BACTEC Diluting Fluid Polski PRZEZNACZENIE Ciecz do rozcieñczania BACTEC (BACTEC Diluting FLuid) stosuje siê w procedurach, w których hodowle drobnoustrojów rozcieñcza siê do celów inokulacji. Jej g³ównym zastosowaniem s¹ standardowe testy wra liwoœci na leki BACTEC pr¹tka gruÿlicy M. tuberculosis 1,3-7. W tej procedurze inokulum rozcieñcza siê w stosunku 1:100 przed dodaniem do fiolki kontrolnej. Ciecz do rozcieñczania mo na tak e stosowaæ do rozcieñczania hodowli w innych procedurach, takich jak test NAP, lub dowolnym innym teœcie, w którym konieczne jest rozcieñczenie zawiesiny hodowli 2. STRESZCZENIE I OBJAŒNIENIE Stosowanie cieczy do rozcieñczania jest czêœci¹ badania podatnoœci na leki w testach BACTEC M. tuberculosis. Ciecz do rozcieñczania zawiera detergent, polisorbat 80 (Tween 80) i woln¹ od kwasów t³uszczowych albuminê. Substancje te u³atwiaj¹ rozproszenie pr¹tków w zawiesinie. Albumina jest wolna od kwasów t³uszczowych, nie wspó³zawodniczy wiêc z wyznakowanym 14 C kwasem t³uszczowym, znajduj¹cym siê w po ywce. Stê enie polisorbatu 80 jest minimalne, tak e nie zaburza on testu wra liwoœci na leki, umo liwiaj¹c jednak rozproszenie pr¹tków i uzyskanie jednolitej, homogennej zawiesiny. ZASADY PROCEDURY Test wra liwoœci na leki BACTEC opiera siê na zmodyfikowanej metodzie proporcji. Za proporcjê krytyczn¹ dla opornoœci uwa a siê 1%, co oznacza, e je eli 1% lub wiêcej populacji pr¹tków wykazuje opornoœæ, hodowlê uznaje siê za oporn¹. Przy ustalaniu 1% proporcji opornoœci w po ywce 12B do hodowli pr¹tków, inokulum bakteryjne przeznaczone do fiolki kontrolnej rozcieñcza siê w stosunku 1:100 przed dodaniem do fiolki z po ywk¹. Ciecz do rozcieñczania BACTEC dostarcza siê po to, aby u³atwiæ rozcieñczenie zawiesiny hodowli w stosunku 1:100. Wolna od kwasów t³uszczowych albumina i polisorbat 80, obecne w cieczy do rozcieñczania, u³atwiaj¹ rozproszenie zawiesiny i uzyskanie bardziej jednolitej zawiesiny pr¹tków. ODCZYNNIKI Fiolki z ciecz¹ do rozcieñczania BACTEC zawieraj¹ przed przeprowadzeniem badania nastêpuj¹ce aktywne sk³adniki: CIECZ DO ROZCIEÑCZANIA BACTEC, PO 9,9 ML Iloœæ dodawana na litr wody destylowanej Polisorbat 80.................................................. 0,2 ml Wolna od kwasów t³uszczowych albumina surowicy bydlêcej....... 2,0 g Ostrze enia i œrodki ostro noœci: Ciecz do rozcieñczania BACTEC przeznaczona jest do u ytku diagnostycznego in vitro. Produkt zawiera suchy kauczuk naturalny. W próbkach mog¹ byæ obecne drobnoustroje patogenne, takie jak wirusy zapalenia w¹troby i wirus HIV. Przy kontakcie z ka dym materia³em zanieczyszczonym krwi¹ lub innymi p³ynami ustrojowymi nale y przestrzegaæ Uniwersalnych œrodków ostro noœci 8-11 i zaleceñ obowi¹zuj¹cych w danej instytucji. Przed u yciem ka da fiolka powinna byæ zbadana pod k¹tem œladów zniszczenia, zanieczyszczenia lub przecieku, takich jak œciemnienie, uwypuklenie lub zapadniêcie siê przegrody. NIE U YWAÆ fiolek z cechami zanieczyszczenia. W fiolce z zanieczyszczeniami mo e dojœæ do zwiêkszenia ciœnienia. Zanieczyszczenie fiolki mo e nie byæ ³atwo widoczne. Fiolek z oznakami zmêtnienia, zanieczyszczenia czy zmiany barwy (na ciemniejsz¹) nie nale y u ywaæ. Fiolki z cechami uszkodzenia nale y wyrzuciæ przed inokulacj¹. W rzadkich przypadkach szyjka fiolki mo e byæ pêkniêta i mo e od³amaæ siê podczas zdejmowania pokrywki albo w czasie obs³ugi. Tak e w rzadkich przypadkach fiolka mo e nie byæ zamkniêta wystarczaj¹co szczelnie. W obu takich przypadkach zawartoœæ fiolki mo e wyciekaæ lub rozlaæ siê, zw³aszcza przy odwróceniu fiolki do góry dnem. Jeœli fiolka by³a inokulowana, materia³, który wyciek³ lub uleg³ rozlaniu nale y traktowaæ z ostro noœci¹ ze wzglêdu na to, e mo e on zawieraæ patogenne drobnoustroje (czynniki). Przed utylizacj¹ nale y wysterylizowaæ wszystkie inokulowane fiolki w autoklawie. Nale y zawsze przestrzegaæ technik aseptycznych i ustalonych œrodków ostro noœci w odniesieniu do zagro enia mikrobiologicznego. Procedury nale y prowadziæ w odpowiedniej kabinie bezpieczeñstwa biologicznego w pomieszczeniu o odpowiednim systemie wentylacyjnym, zgodnie z zaleceniami CDC 12. Przy kontakcie z próbkami i hodowlami, zawieraj¹cymi potencjalne patogeny, nale y u ywaæ odpowiedniej odzie y ochronnej, maski i rêkawiczek. Stosowaæ siê do zaleceñ CDC i OSHA 12. Aby zminimalizowaæ potencjalny wyciek podczas inokulacji, nale y u yæ koñcówek z za³o onymi na sta³e ig³ami lub zakoñczeñ Luer-Lok. INSTRUKCJA PRZECHOWYWANIA Fiolki z ciecz¹ do rozcieñczania BACTEC nale y przechowywaæ w temperaturze 2 25 C w suchym miejscu, bez nara enia na bezpoœrednie dzia³anie œwiat³a s³onecznego. POBIERANIE PRÓBKI Zob. instrukcje do testów wra liwoœci (ulotka do opakowania zestawu leków S.I.R.E. PP-118JAA). PP117JAA 2007/06
PROCEDURA Dostarczane materia³y: Ciecz do rozcieñczania BACTEC Materia³y wymagane, ale niedostarczane: Po ywka 12B BACTEC Aparat 460TB BACTEC Strzykawka tuberkulinowa z ig³¹ zamocowan¹ na sta³e Roztwór œrodka odka aj¹cego 70% alkohol izopropylowy Z fiolki z ciecz¹ do rozcieñczania BACTEC zdj¹æ zakrêtkê. Przy ka dym wprowadzaniu fiolki nale y odka aæ gumow¹ przegrodê fiolki. Wierzcho³ek ka dej fiolki oczyœciæ œrodkiem odka aj¹cym i nastêpnie 70% alkoholem. Zawiesinê hodowli, która ma byæ rozcieñczana, wprowadzaæ do fiolki za pomoc¹ strzykawki z ig³¹ za³o on¹ na sta³e lub z zakoñczeniem Luer-Lok. Po dodaniu do fiolki 0,1 ml uzyskuje siê rozcieñczenie w stosunku 1:100. Dok³adnie zmieszaæ przez obrócenie do góry dnem co najmniej 10 razy. Je eli potrzebne jest rozcieñczenie inne ni 1:100, pobraæ czêœæ zawartoœci fiolki i wykonaæ odpowiednie rozcieñczenie. Dalsze szczegó³y procedury badania wra liwoœci na lek mo na znaleÿæ w ulotce do opakowania zestawu z lekami S.I.R.E. (PP-118JAA) lub w podrêczniku dotycz¹cym procedury i produktu 460TB BACTEC (MA-0029). KONTROLA JAKOŒCI NIE U YWAÆ fiolek do hodowli po up³ywie ich daty wa noœci. NIE U YWAÆ fiolek hodowlanych, które wykazuj¹ pêkniêcia lub defekty; utylizowaæ fiolkê w odpowiedni sposób. U ytkownik powinien oceniæ fiolki z ciecz¹ do rozcieñczania pod k¹tem oznak pogorszenia jakoœci. Kontrolê jakoœci procedur bakteryjnych opisano w ulotce do opakowania zestawu leków S.I.R.E. (PP-118JAA) lub w podrêczniku dotycz¹cym procedury i produktu 460TB BACTEC (MA-0029). Z ka dym zestawem cieczy do rozcieñczania dostarczane s¹ certyfikaty kontroli jakoœci. W certyfikatach kontroli jakoœci podano drobnoustroje u ywane do testów danego typu produktu. W ramach codziennej kontroli nale y badaæ na aparacie systemu 460TB BACTEC fiolki do badania wydajnoœci (BACTEC Performance Test Kit). Uzyskanie niskiego odczytu, je eli fiolki do badania wydajnoœci przetestowano prawid³owo, wskazuje na mo liwoœæ awarii aparatu (zob. ulotkê do opakowania PTK BACTEC PP-046JAA). OGRANICZENIA PROCEDURY Dok³adne sporz¹dzenie preparatu o rozcieñczeniu 1:100 jest mo liwe tylko pod warunkiem dok³adnego rozproszenia rozcieñczanej zawiesiny. Obecnoœæ du ych grudek, zw³aszcza w przypadku M. tuberculosis, mo e powodowaæ nieprawid³owe rozcieñczenie i wp³ywaæ w ten sposób na wyniki badania wra liwoœci na lek. Zanieczyszczenie Nale y zachowaæ ostro noœæ, aby zapobiec zanieczyszczeniu przy inokulacji do fiolki BACTEC. Zanieczyszczona próbka da odczyt dodatni, co jednak nie oznacza wyniku istotnego klinicznie. Takie ustalenie musi byæ wykonane przez u ytkownika na podstawie takich czynników, jak: typ wykrytych drobnoustrojów, wystêpowanie tego samego drobnoustroju w wielu hodowlach, historia choroby pacjenta, odpowiednie kontrole aparatury itp. Zanieczyszczenie mo e byæ tak e skutkiem nieprawid³owej konserwacji igie³ i przewodów BACTEC, niedostatecznego oczyszczania przegrody lub nieprawid³owego dzia³ania jednostki grzewczej igie³ BACTEC (zob. instrukcjê obs³ugi i konserwacji). Z powodu charakteru materia³u biologicznego zawartego w pod³o ach i naturalnej ró norodnoœci drobnoustrojów u ytkownik powinien zdawaæ sobie sprawê z potencjalnej ró norodnoœci wyników przy wzroœcie niektórych drobnoustrojów. OCZEKIWANE WYNIKI I SWOISTA CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŒCIOWA Szczegó³y mo na znaleÿæ w ulotce do opakowania zestawu leków S.I.R.E. (PP-118JAA). Po zmieszaniu zawiesiny hodowli takiej jak hodowla M. tuberculosis z ciecz¹ do rozcieñczania i po dok³adnym wymieszaniu jednolitej zawiesiny hodowli uzyskuje siê po ¹dane rozcieñczenie. Obecnoœæ polisorbatu 80 nie wp³ywa istotnie na wzorzec wra liwoœci ze wzglêdu na jego ma³e stê enie. PIŒMIENNICTWO 1. Hawkins, J.E. Non-weekend schedule for BACTEC susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 23:934-937, 1986. 2. Laszlo, A. and S.H. Siddiqi. Evaluation of a rapid radiometric differentiation test for the Mycobacterium tuberculosis complex by selective inhibition with r-nitro-a-acetylamino-b-hydroxy-propiophenone. J. Clin. Microbiol. 19:694-695, 1984. 3. Libonati, J.P. et al. Identification and direct drug susceptibility testing of mycobacteria by the radiometric method. Abstract C300, A.S.M. Annual Meeting, St. Louis, MO, 1984. 4. Roberts, G.D. et al. Evaluation of BACTEC radiometric method for recovery of mycobacteria and drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis from acid-fast smear-positive specimens. J. Clin. Microbiol. 18:689-696, 1983. 5. Siddiqi, S.H. et al. Evaluation of a rapid radiometric method for drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 1981, 13: 908-912. 6. Siddiqi, S.H. et al. Interlaboratory drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis by radiometric and two conventional methods. J. Clin. Microbiol. 1985, 22: 919-923. 2
7. Snider, Jr., D.E. et al. Rapid drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. Am. Rev. Respir. Dis. 123:402-406, 1981. 8. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 2001. Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed., NCCLS, Wayne, PA. 9. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17:53-80. 10. U.S. Department of Health and Human Services. 1999. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC) 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 11. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045. 12. Kent, P.T. et al. Public health mycobacteriology, a guide for the level III laboratory. Centers for Disease Control, Division of Laboratory Training and Consultation. Atlanta, GA, 1985. 3
4
Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland 21152 USA 800-638-8663 BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon, County Clare, Ireland Tel: 353-61-47-29-20 Fax: 353-61-47-25-46 BD, BD Logo, BACTEC and Luer-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company. 2007 BD.