Sesja 6. Molekularna epidemiologia wodnopochodnych pasożytów ludzi i zwierząt

Transkrypt

1 Sesja 6 Molekularna epidemiologia wodnopochodnych pasożytów ludzi i zwierząt

2

3 Wiadomoœci Parazytologiczne 2007, 53 (suplement), 101 Cryptosporidium spp. infections in hospitalized patients in Poland Anna Bajer 1, Małgorzata Bednarska 1, Simone Caccio 2, Beata Kuśnierz Wolska 3 and Edward Siński 1 1 Department of Parasiology, Institute of Zoology, Faculty of Biology, University of Warszawa, Miecznikowa 1, , Warszawa, Poland 2 Division of Gastroenteric and Tissue Parasitic Diseases, Department of Infectious, Parasitic and Immunomediated Diseases, Istituto Superiore di Sanita, Roma, Italy 3 Gastroenaterology, Hepatology and Immunology Clinic, Children's Memorial Health Institute (CMHI), Warszawa, Av Dzieci Polskich 20, , Warszawa, Poland Cryptosporidium parasites cause a severe illness (cryptosporidiosis) in immunocompromised humans all over the world. However, in Poland there is still little known on epidemiology of these parasites due to the paucity of data on human cases. The problems of epidemiology concern the existence of multiple transmis sion routes, including anthroponotic and zoonotic transmission. During last 10 years the wide range of vario us molecular technique, basing mostly on Polymerase Chain Reaction (PCR), was employed for the detec tion of sources of human infections. The aim of this study was molecular typing of Cryptosporidium spp. iso lates from hospitalized patients with or without different immunodeficiencies. Thirty five human isolates we re derived from clinical cases of children and adult patients of The Children's Memorial Health Institute, Cancer Centre in Warsaw and Children's Hospital in Otwock. Isolates were characterised by nested PCR am plification of a fragment of Cryptosporidum Oocyst Wall Protein (COWP) gene and sequence analysis of 550 bp PCR product. Obtained sequences were compared with sequences deposed in GenBank data base. Among 13 positive isolates three different Cryptosporidium species were identified: C. hominis, C. parvum and C. meleagridis. These results suggest different routes of transmission of this parasite in humans in Poland with possible important role of zoonotic transmission. The study was partially supported by State Committee for Scientific Research, KBN, through Faculty of Biology, War saw University intramural grant, BW 1601/53 and KBN grant no. 2PO4C09827.

4 Wiadomoœci Parazytologiczne 2007, 53 (suplement), 102 Diagnostyka molekularna Acanthamoeba spp. izolowanych z prób środowiskowych Molecular diagnostics of Acanthamoeba spp. isolated from environment Monika Derda i Edward Hadaś Uniwersytet Medyczny, Katedra i Zakład Biologii i Parazytologii Lekarskiej, Poznań, ul. Fredry 10; E mail: mderda@ump.edu.pl Pełzaki wolno żyjące z rodzaju Acanthamoeba są czynnikiem etiologicznym ziarniniakowego zapalenia mózgu, zapalenia rogówki oka oraz zapalenia innych narządów. Istotnym warunkiem prognostycznym lecze nia zarażenia pełzakami jest szybkie rozpoznanie inwazji. Dotychczasowe metody diagnostyczne i identyfi kacji pełzaków są czasochłonne. Opierają się głównie na mikroskopowej ocenie cech morfologicznych po przedzonej hodowlą pełzaków na podłożach. Celem naszych badań było opracowanie nowej, szybkiej metody wykrywania i identyfikacji pełzaków z rodzaju Acanthamoeba izolowanych z prób środowiskowych oraz z materiału diagnostycznego pobranego od pacjentów. Materiałem badanym były próbki wody pochodzące z jezior i stawów, a także próbki wody wodociągo wej. Identyfikację pełzaków prowadzono techniką PCR wykorzystując dwie pary starterów: Nelson i ACAR NA oraz metodą mikroskopową porównawczo ze szczepami standardowymi. Przebadano 6 szczepów wzor cowych oraz 46 izolatów pochodzących z prób środowiskowych. Badania wykazały, że startery ACARNA są specyficzne dla rodzaju Acanthamoeba i w reakcji z DNA tych pełzaków dają produkt 272 pz. Reakcję pozytywną uzyskano w przypadku szczepów wzorcowych oraz 15 z przebadanych izolatów. Szczepy wzorcowe Hartmanella i Naegleria oraz pozostałe 31 izolatów dawały reakcję negatywną. Badania PCR z zastosowaniem staterów Nelson wykazały, że DNA szczepów Acanthamoba w reakcji PCR dają produkt o wielkości 229 pz, DNA Hartmanella daje produkt 180 pz, na tomiast szczepy Naegleria nie dają reakcji z tymi starterami. Stwierdzono, że stosując technikę PCR u można w krótkim czasie w badanym materiale wykryć i rozpo znać rodzaj Acanthamoeba.

5 Wiadomoœci Parazytologiczne 2007, 53 (suplement), 103 Ocena częstości występowania zarażeń Cryptosporidium spp. u dzieci z biegunką Evaluation of prevalence of Cryptosporidium spp. infection in children with diarrhea Elżbieta Gołąb 1, Maria Waloch 1, Wioletta Rożej 1 *, Teresa Wernik 2, Mariola Piotrowska 2, Maria Wąsik 2 i Tadeusz H. Dzbeński 1 1 Zakład Parazytologii Lekarskiej, Państwowy Zakład Higieny 2 Zakład Diagnostyki Laboratoryjnej i Immunologii Klinicznej Wieku Rozwojowego, Samodzielny Publiczny Dziecięcy Szpital Kliniczny, Warszawa *Autor do korespondencji: E mail: wrozej@gmail.com Cryptosporidium należy do pierwotniaków rozwijających się w komórkach nabłonka jelitowego. Konse kwencją zarażenia jest rozwój stanu zapalnego błony śluzowej jelita, który objawia się najczęściej bólami brzucha, nudnościami, wymiotami oraz wodnistą biegunką z dużą ilością śluzu. Kryptosporydioza u osób im munokompetentnych przebiega na ogół łagodnie i ulega samowyleczeniu w ciągu kilku dni, jednak u osób z obniżoną czynnością układu odpornościowego bywa przewlekła i wyniszczająca. Oszacowano, że Crypto sporidum wywołuje około 2% biegunek występujących u ludzi immunokompetentnych w krajach rozwinię tych. Niestety brakuje danych dotyczących występowania kryptosporydiozy w Polsce, ponieważ zwykle Cryptosporidum nie jest brane pod uwagę przy poszukiwaniu czynnika etiologicznego biegunek, zarówno w przypadkach zachorowań pojedynczych jak i w ogniskach zatruć pokarmowych. W celu określenia częstości występowania Cryptosporidum jako przyczyny biegunek u dzieci przeprowa dzono badania 122 próbek kału pobranych od dzieci, u których w rezultacie rutynowo przeprowadzonych ba dań mikrobiologicznych nie określono czynnika etiologicznego biegunki. Zbadane dzieci, w tym 63 dziew czynki i 59 chłopców w wieku od 1 miesiąca do 9 roku życia (średnia 3 lata), były hospitalizowane w dwóch szpitalach warszawskich. Próbki kału badano mikroskopowo po sporządzeniu rozmazów zabarwionych zmodyfikowaną metodą Ziehl Neelsena oraz wykorzystując metodę immunofluorescencji bezpośredniej (zestaw MeriFluor Crypto sporidium/giardia firmy Meridian) W wyniku przeprowadzonych badań stwierdzono obecność oocyst Cryptosporidium w próbkach kału 36 dzieci, w tym 20 dziewczynek i 17 chłopców w wieku od 0,5 do 3 roku życia. Uzyskane wyniki badań wskazują, że Cryptosporidum jest często występującym czynnikiem etiologicz nym biegunki u małych dzieci, wydaje się więc niezbędnym wprowadzenie badań w kierunku kryptospory diozy do schematu diagnostyki laboratoryjnej zakażeń przewodu pokarmowego u dzieci.

6 Wiadomoœci Parazytologiczne 2007, 53 (suplement), 104 Contamination of fresh food products with dispersive stages of intestinal parasites Szymon Jędrzejewski and Anna C. Majewska Department of Biology and Medical Parasitology, Poznan University of Medical Sciences, Fredry 10, Poznań, Poland; E mail: szyjedrz@amp.edu.pl It has long been known that food products can be contaminated with dispersive stages of intestinal para sites, the number of documented foodborne outbreaks is increasing each year. Fresh produce consumed with minimal preparation, is a potential vehicle of dispersive stages of intestinal parasites. Fresh food products have complex surface and porosity, for which reason they are a difficult matrix for laboratory testing and standardization. We have initiated testing commercial fresh produce at the retail level to assess their conta mination with protozoan parasites. A total of 70 food product samples (9 sprouts, 16 heads of lettuce, 7 bunches of herbs, 20 berries containers, 18 vegetable samples) were analyzed. Food products were purchased from various retail types in the Wielkopolska region. Each pellet obtained from food samples was examined using microscopic identification and commercial immunological tests (EIA, IFA). Dispersive stages of protozoan parasites were detected in 18.6% of food items; in 33.3% of sprouts units, 18.8% of lettuce units, 5.56% of vegetable units and 5.0% of fruit units. Giardia intestinalis cysts were found in 2 units of berries (10%); Cryptosporidium sp. oocysts in 3 units of sprouts, 4 units of lettuce, 2 herbs units and in one unit of fruit and vegetable. Additionally we found Blastocystis spp. cysts in 17.15% of samples. Sprouts were significantly more likely to be contaminated with Cryptosporidium oocysts than the other food products. Fruits were more likely to be contaminated with Giardia cysts. The results of present research indicate that contaminated fresh food products could be a source of para site infections in humans.

7 Wiadomoœci Parazytologiczne 2007, 53 (suplement), 105 Contamination of fresh food produce from various retail types with human virulent microsporidian spores Szymon Jędrzejewski 1, Thaddeus K. Graczyk 2,3,4, Anna Słodkowicz Kowalska 1, Leena Tamang 2 and Anna C. Majewska 1 1 Department of Biology and Medical Parasitology, Poznan University of Medical Sciences, Poznań, Poland; E mail: szyjedrz@amp.edu.pl 2 Department of Environmental Health Sciences, Division of Environmental Health Engineering, Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health, Baltimore, MD, USA 3 Johns Hopkins University Center for Water and Health, Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health, Baltimore, MD, USA 4 Department of Molecular Microbiology and Immunology, Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health, Baltimore, MD, USA Consumption of fresh food products has constantly been increasing globally, as an essential part of a healthy diet. However, a growing trend of foodborne outbreaks indicates that consuming fresh food products is not always risk free. Microsporidia are obligate eukaryotes parasitizing a wide range of hosts, with Enterocytozoon bieneusi and Encephalitozoon intestinalis being the most common microsporidian oppor tunistic pathogens in humans. Although, fresh food products have been contaminated with a variety of human pathogens, reports on contamination with microsporidian spores are scant. The aim of the study was examination of various fresh products for human virulent microsporidia. A total of 80 food products (berries, sprouts and vegetables) were purchased from various retail types in the Wielkopolska region. Each pellet obtained from food samples was examined using chromotrope, CalcoFluor White M2R, and FISH technique. All spore positive samples were re tested by multiplexed FISH assay. Human virulent microsporidian spores were detected in 11.3% of food items; in 24.0% of berry units, 5.0% of sprouts, and 5.7% of vegetable units. E. intestinalis was identified in 4 units of berries; E. bieneusi in 2 units of raspberries, 1 mung bean sprouts, and 1 curly lettuce; and E. cuniculi in parsley leaves. The present study demonstrated that: (a) fresh produce can contain potentially viable spores of E. bieneusi, E. intestinalis, and E. cuniculi; (b) berries can be contaminated with human virulent microsporidi an spores at a significantly higher proportion than sprouts and vegetables; (c) various fresh produce retail types can distribute contaminated products.

8 Wiadomoœci Parazytologiczne 2007, 53 (suplement), 106 Identyfikacja zwierzęcych rezerwuarów inwazyjnych dla człowieka mikrosporydiów w Ogrodzie Zoologicznym w Poznaniu Animal reservoirs of human virulent microsporidian species in the Poznan Zoological Garden Anna Słodkowicz Kowalska 1, Thaddeus K. Graczyk 2, 3 i Anna C. Majewska 1 1 Katedra i Zakład Biologii i Parazytologii Lekarskiej, Uniwersytet Medyczny im. Karola Marcinkowskiego w Poznaniu, Polska; E mail: aslodk@ump.edu.pl 2 Division of Environmental Health Engineering, Department of Environmental Health Sciences, Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health, Baltimore, MD, USA 3 Department of Molecular Microbiology and Immunology, Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health, Baltimore, MD, USA W ostatnich latach stwierdzono, że niektóre gatunki ssaków są rezerwuarem inwazyjnych dla człowieka mikrosporydiów: Enterocytozoon bieneusi, Encephalitozoon hellem, Encephalitozoon cuniculi i Encephali tozoon intestinalis. Celem niniejszej pracy było zbadanie kału ssaków, hodowanych w Ogrodzie Zoologicz nym w Poznaniu, na obecność mikrosporydiów inwazyjnych dla człowieka. Materiał badań stanowiło 365 prób kału od 20 gatunków ssaków z 11 rzędów i 39 rodzin. Ze świeżych prób kału wykonywano trwałe rozmazy, które barwiono chromotropem. Preparaty przeglądano w mikrosko pie świetlnym, stosując obiektyw immersyjny. W celu potwierdzenia mikroskopowej identyfikacji spor i określenia gatunku mikrosporydium zastosowano technikę FISH (fluorescent in situ hybridization). Dotychczas, w jednej próbie kału (0,3%) uzyskanej od lemura wari czerwonego (Varecia variegata ru bra) stwierdzono obecność spor E. intestinalis. U lemura nie zaobserwowano żadnych objawów chorobo wych. Według naszej wiedzy, po raz pierwszy w Polsce wykryto E. intestinalis u ssaków, a lemur wari czer wony jest nowym gatunkiem żywiciela. Warto również dodać, że lemur wari czerwony znajduje się na liście gatunków zagrożonych. Mimo, że lemur wari był zarażony bezobjawowo, to jednak może być źródłem en cefalitozoonozy dla innych zwierząt hodowanych w ZOO oraz dla opiekunów zwierząt i osób zwiedzających ogród zoologiczny.

9 Wiadomoœci Parazytologiczne 2007, 53 (suplement), 107 Role of wild, captive and domestic birds in the environment contamination with Giardia cysts and Cryptosporidium oocy sts in western Poland Anna Słodkowicz Kowalska 1, Thaddeus K. Graczyk 2, 3, Szymon Jędrzejewski 1, Piotr Zduniak 4, Piotr Solarczyk 1, Andrzej Nowosad 5, Piotr Nowosad 1 and Anna C. Majewska 1 1 Department of Biology and Medical Parasitology, Poznan University of Medical Sciences, Poznań, Poland; E mail: aslodk@ump.edu.pl 2 Division of Environmental Health Engineering, Department of Environmental Health Sciences, Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health, Baltimore, MD, USA 3 Department of Molecular Microbiology and Immunology, Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health, Baltimore, MD, USA 4 Department of Avian Biology and Ecology, Adam Mickiewicz University 5 Department of Systematic Zoology, Adam Mickiewicz University, Poznań, Poland. There are a lot of sources of environmental contamination with human waterborne parasites. A large vari ety of birds species can sustain a reservoir for human infectious protozoan parasites. However, the role of such birds in contamination of aquatic habitats with such parasites has not been adequately investigated. The aim of study was the examination of fecal samples of wild, captive and domestic birds for the presence of Giardia cysts and Cryptosporidium oocysts and determination which of examined bird species take part in environment contamination with dispersive stages of the protozoan parasites. A total of 499 fecal specimens were sampled from 308 wild birds, 90 captive birds, and 101 domestic birds. From all fecal specimens wet and stained (hematoxylin and Ziehl Neelsen techniques) smears were prepared. Moreover, to detect the Giardia cysts and Cryptosporidium oocysts the FISH technique (Fluorescent In Situ Hybridization) was used. Giardia cysts were detected in 7.5% wild birds (greyleg goose, mallard duck, mute swan, ducks goosander and carrion crow), 2.2% captive birds (white stork and black crowned crane) and in one domes tic goose. Cryptosporidium oocysts were detected in feces obtained from 5.8% wild birds (mute swan, ducks goosander, white stork, carrion crow and rook) and in one mandarin duck from Zoo. The prevalence of both protozoan species was significantly higher in free living avian species, than in captive and domestic birds. The results of our research demonstrated that birds play a role in the environment contamination with Giardia cysts and Cryptosporidium oocysts.

10 Wiadomoœci Parazytologiczne 2007, 53 (suplement), 108 Molekularna identyfikacja inwazyjnych dla człowieka mikrosporydiów w kale gołębi z wybranych regionów Polski First molecular identification of human virulent microsporidian species in pigeons in Poland Anna Słodkowicz Kowalska 1, Andrzej Nowosad 2, Thaddeus K. Graczyk 3, 4, Piotr Solarczyk 1, Szymon Jędrzejewski 1 i Anna C. Majewska 1 1 Katedra i Zakład Biologii i Parazytologii Lekarskiej, Uniwersytet Medyczny im. Karola Marcinkowskiego w Pozna niu, Polska; E mail: aslodk@ump.edu.pl 2 Zakład Zoologii Systematycznej, Uniwersytet im. Adama Mickiewicza w Poznaniu, Polska 3 Division of Environmental Health Engineering, Department of Environmental Health Sciences, Johns Hopkins Blo omberg School of Public Health, Baltimore, MD, USA 4 Department of Molecular Microbiology and Immunology, Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health, Balti more, MD, USA W ostatnich latach stwierdzono, że dzikie gołębie w miastach mogą być żywicielami inwazyjnych dla człowieka gatunków mikrosporydiów. Toteż celem tych badań było sprawdzenie, czy dzikie i hodowlane go łębie z wybranych terenów Polski są zarażone mikrosporydiami. Łącznie zbadano 26 zbiorowych prób kału gołębi (9 prób kału od gołębi miejskich i 17 prób kału od gołębi hodowlanych). Próby kału od gołębi miej skich zebrano z 2 miejsc w Poznaniu, natomiast próby kału od gołębi hodowlanych pobrano z gołębników 4 hodowców z Dolnego Śląska i jednego z Wielkopolski. Barwione chromotropem rozmazy kału badano mi kroskopowo. W celu identyfikacji gatunku mikrosporydium wykorzystano fluorescencyjną hybrydyzację in situ (FISH). Mikrosporydia wykryto tylko w 3 próbach kału gołębi hodowlanych. E. hellem stwierdzono w próbach kału uzyskanych z 2 gołębników, natomiast spory E. intestinalis w jednej próbie kału. Wszystkie próby pozytywne uzyskano z 3 gołębników na Dolnym Śląsku. Po raz pierwszy w Polsce wykryto w kale gołębi inwazyjne dla człowieka gatunki mikrosporydiów. Kon takt z odchodami tych ptaków może stanowić źródło mikrosporydiozy dla hodowców gołębi.

11 Wiadomoœci Parazytologiczne 2007, 53 (suplement), 109 Identification of Giardia genotypes in artiodactyles Piotr Solarczyk and Anna. C. Majewska Department of Biology and Medical Parasitology, Poznan University of Medical Sciences, Fredry 10, Poznań, Poland; E mail: psolar@amp.edu.pl Protozoan parasites of Giardia genus infect many species of vertebrates. The role of animals in transmit ting Giardia to humans remains unclear because cysts of most Giardia species and genotypes are morpho logically identical. Although artiodactyles are commonly infected with Giardia, there is little molecular evi dence that the animals may be origin of Giardia infection in humans. The present study was performed to examine the genotypes of Giardia in wild and captive ruminants. Fecal samples were collected from 4 species of ruminants; 22 specimens were obtained from wild cervids and 2 samples from captive ruminants. Wet and stained fecal smears were microscopically examined. Giardia cysts were detected in one specimen obtained from wild red deer. The cysts were purified using 0.85 M sucrose gradient centrifugation technique. Axenic culture was received by inoculation of trophozoites obtained by in vitro excystation procedure. Total DNA was extracted from Giardia cysts and trophozoites. Molecular characterization of Giardia isolate from gazelle Thomsoni was also performed. The axenic Giardia isolate from gazelle was obtained previously (Majewska et al. 2004). DNA was amplified using primers directed to the ß giardin gene. Sequencing of the amplicons revealed that Giardia from red deer belonged to assemblage A, whereas the isolate from gazelle to assemblage B. This is the first report of axenic Giardia isolate and assemblage A from red deer as well as assemblage B in gazelle Thomsoni. Both species of the ruminants could be a potential source of Giardia infections for humans. Nevertheless, it is also possible that the animals become infected with Giardia of human origin.

12 Wiadomoœci Parazytologiczne 2007, 53 (suplement), 110 Molecular identification of Giardia spp. and Cryptosporidium spp. in humans and animals Piotr Solarczyk and Anna C. Majewska Department of Biology and Medical Parasitology, Poznan University of Medical Sciences, Fredry 10, Poznań, Poland; E mail: psolar@amp.edu.pl Giardia and Cryptosporidium are enteropathogens of humans and animals. The parasites may represent either zoonotic or host specific genotypes. The aim of the study was carried out to determine the presence of Giardia and Cryptosporidium species and genotypes in humans and animals utilizing molecular techniques. Seven hundred and seventy eight fecal samples, including 131 from humans and 647 from animals, were examined. Cryptosporidium oocysts were identified in 31 fecal specimens from cattle, 1 from giraffe and 1 from gopher (Citellus citellus). Giardia cysts were identified in 5 samples obtained from ZOO animals (3 from cactus mice, Peromyscus eremicus; tamandua, Tamandua tetradactyla: giant toad, Bufo marinus), and in sample from dog and man. Moreover, 5 axenic Giardia isolates from sheep, silvery marmoset (Callihtrix argentata) and from humans were also analyzed. Total DNA was extracted from oocysts and trophozoites. DNA was amplified using primers directed to Giardia β giardin or Cryptosporidium COWP genes. Three animal specimens (sheep, marmoset, tamandua) and 4 human samples were positive for Giardia by PCR, whereas 3 bovine samples for Cryptosporidium. All PCR positive specimens were sequenced to determine the species and genotype. The sequences were compared with those in the GeneBank database by BLASTn analysis. Sequenced data revealed that all G. intestinalis isolates from humans and animals belonged to assemblage B, whereas the C. parvum isolates from cattle to "bovine" genotype. The results of the study indi cated that all of the genotypes are zoonotic and therefore transmission of the parasites between humans and animals in Wielkopolska region is possible.

13 Wiadomoœci Parazytologiczne 2007, 53 (suplement), 111 Zagrożenie dla zdrowia ludzi wynikające z obecności oocyst Cryptosporidium w wodzie w świetle przepisów prawa Regulation aspects of the potential danger to human health arising from the presence in water of Cryptosoridium oocysts Bożenna Toczyłowska Instytut Techniki Budowlanej, ul. Ksawerów 21, Warszawa Woda jest jednym z głównych źródeł pośredniej transmisji oocyst Cryptosporidium spp. Ochrona zdro wia ludzi przed tymi pasożytniczymi pierwotniakami przenoszonymi drogą wodną została zaliczona do prio rytetów zdrowia publicznego, co znalazło odbicie w licznych przepisach prawa, wytycznych i normach. W przepisach Unii Europejskiej zasady postępowania dotyczące bezpieczeństwa wody przeznaczonej do spożycia, związane z obecnością oocyst Cryptosporidium są przedmiotem dwóch Dyrektyw: w Dyrektywie 2003/99/WE w sprawie monitorowania chorób odzwierzęcych i odzwierzęcych czynni ków chorobotwórczych, w Dyrektywie 1998/83/WE w sprawie jakości wody przeznaczonej do spożycia przez ludzi. Postanowienia powyższych Dyrektyw zostały wdrożone do prawa polskiego. Przepisy te nakazują, aby w sytuacji zagrożenia epidemiologicznego badać, czy nie ma zagrożenia dla zdrowia ludzi, wynikającego z obecności oocyst Cryptosporidium spp. w wodzie. Zarówno przepisy polskie jak i UE nie podają, jakie należy stosować metody, aby ocenić zagrożenie zdro wia publicznego i jak postępować w celu zredukowania ryzyka związanego z skażeniem wody tymi pasoży tami. Prawnie uregulowane są te zagadnienia w USA, Zjednoczonym Królestwie oraz w Irlandii. W USA od 2006 obowiązują przepisy wydane przez EPA (US EPA Long Term 2), które zalecają, aby za podstawę oce ny ryzyka przyjmować koncentrację oocyst Cryptosporidium w wodzie surowej. Przepisy ustanowione na Wyspach Brytyjskich zalecają, aby podstawą oceny było monitorowanie wody uzdatnionej. Z uwagi na niską koncentrację oocyst Cryptosporidium w wodzie należy stosować odpowiednie metody monitorowania. Zalecane metody są przedmiotem wytycznych US EPA, DWI, EPA (Irlandia) oraz norm US EPA 1622:2005, US EPA 1623:2005 oraz ISO 15553:2006. Przedmiotem referatu będą metody oceny ryzyka dla zdrowia ludzi, wynikające z obecności w wodzie oo cyst Cryptosporium spp. oraz metody monitorowania jakości wody zalecane w wytycznych WHO, przepi sach US EPA i przepisach państw europejskich (Anglii i Walii oraz Irlandii) oraz w odnośnych normach.