(12) TŁUMACZENIE PATENTU EUROPEJSKIEGO (19) PL (11) (13) T3 (96) Data i numer zgłoszenia patentu europejskiego:

Transkrypt

1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) TŁUMACZENIE PATENTU EUROPEJSKIEGO (19) PL (11) PL/EP (13) T3 (96) Data i numer zgłoszenia patentu europejskiego: (1) Int. Cl. A61K3/ (06.01) (97) O udzieleniu patentu europejskiego ogłoszono: Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej Europejski Biuletyn Patentowy 09/14 EP B1 (4) Tytuł wynalazku: Immunostymulująca odżywka dla niemowląt () Pierwszeństwo: EP (43) Zgłoszenie ogłoszono: Europejski Biuletyn Patentowy 07/19 (4) O złożeniu tłumaczenia patentu ogłoszono: Wiadomości Urzędu Patentowego 08/09 (73) Uprawniony z patentu: N.V. Nutricia, Zoetermeer, NL (72) Twórca (y) wynalazku: PL/EP T3 BOEHM Günther, Echzell, DE BEERMANN Christopher, Neu-Anspach, DE STAHL Bernd, Rosbach, DE M'RABET Laura, Amersfoort, NL GARSSEN Johan, Nieuwegein, NL (74) Pełnomocnik: Sulima Grabowska i Sierzputowska Biuro Patentów i Znaków Towarowych sp.j. rzecz. pat. Sulima Zofia Warszawa skr. poczt. 6 Uwaga: W ciągu dziewięciu miesięcy od publikacji informacji o udzieleniu patentu europejskiego, każda osoba może wnieść do Europejskiego Urzędu Patentowego sprzeciw dotyczący udzielonego patentu europejskiego. Sprzeciw wnosi się w formie uzasadnionego na piśmie oświadczenia. Uważa się go za wniesiony dopiero z chwilą wniesienia opłaty za sprzeciw (Art. 99 (1) Konwencji o udzielaniu patentów europejskich).

2 SGS-33/VAL EP B1 Opis 1 2 DZIEDZINA WYNALAZKU [0001] Niniejszy wynalazek dotyczy kompozycji odżywczej lub farmaceutycznej zawierającej składnik tłuszczowy, składnik białkowy i składnik węglowodanowy, a także zawierającej serwatkę i kazeinę, oraz zastosowania tej kompozycji. TŁO WYNALAZKU [0002] Karmienie piersią optymalnie wspomaga rozwój niemowlęcia i chroni przed infekcjami. Jednakże, nie wszystkie niemowlęta mogą otrzymywać ludzkie mleko. Cały czas zatem istnieje potrzeba dostarczenia preparatu dla niemowląt, który stymulowałby funkcje ludzkiego mleka. Obok żądanego podobieństwa składu pomiędzy preparatem dla niemowląt i ludzkim mlekiem, szczególnie pożądane jest naśladowanie działania ochronnego jakie cechuje ludzkie mleko. Przykładowo okazało się, iż ludzkie mleko chroni przed infekcjami i alergiami. [0003] W znanych preparatach dla niemowląt, stosunek kazeiny do serwatki jest możliwie jak najbardziej podobny do tego w ludzkim mleku tak dalece jak to możliwe. Uważa się, iż stosunek ten zapewnia optymalny wzrost niemowlęcia. Jednakże, wciąż istnieje wiele wad związanych z zastosowaniem bydlęcych źródeł białka, które stanowi głównie serwatka. Preparaty te oparte głównie na serwatce nie chronią optymalnie przed infekcjami. Podawanie takich preparatów skutkuje upośledzeniem rozwoju flory jelitowej u niemowlęcia w porównaniu z niemowlętami odżywianymi ludzkim mlekiem, zwłaszcza w pierwszych trzech do czterech tygodniach życia. Skład flory u niemowląt żywionych preparatami opartymi głównie na serwatce obejmuje mniej więcej te same szczepy bakterii jak u niemowląt żywionych ludzkim mlekiem, jednakże, liczba pożytecznych bakterii jest zmniejszona u niemowląt otrzymujących preparat oparty głównie na serwatce w porównaniu do niemowląt otrzymujących ludzkie mleko. Co więcej, flora u niemowląt żywionych preparatami zawierającymi głównie serwatkę jako bydlęce źródło białka obejmuje zwiększone ilości bakterii patologicznych, takich jak laseczki beztlenowe i pałeczki jelitowe. Zatem, w wyniku żywienia niemowlęcia z użyciem preparatu zawierającego głównie serwatkę tworzy się suboptymalna flora jelitowa. [0004] Ze względu na fakt, iż bardzo małe niemowlęta mają niedojrzały układ odpornościowy i niedojrzały przewód jelitowy, rozwój suboptymalnej flory jelitowej może spowodować infekcje, biegunki, alergię i zapalenie. Zwłaszcza niemowlęta w wieku pomiędzy 0 i dniami, żywione preparatami zawierającymi głównie serwatkę bydlęcą jako białko, są

3 2 narażone na to ryzyko, gdyż ich flora kałowa bardzo różni się od flory niemowląt żywionych ludzkim mlekiem STRESZCZENIE WYNALAZKU [000] Celem niniejszego wynalazku jest dostarczenie kompozycji odżywczej lub farmaceutycznej, która zmniejsza ryzyko związane z żywieniem niemowląt preparatem zawierającym głównie serwatkę. [0006] Cel ten osiągnięto dzięki kompozycji według zastrzeżenia 1. [0007] Kompozycja według niniejszego wynalazku charakteryzuje się tym, że stosunek wagowy kazeiny do serwatki wynosi od 1:1 do 1:2,4, oraz tym, że kompozycja zawiera: a) co najmniej 3 gramy argininy na 0 gramów białka; b) co najmniej % wag. kwasu linolowego (LA) względem całkowitej ilości kwasów tłuszczowych, c) co najmniej 1% wag. kwasu alfa-linolenowego (ALA) względem całkowitej ilości kwasów tłuszczowych; d) co najmniej jeden długołańcuchowy polinienasycony kwas tłuszczowy (LCPUFA) w ilości przekraczającej 0,1% wag. względem całkowitej ilości kwasów tłuszczowych, przy czym ten długołańcuchowy polinienasycony kwas tłuszczowy (LCPUFA) jest wybrany z grupy obejmującej kwas dokozaheksaenowy (DHA), kwas arachidonowy (ARA) i kwas eikozapentaenowy (EPA); e) do 2% wag. co najmniej jednego polinienasyconego kwasu tłuszczowego względem całkowitej ilości kwasów tłuszczowych i f) 2 do 12 gramów niestrawnych oligosacharydów o stopniu polimeryzacji 2 do 0 na 0 gramów suchej masy kompozycji. [0008] Kompozycja według wynalazku stymuluje dojrzewanie układu immunologicznego i dojrzewanie przewodu jelitowego. Kompozycja według wynalazku jest szczególnie odpowiednia do profilaktyki i/lub leczenia zaburzeń zapalnych u niemowląt, takich jak infekcja, biegunka i alergia. Niniejsza kompozycja: stymuluje rozwój optymalnej flory jelitowej (tzn. flory podobnej do flory uzyskanej przez żywienie ludzkim mlekiem); stymuluje dojrzewanie układu żołądkowo-jelitowego, przez zapobieganie wnikania alergenów, takich jak patologiczne bakterie, toksyny i alergeny pochodzące z żywności do krążenia układowego; stymuluje dojrzewanie układu odpornościowego, w wyniku czego polepsza się obrona w przypadku wniknięcia alergenu, patogenu lub toksyny przez barierę jelitową i/lub wniknięcia do krążenia układowego;

4 zapewnia optymalne żywienie niemowlęcia. [0009] Uważa się, iż procesy fizjologiczne leżące u podstaw rozwoju flory jelitowej niskiego ryzyka, dojrzewania jelit i dojrzewania układu odpornościowego są wysoko wzajemnie powiązane i współzależne. Zatem preparaty dla niemowląt powinny zawierać wszystkie te składniki, w odpowiedniej równowadze, które stymulują dojrzewanie przewodu pokarmowego, dojrzewanie układu odpornościowego i rozwój flory jelitowej niskiego ryzyka. Przy optymalnym połączeniu składników niemowlę jest lepiej chronione przed alergenami. Niniejsza kompozycja dostarcza takie optymalne połączenie składników. Ze względu na fakt, iż składniki często działają według różnych mechanizmów, składniki niniejszej kompozycji działają synergistycznie, zapewniając niemowlęciu zwiększoną odporność i zmniejszając zapadalność na zaburzenia zapalne, zwłaszcza alergię. [00] Niniejsza kompozycja zawiera oligosacharydy o niskim stopniu polimeryzacji. Oligosacharydy stymulują tworzenie flory jelitowej niskiego ryzyka, zwłaszcza zmniejszając liczbę (potencjalnie) patologicznych bakterii jelitowych, takich jak laseczki beztlenowe, pałeczki jelitowe i/lub paciorkowce jelitowe; i stymulując kolonizację przez bakterie Bifidus i pałeczki mlekowe. Bakterie Bifidus i pałeczki mlekowe stymulują dojrzewanie jelit, np. przez stymulację syntezy fukooligosacharydów przez komórki nabłonka jelita. Optymalną stymulację osiąga się przez dodanie mieszanki różnych oligosacharydów, zwłaszcza mieszanki oligosacharydów obejmujących zarówno obojętne jak i kwasowe oligosacharydy. Oligosacharydy wywierają również bezpośrednie działanie na układ odpornościowy przez obniżanie odpowiedzi Th2 i zwiększanie odpowiedzi Th1. Stwierdzono, iż niniejsza kompozycja zawierająca oligosacharydy można korzystnie stosować do przywracania braku równowagi w odpowiedziach Th1/Th2 oraz do leczenia i profilaktyki zaburzeń, które są związane z brakiem równowagi Th1/Th2, takim jak zaburzenia autoimmunologiczne i alergia. [0011] Jednakże, nawet w przypadku połączenia oligosacharydów z zawierającym głównie serwatkę białkiem pochodzenia innego niż ludzkie, niemowlęta otrzymujące tę kompozycję cierpią z powodu zwiększonego ryzyka infekcji podczas pierwszego miesiąca życia. Zatem pożądane jest dodatkowa poprawa układu odpornościowego i/lub dojrzałości jelit. [0012] Nieoczekiwanie stwierdzono, iż kwasy LCPUFA skutecznie zmniejszają przepuszczalność okołokomórkową nabłonka. W odróżnieniu od doniesień Usami i innych (Clinical Nutrition 01, (4): 31-39), stwierdzono, iż polinienasycone kwasy tłuszczowe C18 i C, zwłaszcza kwas eikozapentaenowy (EPA; C: n3) kwas dokozaheksaenowy (DHA; C22:6 n3) i kwas arachidonowy (AA; C:4) mają zdolność do skutecznego zmniejszania przepuszczalności jelitowej obwódki zamykającej, dzięki czemu stymulują

5 dojrzewanie jelit. Zatem niniejsza kompozycja korzystnie zawiera kwasy LCPUFA. Ponadto niezbędne kwasy tłuszczowe, kwas linolowy (C18:2 n6) i kwas alfa linolenowy (C18:3 n3), są niezbędne zarówno dla dojrzewania układu odpornościowego jak również dla dojrzewania przewodu jelitowego. W innej szczególnie korzystnej postaci, niniejsza kompozycja zawiera również kwas gamma-linolenowy (GLA; C18:3 (n-6)). Niniejsza kompozycja zatem zawiera kwas linolowy i kwas alfa linolenowy. [0013] Ewentualnie, ale bardzo korzystnie, niniejsza kompozycja zawiera również nukleotydy i/lub nukleozydy. Nukleotydy stymulują dojrzewanie przewodu jelitowego, zmniejszają zapadalność na biegunki i stymulują układ odpornościowy. Niemowlęta żywione preparatami wzbogaconymi w nukleotydy w porównaniu z tymi żywionymi preparatami niewzbogaconymi mają zwiększone miano przeciwciał po ekspozycji na antygen ze stymulacją aktywności komórek naturalnych zabójców antygenów. (Carver i inni Acta Paediatrica, (1999) tom 88, nr dod. 4, str ). OPIS SZCZEGÓŁOWY [0014] Kompozycja według niniejszego wynalazku zawiera głównie oparte na serwatce źródło białka pochodzenia innego niż ludzkie, długołańcuchowe polinienasycone kwasy tłuszczowe i oligosacharydy. [001] Jak wspomniano wyżej niniejszy wynalazek dostarcza kompozycję zawierającą serwatkę i kazeinę w stosunku wagowym kazeina do serwatki wynoszącym 1:1 do 1:2,4 oraz co najmniej 3 gramy argininy na 0 gramów białka. [0016] Zakres 1:1 do 1:2,4 dla stosunku kazeina/serwatka obejmuje wszystkie wartości mieszczące się w tym zakresie, a zatem przykładowo następujące stosunki kazeiny do serwatki: 1:1, 1:1,1, 1:1,2, 1:1,3, 1:1,4, 1:1,, 1:1,6, 1:1,7, 1:1,7, 1:1,9, 1:1,2, 1:1,3, 1:1,4, 1:1,, 1:1,6, 1:1,7, 1:1,8, 1:1,9, 1:2,0, 1:2,1, 1:2,2, 1:2,3 i 1:2,4. W korzystnej postaci stosunek kazeina:serwatka wynosi 1:1,4-1,6, a jaszcze korzystniej około 1:1, (40:60) [0017] Arginina jest korzystnie obecna w ilości 3 do 8 gramów argininy na 0 gramów składnika białkowego. Ten zakres ujawnia wszelkie wartości, a w szczególności wszystkie wartości całkowite mieszczące się w tym zakresie, takie jak 3, 4,, 6, 7 i 8 gramów. Kompozycja korzystnie zawiera 4 do gramów argininy na 0 gramów białka. [0018] Kwasy LCPUFA obecne w kompozycji są wybrane z grupy obejmującej DHA, AA i EPA. Oznacza to, iż może być obecny jeden lub dwa lub trzy z tych długołańcuchowych polinienasyconych kwasów tłuszczowych. [0019] Zakres do 2% wag. podany dla polinienasyconych kwasów tłuszczowych ujawnia wszelkie wartości mieszczące się w tym zakresie. [00] Niniejsza kompozycja nie obejmuje kompozycji stanowiącej ludzkie mleko. Niniej-

6 1 2 3 szy sposób nie obejmuje sposobu, w którym podaje się kompozycję stanowiącą ludzkie mleko. Zatem korzystnie podaje się kompozycję zawierającą substancję pochodzenia innego niż ludzkie, korzystnie węglowodany włókniste, tłuszcz i/lub białko pochodzenia innego niż ludzkie, korzystnie pochodzenia roślinnego, zwierzęcego, bakteryjnego lub syntetyczne. Korzystnie wszystkie składniki i komponenty, z których wytwarza się kompozycję według wynalazku, są pochodzenia innego niż ludzkie. Makroskładniki odżywcze [0021] Niniejszą kompozycję można korzystnie stosować jako preparat dla niemowląt. Taki preparat dla niemowląt korzystnie zawiera składnik lipidowy, składnik białkowy i składnik węglowodanowy, przy czym korzystnie podaje się go niemowlęciu w postaci płynnej. [0022] Zgodnie z korzystną postacią niniejszy wynalazek dotyczy kompozycji, a zwłaszcza preparatu dla niemowląt zawierającego do 60%en tłuszczów; do 1%en białka; i 2 do 7%en węglowodanów. Korzystnie kompozycja zawiera do 1%en białka, do 60%en tłuszczów i 2 do 6%en węglowodanów. Korzystniej, niniejsza kompozycja zawiera 43 do 3%en tłuszczów; 7 do 11%en białka; i 43 do 3%en węglowodanów (%en jest skrótem procentowego udziału energii i oznacza względną ilość jaką każdy składnik wnosi do całkowitej wartości kalorycznej preparatu). [0023] Składnik białkowy niniejszego preparatu dla niemowląt zawiera kazeinę i serwatkę w stosunku wagowym wspomnianym wyżej. Kazeina i/lub serwatka korzystnie pochodzą z mleka ssaka innego niż człowiek. W celu zapewnienia optymalnego żywienia niemowlęcia, kompozycja zawiera argininę w określonej ilości. Określenie białko lub składnik białkowy w tym kontekście oznacza zbiorczo białko, polipeptydy, peptydy i aminokwasy. Arginina jest niezbędna w niniejszej kompozycji. Zmniejsza ona zapadalność na stany zapalne jelita (Amin i inni Journal of Pediatrics, (02) tom 140, nr 4, str ). Ponadto, arginina stymuluje układ odpornościowy i jest wymagana do utrzymania zdrowego układu odpornościowego (Niever i inni, Biomedicine & Pharmacotherapy, (02) tom 6, nr, str ). Kazeina i serwatka zawierają argininę, ale w przypadku większości źródeł mleka (np. serwatka i kazeina bydlęca) kazeina i serwatka nie dostarczają wystarczających ilości argininy. Korzystnie co najmniej część argininy, w którą wzbogaca się kompozycję, stanowi aminokwas w postaci wolnej zasady, np. w postaci L-argininy, lub w postaci soli lub estru, przy czym postać wolnego aminokwasu jest korzystna. Niniejsza kompozycja korzystnie zawiera pomiędzy 7 a 00 mg argininy w postaci wolnego aminokwasu na 0 gramów suchego preparatu dla niemowląt, korzystniej pomiędzy a 400 mg argininy w postaci wolnego aminokwasu na 0 gramów suchego preparatu dla niemowląt.

7 6 [0024] Węglowodan w niniejszej kompozycji korzystnie stanowi w większej mierze laktoza, czyli korzystnie laktoza stanowi co najmniej 7% wag. całkowitej ilości strawnego węglowodanu, korzystnie co najmniej 90% wag. 1 2 Białko o niskiej zawartości treoniny [002] Preparaty dla niemowląt oparte głównie na serwatce z innego niż ludzkie źródła białka zwykle cechują się wysoką zawartością biodostępnej treoniny w porównaniu do ludzkiego mleka. Ludzkie mleko zawiera stosunkowo niewielkie ilości biodostępnej treoniny. Zatem stan techniki dostarcza sposobów zmniejszania zawartości treoniny w preparatach opartych głównie na serwatce (patrz przykładowo EP48226, WO i EP74122). Podawanie preparatów dla niemowląt opartych głównie na serwatce o zmniejszonej zawartości treoniny zapewnia profile treoniny in vivo, które są porównywalne to profili u niemowląt karmionych piersią. Niniejsza kompozycja to korzystnie kompozycja o niskiej zawartości treoniny, tj. kompozycja zawierająca 2 do 6 gramów treoniny na 0 gramów białka. Niską zawartość treoniny można przykładowo uzyskać dzięki zastosowaniu produktów serwatkowych wytworzonych przez ultrafiltrację lub pewnych kwasowych produktów serwatkowych. Zawartość niezbędnych kwasów tłuszczowych [0026] Niniejsza kompozycja zawiera co najmniej % wag. kwasu linolowego (LA) względem całkowitej ilości kwasów tłuszczowych, korzystnie pomiędzy 11 a % wag., korzystniej pomiędzy 12 a 1% wag. Niniejsza kompozycja korzystnie zawiera co najmniej 1% wag. kwasu alfa-linolenowego (ALA) względem całkowitej ilości kwasów tłuszczowych, korzystnie pomiędzy 1, a 4% wag. ALA, jeszcze korzystniej pomiędzy 2 a 2,% wag. W celu zmniejszenia presji jelitowej, stosunek wagowy LA/ALA korzystnie wynosi pomiędzy 2 a, korzystnie pomiędzy a 7,. [0027] Niniejsza kompozycja korzystnie zawiera pomiędzy 0,0 a % wag. kwasu gammalinolenowego (GLA) względem całkowitej ilości kwasów tłuszczowych, korzystnie pomiędzy 0,1 a 1% wag. Zawartość długołańcuchowych polinienasyconych kwasów tłuszczowych [0028] Niniejsza kompozycja zawiera co najmniej jeden długołańcuchowy polinienasycony kwas tłuszczowy o lub 22 atomach węgla (LCPUFA) w ilości przekraczającej 0,1% wag. względem całkowitej ilości kwasów tłuszczowych, wybrany z grupy obejmującej kwas dokozaheksaenowy (DHA), kwas arachidonowy (AA) i kwas eikozapentaenowy (EPA). Korzystnie kompozycja zawiera DHA w ilości przekraczającej 0,1% wag. względem całkowitej ilości kwasów tłuszczowych; i AA w ilości przekraczającej 0,1% wag.

8 względem całkowitej ilości kwasów tłuszczowych. [0029] Korzystnie zawartość co najmniej jednego LCPUFA z tej grupy wynosi pomiędzy 0,1 a 1% wag. względem całkowitej ilości kwasów tłuszczowych w kompozycji. Korzystnie zawartość co najmniej dwóch z tych kwasów LCPUFA wynosi pomiędzy 0,1 a 1% wag. względem całkowitej ilości kwasów tłuszczowych w kompozycji. Korzystnie kompozycja zawiera AA i DHA, jeszcze korzystniej AA, DHA i EPA. [00] Zawartość AA korzystnie nie przekracza % wag., korzystniej nie przekracza 1% wag., najkorzystniej wynosi pomiędzy 0,1 a 0,6% wag. względem całkowitej ilości kwasów tłuszczowych. W niniejszej kompozycji, korzystnie dodaje się EPA i/lub DHA w celu równoważenia działania AA, np. zmniejszenia potencjalnego działania prozapalnego metabolitów AA. Nadmiar metabolitów AA może spowodować zapalenie. Zatem niniejsza kompozycja korzystnie zawiera AA, EPA i/lub DHA, przy czym stosunek wagowy AA/DHA korzystnie wynosi powyżej 0,2, korzystnie powyżej 0,, a jeszcze korzystniej powyżej 1. Stosunek AA/DHA korzystnie wynosi poniżej 2, korzystnie poniżej. Stosunek wagowy AA/EPA korzystnie wynosi pomiędzy 1 a 0, korzystniej pomiędzy a. Stosunek wagowy EPA/DHA korzystnie wynosi 1 lub mniej, korzystniej poniżej 0,. [0031] W korzystnej postaci zawartość LCPUFA nie przekracza 3% wag. względem całkowitej ilości kwasów tłuszczowych, gdyż jest to pożądane w celu jak najbardziej bliskiego naśladowania ludzkiego mleka. Z tej samej przyczyny niniejsza kompozycja korzystnie zawiera mniej niż 1 gram kwasu omega-3 LCPUFA na 0 gramów kwasów tłuszczowych, korzystniej pomiędzy 0,1 a 0,7 grama na 0 gramów kwasów tłuszczowych. Zawartość kwasu omega-6 LCPUFA korzystnie nie przekracza 2 gramów na 0 gramów kwasów tłuszczowych i wynosi korzystnie pomiędzy 0,1 a 0,7 grama na 0 gramów kwasów tłuszczowych. [0032] Kwasy LCPUFA i inne kwasy tłuszczowe można dostarczać w postaci wolnych kwasów tłuszczowych, w postaci triglicerydów, w postaci fosfolipidów, lub w postaci mieszaniny jednego lub większej liczby powyższych składników. Niniejsza kompozycja korzystnie zawiera co najmniej jeden AA i DHA w postaci fosfolipidu, gdyż zmniejszają one zapadalność na zaburzenia zapalne jelita. Niniejsza kompozycja korzystnie zawiera pomiędzy 0,1 a mg AA w postaci fosfolipidu na gram całkowitej ilości kwasów i pomiędzy 0,1 a mg DHA w postaci fosfolipidu na gram całkowitej ilości kwasów. Korzystnie AA i/lub DHA są co najmniej częściowo obecne w postaci fosfatydylocholiny (PC) i/lub fosfatydyloetanoloaminy (PE), np. AA i/lub DHA zawierające PE i/lub PC. Mononienasycone kwasy tłuszczowe [0033] Niniejsza kompozycja odżywcza korzystnie zawiera również kwas tłuszczowy

9 omega-9 (n-9) (korzystnie kwas oleinowy, 18:1), w celu zapewnienia dostatecznego odżywienia. Korzystnie niniejsza kompozycja dostarcza co najmniej 1% wag. kwasów tłuszczowych n-9 względem całkowitej masy kwasów tłuszczowych, korzystniej co najmniej 2% wag. Zawartość kwasów tłuszczowych n-9 korzystnie wynosi poniżej 80% wag. względem całkowitej masy kwasów tłuszczowych. W celu zapewnienia dostatecznego odżywienia, niniejsza kompozycja korzystnie cechuje się stosunkiem wagowym nasyconych kwasów tłuszczowych/polinienasyconych kwasów tłuszczowych wynoszącym pomiędzy 2 a. Stosunek wagowy mononienasyconych kwasów tłuszczowych/nasyconych kwasów tłuszczowych korzystnie wynosi pomiędzy 0, a 2. [0034] Niniejsza kompozycja korzystnie zawiera pomiędzy a 2% wag. polinienasyconych kwasów tłuszczowych względem całkowitej ilości kwasów tłuszczowych, korzystnie pomiędzy a % wag. [003] Niniejszą kompozycję można dodatkowo ulepszyć przez dodanie kwasu stearydonowego (C18:4n3). Kompozycja korzystnie zawiera pomiędzy 0,0 a 2% wag. kwasu stearydonowego względem całkowitej ilości kwasów tłuszczowych, jeszcze korzystniej pomiędzy 0,1 a 1% wag. Oligosacharydy [0036] Niniejsza kompozycja zawiera 2 do 12 gramów niestrawnych oligosacharydów o stopniu polimeryzacji (DP) 2 do 0, na 0 gramów suchej masy kompozycji, korzystnie pomiędzy 3 a 8 gramów, korzystniej pomiędzy a 7, gramów. Po roztworzeniu proszku w cieczy i podaniu ciekłego preparatu niemowlęciu, te ilości niestrawnych oligosacharydów zapewniają żądane działanie bez powodowania dyskomfortu jelitowego. Odpowiednie niestrawne oligosacharydy nie są lub są trawione jedynie częściowo w jelicie dzięki działaniu kwasów lub enzymów trawiennych obecnych w górnym odcinku przewodu pokarmowego człowieka (jelito cienkie i żołądek), ale są fermentowane przez florę bakteryjną obecną w jelicie człowieka. Oligosacharydy są korzystnie rozpuszczalne w wodzie (rozpuszczalność przekracza 1 gram oligosacharydu na litr wody). Przeciętnie DP niniejszego oligosacharydu korzystnie wynosi poniżej 40, korzystniej poniżej. Optymalnie, niniejsza kompozycja zawiera pomiędzy 2 a 12 gramów oligosacharydów o DP wynoszącym 2 do 60, korzystniej o DP wynoszącym 2 do (tj. suma mas tych oligosacharydów o DP 2, 3, 4,, 6, 7, 8, 9 i ). [0037] Zgodnie z kolejną postacią co najmniej jeden z oligosacharydów w niniejszej kompozycji jest wybrany z grupy obejmującej inulinę, fruktooligosacharydy, niestrawne dekstryny, galaktooligosacharydy (w tym transgalaktooligosacharydy), ksylooligosacharydy, arabinooligosacharydy, glukooligosacharydy, mannooligosacharydy, lakto-n-neotetraozę,

10 fukooligosacharydy (zawierające co najmniej jedną jednostkę fukozosacharydu), kwasowe oligosacharydy (patrz poniżej, np. oligosacharydy kwasu uronowego, takie jak hydrolizaty pektyny) i ich mieszaniny. [0038] Korzystnie niniejsza kompozycja zawiera co najmniej jeden składnik wybrany z grupy obejmującej inuliny i fruktooligosacharydy i co najmniej jeden składnik wybrany z grupy obejmującej galaktooligosacharydy (w tym transgalaktooligosacharydy) i hydrolizat pektyny. W szczególnie korzystnej postaci niniejsza kompozycja zawiera 2 do 12 gramów oligosacharydów o DP wynoszącym 2 do oraz sacharydy galaktozy i glukozy w połączeniu β, korzystniej transgalaktooligosacharydy (czyli [gal]n-glu, gdzie n oznacza 2 do ). W szczególnie korzystnej postaci niniejsza kompozycja zawiera transgalaktooligosacharydy (tj. [gal]n-glu, w którym n oznacza 2 do ), hydrolizaty pektyny i co najmniej jeden składnik wybrany z grupy obejmującej fruktooligosacharydy i inulinę. Niniejszy oligosacharyd może również stanowić oligosacharyd pochodzący z mleka zwierzęcego, mieszanina oligosacharydów pochodzących z mleka zwierzęcego lub oligosacharyd fukozylowany (oligosacharyd zawierający co najmniej jedną jednostkę fukozosacharydu). [0039] W celu dalszego zwiększenia dojrzewania jelit w całym obszarze okrężnicy, korzystnie co najmniej % wag. oligosacharydów w niniejszej kompozycji ma DP wynoszący 2 do (tj. 2, 3, 4 i/lub ) oraz co najmniej % wag. ma DP wynoszący do 0. Korzystnie co najmniej 0% wag., korzystniej co najmniej 7% wag. oligosacharydów ma DP wynoszący 2 do (tj. 2, 3, 4,, 6, 7, 8, 9 i/lub ), gdyż uważa się, iż związki te działają w obrębie całego jelita krętego i bliższej oraz środkowej części okrężnicy, oraz ze względu na zmniejszony procent wagowy oligosacharydów, które należy włączyć do kompozycji dla osiągnięcia żądanego działania. [0040] Korzystne stosunki wagowe: (oligosacharydy o DP 2 do ):(oligosacharydy o DP 6 do 9); i (oligosacharydy o DP do 0):(oligosacharydy o DP 6 do 9) wszystkie powyżej 1. [0041] Korzystnie oba stosunki wagowe wynoszą powyżej 2, jeszcze korzystniej powyżej. [0042] Niniejsza kompozycja korzystnie zawiera 0, do gramów galaktooligosacharydu o DP pomiędzy 2 a, na 0 gramów suchej masy kompozycji, korzystniej pomiędzy 1 a gramów. Korzystnymi galaktooligosacharydami są transgalaktooligosacharyd, gdyż najlepiej naśladuje on oligosacharydy ludzkiego mleka. Niniejszy wynalazek korzystnie obejmuje 0, do gramów fruktopolisacharydu o DP pomiędzy a 60 na 0 gramów suchej masy kompozycji, korzystniej pomiędzy 1 a gramów. Określenie fruktopolisacharyd oznacza węglowodan polisacharydowy o łańcuchu zawierającym co najmniej jednostek fruktozy połączonych wiązaniami β.

11 Oligosacharydy kwasowe [0043] W celu dalszej poprawy spójności bariery, niniejsza kompozycja korzystnie zawiera kwasowe oligosacharydy o DP pomiędzy 2 a 0, korzystnie 2 do 60. Określenie kwaśny lub kwasowy oligosacharyd oznacza oligosacharydy zawierające co najmniej jedną grupę kwasową wybraną z grupy obejmującej kwas N-acetyloneuraminowy, kwas N-glikoloiloneuraminowy, wolną lub zestryfikowaną grupę kwasu karboksylowego, grupę kwasu siarkowego i grupę kwasu fosforowego. Kwasowy oligosacharyd korzystnie zawiera jednostki kwasu uronowego (tj. polimer kwasu uronowego), korzystniej jednostki kwasu galakturonowego. Niniejsza kompozycja korzystnie zawiera pomiędzy 0,1 a gramów kwasowych oligosacharydów na 0 gramów suchej masy niniejszej kompozycji, korzystniej pomiędzy 1 a 6 gramów na 0 gramów suchej masy. Struktura I: Polimerowy oligosacharyd kwasowy [0044] 1 2 gdzie: R jest korzystnie wybrany z grupy obejmującej atom wodoru, hydroksyl lub grupę kwasową, korzystnie hydroksyl; a co najmniej jeden podstawnik wybrany z grupy obejmującej R2, R3, R4 i R oznacza ugrupowanie kwasu N-acetyloneuraminowego, kwasu N-glikoloiloneuraminowego, wolną lub zestryfikowaną grupę kwasu karboksylowego, grupę kwasu siarkowego i grupę kwasu fosforowego, a pozostałe podstawniki R2, R3, R4 i R oznaczają hydroksyl i/lub atom wodoru. Korzystnie jeden podstawnik wybrany z grupy obejmującej R2, R3, R4 i R oznacza ugrupowanie kwasu N-acetyloneuraminowego, kwasu N-glikoloiloneuraminowego, wolną lub zestryfikowaną grupę kwasu karboksylowego, grupę kwasu siarkowego lub grupę kwasu fosforowego, a pozostałe podstawniki oznaczają hydroksyl i/lub atom wodoru. Jeszcze korzystniej jeden podstawnik wybrany z grupy obejmującej R2, R3, R4 i R oznacza wolną lub zestryfikowaną grupę kwasu karboksylowego, a pozostałe podstawniki R2, R3, R4 i R oznaczają hydroksyl i/lub atom wodoru; i n jest liczbą całkowitą i oznacza liczbę jednostek heksozy (patrz również stopień polimeryzacji, poniżej), które może stanowić dowolna jednostka heksozowa. Odpo-

12 11 1 wiednio n oznacza liczbę całkowitą pomiędzy Korzystnie jednostkę(i) heksozy stanowi jednostka kwasu uronowego. [004] Najkorzystniej R1, R2 i R3 oznacza hydroksyl, R4 oznacza atom wodoru, R oznacza grupę kwasu karboksylowego, n oznacza dowolną liczbę pomiędzy 1 a, korzystnie pomiędzy 1 a, a jednostkę heksozy stanowi kwas galakturonowy. [0046] Wykrywanie, pomiar i analizy korzystnych kwasowych oligosacharydów stosowanych w niniejszym sposobie podano we wcześniejszym zgłoszeniu patentowym dotyczącym kwasowych oligosacharydów, tj. WO 0/ [0047] Korzystnie, kwasowy oligosacharyd ma jedną, korzystnie dwie, końcowe jednostki kwasu uronowego, które mogą być w postaci wolnej lub zestryfikowane. Korzystnie końcowa jednostka kwasu uronowego jest wybrana z grupy obejmującej kwas galaktouronowy, kwas glukuronowy, kwas guluronowy, kwas iduronowy, kwas mannuronowy, kwas ryburonowy i kwas altruronowy. Te jednostki mogą mieć postać wolną lub zestryfikowaną. W jeszcze korzystniejszej postaci końcowa jednostka heksozy zawiera wiązanie podwójne, które korzystnie znajduje się pomiędzy pozycjami C4 i C końcowej jednostki heksozy. Korzystnie jedna z końcowych jednostek heksozy zawiera podwójne wiązanie. Końcowa heksoza (np. kwas uronowy) korzystnie ma wzór zgodnie z następującą strukturą II: Struktura II: Korzystna grupa końcowej kwasowej jednostki heksozy [0048] 2 gdzie R jest korzystnie wybrany z grupy obejmującej atom wodoru, hydroksyl i grupę kwasową, korzystnie hydroksyl (patrz powyżej); i co najmniej jeden podstawnik wybrany z grupy obejmującej R2, R3, R4 i R oznacza ugrupowanie kwasu N-acetyloneuraminowego, kwasu N-glikoloiloneuraminowego, wolną lub zestryfikowaną grupę kwasu karboksylowego, grupę kwasu siarkowego i grupę kwasu fosforowego, a pozostałe podstawniki R2, R3, R4 i R oznaczają hydroksyl i/lub atom wodoru. Korzystnie jeden podstawnik wybrany z grupy obejmującej R2, R3, R4 i R oznacza ugrupowanie kwasu N-acetyloneuraminowego, kwasu N-glikoloiloneuraminowego, wolną lub zestryfikowaną grupę kwasu karboksylowego, grupę kwasu siarkowego i grupę kwasu fosforowego, a pozostałe pod-

13 stawniki R2, R3, R4 i R oznaczają hydroksyl i/lub atom wodoru. Jeszcze korzystniej jeden podstawnik wybrany z grupy obejmującej R2, R3, R4 i R oznacza wolną lub zestryfikowaną grupę kwasu karboksylowego, a pozostałe podstawniki R2, R3, R4 i R oznaczają hydroksyl i/lub atom wodoru; a n stanowi liczbę całkowitą i oznacza liczbę jednostek heksozy (patrz również Stopień polimeryzacji, poniżej), którą może stanowić jakakolwiek jednostka heksozy. Dogodnie n jest liczbą całkowitą pomiędzy i oznacza liczbę jednostek heksozy, które to jednostki heksozy korzystnie stanowi kwas uronowy, jeszcze korzystniej jednostki kwasu galaktouronowego. Grupy kwasu karboksylowego w tych jednostkach mogą mieć postać wolną lub (częściowo) zestryfikowaną, przy czym są one korzystnie co najmniej częściowo metylowane. [0049] Korzystniej, R2 i R3 oznaczają hydroksyl, R4 oznacza atom wodoru, a R oznacza wolną lub zestryfikowaną grupę kwasu karboksylowego. [000] Kwasowe oligosacharydy stosowane w niniejszym wynalazku korzystnie wytwarza się z pektyny, pektanu, alginianu, chondroityny, kwasów hialuronowych, heparyny, heparanu, węglowodanów pochodzenia bakteryjnego, sialoglikanów, fukoidanu, fukooligosacharydów lub karageniny, korzystniej z pektyn i/lub alginianów. Korzystnie stosuje się hydrolizat pektyny. Nukleotydy [001] Niniejsza kompozycja korzystnie zawiera również pomiędzy a 0 mg nukleozydów i/lub pomiędzy a 0 mg nukleotydów na 0 gramów suchej masy kompozycji, korzystniej pomiędzy a 0 mg. Nukleotydy i/lub nukleozydy dodatkowo stymulują układ odpornościowy, działając synergistycznie z innymi składnikami niniejszej kompozycji. Cynk [002] Cynk jest niezbędnym składnikiem mikroodżywczym dla wzrostu i rozwoju funkcji odpornościowych. Niedobór cynku upośledza całościowo funkcje odpornościowe i odporność na infekcje. Zatem niniejsza kompozycja korzystnie zawiera cynk, korzystnie w ilości 2 do 0 mg cynku na 0 gramów suchej masy kompozycji, jeszcze korzystniej co najmniej 4-2 mg cynku na 0 g suchej masy kompozycji. Masę cynku oblicza się w odniesieniu do cynku jako pierwiastka. Ciecz [003] Niniejsza kompozycja ma korzystnie postać proszku lub cieczy albo postać tabletki, przy czym masa tej tabletki wynosi pomiędzy a 2 gramów. Korzystnie niniejsza kompozycja ma postać proszku, gdyż zwiększa to okres jego przechowywania. Niniejszą kom-

14 pozycję korzystnie podaje się doustnie w postaci ciekłej. Przed podaniem niniejszej kompozycji, korzystnie miesza się ją z cieczą, korzystnie wodą. Z uwagi na to, że korzystnie temperatura ciekłej kompozycji podczas podawania wynosi 3-40 C (korzystnie około 37 C), preparat w postaci ciekłej korzystnie wytwarza się następująco: Sposób a: miesza się wodę o temperaturze poniżej C z kompozycją według któregokolwiek z zastrzeżeń 1-, w stosunku wagowym woda: kompozycja wynoszącym 1-:1; i ogrzewa się mieszaninę otrzymaną w etapie a) do temperatury pomiędzy 3 a 0 C; lub Sposób b: miesza się wodę o temperaturze poniżej 60 C z kompozycją według któregokolwiek z zastrzeżeń 1-, w stosunku wagowym woda: kompozycja wynoszącym 1-:1; i chłodzi się mieszaninę otrzymaną w etapie a) do temperatury pomiędzy 3 a 40 C. Sposób a) jest bardziej odpowiedni dla wytwarzania ciekłego preparatu z proszku, podczas gdy sposób b) jest bardziej odpowiedni do wytwarzania ciekłego preparatu z tabletki. [004] Nieregularny stolec (np. twardy stolec, niedostateczna objętość stolca, biegunka) stanowi główny problem u wielu małych dzieci i pacjentów chorych, którzy otrzymują pokarm ciekły. Stwierdzono, iż problemy ze stolcem można zmniejszyć przez podawanie niniejszej kompozycji w postaci ciekłej, o osmolalności pomiędzy 0 a 00 mosm/kg, korzystniej pomiędzy 0 a 400 mosm/kg, najkorzystniej pomiędzy 2 a 0 mosm/kg. [00] W świetle powyższych problemów z biegunką, ważne jest również, aby pokarm ciekły nie cechował się nadmierną gęstością kaloryczną, gdyż powoduje to znaczną presję jelitową. Jednakże preparat powinien dostarczać wystarczającą liczbę kalorii w celu odżywienia niemowlęcia. Zatem ciekły pokarm korzystnie cechuje się gęstością kaloryczną pomiędzy 0, a 0,9 kcal/ml, korzystnie pomiędzy 0,6 a 0,8 kcal/ml. Podawanie [006] Niniejszą kompozycję korzystnie podaje się niemowlętom w wieku pomiędzy 0 a 2 lata. Niniejszą kompozycję można również korzystnie stosować w sposobie zapewniania wymagań odżywczych dla wcześniaków (niemowlę urodzone przed 37 tygodniem ciąży). W korzystnej postaci niniejszy wynalazek dostarcza sposób żywienia niemowląt w wieku pomiędzy 0 a dniem. [007] Niniejszą kompozycję można korzystnie stosować w celu leczenia lub profilaktyce chorób, w przypadku których zagrożone działanie układu odpornościowego i/lub niedojrzałość bariery jelitowej leżą u podstaw rozwoju choroby. Niniejszą kompozycję można zatem korzystnie stosować do leczenia lub profilaktyki biegunki lub alergii, zwłaszcza u

15 niemowląt w wieku pomiędzy 0 i 2. Niniejsza kompozycja jest szczególnie odpowiedni do leczenia i/lub profilaktyki alergicznego nieżytu nosa, alergicznego zapalenia spojówek, alergicznemu zapalenia skóry, atopowego zapalenia skóry i/lub alergii pokarmowej. [008] Niniejszą kompozycję korzystnie dostarcza się w postaci proszku w opakowaniu lub opakowanego preparatu gotowego do spożycia. W celu zapobiegania zepsuciu produktu, wielkość opakowania preparatu gotowego do spożycia korzystnie nie przekracza porcji do pojedynczego podania, np. korzystnie nie przekracza 00 ml; a wielkość opakowania niniejszej kompozycji w postaci proszku korzystnie nie przekracza ilości wystarczającej na podań. Odpowiednie wielkości opakowania dla proszku wynoszą 00 gramów lub mniej, korzystnie 00 gramów lub mniej. [009] Opakowane produkty zaopatrzone w etykiety, które bezpośrednio lub pośrednio skierowane są do konsumenta w odniesieniu do użycia tego produktu w związku z jednym lub większą liczbą wskazanych powyżej lub poniżej zastosowań, są objęte zakresem niniejszego wynalazku. Takie etykiety mogą przykładowo zawierać informacje, takie jak stymuluje dojrzewanie jelit i/lub układu odpornościowego, zmniejsza reakcję alergiczną, zmniejszona presja, zwiększona odporność lub zmniejszona wrażliwość lub podobne określenia. [0060] Zatem przedmiotem niniejszego wynalazku jest zastosowanie opisanej tu kompozycji do wytwarzania preparatu pokarmowego lub leku do podawania ssakowi do leczenia i/lub profilaktyki choroby zapalnej, biegunki, wyprysku i/lub atopowego zapalenia skóry. [0061] Kolejnym przedmiotem niniejszego wynalazku jest zastosowanie opisanej tu kompozycji do wytwarzania leku do stosowania w sposobie leczenia i/lub profilaktyki choroby zapalnej, biegunki, wyprysku i/lub atopowego zapaleniu skóry, który to sposób obejmuje podawanie tego preparatu dojelitowo lub doustnie ssakowi, a w szczególności ludzkiemu niemowlęciu. Niniejszy sposób zapewnia sposób leczenia i/lub zapobiegania infekcjom, przez podawanie niniejszej kompozycji. [0062] Wynalazek ponadto opisano w poniższych przykładach: Przykład 1: Odżywka dla niemowląt [0063] Ciekłą odżywkę dla niemowląt, wytworzono przez zmieszanie 13,9 g proszku z wodą w wyniku czego otrzymano 0 ml końcowego produktu, przy czym ten ciekły produkt na 0 ml zawierał: Energia: 66 kcal Białko: 8%en 1,3 g (zawierającego 0,6 g kazeiny; 0,8 g serwatki; 0,072 g L-argininy)

16 1 1 2 Strawne węglowodany: 44%en 7,4 g (zawierające 7,3 g laktozy) Tłuszcz: 48%en 3, g (zawierającego 0,41 g kwasu linolowego; 0,08 g kwasu α-linolenowego; 0,012 g kwasu arachidonowego; 0,002 g kwasu eikozapentanowego; 0,006 g kwasu dokozaheksaenowego; 1,4 g kwasu oleinowego;) Włókno: 0,8 g (zawierającego 0,0 g fruktopolisacharydu (Raftiline HP, Orafti, Tienen, Belgia); 0, g transgalaktooligosacharydów (Vivinal-GOS (Borculo Domo Ingredients, Holandia); 0, g hydrolizatu pektyny wytworzonego sposobem opisanym w EP137343, przykład 1. Nukleotydy: 0,89 mg Cytydyno--monofosforanu; 0, mg Urydyno--monofosforanu; 0,82 mg Adenozyno--monofosforan; 0, mg Guanozyno--monofosforanu; 0,34 mg Inozyno--monofosforanu. Osmolalność: 0 mosmol/l [0064] Kompozycja dodatkowo zawiera cholinę (6 mg/0 ml) i taurynę (6,3 mg/0 ml); minerały i pierwiastki śladowe (w tym 2 mg cynku/0 ml) i witaminy w ilościach zgodnych z międzynarodowymi zaleceniami dla preparatów mlecznych dla niemowląt. Przykład 2: [006] Opakowany preparat mleka dla niemowląt według przykładu 1, w którym dostarczono opakowania zaopatrzonego w etykietę informującą, iż preparat może być odpowiednio stosowany w celu profilaktyki lub leczenia alergii. Przykład 3: Procedura doświadczalne [0066] Wpływ diety zawierającej oligosacharydy kwasowe, ewentualnie w połączeniu z oligosacharydami obojętnymi badano w modelu odpowiedzi z nadwrażliwością typu późnego (DTH), która stanowi parametr odpowiedzi immunologicznej Th1 i jest określana przez pomiar zwiększenia opuchlizny ucha po miejscowym prowokowaniu antygenem. [0067] Zastosowane kwasowe oligosacharydy (AcOl), o średniej DP pomiędzy 2 a, otrzymano sposobem opisanym w WO 02/42484 (patrz przykład 1). Poddano badaniu die-

17 ty zawierające 1% wag., 2,% wag., % wag. i %% wag. AcOl względem całkowitej masy diety. Zastosowano mieszaninę obojętnych oligosacharydów (GF) zawierających galaktooligosacharydy (GOS) (Vivinal-GOS (Borculo Domo Ingredients, Holandia) i fruktooligosacharydy (FOS) (Raftiline HP, Orafti, Tienen, Belgia) w stosunku wagowym GOS:FOS wynoszącym 9:1. Poddano badaniu diety zawierające 1, 2, i % wag. GF względem całkowitej masy diety. Wpływ połączenia oligosacharydów kwasowych i obojętnych (GF i AcOl) badano dla diety zawierającej 1% wag. GF i 1% wag. AcOl względem całkowitej masy diety. [0068] Wszystkie dane przedstawiono jako procent względem wartości kontrolnych, czyli jako względne wartości dla grupy wzbogaconej w oligosacharydy w porównaniu z grupą otrzymującą dietę kontrolną (bez oligosacharydów). Zwierzęta i diety [0069] Samice myszy C7BI/6, w wieku 6 tygodni (Harlan Nederland BV, Horst, Holandia) trzymano w grupach w warunkach regularnego 12 godzinnego reżimu dzień/noc. Wielkość grupy wynosiła zwierząt na grupę i 3 zwierzęta w grupach kontroli negatywnej. Zwierzętom podano pół-syntetyczne diety (Research Diet Services, Wijk bij Duurstede, Holandia). Diety kontrolne sporządzono według wymagań AIN93G (Reeves i inni (1993) Development and Testing of the AIN93 purified diets for rodents: results on growth kidney calcification and bone mineralisation in rats and mice. J Nutrition 123(11): ), diety wzbogacone w oligosacharydy oparto na tych zaleceniach. Zawartość węglowodanów w dietach wzbogacanych utrzymywano na stałym poziomie przez wymianę całkowitej ilości węglowodanów na oligosacharydy w oparciu o masę. Poszczególne składniki węglowodanowe zastępowano zgodnie z ich zwykłym udziałem w diecie. Węglowodany w zwykłej diecie składały się ze skrobi kukurydzianej (40% całkowitej masy), dekstrynizowanej skrobi kukurydzianej (13,2%), sacharozy (%) i celulozy (%). Protokół szczepień [0070] Szczepienia rozpoczęto po dwóch do czterech tygodni adaptacji do nowych warunków środowiskowych i diet. W dniu 0, przed szczepieniem pobierano próbkę krwi. W dniu 1, podskórnie podawano pierwszą szczepionkę. Po trzech tygodniach, pobierano próbkę krwi (dzień 21) i podawano szczepionkę przypominającą (dzień 22). Dziewięć dni po podaniu szczepionki przypominającej (dzień 31), zmierzono podstawową grubość ucha przy użyciu zewnętrznego mikrometru Digimatic (Mitutoyo, Veenendaal, Holandia) i indukowano odpowiedź z nadwrażliwością typu późnego (DTH) przez wstrzyknięcie roztworu antygenu (podskórne) do małżowiny usznej myszy. 24 godziny po podaniu (dzień

18 ), zmierzono odpowiedź DTH, pobierano próbkę krwi i myszy uśmiercono. Wyodrębniono śledziony i przygotowano do ponownej stymulacji ex-vivo. [0071] Szczepienia polegały na podaniu 0 µl (podskórnie) mieszaniny 1:1 roztworu antygenu i adjuwanta Stimune (Specol, Cedidiagnostics BV, Lelystad, Holandia). Roztwór antygenu stanowiło rozcieńczenie 1:0 Influvac 02/03 (Solvay Pharmaceuticals, Weesp, Holandia) w PBS. Influvac jest trójwalentną szczepionką białkową zawierającą 3x µg/ml hemaglutyniny trzech różnych szczepów wirusa grypy. [0072] W celu wywołania odpowiedzi DTH, myszom wstrzyknięto podskórnie 2 µl dializowanego Influvac w oba uszy jako prowokację DTH. Hodowle komórkowe [0073] Wyodrębniono komórki śledziony ze śledzion z użyciem drobnooczkowych sit komórkowych (Becton Dickinson, Erembodegem, Belgia). Czerwone krwinki poddano lizie przez minutową inkubację na lodzie. Po przemyciu pożywką do hodowli bez czerwieni fenolowej, komórki zliczono (Coulter Counter, Beckman Coulter, Holandia) i utrzymywano na lodzie. Hodowle zapoczątkowano z użyciem 0,1 µg/ml dializowanego Influvac jako bodźca. Komórki zaszczepiono na 96-studzienkowych płytkach hodowlanych w ilości 1*6 komórek na studzienkę. Pożywka hodowlana składała się z RPMI-1640 z buforem HEPES i 2 mm L-Glutaminą (Invitrogen, Merelbeke, Belgia) z % płodowej surowicy 2 cielęcej (FCS). Hodowle inkubowano przez dni w 37 C przy % CO2. Następnie supernatanty zebrano i zamrożono w -80 C do czasu analizy. Namnażanie komórek zmierzono w równoległych hodowlach przez włączenie 3H-tymidyny, którą dodano do hodowli na ostatnie 18 godzin w ilości 0,4 µcu/studzienkę. Po dniach, komórki zebrano z użyciem przyrządu Filtermate (Perkin Elmer, Zaventem, Belgia) i zliczono licznikiem Micro-Beta (Perkin Elmer, Zaventem, Belgia). Rozpad radioaktywny zmierzono w czasie 1 minuty na studzienkę i rejestrowano impulsy na minutę (cpm) jako miarę szybkości namnażania. [0074] Cytokiny poddano analizie w supernatantach hodowli stymulowanych Influvac. Zmierzono IL-2, IL-, IL- i IFN-gamma z użyciem układu Bio-Plex z zamówionym zestawem mieszanych perełek dla wspomnianych cytokin (Bio-Rad, Veenendaal, Holandia). Cytokiny zmierzono zgodnie ze wskazówkami producenta. Wartości IL-4 zmierzono w teście ELISA z użyciem zestawu Pharmingen OptEIA mouse IL-4 (Becton Dickinson, Erembodegem, Belgia), zgodnie ze wskazówkami producenta. Wyniki Odpowiedź DTH na kwasowe oligosacharydy [007] Diety zawierające dawki 1% wag., 2,% wag. i % wag. AcOl indukowały staty-

19 18 stycznie znaczące zwiększenie odpowiedzi DTH, wykazując zwiększenie zależne od dawki (patrz Tabela 1). Zaobserwowane działanie wskazuje na korzystne zastosowanie kwasowych oligosacharydów w niniejszym sposobie. Tabela 1 % wag. kwasowych oligosacharydów w diecie 0 (próba kontrolna) , 136* 140* odpowiedź DTH (%) * oznacza znaczącą różnicę (P<0,0) w porównaniu z próbą kontrolną Odpowiedź DTH na oligosacharydy kwasowe i obojętne [0076] Połączenie 1% wag. GF, 2,% wag. GF i mieszaniny 1% wag. GF i 1% wag. AcOl indukuje statystycznie znaczące zwiększenie DTH (patrz Tabela 2). Zaobserwowane działanie wskazuje na korzystne zastosowanie niestrawnych oligosacharydów, zwłaszcza połączenia kwasowych i obojętnych oligosacharydów w niniejszym sposobie. Tabela 2 % wag. oligosacharydów w diecie 0 (próba kontrolna) 0 1% wag. GF 132* 1% wag. AcOl 122 2,% wag. GF 129* 2,% wag. AcOl 136* 1% wag. GF i 1% wag. AcOl 19* odpowiedź DTH (%) * oznacza znaczącą różnicę (P<0,0) w porównaniu z kontrolą 1 Wpływ kwasowych oligosacharydów na namnażanie specyficzne dla Influvac [0077] Podawanie diet zawierających 2,% wag. i % wag. kwasowych oligosacharydów (AcOl) indukowało znacząco obniżające działanie względem specyficznego dla influvac namnażania ex vivo (patrz Tabela 3). Zaobserwowane działanie wskazuje na korzystne zastosowanie kwasowych oligosacharydów w niniejszym sposobie.

20 19 Wpływ połączenia kwasowych i obojętnych oligosacharydów oligosacharydów na namnażanie specyficzne dla Influvac [0078] Podawanie połączenia 1% wag. GF i 1% wag. AcOl indukowało znaczący obniżający się wpływ na specyficzne namnażanie antygenu (patrz Tabela 3). W związku z tym, iż działanie jest znacząco zwiększone względem odpowiedzi DTH w przypadku diet zawierających same kwasowe lub obojętne oligosacharydy, wyniki te wskazują na synergistyczne działanie spowodowane podaniem kwasowych i obojętnych oligosacharydów. Zaobserwowane działanie wskazuje na korzystne zastosowanie połączenia kwasowych i obojętnych oligosacharydów w niniejszym sposobie. Zmniejszone namnażanie wskazuje na zmniejszenie odpowiedzi Th2 i działanie równoważące Th1/Th2 niniejszego sposobu. Tabela 3 % wag. oligosacharydów w diecie 0 (próba kontrolna) 0 1% wag. GF 0 1% wag. AcOl 92 2,% wag. AcOl 61 * % wag. AcOl 4* 1% wag. GF i 1% wag. AcOl Specyficzne namnażanie dla Influvac (%) 0* * oznacza znaczącą różnicę (P<0,0) w porównaniu z kontrolą 1 Równowaga Th1/Th2: Profile cytokin po podaniu kwasowych oligosacharydów [0079] Profile cytokin zmierzono w supernatantach hodowlanych influvac-specyficznych komórek śledziony. Dane przedstawiono jako procent względem wartości dla szczepionej grupy kontrolnej (tj. nie otrzymującej oligosacharydów). W porównaniu do prób kontrolnych, w wyniku podania diet zawierających 2,% wag. i % wag. AcOl, uzyskano zmniejszenie ilości związanych z Th2 cytokin IL-4, IL- i IL-, podczas gdy zwiększyła się liczba związanych z Th1 cytokin IL-2, a IFN-γ nie uległy zasadniczemu zmniejszeniu (patrz Tabela 4). Wyniki te wskazują na równoważące działanie Th1/Th2 kwasowych oligosacharydów i wskazują na korzystne zastosowanie kwasowych oligosacharydów w niniejszym sposobie, np. do leczenia i/lub profilaktyki chorób, którym towarzyszy względnie niska odporność Th1.

21 Równowaga Th1/Th2: Profile cytokin po podaniu kwasowych i obojętnych oligosacharydów [0080] W porównaniu do prób kontrolnych, w wyniku podania połączenia 1% wag. GT i 1% wag. AcOl, osiągnięto zmniejszenie ilości związanych z Th2 cytokin IL-4, IL- i IL-, podczas gdy ilości związanych z Th1 cytokin IL-2 i IFN-γ nie uległy zmniejszeniu (patrz Tabela 4, w której dane przedstawiono jako procent względem wartości dla grupy, której podano szczepionkę (tj. nie otrzymującej oligosacharydów)). Wyniki te wskazują na równoważące Th1/Th2 działanie połączenia kwasowych i obojętnych oligosacharydów i wskazują na korzystne użycie kwasowych oligosacharydów w niniejszym sposobie, np. do leczenia i/lub profilaktyki chorób, którym towarzyszy względnie niska odporność Th1. Szczególnie stosunek IL-4/IFN wskazuje na równowagę Th2/Th1. Innymi słowami, niski stosunek wskazuje na stymulację Th1 i/lub hamowanie Th2, i w każdym przypadku wskazuje na działanie równoważące Th1-Th2 niniejszych oligosacharydów. % wag. oligosacharydów w diecie Tabela 4 cytokiny IFN-γ (%) IL2 (%) IL (%) IL4 (%) IL (%) stosunek IL4/IFN-γ 0 (próba kontrolna) % wag. AcOl * ,% wag. AcOl * 66 7 % wag. AcOl * 44* 33* 6* 1* 1% wag. GF i 1% wag. AcOl * 44* * 4* * oznacza znaczącą różnicę (P<0,0) w porównaniu z kontrolą Zastrzeżenia patentowe 1 1. Kompozycja odżywcza lub farmaceutyczna formułowana jako preparat dla niemowląt i zawierająca składnik tłuszczowy, składnik białkowy i składnik węglowodanowy oraz zawierający serwatkę i kazeinę, znamienny tym, że stosunek wagowy kazeiny do serwatki wynosi 1:1 do 1:2,4, oraz tym, że kompozycje zawierają: a) co najmniej 3 gramy argininy na 0 gramów białka; b) co najmniej % wag. kwasu linolowego względem całkowitej ilości kwasów tłuszczowych; c) co najmniej 1% wag. kwasu alfa-linolenowego względem całkowitej ilości kwasów tłuszczowych;

22 21 d) co najmniej jeden długołańcuchowy polinienasycony kwas tłuszczowy w ilości przekraczającej 0,1% wag. względem całkowitej ilości kwasów tłuszczowych, przy czym ten długołańcuchowy polinienasycony kwas tłuszczowy jest wybrany z grupy obejmującej kwas dokozaheksaenowy, kwas arachidonowy i kwas eikozapentaenowy; e) do 2% wag. co najmniej jednego polinienasyconego kwasu tłuszczowego względem całkowitej ilości kwasów tłuszczowych; f) 2 do 12 gramów niestrawnych oligosacharydów o stopniu polimeryzacji 2 do 0 na 0 gramów suchej masy kompozycji; i g) kwasowe oligosacharydy o stopniu polimeryzacji 2 do Kompozycja według zastrzeżenia 1, zawierająca transgalaktooligosacharyd, hydrolizat pektyny i co najmniej jeden składnik wybrany z grupy obejmującej fruktooligosacharydy i inulinę Kompozycja według któregokolwiek z poprzednich zastrzeżeń, znamienny tym, że kompozycja zawiera kwas dokozaheksaenowy, kwas arachidonowy i kwas eikoza- pentaenowy. 4. Kompozycja według któregokolwiek z poprzednich zastrzeżeń, znamienny tym, że kompozycja zawiera 2 do 0 mg cynku na 0 gramów suchej masy kompozycji.. Kompozycja według któregokolwiek z poprzednich zastrzeżeń, znamienny tym, że zawartość składnika białkowego wynosi do 1%en; składnika tłuszczowego do 60%en; i składnika węglowodanowego 2 do 7%en. 6. Kompozycja według któregokolwiek z poprzednich zastrzeżeń, znamienny tym, że kompozycja ponadto zawiera pomiędzy i 0 mg nukleotydów i/lub pomiędzy a 0 mg nukleozydów na 0 gramów suchej masy preparatu Kompozycja według któregokolwiek z poprzednich zastrzeżeń, znamienny tym, że kompozycja zawiera 2 do 6 gramów treoniny na 0 gramów składnika białkowego. 8. Kompozycja według któregokolwiek z poprzednich zastrzeżeń, znamienny tym, że kompozycja zawiera kwas dokozaheksaenowy w ilości przekraczającej 0,1% wag. względem całkowitej ilości kwasów tłuszczowych i kwas arachidonowy w ilości przekraczającej 0,1% wag. względem całkowitej ilości kwasów tłuszczowych, oraz tym, że stosunek wagowy kwasu arachidonowego/kwasu dokozaheksaenowego wynosi pomiędzy 0,2 a 2.