący: ProClin 300 (0,25%) RB RC Rozcieńczalnik kontrolny ujemny Bufor Tris NaCl (ph 8,0), zawierający surowicę owczą oraz surowicę ludzką negatywną pod względem antygenu HBs oraz przeciwciał anty-hvc i anty-hiv1/2. Odczynnik gotowy do użycia. Środek konserwujący: ProClin 300 (0,25%) Rozcieńczalnik próbki Roztwór soli fizjologicznej 0,85%. Odczynnik gotowy do użycia. Środek konserwujący: ProClin 300 (0,1%) 1 fiolka 0,7 ml 1 fiolka 27 ml

4 ZALECENIA DLA UŻYTKOWNIKA Uzyskanie prawidłowego wyniku zależy od przestrzegania zasad Dobrej Praktyki Laboratoryjnej: Nie stosować odczynników po upływie daty przydatności do użytku. Podczas oznaczenia nie mieszać i nie łączyć odczynników zestawu MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY o różnych numerach serii. Przed użyciem, odczekać 30 minut, aby odczynniki uzyskały temperaturę otoczenia (18-30 C). Stosować dokładnie umyte i wypłukane wodą destylowaną naczynia szklane lub najlepiej materiały jednorazowego użytku. Zapoznać się z instrukcją obsługi do zestawu MONOLISA HBs Ag ULTRA. 5 HIGIENA I BEZPIECZEŃSTWO PRACY Wszystkie odczynniki zestawu przeznaczone są do diagnostyki in vitro. Materiał pochodzenia ludzkiego, stosowany do przygotowania odczynników RA i RB został przebadany i nie stwierdzono w nim obecności antygenu HBs oraz przeciwciał anty-hiv1, anty-hiv2 i anty-hcv. Ponieważ nie ma metod gwarantujących brak obecności wirusów HIV, HBV lub HCV oraz innych czynników zakaźnych, odczynniki te oraz próbki pacjenta należy traktować jako potencjalnie zakaźne i należy postępować z należytą ostrożnością. Ogólne instrukcje dotyczące higieny i bezpieczeństwa pracy podano w instrukcji do zestawu MONOLISA HBsAg ULTRA. Niektóre odczynniki zawierają ProClin TM 300 (0,04%, 0,1% i/lub 0,5%) Xi - drażniący Xi Drażniący R43: Może powodować uczulenie w kontakcie ze skórą S28-37: W razie kontaktu ze skórą natychmiast spłukać obficie wodą z mydłem. Stosować odpowiednie ubranie ochronne. 6 INNE NIEZBĘDNE MATERIAŁY Zobacz w instrukcji obsługi do zestawu MONOLISA HBs Ag ULTRA. 7 PRZECHOWYWANIE I TRWAŁOŚĆ ODCZYNNIKÓW Przed użyciem przechowywać zestaw w temperaturze od +2 C do +8 C. Po otwarciu, wszystkie odczynniki mogą być wykorzystywane do terminu ważności podanego na opakowaniu, pod warunkiem, że są przechowywane w temperaturze od +2 C do +8 C. 8 - PRÓBKI Sprawdź w instrukcji obsługi do zestawu MONOLISA HBs Ag ULTRA. Próbki o bardzo wysokim stężeniu HBs Ag, mogą zostać niezneutralizowane przez odczynnik neutralizujący jeżeli oznaczane są w formie nierozcieńczonej. Zobacz rozdział 10 "OBLICZANIE I INTERPRETACJA WYNIKÓW", podrozdział "Kryteria walidacji testu". Uwaga: próbki o wysokim stężeniu HBs Ag, o gęstości optycznej większej niż 3.000 w teście MONOLISA HBs Ag ULTRA, można oznaczać bezpośrednio jeżeli zostaną rozcieńczone 1/100 za pomocą rozcieńczalnika próbek.

9 - PROCEDURA BADANIA Postępować według poniższych etapów, stosując odczynniki zestawu MONOLISA HBs Ag ULTRA. 1. Przygotować roztwór płuczący (R2) oraz roboczy roztwór koniugatu (R6+R7): patrz rozdział 8 "PRZYGOTOWANIE ODCZYNNIKÓW", podrozdział "Odczynniki do rekonstytucji" w instrukcji obsługi do zestawu MONOLISA HBs Ag ULTRA. 2. Wyjąć ramkę mikropłytki oraz wymaganą liczbą pasków (odczynnik R1) z opakowania ochronnego. 3. Nanieść odczynniki do studzienek w następującej kolejności: Studzienki A1, A2: 100 µl kontroli ujemnej (R3) zestawu MONOLISA HBs Ag ULTRA. Studzienki B1, B2: 100 µl kontroli dodatniej (R4) zestawu MONOLISA HBs Ag ULTRA. Studzienki C1, C2, D1, D2: 100 µl pierwszej próbki do potwierdzenia. Studzienki E1, E2, F1, F2: 100 µl drugiej próbki do potwierdzenia. Studzienki G1, G2, H1, H2: 100 µl trzeciej próbki do potwierdzenia i tak dalej... Zależnie od wymagań stosowanego systemu, możliwa jest zmiana położenia kontroli a także kolejności dystrybucji odczynników. 4. Dodać 20 μl rozcieńczalnika kontrolnego ujemnego (RB) do studzienek A1, B1, C1, D1, E1, F1, G1, H1 oraz 20 μl odczynnika neutralizującego (RA) do studzienek A2, B2, C2, D2, E2, F2, G2, H2, itd... 5. Nanieść po 50 µl roboczego roztworu koniugatu (R6+R7) do wszystkich studzienek. Wymieszać zawartość wszystkich studzienek za wykonując co najmniej 3 aspiracje. 6. Przejść do etapu 7 i kolejnych etapów opisanych w rozdziale 11 "PROCEDURA" instrukcji obsługi do zestawu MONOLISA HBs Ag ULTRA. 10 - OBLICZANIE I INTERPRETACJA WYNIKÓW 1) Współczynnik reaktywności kontroli i próbek 1. Dla kontroli dodatniej (R4) i ujemnej (R3) zestawu MONOLISA HBs Ag ULTRA, obliczyć: Współczynnik reaktywności = średnia OD kontroli z RB [(OD R3 z RB + OD R3 z RA)/2] + 0,050 2. Dla każdej próbki obliczyć: Współczynnik reaktywności = średnia OD próbki z RB [(OD R3 z RB + OD R3 z RA)/2] + 0,050 2) Procent hamowania 1. Obliczyć procent hamowania dla gęstości optycznych odnotowanych dla kontroli dodatnich (R4) i ujemnych (R3) po dodaniu odczynnika neutralizującego (RA) oraz rozcieńczalnika kontroli negatywnej (RB). Procent zahamowania = (OD kontroli z RB) (OD kontroli z RA) OD kontroli z RB x 100 2. Obliczyć procent hamowania dla gęstości optycznych odnotowanych dla próbek po dodaniu odczynnika neutralizującego (RA) oraz rozcieńczalnika kontrolnego ujemnego (RB). Procent zahamowania = 3) Kryteria walidacji testu (średnie OD próbek z RB) - (średnie OD próbek z RA) średnie OD próbek z RB x 100

1. Wartości gęstości optycznej dla kontroli ujemnej (R3) z dodatkiem rozcieńczalnika kontrolnego ujemnego (RB) lub odczynnika neutralizującego (RA) muszą być niższe lub równe 0.080 jednostek OD. Dla tej samej kontroli negatywnej (R3), współczynnik reaktywności musi wynosić mniej niż 0.8. Dla kontroli dodatniej (R4) z dodatkiem rozcieńczalnika kontrolnego ujemnego (RB), gęstość optyczna musi być większa niż 0.800. Dla tej samej kontroli pozytywnej (R4), procent hamowania musi być równy lub większy niż 50%. 2. W przypadku próbek, których procent hamowania < 50%, a współczynnik reaktywności 0.8, konieczne jest ich ponowne przebadanie po rozcieńczeniu w rozcieńczalniku próbki (1/100; 1/10 000; 1/1 000 000; itd., rozcieńczenie 100x), aby uzyskać współczynnik reaktywności < 0,8 (w tym przypadku próbka nie jest potwierdzona) lub potwierdzenie neutralizacji badanej próbki (procent hamowania 50%). 4) Interpretacja wyników Próbka jest potwierdzona jako dodatnia pod względem obecności HBs Ag, jeżeli współczynnik reaktywności jest równy lub większy niż 0.8, a procent hamowania jest równy lub większy niż 50%. Współczynnik reaktywności próbki Procent hamowania Interpretacja 0,8 50% Potwierdzenie 0,8 < 50% Brak potwierdzenia; próbka do rozcieńczenia < 0,8 Jakikolwiek wynik Próbka niereaktywna* * Brak potwierdzenia dla próbek rozcieńczonych Przykłady: Test Wartości OD z RA Wartości OD z RB Współczynnik reaktywności próbki Procent hamowania Interpretacja Kontrola dodatnia 0,095 2,025 32,66 95% Potwierdzenie (R4) Kontrola ujemna (R3) 0,011 0,013 0,21 15% Niereaktywna Próbka 1 0,009 0,007 Próbka 2 2,585 2,570 Próbka 2 Rozcieńczenie 1/100 0,049 0,045 Próbka 3 0,132 0,140 Próbka 3 Rozcieńczenie 1/100 0,032 0,028 0,027 0,023 3,906 3,880 2,079 2,058 0,151 0,161 0,036 0,032 0,40 68% Niereaktywna 63,00 34% Brak potwierdzenia; próbka do rozcieńczenia 33,36 98% Potwierdzenie 2,52 13% Brak potwierdzenia; próbka do rozcieńczenia 0,55 12% Brak potwierdzenia

11 - CHARAKTERYSTYKA TESTU Właściwości testu MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY w połączeniu z MONOLISA HBs Ag ULTRA oceniono, oznaczając próbki od losowo wybranych dawców krwi, pacjentów z ostrym lub przewlekłym zapaleniem wątroby typu B oraz z innymi chorobami, nie związanymi z zapaleniem wątroby typu B, a także na komercyjnych próbkach i panelach serokonwersyjnych. Ponadto, granica czułości testu została określona przy użyciu surowic z panelu HB Francuskiej Służby Krwi (EFS) oraz satndardów WHO (NIBSC kod 00/588). Czułość analityczna Wszystkie rozcieńczone próbki o stężeniach od 0.06 ng/ml do 2.2 ng/ml pochodzące z panelu czułości HB EFS oraz wszystkie dodatnie próbki z panelu WHO NIBSC zostały potwierdzone za pomocą testu MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY. Stężenie większe niż 10 mg/ml HBs Ag zneutralizowano po rozcieńczeniu próbki. Czułość Czułość testu określono na podstawie badań wykonanych dla 337 próbek dodatnich, pochodzących od monitorowanych pacjentów z przewlekłym lub ostrym wirusowym zapaleniem wątroby typu B. Wszystkie próbki dodatnie zostały potwierdzone za pomocą testu MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY. Przebadano ponadto próbki z 15 dobrze udokumentowanych dostępnych komercyjnie paneli serokonwersyjnych HBV (45 próbek): wszystkie próbki pozytywne zostały zneutralizowane. Swoistość i reakcje krzyżowe Przebadany został zestaw firmowy składający się z 16 próbek fałszywie dodatnich w teście MONOLISA HBs Ag ULTRA i żadna z nich nie została potwierdzona w teście MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY. Z użyciem testu MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY przebadano również 102 próbki pobrane od pacjentów, u których występowały różne patologie lub stany niezwiązane z wirusowym zapaleniem wątroby typu B (kobiety ciężarne, czynnik reumatoidalny, przeciwciała przeciwjądrowe, przeciwciała skierowane przeciwko białkom mysim oraz inne zakażenia wirusowe i bakteryjne) i zostały one potwierdzone jako negatywne. Dodatkowo, za pomocą testu MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY przebadano 37 próbek dodatnich zarówno w kierunku HBs Ag jak i wobec innych markerów (czynnik reumatoidalny, przeciwciała przeciwjądrowe, przeciwciała skierowane przeciwko białkom mysim lub inne zakażenia wirusowe) i zostały one potwierdzone jako pozytywne. Ponadto, 23 próbki z panelu BBI PCA 201 z współistniejącymi zakażeniami (HBV, HIV, HCV i/lub HTLV) potwierdzono jako dodatnie w teście MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY bezpośrednio lub po rozcieńczeniu. Powtarzalność Powtarzalność dla testu MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY określono przy zastosowaniu 4 próbek: 1 próbka ujemna (próbka 1), 2 próbki dodatnie (próbki 2 i 3) oraz jedna próbka silnie dodatnia (próbka 4). Powtarzalność wewnątrz-testową oznaczono badając ww. 4 próbki 30 razy w jednym teście. Powtarzalność między-testową (odtwarzalność) oznaczono badając ww. 4 próbki w duplikatach, wykonując 2 różne badania dziennie przez okres 20 dni. Wyniki przedstawiono w poniższych tabelach: Tabela 1: Powtarzalność wewnątrz-testowa Próbka 1 Próbka 2 n = 30 (współczynnik = 0,37) (współczynnik = 1,32) Średni % hamowania Odchylenie standardowe (SD) Próbka 3 (współczynnik = 3,39) Próbka 4 (współczynnik = 18,39) 4 85,37 94,89 98,38 12,6 1,59 0,66 0,21 CV (%) Nie dotyczy 1,86% 0,69% 0,22%

Tabela 2: Odtwarzalność n = 40 Próbka 1 Próbka 2 Próbka 3 Próbka 4 (współczynnik = 0,37) (współczynnik = 1,32) (współczynnik = 3,39) (współczynnik = 18,39) Średni % hamowania 3,74 81,46 92,76 98,08 Odchylenie standardowe (SD) 15,84 7,07 3,43 0,75 CV (%) Nie dotyczy 8,68% 3,70% 0,76% Wyniki uzyskane podczas tych badań były zgodne z oczekiwaniami. 12 - OGRANICZENIA TESTU Zastosowanie testu potwierdzającego MONOLISA HBS Ag ULTRA CONFIRMATORY jest ściśle ograniczone do potwierdzania obecności antygenu powierzchniowego wirusa zapalenia wątroby typu B (HBs Ag) w ludzkiej surowicy i osoczu krwi. Próbki, które w sposób powtarzalny dają wynik słabo dodatni (indeks próbki mniejszy niż 2) w teście MONOLISA HBs Ag ULTRA i które nierozcieńczone określane są jako niereaktywne w teście MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY (współczynnik reaktywności mniejszy niż 0,8) należy interpretować z ostrożnością. Zalecane jest ponowne przebadanie tych pacjentów z zastosowaniem innej metody lub pobranie drugiej próbki do badania w późniejszym czasie. Przeciwciała heterofilne oraz HAMA obecne w surowicy lub osoczu mogą interferować w niniejszym oznaczeniu. Przeciwciała te mogą być obecne w próbkach pochodzących od osób mających regularny kontakt ze zwierzętami lub poddanych terapii z użyciem produktów pochodzenia zwierzęcego. Wyniki niezgodne z objawami klinicznymi wymagają przeprowadzenia badań dodatkowych. 13 - LITERATURA 1. COUROUCE A.M., LEE H., DROUET J., CANAVAGGIO M. and SOULIER J.P. (1983) - Monoclonal antibodies to HBs Ag : a study of their specificities for eight different HBs subtypes. Developments in Biological Standardization, 54, 527-534. 2. COUROUCE A.M., PLANCON A. and SOULIER J.P. (1983) - Distribution of HBs Ag subtypes in the world. Vox Sang. 44, 197-211. 3. DAVID G.S., PRESENT W., MARTINIS J., WANG R., BATHOLOMEW R., DESMOND W. and SEVIER E.D., (1981) - Monoclonal antibodies in the detection of hepatitis infection. Medical Laboratory Sciences, 38, 341-.348. 4. DROUET J., COUROUCE A.M., KALIL J., LEE H., and FELLOUS M. (1981) - Monoclonal antibodies to HBs Ag produced by murine hybridomas. In viral hepatitis, edited by Szmuness W. Alter H.J., Maynard J.E. The Franklin Institute Press, 706. 5. FIELDS H.A., DAVID C.L., BRADLEY D.W. and MAYNARD J.E. (1983) - Experimental conditions affecting the sensitivity of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of hepatitis B surface antigen (HBs Ag) - Bulletin of the World Health Organization, 61, 1, 135-142. 6. LEE H.H., COUROUCE A.M., PERE M., CANAVAGGIO M., DROUET J. and SOULIER J.P. (1983) - Monoclonal antibodies to HBs Ag; a study of their specificities against HBs Ag subtypes and their utilization in ELISA. International Association of Biological Standardization. International Symposium on Monoclonal Antibodies : Paris, France. 7. SOULIER J.P., COUROUCE A.M., LEE H. DROUET J., MULLER A. and CANAVAGGIO M. (1983) - Monoclonal antibodies against HBs antigen. Bulletin Biotest (vol. 4, 353-358). 8. WANDS J.P., CARLSON R.L., SCHOEMAKER H., ISSELBACHER K.J. and ZURAWSKI V.R. (1981) - Immunodiagnosis of hepatitis B with high-affinity IgM monoclonal antibodies. Proc. Nat. Acad. Sci., 78, 2, 1214-1218. 9. M. CANAVAGGIO, A.M. COUROUCE, M. PERE, H. LEE - Spécificité d'anticorps monoclonaux dirigés contre le déterminant a de l'ag HBs (1985). Nouvelle Revue Française d'immunohématologie (Springer International), 27, 2, 134. 10. J. DROUET, G. CHARRIER, A.M. COUROUCE, M. PERE, J.F. DELAGNEAU, J. ROISIN (1985) - Nouveaux réactifs de dépistage de l'ag HBs et de dosage de l'anticorps anti-hbs. Nouvelle Revue Française d'immunohématologie (Springer International), 27, 2, 134

CE marking (European directive 98/79/CE on in vitro diagnostic medical devices) Znak CE (Dyrektywa Parlamentu Europejskiego 98/79/CE o wyrobach do diagnostyki medycznej in vitro) For in vitro diagnostic use Wyrób dodiagnostyki in vitro Catalogue number Numer katalogowy Manufacturer Wytwórca Authorised Representative Autoryzowany Przedstawiciel Batch code Kod partii Expiry date YYYY/MM/DD Użyć przed RRRR/MM/DD Storage temperature limitation Przestrzegać zakresu temperatur Consult Instruction for use Sprawdź w instrukcji obsługi Bio-Rad 3, Bd Raymond Poincaré 92430 MARNES LA COQUETTE - FRANCE Tél. : + 33 (0) 1 47 95 60 00 Fax.: + 33 (0) 1 47 41 91 33 0459 01/2010 Kod: 883588