Uniwersytet Przyrodniczy we Wrocławiu. Wydział Medycyny Weterynaryjnej. Katedra Biochemii, Farmakologii i Toksykologii.

HTML
DOWNLOAD

Wielkość: px

Rozpocząć pokaz od strony:

Download "Uniwersytet Przyrodniczy we Wrocławiu. Wydział Medycyny Weterynaryjnej. Katedra Biochemii, Farmakologii i Toksykologii."

Stanisław Kwiecień
7 lat temu
Przeglądów:

1 Uniwersytet Przyrodniczy we Wrocławiu Wydział Medycyny Weterynaryjnej Katedra Biochemii, Farmakologii i Toksykologii Aleksandra Pawlak CHARAKTERYSTYKA FENOTYPOWA KOMÓREK CHŁONIAKÓW I BIAŁACZEK PSÓW ORAZ OCENA IN VITRO ICH WRAŻLIWOŚCI NA LEKI CYTOSTATYCZNE Rozprawa doktorska Promotor: prof. dr hab. Bożena Obmińska-Mrukowicz Wrocław 2014

2 Badania były finansowane przez Narodowe Centrum Nauki w ramach grantu: 2011/01/N/NZ5/02833 pt.: Badanie nad zastosowaniem hodowli pierwotnych i ustalonych linii komórkowych psiego chłoniaka w diagnostyce i leczeniu chłoniaków u psów. Termin realizacji

3 8. Streszczenie Celem pracy była charakterystyka fenotypowa komórek chłoniaków i białaczek psów oraz ocena in vitro ich wrażliwości na następujące leki cytostatyczne: arabinozyd cytozyny, chlorambucyl, 4-HO-cyklofosfamid, doksorubicynę, etopozyd, deksametazon, prednizolon, lomustynę i winkrystynę. W badaniach wykorzystano komórki nowotworowe pobrane od chorych psów oraz ustalone linie komórkowe psich chłoniaków i białaczek. Część badań z zastosowaniem komórek nowotworowych pobranych od chorych psów, obejmowała ich charakterystykę fenotypową, określenie częstotliwości występowania poszczególnych fenotypów chłoniaków i białaczek w populacji badanych psów oraz próbę wykorzystania hodowli komórek nowotworowych pobranych od psów w prognozowaniu odpowiedzi na leczenie, w oparciu o wyniki testów chemiowrażliwości przeprowadzonych w warunkach in vitro. Częstotliwość występowania chłoniaków/białaczek o wysokim stopniu złośliwości u psów badana była metodą cytometrii przepływowej. Badanie wykazało, że typ B stanowi 71% przypadków, typ T - 17%, a chłoniaki/białaczki o mieszanym/nieokreślonym fenotypie 12%. Badanie nad przydatnością zastosowania hodowli komórek chłoniaka/białaczki psów w testach chemiowrażliwości wykazało, że komórki nowotworowe pobrane od psów charakteryzują się słabym wzrostem w warunkach in vitro. Za test do oceny wrażliwości komórek chłoniaka/białaczki psa o największej przydatności uznano metodę z zastosowaniem barwienia aneksyną V i jodkiem propidyny. Wykazano, że komórki chłoniaka/białaczki psa typu B in vitro, charakteryzują się wyższą wrażliwością niż komórki typu T, na działanie większości zastosowanych w badaniu związków cytostatycznych. Za substancje o najsilniejszej aktywności przeciwnowotworowej in vitro w stosunku do hodowli pierwotnych komórek chłoniaka/białaczki uznano: 4-HO-cyklofosfamid, doksorubicynę i winkrystynę. Doświadczenia z zastosowaniem ustalonych linii komórkowych chłoniaków i białaczek psów wykazały ich dużą przydatność w badaniach nad opracowywaniem nowych strategii terapeutycznych. Profil wrażliwości poszczególnych linii komórkowych doskonale odpowiada temu obserwowanemu w komórkach hodowli pierwotnych. Linia CLBL-1, reprezentująca najczęściej występującą u psów formę chłoniaka B-komórkowego, charakteryzowała się najwyższą wrażliwością na większość testowanych substancji, w tym na 90

4 działanie steroidowych leków przeciwzapalnych. Linia CL-1, odpowiadająca trudno poddającemu się terapii chłoniakowi T-komórkowemu, charakteryzowała się wysoką opornością na badane substancje cytostatyczne. Dzięki oporności na działanie glikokortykosteroidów, linie CL-1 i GL-1 mogą stanowić cenny model do badań nad mechanizmem oporności na tę grupę leków. Substancjami o najsilniejszej aktywności przeciwnowotworowej in vitro w stosunku do wszystkich linii komórkowych są 4-HOcyklofosfamid, doksorubicyna i winkrystyna. 91

5 9. Abstract (in english) The aim of the study was a phenotypic characterization of canine lymphoma and leukemia cells and in vitro evaluation of their sensitivity to the following cytostatic drugs: cytarabine, chlorambucil, 4-HO-cyclophosphamide, doxorubicin, etoposide, dexamethasone, prednisolone, lomustine and vincristine. The experiments involved neoplastic cells collected from the affected dogs and established cell lines of canine lymphomas and leukemias. The experiments based on the cells collected from the sick dogs involved a phenotypic characterization of the collected neoplastic cells and determination of the incidence of specific lymphoma and leukemia phenotypes in the investigated canine population. An attempt was also made at using the culture of neoplastic cells collected from the dogs to predict a response to treatment based on the results of in vitro chemosensitivity tests. Flow cytometry showed that the incidence of high-grade malignancy lymphomas / leukemias was 71% for type B, 17% for type T, and lymphomas / leukemias of mixed or undetermined phenotype accounted for 12% of cases. The tests aimed at assessing the usefulness of the canine lymphoma / leukemia cell culture in the chemosensitivity assays revealed that the canine neoplastic cells exhibited poor growth in vitro. It was found that the sensitivity of canine lymphoma / leukemia cells was the most efficiently assessed using annexin V and propidium iodide staining. Lymphoma / leukemia B-type cells showed greater sensitivity than T cells to most of the cytostatic agents applied in vitro. The agents with the strongest in vitro antitumor activity towards the primary cells of lymphoma / leukemia were: 4-HO-cyclophosphamide, doxorubicin and vincristine. The experiments with established canine lymphoma and leukemia cell lines were found to be very useful in the studies aimed at the development of new therapeutic strategies. Sensitivity profile of individual cell lines perfectly corresponded to that observed in the primary culture cells. CLBL-1 line, representing the most frequent canine form of B-cell lymphoma, was characterized by the highest sensitivity to the majority of the tested substances, including the anti-inflammatory steroids. CL-1, representing difficult to treat T- cell lymphoma, was characterized by high resistance to the investigated cytostatic substances. Thanks to their glucocorticoid resistance, CL-1 and GL-1 lines can be good research models 92

6 for investigating the mechanisms of resistance to this group of drugs. 4-HOcyclophosphamide, doxorubicin and vincristine were found to exhibit the strongest in vitro anticancer activity against all cell lines. 93

Podobne dokumenty

Folia Medica Lodziensia

Folia Medica Lodziensia tom 38 suplement 1 2011 Folia Medica Lodziensia, 2011, 38/S1:5-124 ZNACZENIE WYBRANYCH POPULACJI KOMÓREK IMMUNOLOGICZNYCH W LECZENIU ZAOSTRZEŃ STWARDNIENIA ROZSIANEGO Z ZASTOSOWANIEM