POUFNE. Pełen opis użytych szczegółów badania i procedur kontrolnych jest jest w metodzie testu. Dezynfekujący środek do wcierania do rąk

Transkrypt

1 Ocena skuteczności dezynfekującego środka do wcierania do rąk GAMA Healthcare Hand Rub (Clinell) za pomocą Europejskiego Standardowego Testu EN 1500:1997 Marzec 2005 Autor: P. Humphreys

2 Badania przeprowadzone przez: Uniwersytet Huddersfield. Szkoła Nauk Stosowanych, Queensgate, Huddersfield HD1 3DH Data: Marzec 2005 Badania mikrobiologiczne Metoda testu Europejski Standardowy Test EN 1500:1997 Procedury testu Pełen opis użytych szczegółów badania i procedur kontrolnych jest jest w metodzie testu. Dezynfekujący środek do wcierania do rąk GAMA Healthcare Ltd. (Clinell) Testowana partia Temperatura 20 ºC (± 1 ºC) Testowany czas kontaktu 1 minuta Testowane mikrorganizmy Escherichia coli K (NCIMB), Narodowa kolekcja bakterii przemysłowych, spożywczych i morskich, Aberdeen. Podłoże bakteryjne agar tryptonowo sojowy, LabM Inkubacja Płytki zostały poddane inkubacji w temperaturze37 ºC przez godzin Procedura zliczania płytek lane płytki Rozcieńczalnik płyn Ringera o stężeniu ¼ (LabM) Neutralizatory środek do wcierania do rąk GAMA Healthcare (Clinell), neutralizator zawierający rozcieńczone: Polisorbat 80, L- Histydynę, Saponinę i cysteinę. Propan-2-ol 60% (v/v), w porównywany środku do wcierania do rąk neutralizator zawierający rozcieńczone: polisorbat, lecytynę i L-histydynę. Badania zostały przeprowadzone, żeby stwierdzić, czy neutralizator jest odpowiedni. (Patrz Aneks 1) Została uzyskana aprobata Komisji do spraw Etyki na przeprowadzenie następującego testu. Metoda badania i jej weryfikacja EN 1500:1997 Chemiczne środki dezynfekcyjne i antyseptyczne Higieniczna dezynfekcja rąk metodą wcierania Metoda testu i wymagania (faza 2/etap 2). Ten Europejski Standard określa metodę testu symulującego praktyczne warunki ustalenia, czy produkt przeznaczony do higienicznej dezynfekcji rąk metodą wcierania zmniejsza liczbę uwolnionych przejściowo bakterii, zgodnie z wymaganiami w czasie wcierania preparatu w celowo zainfekowane ręce ochotników. Ta metoda obejmuje zastosowanie żywych mikroorganizmów testowych ( Escherichia coli K NCIMB) na rękach, a następnie zebraniu testowych mikroorganizmów w celu dokonania bazowego zliczenia. Testowany albo porównawczy produkt dezynfekujący jest stosowany na ręce przed kolejnym pobraniem pozostałych żyjących mikroorganizmów w próbce zawiesiny zawierającej neutralizatory, w celu określenia wpływu jakichkolwiek pozostałości środka dezynfekującego. Mikroorganizmy są zliczane, liczby są transponowane na system logarytmiczny i ustalana jest różnica między liczbą pozostałych bakterii po zastosowaniu testowanego preparatu i porównawczego oraz bazowymi zliczeniami i są one analizowane statystycznie ze względu na istotność. Im większa różnica między tymi dwiema liczbami, tym skuteczniejszy jest produkt. Każdy ochotnik powtarzał procedurę dla preparatu porównawczego i testowanego. Aby testowany produkt spełnił wymagania standardu, EN1500:1997, średnia redukcja logarytmiczna nie może być znacznie mniejsza (przy poziomie istotności 90%) niż uzyskana przy użyciu produktu porównawczego.

3 Metoda aplikacji: Aplikacja testowanych mikroorganizmów: Ręce były myte przez 1 minutę delikatnym mydłem, żeby usunąć przejściowo znajdujące się bakterie, a następnie zostały dokładnie osuszone ręcznikami papierowymi (delikatne mydło 200 l -1 : olej lniany 50 części wagowych; wodorotlenek potasu 9.5 części wagowych; etanol 7 części w destylowanej wodzie, autoklaw do sterylizacji). Ochotnicy zanurzyli ręce aż do połowy śródręcza, trzymając je przez 5 sekund z rozsuniętymi palcami w 2 l zawiesiny testowanego mikroorganizmu E. coli K12, zawierającej od 2 x 10 8 do 2 x 10 9 cfu ml -1. Ręce były suszone strumieniem powietrza przez 3 minuty, po czym rozpoczęła się procedura testu albo procedura wcierania dla produktu porównawczego (R) lub dla produktu testowanego (P) opisana poniżej. Produkt porównawczy (R): 60% (w/v) Propan-2-ol Procedura wcierania dla produktu porównawczego (R): Trzy ml produktu porównawczego (propan-2-ol) zostały wlane na złożone w miseczkę suche ręce i wcierane energicznie w skórę przez 30 sekund aż do nadgarstków, zgodnie ze standardową procedurą wcierania w ręce przedstawioną na Rysunku 1. Zapewniło to całkowite pokrycie rąk. Technika ta obejmowała pięć pociągnięć do tyłu i do przodu, dłonią o dłoń, prawą dłonią nad grzbietem lewej dłoni i lewą dłonią nad grzbietem prawej dłoni, dłonią o dłoń ze splecionymi palcami, tylną stroną palców druga dłonią z palcami zablokowanymi, wycieranie przez obracanie prawego kciuka ściskanego w lewej dłoni i na odwrót, wycieranie przez obracanie ściśniętych palców prawej dłoni na lewej dłoni i ściśniętych palców lewej dłoni na prawej. Procedura ta została powtórzona dla dalszych 3 ml produktu porównwczego, żeby uzyskać całkowity czas wcierania 60 sekund. Procedura dla produktu porównawczego została zakończona opłukaniem palców przez 5 sekund pod strumieniem bieżącej wody. Nadmiar wody został strząśnięty. Próbki zostały pobrane natychmiast. Produkt testowany ()): Dezynfekujący środek do wcierania do rąk GAMA Healthcare (Clinell), nakładany w ilościach 3 ml przez 30 sekund. Testowany produkt był stosowany przy pomocy tej samej techniki wcierania, co opisana dla produktu porównawczego (R). Procedura została zakończona spłukaniem palców przez 5 sekund pod strumieniem bieżącej wody. Nadmiar wody został strząśnięty i próbki zostały pobrane natychmiast.

4 Wyniki Tabela 1. Procedura wcierania w ręce porównawczego propan-2-ol 60% (v/v) Preparat propan-2-ol 60% (v/v) Zastosowanie wcieranie 3ml/30s, jeden raz Data badania 17-Marca 2005 Badany E.coli K12 NCIMB Mikroorganizm Zawiesina 2.14 x 10 9 cfu m l-1 Ochotnik Liczba CFU na płytkę z rozcieńczenia 10x Nr Ręka Wstępne wartości Wartości po zabiegu prawa lub lewa 1 l r l r l r l r l r l r l r l r l r l r l r l r l r l r l r

5 Tabela 1. Tabela 2. Wcieranie w ręce testowanego produktu. Preparat GAMA Healthcare Clinell Zastosowanie wcieranie 3ml/30s, jeden raz Data badania 17-Marca 2005 Badany E.coli K12 NCIMB Mikroorganizm Zawiesina 2.14 x 10 9 cfu m l-1 Ochotnik Liczba CFU na płytkę z rozcieńczenia 10x Nr Ręka Wstępne wartości Wartości po zabiegu prawa lub lewa 1 l r l r l r l r l r l r l r l r l r l r l r l r l r l r l r

6 Tabela 3. Obliczone wartości log10 (średnia z lewej i prawej ręki) i współczynniki redukcji log 10 dla wyników z badania (Tabela 1 i Tabela 2) Ochotnik Produkt porównawczy Product procedura z propan-2-ol 60% v/v (R) Testowany produkt GAMA Healthcare (P) log x log y log z log x log y log z średnia s N x średnie wartości log przed zabiegiem 10 z lewej i prawej ręki Y - średnie wartości log 10 po zabiegu Z X_Y średnie wartości redukcji log 10 S standardowe odchylenie N rozmiar próbki z lewej i prawej ręki

7 Analiza statystyczna Tabela 4 Analiza statystyczna Tabela 4. Porównanie statystyczne wartości otrzymanych przy pomocy R (kontrola) i P (produkt) Ochotnik log RF pochodzący od Różnica Rząd różnicy R P P R-P nieistotny istotny RF: współczynnik redukcji (reduction factor) z Suma rzędów (+) 63 Suma rzędów (-): 57 Kiedy mniejsza z sum rzędów (tu 57) zostanie porównana z wartościami tabelarycznymi z tabeli Wilcoxona (tabela 5) o poziomie istotności 0.1 tj. 90% (wartość 36), suma rzędów jest nie mniejsza nież wartość tabelaryczna. Produkt tj. 3 ml dezynfekującego środka do wcierania do rąk (Clinell) została wtarta przez 30 sekund (jedno powtórzenie) i nie ma istotnej różnicy w skuteczności (ani większej ani mniejsze j) od produktu porównawczego. Produkt dezynfekujący środek do wcierania do rąk (Clinell) spełnia wymagania co do skuteczności ze standardu EN 1500:1997 Tabela 5 Test Wilcoxon matched pairs signed rank - krytyczne wartości z niższej z obu sum rzędów (+) albo ( - oznanczone na różnych poziomach istotności. Liczba par z różnicą, która nie jest Poziom istotności równa 0 n 0.1 (90%) 0.05 (95%) 0.01 (99%)

8 Wnioski: Zgodnie z EN 1500:1997, dezynfekujący środek do wcierania do rąk GAMA Healthcare (Clinell) przy stosowaniu w dwóch dawkach 3ml i wcierany w ręce przez 60 sekund łącznie nie jest istotnie bardziej lub mniej skuteczny przy poziomie ufności 90% od porównawczego produktu propan-2-ol 60% (w/v), który był stosowany w dwóch dawkach po 3 ml i wcierany w ręce przez całkowity czas 60 sekund. Dezynfekujący środek do wcierania do rąk GAMA Healthcare (Clinell) jeśli jest stosowany w opisany powyżej sposób spełnia wymogi zawarte w EN 1500:1997, tj. średnia redukcja uwolnionych testowanych mikroorganizmów uzyskana dla dezynfekującego środka do wcierania do rąk GAMA Healthcare (Clinell) nie jest istotnie niższa niż uzyskana dla produktu porównawczego (propan-2-ol 60% w/v) i dlatego spełnia on Europejski Standard EN 1500:1997 dla higienicznych środków do wcierania do rąk. Rysunek 1. Standardowa procedura higienicznego wcierania do rąk Wlać właściwą objętość produktu do wcierania do rąk na złożone w miseczkę suche ręce 30 s 60 s zgodnie ze standadową procedurą wcierania do rąk pokazaną poniżej, żeby zapewnić całkowite pokrycie dłoni. Czynność jest w każdym etapie powtarzana pięć razy przed przejściem do następnego etapu. Po zakończeniu etapu 6, zaczyna się serię etapów, żeby zakońzyc czas mycia. Zaadaptowane z EN 1500:1997 Chemiczne środki dezynfekcyjne i antyseptyczne Metoda testu higienicznej dezynfekcji rąk metodą wcierania (faza 2/etap 2).

9 Aneks 1 Weryfikacja metody A1: Weryfikacja nietoksyczności środka neutralizującego (kontrola) Do 9 ml i środka neutralizującego dodano 1 ml zawiesiny bakteryjnej rozcieńczonej do 1 x 10 3 do 3 x10 3 wymieszano i pozostawiono w kąpieli wodnej w temperaturze 20 ºC ± 1 ºC na czas kontaktu 1 min ± 5 s Po upływie czasu kontaktu póbki 1 ml zostały pobrane podwójnie i przygotowane zostały lane płytki, po inkubacji w temperaturze 37 ºC przez 48 h. Oznaczono średnią liczbę metodą płytkową N środka neutralizującego. A.2 Weryfikacja inaktywacji metodą neutralizacji rozcieńczenia (test) Do 1 ml rozcieńczonej zawiesiny bakteryjnej dodano 9 ml środka do wcierania do rąk, wymieszano i pozostawiono w kąpieli wodnej w temperaturze 20 ºC ± 1 ºC na czas kontaktu 5 min ± 10 s. Następnie 1 ml mieszaniny został przeniesiony do 8 ml środka neutralizującego utrzymywanego w temperaturze 20 ºC ± 1 ºC i pozostawiony na 5 min ± 10 s. Dodano 1 ml zawiesiny testowanych bakterii w rozcieńczeniu 1 x 10 3 to 3 x10 3 wymieszano i pozostawiono na czas kontaktu 1 min ± 5 s. Po upływie czasu kontaktu próbki 1 ml zostały pobrane podwójnie i przygotowane zostały lane płytki, po inkubacji w temperaturze 37 ºC przez 48 h. Oznaczono średnią liczbę metodą płytkową n środka neutralizującego. Tabela 2A Weryfikacja metody rozcieńczania-neutralizacji Neutralizator polisrobat 80, L-histydyna, saponina i cysteina - GAMA Healthcare (P) Bakteryjny test zawiesinowy Weryfikacja neutralizacji (cfu ml -1 ) Escherichia coli A1. Kontrola A2. Test 211, , , 185 (N=208) (N =199.5) (n = 189) polisorbat, lecytyna i L- histydyna - Propan-2-ol (R) 211, 205 (N=208) 203, 201 (N = 202) 189, 180 (n = 184.5) Wyniki Dla testowanego mikroorganizmu Escherichia coli K12: N i N są między 100 a 300 cfu N jest większe niż 0.5 razy N n jest większe niż 0.5 razy N Neutralizacja została zweryfikowana za pomocą środka neutralizującego.

10 Opinia użytkownika Mimo że metody Europejskiego testu takie jak EN1500:1997 wyłączają badania nad akceptacją przez użytkowników, jednak powszechnie uważa się, że akceptacja przez użytkowników odgrywa podstawową rolę żeby zapewnić odpowiednie mycie rąk/dezynfekcję. Na zakończenie procedury badania uczestnicy sotali poproszeni, żeby umyć/zdezynfkować swoje ręce alkoholowym żelem Purell. Wyniki sondażu wśród 15 uczestników zostały pkazane w tabeli 6. Zapach Dotyk Ogólna preferencja Delikatne mydło Propan-2-ol GAMA Healthcare Clinell Purell (4) -14 (3) 26 (1) -10 (2) Wynik: Dobry = +1 liczba uczestników = 15 Nie mam zdania = 0 (1-4) = kolejność preferencji Słaby = -1 Jak widać, produkty dostępne na rynku: dezynfekujący środek do wcierania do rąk GAMA Healthcare (Clinell) i Purell cieszyły się większym uznaniem niż standardowe naturalne delikatne mydło i porównawcza formuła kontrolna, propan-2-ol 60 %. Większośc uczestników (13) uznała uczucie w dotyku i zapach produktu GAMA Healthcare (Clinell) za akceptowalne/dobre. Co interesujące, większość uczestników (13) nie lubiła w dotyku produktu Purell, zgłaszając, że wydaje się on kleisty w dotyku. Streszczenie Kosmetyczne względy i akceptacja przez użytkownika to kluczowe kwestie przy wyborze środka do dezynfekcji rąk i środka do wcierania do rąk. Jeśli produkt jest nieprzyjemny, nie będzie używany i mało prawdopodobne będzie stosowanie się do wytycznych narodowej dobrej praktyki dezynfekcji rąk. Opinie użytkownika dotyczące zapachu i uczucia w dotyku zostały zebrane od wszystkich 15 uczestników tego badania odnośnie produktu testowanego i obecnie używanego żelu do rąk. Dezynfekujący środek do wcierania do rąk GAMA Healthcare (Clinell) cieszył się dość dużym uznaniem, w odróżnieniu od standardowych porównawczych produktów, propan-2-ol 60% i delikatnego mydła naturalnego. Na podstawie tego badania trudno jest przeprowadzić bezpośrednie porównanie między środkiem do wcierania do rąk Purell, a środkiem do wcierania do rąk GAMA Healthcare (Clinell), jednak początkowa reakcja wydaje się przemaw iać na korzyść użycia środka do wcierania do rąk GAMA Healthcare (Clinell) w stosunku do żelu do rąk Purell. Opinia W czasie badań wspierających te wyniki napotkaliśmy na pewne trudności przy identyfikacji skutecznych neutralizatorów dla produktów na bazie alkoholu (czynne składniki 70%). Literatura przedmiotu sugeruje użycie uniwersalnych neutralizatorów. Jednak nie udało nam się znaleźć skutecznego chemicznego neutralizatora, używając filtracji membranowej, kiedy było to konieczne. Wydaje się, że problem neutralizacji produktu, który skutecznie jest w 70% czynny nie został rozpoznany i omówiony w literaturze przedmiotu z zakresu mikrobiologii. Potencjalnie może to prowadzić do zakwestionowania wyników produktów o wysokiej czynności, głównie produktów zawierających alkohol, gdzie neutralizacja produktu zachodzi poprzez chemiczny neutralizator.