Zasady diagnostyki laboratoryjnej u pacjenta otrzymującego lek Hemlibra Edyta Odnoczko

Transkrypt

1 Zasady diagnostyki laboratoryjnej u pacjenta otrzymującego lek Hemlibra Edyta Odnoczko 23 marzec 2019r.

2 HEMLIBRA = EMICIZUMAB (ACE 910) Działanie: naśladuje (mimics) in vitro oraz in vivo FVIIIa Nie wymaga aktywacji trombiną do swojego działania Specyficznie wiąże się do domen EGF FIX/FIXa oraz FX/FXa wiąże zymogeny i formy aktywne Efekt laboratoryjny: skrócenie APTT Interferencja emicizumabu w oznaczenia: aptt FVIII:C (metoda koagulacyjna jednostopniowa) inhibitora FVIII (klasyczna metoda Bethesda) Osocze badane Odczynnik APTT Inkubacja 3 min 37 C skrzep CaCl 2 Pomiar czasu krzepnięcia 2

3 WPŁYW EMICIZUMABU NA APTT Wartość aptt ulega normalizacji już przy stężeniach niższych od terapeutycznych Ref.range: sec N Engl J Med May 26;374(21): doi: /NEJMoa

4 OZNACZANIE AKTYWNOŚCI FVIII TEST KOAGULACYJNY JEDNOSTOPNIOWY kalibracja wobec FVIII w osoczu standardowym wysoka wartość! (kilkaset lub kilka tysięcy %) Wartość FVIII:C=100% już przy 10ug/ml Emicizmuabu (Calatzis et al., ECTH 2016) Tripodi A. et al. Clin Chem Feb;65(2): doi: /clinchem Epub 2018 Oct 3 4

5 OZNACZANIE AKTYWNOŚCI FVIII - TESTY CHROMOGENNE Wrażliwość testu na obecność Emicizumabu: Odczynnik (FIXa, FX) pochodzenia bydlęcego niewrażliwy prawdziwa aktywność FVIII Odczynnik (FIXa, FX) pochodzenia ludzkiego wrażliwy ekwiwalent aktywności FVIII (FVIII-like) Tripodi A. et al. Clin Chem Feb;65(2): doi: /clinchem Epub 2018 Oct 3 5

6 OZNACZANIE INHIBITORA FVIII U PACJENTA LECZONEGO EMICIZUMABEM Klasyczny test Bethesda Test Bethesda Zmodyfikowany test Bethesda RA FVIII: metoda koagulacyjna jednostopniowa Osocze badane Osocze prawidłowe Bufor/ osocze def. FVIII RA FVIII: metoda chromogenna (odczynnik (FIXa, FX) pochodzenia bydlęcego) wyniki fałszywie ujemne Próbka badana Inkubacja 2h 37ºC Próbka kontrolna prawdziwe stężenie inhibitora FVIII Oznaczenie RA FVIII Kalkulacja miana inhibitora (BU/mL) RA (Residual Activity) aktywność resztkowa 6

7 WPŁYW HEMLIBRA NA WYNIKI INNYCH TESTÓW LABORATORYJNYCH HEMOSTAZY 7

8 MONITOROWANIE LABORATORYJNE EMICIZUMABU Terapia z użyciem HEMLIBRA nie wymaga laboratoryjnego monitorowania dawkowania leku Stabilna i trwała odpowiedź na leczenie Neutralizujace ADA występują bardzo rzadko (<1%) W szczególnych sytuacjach może zaistnieć konieczność wykonania badań laboratoryjnych Weryfikacja skuteczności leczenia Uraz, duże krwawienie Zabieg chirurgiczny 8

9 MONITOROWANIE LECZENIA: OZNACZANIE STĘŻENIA LEKU / EKWIWALENTU FVIII (FVIII-LIKE) 1. Kalibrator komercyjny o znanym stężeniu emicizumabu ( 2. Test koagulacyjny w modyfikacji z rozcieńczonym osoczem badanym (1/80) Stężenie leku jako pochodna czasu krzepnięcia w odniesieniu do kalibratora Precyzja testu zależna od składu buforu i odczynnika APTT 3. Test chromogenny z odczynnikiem (FIXa, FX) pochodzenia ludzkiego Stężenie leku jako pochodna absorbancji w odniesieniu do kalibratora zależność liniowa od dawki leku 4. Brak obecnie jasnej informacji o korelacji ekwiwalentu FVIII i skuteczności leczenia Tripodi A. et al. Clin Chem Feb;65(2): doi: /clinchem Epub 2018 Oct 3 Bowyer A, Ehahad 2019, P027; Turkantoz H, EAHAD 2019, P127. 9

10 RODZAJE TESTÓW CHROMOGENNYCH DO OZNACZANIA FVIII Bowyer A. How to set up chromogenic FVIII and FIX assays. WFH

11 PODSUMOWANIE: ZASTOSOWANIE TESTÓW LABORATORYJNYCH U PACJENTÓW LECZONYCH HEMLIBRA Nazwa testu Ekwiwalent FVIII Inhibitor FVIII ADA FVIII (substytucja) APTT NIE NIE TAK NIE FVIII (test koagulacyjny) NIE NIE (fałszywie ujemny) TAK NIE FVIII (test chromogenny czynniki bydlęce) NIE TAK TAK FVIII (test chromogenny czynniki ludzkie) TAK NIE (fałszywie ujemny) TAK NIE Novembrino C, EAHAD

12 POTENCJALNE ZLECENIA U PACJENTÓW LECZONYCH HEMLIBRA Oznaczenie FVIII testem chromogennym z odczynnikiem bydlęcym monitorowanie leczenia koncentratem FVIII Oznaczenie inhibitora FVIII testem chromogennym z odczynnikiem bydlęcym monitorowanie inhibitora FVIII Oznaczenie FVIII testem chromogennym z odczynnikiem ludzkim lub ocena stężenia zmodyfikowanym testem koagulacyjnym (kalibrator) ekwiwalent FVIII do oceny aktywności Emicizumabu 12

13 13 DZIĘKUJĘ ZA UWAGĘ!