Transkrypt

1 Directigen Flu + Do zróznicowanego, bezposredniego wykrywania antygenów wirusa influenzy typu i Zobacz objaœnienie symboli na koñcu ulotki U L006712J 2006/09 Polski PRZEZNCZENIE Test Directigen Flu + to szybki immunologiczny test b³onowy in vitro s³u ¹cy do bezpoœredniego i iloœciowego wykrywania antygenów wirusa influenzy typu i w p³ukance nosowo-gard³owej, aspiracie nosowo-gard³owym, wymazie nosowo-gard³owym, wymazie z ni szej czêœci jamy nosowej, wymazie z gard³a oraz p³ukance oskrzelowop³ucnej pobranych od pacjentów z objawami choroby Directigen Flu + jest zró nicowany, dziêki czemu, wykonuj¹c jeden test, mo na odró niæ antygeny wirusa influenzy typu od antygenów wirusa influenzy typu Test jest pomocny podczas diagnozowania zaka eñ wirusem influenzy typu i Wszystkie negatywne wyniki badañ powinny zostaæ potwierdzone przez hodowle komórkowe, poniewa negatywne wyniki nie wykluczaj¹ zaka enia wirusem grypy i nie powinny byæ stosowane jako wy³¹czna podstawa do leczenia lub innych decyzji zwi¹zanych z prowadzeniem leczenia Test Directigen Flu + nie s³u y do wykrywania wirsa influenzy typu C STRESZCZENIE I OJŒNIENIE Grypa jest chorob¹ wirusow¹ o ostrym przebiegu maj¹c¹ charakter sezonowy Charakterystyczne objawy to nag³y wzrost gor¹czki, dreszcze, ból g³owy, bóle miêœniowe i suchy kaszel Objawy kliniczne zwykle ustêpuj¹ w ci¹gu jednego tygodnia, chyba e pojawi¹ siê powik³ania Wirusy influenzy typu lub wywo³uj¹ wiêkszoœæ chorób o znaczeniu klinicznym, natomiast wirus influenzy typu C jest odpowiedzialny za przebiegaj¹c¹ ³agodnie chorobê, g³ównie górnych dróg oddechowych Pacjenci z podejrzeniem grypy mog¹ odnieœæ korzyœci ze stosowania leków antywirusowych mantadyna 1 i rimantadyna 1 to dostêpne œrodki u ywane zarówno do zapobiegania grypie typu, jak i jej leczenia Zanamivir 1 i oseltamivir 1 to dostêpne œrodki s³u ¹ce do leczenia zarówno grypy typu, jak i grypy typu W przypadku osób doros³ych podanie tych leków w ci¹gu pierwszych 48 godzin od chwili wyst¹pienia objawów mo e z³agodziæ przebieg oraz skróciæ czas trwania choroby Poniewa zosta³y opracowane opcje terapeutyczne obejmuj¹ce leczenie grypy typu, konieczne jest dokonanie szybkiego rozró nienia miêdzy gryp¹ typu i typu, dziêki czemu lekarze bêd¹ mogli wybraæ metodê selektywnej interwencji przeciwwirusowej Ponadto tylko amantadyna i rimantadyna s¹ stosowane w profilaktyce grypy, trzeba wiêc okreœliæ, czy w danej instytucji (np domu opieki) lub spo³ecznoœci objawy choroby wywo³uje wirus influenzy typu, aby podj¹æ odpowiednie dzia³ania profilaktyczne wzglêdem osób nara onych na zaka enie Wa ne jest wiêc szybkie okreœlenie nie tylko tego, czy dana choroba to grypa, ale tak e tego, który typ wirusa j¹ wywo³uje Procedury stosowane w diagnostyce grypy typu i obejmuj¹ szybkie testy immunologiczne, bezpoœrednie oznaczenie immunofluorescencyjne próbki, reakcjê odwrotnej transkrypcji ³añcucha polimerazy (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction, RT-PCR), oznaczenie serologiczne oraz izolacjê hodowli komórkowej z potwierdzeniem 2-8 Oznaczenie immunofluorescencyjne sk³ada siê z barwienia próbek unieruchomionych na szkie³kach mikroskopowych za pomoc¹ przeciwcia³ znakowanych fluorescein¹ oraz z nastêpuj¹cej póÿniej obserwacji pod mikroskopem fluorescencyjnym 4,9,10 Metody hodowlane rozpoczynaj¹ siê od wstêpnej izolacji wirusa w hodowli komórkowej, po której nastêpuje zahamowanie hemadsorbcji, immunofluorescencja lub oznaczenie neutralizacyjne w celu potwierdzenia obecnoœci wirusa influenzy Test Directigen Flu + to oznaczenie wykorzystuj¹ce filtr immunob³onowy w celu wykrycia antygenów influenzy lub wyekstrahowanych z odpowiednich próbek pobranych od pacjentów wykazuj¹cych objawy choroby Ca³kowity czas testu wynosi mniej ni 15 minut, a reakcja jest okreœlana przez powstanie widocznego wzorca barwi¹cego W przypadku testu Directigen Flu + nie pojawia siê problem dryfu antygenowego, poniewa docelowe antygeny s¹ silnie zachowawczymi nukleoproteidami okreœlonego typu Szybkoœæ i wydajnoœæ testu Directigen Flu + powoduje, e mo e byæ on stosowany jako STTYSTYCZNY test do wykrywania antygenów wirusa influenzy i, zapewniaj¹cy szybk¹ i wiarygodn¹ informacjê w celu u³atwienia procesu diagnozowania grypy U ycie testu Directigen Flu + do rozró nienia zaka enia wirusem influenzy typu (test Flu ) od zaka enia influenz¹ typu (test ) mo e zapewniæ wiêksz¹ selektywnoœæ interwencji antywirusowej ZSD PROCEDURY Test Directigen Flu + rozpoczyna siê od ekstrakcji antygenów wirusa influenzy typu lub z próbek pobranych z uk³adu oddechowego Wyekstrahowana próbka jest przepuszczana przez zestaw filtrów do ka dej z dwóch studzienek w urz¹dzeniu testowym ColorPC Podczas przechodzenia próbki przez kontroler przep³ywu antygeny influenzy typu lub wzglêdem ywych lub nie ywych cz¹stek wirusowych obecnych w próbce s¹ niespecyficznie wi¹zane w struktury o trójk¹tnym kszta³cie z powierzchni¹ b³ony w studzienkach i Wykrywanie antygenu wychwyconego na b³onie rozpoczyna siê po przep³ukaniu b³ony Do górnej czêœci studzienki urz¹dzenia testowego s¹ dodawane przeciwcia³a monoklonalne ³¹cz¹ce siê (2) specyficznie z antygenem nukleoproteidu influenzy typu Do dolnej czêœci studzienki urz¹dzenia testowego dodawane s¹ przeciwcia³a monoklonalne ³¹cz¹ce siê specyficznie z antygenem nukleoproteidu influenzy typu Naniesione na b³onê ColorPC koniugaty przeciwcia³ monoklonalnych s¹ wi¹zane z unieruchomionymi antygenami Po przemyciu b³ony dodawany jest chromogen i mieszanina jest inkubowana przez 5 minut Dodanie odczynnika zatrzymuj¹cego powstawanie barwy zapewnia dostateczn¹ iloœæ czasu na interpretacjê wyników Pojawienie siê fioletowego trójk¹ta na b³onie studzienki lub urz¹dzenia testowego wskazuje pozytywny wynik testu odpowiednio FLu lub Flu Fioletowa kropka kontrolna i brak widocznego barwnego trójk¹ta to wskaÿniki ujemnego wyniku testu

2 ELEMENTY ZESTWU I ODCZYNNIKI Zestaw testowy Directigen Flu + sk³ada siê z nastêpuj¹cych elementów Urz¹dzenia ColorPC 20 Ka de urz¹dzenie z jednostk¹ kontrolera przep³ywu, zawieraj¹ce kropki kontrolne z rekombinowanych antygenów influenzy typu (H1N1) i typu (Lee 40) na œrodku b³on odpowiednio w studzienkach i, jest zamkniête w foliowej torebce ze œrodkiem poch³aniaj¹cym wilgoæ Odczynnik do ekstrakcji E 9,9 ml Ekstrakcja, 1,6% œrodka mukolitycznego oraz 7,4% detergentów z 0,2% azydku sodu (œrodek konserwuj¹cy) Odczynnik do p³ukania 1 5,1 ml P³ukanie, 50 mm Tris oraz immunoglobulina królicza (IgG) z 0,2% azydku sodu (œrodek konserwuj¹cy) Odczynnik do wykrywania 2 2,3 ml Wykrywanie, przeciwcia³a monoklonalne przeciw influenzie typu (mysie, klony 84 i 85) sprzê one z zasadow¹ fosfataz¹, z 0,2% azydku sodu (œrodek konserwuj¹cy) Odczynnik do wykrywania 3 2,3 ml Wykrywanie, przeciwcia³a monoklonalne przeciw influenzie typu (mysie, klony 9) sprzê one z zasadow¹ fosfataz¹, z 0,2% azydku sodu (œrodek konserwuj¹cy) Odczynnik do p³ukania 4 6,5 ml P³ukanie, 5% butanolu, 2 M mocznika oraz 100 mm Hepes z 0,2% azydku sodu (œrodek konserwuj¹cy) Odczynnik do p³ukania 5 10,5 ml P³ukanie, 50 mm Tris, 150 mm NaCl oraz 16 mm inhibitora z 0,2% azydku sodu (œrodek konserwuj¹cy) Odczynnik do substratu 6 5,8 ml Substrat, 0,73 mm œrodka wywo³uj¹cego barwê Odczynnik zatrzymuj¹cy 7 4,1 ml Zatrzymanie, 150 mm kwasu cytrynowego Kontrola +/- 2,0 ml Kontrola pozytywna wzglêdem testu Flu i negatywna wzglêdem testu Flu, antygen influenzy typu (nukleoproteid rekombinowany nieczynny, H1N1) z 0,1% azydku sodu (œrodek konserwuj¹cy) Kontrola +/- 2,0 ml Kontrola pozytywna wzglêdem testu Flu i negatywna wzglêdem testu Flu, antygen influenzy typu (nukleoproteid rekombinowany nieczynny, Lee 40) z 0,1% azydku sodu (œrodek konserwuj¹cy) Probówki DispensTube 20 Probówki do ekstrakcji próbek i dostarczania ich do urz¹dzenia Koñcówki DispensTube 20 Koñcówki do filtrowania próbki po jej dostarczeniu do urz¹dzenia Ostrze enia i œrodki ostro noœci: Do stosowania w diagnostyce in vitro 1 Je eli zaka enie nowym wirusem grypy jest podejrzewane na podstawie aktualnych klinicznych i epidemiologicznych kryteriów wynikaj¹cych z badañ populacji, zalecanych przez organy zdrowia publicznego, próbki powinny zostaæ pobrane z zastosowaniem œrodków ostro noœci w³aœciwych dla kontroli zaka enia nowymi zjadliwymi wirusami grypy i wys³ane do pañstwowych lub lokalnych wydzia³ów zdrowia w celu ich zbadania W takich przypadkach nie nale y podejmowaæ prób hodowli wirusów, o ile nie jest dostêpne laboratorium SL 3+ do przyjêcia i hodowli próbek 2 W próbkach klinicznych mog¹ wystêpowaæ mikroorganizmy chorobotwórcze, w tym wirusy ó³taczki i ludzki wirus braku odpornoœci (HIV) Podczas pracy ze wszelkimi materia³ami ska onymi krwi¹ i innymi p³ynami ustrojowymi nale y przestrzegaæ Standardowych œrodków ostro noœci oraz wytycznych obowi¹zuj¹cych w danej placówce Pojemniki na próbki oraz inne ska one wyposa enie i materia³y nale y przed wyrzuceniem poddaæ sterylizacji w autoklawie 3 Mo na zaobserwowaæ ró nice w skutecznoœci tego badania, kiedy jest ono stosowane na próbkach pobranych od osób doros³ych i od dzieci, lecz specyficzne ró nice nie s¹ znane 4 Nie u ywaæ odczynników po up³ywie terminu wa noœci 5 NIE mieszaæ odczynników pochodz¹cych z partii o ró nych numerach ani nie zamieniaæ nakrêtek butelek z odczynnikami 6 Nie u ywaæ ponownie urz¹dzeñ ColorPC Stosowanie czasów i temperatur inkubacji innych ni zalecane mo e byæ przyczyn¹ uzyskania b³êdnych wyników 7 by zakraplanie odbywa³o siê poprawnie, butelki z odczynnikami musz¹ byæ trzymane pionowo (w odleg³oœci oko³o 2,5 centymetra od b³ony ColorPC lub probówki), a krople powinny spadaæ pojedynczo, szybko, jedna po drugiej 8 Unikaæ kontaktu odczynników ze skór¹ i b³onami œluzowymi Jeœli to nast¹pi, nale y sp³ukaæ te miejsca wod¹ i skontaktowaæ siê z lekarzem 9 Odczynniki zawieraj¹ azydek sodu, który jest szkodliwy przy wdychaniu, przy kontakcie ze skór¹ oraz w razie po³kniêcia Przy kontakcie z kwasami uwalnia silnie toksyczny gaz Jeœli dojdzie do kontaktu ze skór¹, natychmiast sp³ukaæ du ¹ iloœci¹ wody zydek sodu mo e reagowaæ z o³owiem i miedzi¹ wystêpuj¹cymi w instalacjach kanalizacyjnych, w wyniku czego mog¹ powstaæ silnie wybuchowe azydki metali Po wylaniu przep³ukaæ du ¹ iloœci¹ wody, aby zapobiec gromadzeniu siê azydku 10 Do pobierania wymazów nosowo-gard³owych (NPS) s¹ zalecane waciki poliestrowe lub z koñcówk¹ ze sztucznego jedwabiu na drucie aluminiowym Stwierdzono, e waciki z alginiatu wapniowego nie mog¹ byæ stosowane podczas testów Directigen Flu + 11 Odczynniki do kontroli +/- oraz +/- zosta³y przygotowane z hodowli komórek rekombinowanych, a nie z hodowli wirusowych Nie u ywaæ zestawu, jeœli kontrole +/- i +/- nie daj¹ w³aœciwych wyników 12 Przed u yciem wyj¹æ urz¹dzenie ColorPC z foliowej torebki Nie u ywaæ, jeœli w torebce nie by³o œrodka poch³aniaj¹cego wilgoæ Przechowywanie i sposób postêpowania: Przechowywaæ w temperaturze otoczenia lub w ch³odziarce (2 25 C ) NIE ZMR Æ 2

3 POIERNIE PRÓEK I OCHODZENIE SIÊ Z NIMI Transport i przechowywanie próbek Œwie e próbki nale y jak najszybciej przetransportowaæ do laboratorium, korzystaj¹c z odpowiedniego systemu transportu p³ynów w lodzie lub w ch³odziarce (temperatura do 2 do 8 C) Próbki nale y poddaæ obróbce w mo liwie najkrótszym czasie po ich pobraniu W razie potrzeby próbki mog¹ byæ przechowywane w temperaturze od 2 do 8 C maksymalnie przez 72 godziny lub w temperaturze -20 C przez 7 dni od chwili pobrania Preferowane jest u ycie œwie ych próbek, poniewa wynikiem ich zamro enia mo e byæ obni ona czu³oœæ testu Unikaæ wielokrotnych cykli zamra ania i rozmra ania Nie przechowywaæ próbek w ch³odziarce z systemem automatycznego rozmra ania ardzo wa ne jest przestrzeganie poprawnych metod pobierania próbek i ich przygotowywania Nie nale y odwirowywaæ próbek przed wykonaniem testu Directigen Flu +, poniewa usuniêcie materia³u komórkowego mo e niekorzystnie wp³ywaæ na czu³oœæ testu Próbki pobrane na wczesnym etapie choroby zawieraj¹ najwy sze miana wirusa Pod³o e transportowe: u ywaæ nastêpuj¹cych pod³o y transportowych, zbadanych i zgodnych z testem Directigen Flu +: Roztwór soli fizjologicznej, Fosforan sacharozy stê enie normalne Roztwór soli fizjologicznej Po ywka Trypticase Soy roth plus 0,5% S buforowany fosforanem (Phosphate uffered Saline, PS) PS plus 0,5% elatyny Po ywka Trypticase Soy roth plus 0,5% elatyny PS plus 0,5% albuminy surowicy bydlêcej Minimalna po ywka Earle a (Earle s Minimum Essential Media, EMEM) (ovine Serum lbumin, S) ulion infuzyjny cielêcy EMEM z 0,5% S (Veal Infusion roth, VI) VI plus 0,5% S EMEM z 1% S Viral Culturette EMEM z 0,5% hydrolizatem albuminy mleka Po ywka M4 EMEM z 1,0% hydrolizatem albuminy mleka Po ywka M5 CultureSwab Stuart s Medium (zobacz Dostêpnoœæ ) Pod³o e artels CultureSwab Liquid mies Medium (zob Dostêpnoœæ ) Inne pod³o a transportowe mog¹ byæ stosowane, jeœli wykonano odpowiednie badania kwalifikacyjne W celu zachowania œrodków ostro noœci przed u yciem wszystkie pod³o a transportowe powinny byæ badane pod k¹tem stosowania z testem Directigen Flu + by dokonaæ kwalifikacji pod³o a transportowego, jego jednakowe objêtoœci nale y posiaæ materia³em o znanej wartoœci dodatniej (innym ni zawarte w zestawie kontrole +/- lub +/-) oraz materia³em o znanej wartoœci ujemnej, a uzyskane próbki zbadaæ za pomoc¹ testu Konieczne jest uzyskanie odpowiednich wyników Pobieranie i przygotowywanie próbek Próbki nadaj¹ce siê do testu obejmuj¹ p³ukanki nosowo-gard³owe, aspiraty nosowo-gard³owe, wymazy nosowogard³owe, wymazy z ni szej czêœci jamy nosowej (ma³ owiny nosa), wymazy z gard³a oraz p³ukanki oskrzelowo-p³ucne Niewystarczaj¹ca iloœæ próbki, niew³aœciwe obchodzenie siê z próbk¹ i/lub niew³aœciwy transport mog¹ spowodowaæ otrzymanie fa³szywych negatywnych wyników W zwi¹zku z tym, zaleca siê przeszkolenie personelu w pobieraniu próbek z powodu wagi, jak¹ odgrywa jakoœæ próbek w uzyskaniu dok³adnych wyników badania UWG: Próbki o nadmiernej zawartoœci œluzu mog¹ czasami nie byæ absorbowane przez b³ony ColorPC lub dawaæ wyniki niemo liwe do interpretacji Próbki tego typu mo na rozcieñczyæ w proporcji 1:4 przy pomocy 0,9% roztworu soli lub pod³o a transportowego wirusa albo doprowadziæ do standardu 1,0 McFarland, dobrze wymieszaæ i ponownie przebadaæ 200 µl alikwoty Procedura stosowana w przypadku p³ukanek nosowo-gard³owych i oskrzelowo-p³ucnych 1 Zalecana objêtoœæ p³ukanek to 2 3 ml 2 Nadmierna objêtoœæ p³ukanki mo e zmniejszyæ czu³oœæ testu 3 Próbki badaæ zgodnie z opisem podanym w rozdziale Procedura testowa Procedura stosowana w przypadku aspiratów nosowo-gard³owych 1 Próbki aspiratów nosowo-gard³owych o objêtoœci mniejszej ni 0,5 ml rozcieñczyæ przed badaniem w 2 ml pod³o a transportowego lub roztworu soli fizjologicznej 2 Próbki aspiratów wiêksze ni 0,5 ml wymagaj¹ dodania co najmniej 4 ml pod³o a transportowego lub roztworu soli fizjologicznej 3 Próbki badaæ zgodnie z opisem podanym w rozdziale Procedura testowa Procedura stosowana w przypadku wymazów nosowo-gard³owych, z ni szej czêœci jamy nosowej lub z gard³a 1 Próbki wymazów z gard³a mo na badaæ, bez rozcieñczania za pomoc¹ pod³o a transportowego, przez bezpoœredni¹ ekstrakcjê przeprowadzon¹ zgodnie z opisem podanym w rozdziale Procedura testowa Wymazy z gard³a mo na natychmiast po pobraniu umieœciæ w 1 2 ml pod³o a transportowego lub roztworu soli fizjologicznej 2 Próbki wymazów nosowo-gard³owych i z dolnej czêœci jamy nosowej natychmiast po pobraniu powinny byæ umieszczone w 1 2 ml pod³o a transportowego lub roztworu soli fizjologicznej 3 Wacik dobrze wymieszaæ w pod³o u transportowym lub roztworze soli fizjologicznej 4 Mo liwie najdok³adniej wycisn¹æ wacik 5 Wyrzuciæ wacik do odpowiedniego pojemnika na odpadki 6 Próbki badaæ zgodnie z opisem podanym w rozdziale Procedura testowa 3

4 PROCEDURY Materia³y dostarczone: zobacz Elementy zestawu i odczynniki, aby zapoznaæ siê z dostarczonymi materia³ami Materia³y niezbêdne, ale niedostarczane: wyposa enie i sprzêt laboratoryjny konieczne do transportowania, przechowywania, obróbki i przydzielania próbek; mieszad³o Przeprowadzanie testu: Przegl¹d rozdzia³ów OSTRZE ENI I ŒRODKI OSTRO NOŒCI, POIERNIE PRÓEK I OCHODZENIE SIÊ Z NIMI oraz INTERPRETCJ WYNIKÓW Odczynniki, próbki oraz urz¹dzenia ColorPC musz¹ mieæ temperaturê pokojow¹ (15 30 C) PROCEDUR TESTOW Umieœciæ probówkê DispensTube w okreœlonym miejscu w stacji roboczej Przygotowanie urz¹dzenia ColorPC Wyj¹æ urz¹dzenie ColorPC z torebki tu przed u yciem Docisn¹æ, aby uzyskaæ pewnoœæ, e kontroler przep³ywu jest œciœle dopasowany do obu studzienek urz¹dzenia ColorPC E or E Ekstrakcja próbki Wszystkie próbki z wyj¹tkiem wymazów z gard³a u ywaæ bez pod³o a transportowego: Delikatnie zamieszaæ odczynnik E i odmierzyæ 8 kropli odczynnika E do probówki DispensTube Dok³adnie wymieszaæ próbkê Za pomoc¹ pipety odmierzyæ 200 µl próbki do probówki DispensTube Wymazy z gard³a bez pod³o a transportowego: Delikatnie zamieszaæ odczynnik E i odmierzyæ 16 kropli odczynnika E do probówki DispensTube W³o yæ wacik do probówki DispensTube Mieszaæ przez sekund, równoczeœnie wyciskaj¹c wacik o œcianki probówki DispensTube Wyj¹æ wacik, wyciskaj¹c go w celu usuniêcia nadmiaru p³ynu UWG: Kontrola jakoœci Kontrole +/- lub +/- mog¹ byæ u ywane zamiast próbek od pacjentów w celu wykonania kontroli jakoœci Odmierzyæ 8 kropli odczynnika E do probówki DispensTube, a nastêpnie dodaæ 4 krople dobrze wymieszanej kontroli +/- lub +/- Dok³adnie wymieszaæ Wykonaæ procedurê testow¹ w celu odmierzenia kropel wyekstrahowanej kontroli +/na przemian do obu studzienek pojedynczego urz¹dzenia testowego Kontrola +/- s³u y jako kontrola dodatnia dla testu Flu oraz kontrola ujemna dla testu Flu Procedurê powtórzyæ w osobnym urz¹dzeniu w celu zastosowania kontroli +/- Kontrola +/- to kontrola dodatnia dla testu Flu oraz ujemna dla testu Umieœciæ koñcówkê DispensTube w probówce DispensTube Dok³adnie odwirowaæ lub zamieszaæ UWG: Nie u ywaæ koñcówek pochodz¹cych z innych produktów Directigen Odwróciæ probówkê DispensTube i, przytrzymuj¹c j¹ w górnej po³owie, z dala od koñcówki, delikatnie œcisn¹æ UWG: Œciœniêcie probówki w pobli u koñcówki mo e spowodowaæ jej wysuniêcie i wyciek zawartoœci Odmierzyæ kroplami wyekstrahowan¹ próbkê (unikaj¹c Kropla tworzenia zbyt wielu pêcherzyków), dodaj¹c po kropli na przemian do studzienek i do chwili dodania 4 kropli do ka dej studzienki w urz¹dzeniu ColorPC W ten sposób do pojedynczego urz¹dzenia testowego nale y dodaæ 8 kropli wyekstrahowanej próbki Podczas badania wyci¹gu kontrolnego wyekstrahowan¹ kontrolê +/- nale y dodaæ do obu naczyñ pojedynczego urz¹dzenia testowego ColorPC; podobnie wyekstrahowan¹ kontrolê +/- nale y dodaæ do obu naczyñ pojedynczego urz¹dzenia testowego ColorPC Odczekaæ, a próbki zostan¹ ca³kowicie wch³oniête Jeœli próbka nie zostanie wch³oniêta do urz¹dzenia w ci¹gu piêciu minut, nale y j¹ rozcieñczyæ w sposób opisany w rozdziale Pobieranie i przygotowywanie próbek i poddaæ ponownemu badaniu C Uzyskiwanie barwy Usun¹æ kontroler przep³ywu Zu yty sprzêt wyrzuciæ jako stanowi¹cy zagro enie biologiczne 4

5 1 Odczynnik 1 delikatnie zamieszaæ Dodaæ po 2 krople do ka dej studzienki Odczekaæ do ca³kowitego wch³oniêcia 2 Odczynnik 2 delikatnie zamieszaæ Dodaæ 2 krople wy³¹cznie do studzienki Niezw³ocznie rozpocz¹æ dodawanie odczynnika 3 3 Odczynnik 3 delikatnie zamieszaæ Dodaæ 2 krople wy³¹cznie do studzienki Odczekaæ do ca³kowitego wch³oniêcia odczynników w studzienkach i Odstawiæ na 2 minuty 4 Odczynnik 4 delikatnie zamieszaæ Dodaæ po 3 krople do ka dej studzienki Odczekaæ do ca³kowitego wch³oniêcia 5 Odczynnik 5 delikatnie zamieszaæ Dodaæ po 3 krople do ka dej studzienki Odczekaæ do ca³kowitego wch³oniêcia 6 Odczynnik 6 delikatnie zamieszaæ Dodaæ po 3 krople do ka dej studzienki Odczekaæ do ca³kowitego wch³oniêcia (UWG: ³ona mo e zmieniæ kolor na ó³ty) Odstawiæ na 5 minut 7 Odczynnik 7 delikatnie zamieszaæ Dodaæ po 2 krople do ka dej studzienki Odczekaæ do ca³kowitego wch³oniêcia 5

6 INTERPRETCJ WYNIKÓW Wynik testu nale y odczytywaæ w dobrze oœwietlonym miejscu i notowaæ Jeœli to konieczne, wyniki mo na odczytywaæ do 9 godzin po dodaniu odczynnika 7 (odczynnika zatrzymuj¹cego) Wynik dodatni powinien byæ opisany jako dodatni pod k¹tem obecnoœci antygenu influenzy typu i/lub influenzy typu Wynik ujemny powinien byæ opisany jako przypuszczenie nieobecnoœci antygenów influenzy typu / Wynik dodatni testu Flu (obecny antygen) Fioletowy trójk¹t (dowolnej intensywnoœci) pojawia siê w studzience na b³onie urz¹dzenia ColorPC i informuje o wykryciu antygenu influenzy typu w badanej próbce Ten wynik nie rozpoznaje adnego podtypu wirusa grypy typu T³o powinno mieæ barwê od jasno ó³tej do jasnofioletowej arwa fioletowa nie powinna wystêpowaæ w œrodku trójk¹ta, chyba e jest zamaskowana intensywn¹ reakcj¹ dodatni¹ Wynik dodatni testu Flu Wynik ujemny test Flu Wynik dodatni testu Flu (obecny antygen) Fioletowy trójk¹t (dowolnej intensywnoœci) pojawia siê w studzience na b³onie urz¹dzenia ColorPC i informuje o wykryciu antygenu influenzy typu w badanej próbce T³o powinno mieæ barwê od jasno ó³tej do jasnofioletowej arwa fioletowa nie powinna wystêpowaæ w œrodku trójk¹ta, chyba e jest zamaskowana intensywn¹ reakcj¹ dodatni¹ Wynik dodatni testu Flu Wynik ujemny testu Flu Wynik ujemny Test Flu lub Flu Wynik ujemny testu Flu lub Flu (brak antygenu w odpowiednich studzienkach) rak fioletowego trójk¹ta w studzience lub albo w obu, wskazuj¹cy, e w próbce nie wykryto antygenu influenzy typu lub typu albo obu Te wyniki nie wykluczaj¹ zaka enia wirusem grypy W studzience lub albo w obu pojawia siê fioletowa kropka na b³onie ColorPC, wskazuj¹c, e procedury badania zosta³y prawid³owo wykonane i u yto odpowiednich odczynników T³o powinno mieæ barwê od jasno ó³tej do jasnofioletowej Niemo liwie do zinterpretowania wyniki testu Flu lub Wyniki testu niemo liwe do zinterpretowania Wyników testu Flu, Flu albo obu testów nie mo na zinterpretowaæ, jeœli w odpowiedniej studzience nie ma ani fioletowej kropki, ani fioletowego trójk¹ta Test, w którym powstaje niekompletny trójk¹t, tak e nale y uznaæ za niemo liwy do zinterpretowania W razie powstanie takiego wyniku test nale y powtórzyæ Wynik testu Flu, Flu albo obu typów jest tak e niemo liwy do zinterpretowania, jeœli na b³onie ColorPC pojawi siê bia³y trójk¹t, a jednoczeœnie ca³e t³o ma barwê fioletow¹ W œrodku bia³ego trójk¹ta mo e byæ widoczna przyt³umiona barwna kropka Ponadto wynik testu jest niemo liwy do zinterpretowania, jeœli ca³y obszar b³ony jest fioletowy i nie widaæ kropki kontrolnej by rozwi¹zaæ te problemy, nale y rozcieñczyæ próbkê w stosunku 1:4 0,9% roztworem soli fizjologicznej lub pod³o a transportowego i powtórzyæ test Próbki o nadmiernej zawartoœci œluzu mog¹ nie byæ absorbowane przez b³ony ColorPC lub dawaæ wyniki niemo liwe do interpretacji Mo na je rozcieñczyæ w proporcji 1:4 roztworem soli fizjologicznej, dobrze wymieszaæ i ponownie przebadaæ Kontrola jakoœci: Ka de urz¹dzenie ColorPC wchodz¹ce w sk³ad testu Directigen Flu + zawiera wewnêtrzne kontrole procedur: dodatni¹ i ujemn¹ Pojawienie siê fioletowej kropki kontrolnej w studzienkach i zapewnia wewnêtrzn¹ dodatni¹ kontrolê procedur, stanowi¹c¹ dowód na skutecznoœæ immunologiczn¹ urz¹dzenia i odpowiednie dzia³anie odczynników oraz zapewniaj¹c¹ o poprawnym wykonaniu badania Uwaga: Intensywnoœæ barwy kropki kontrolnej mo e byæ ró na w studzience i Obszar b³ony otaczaj¹cej trójk¹t umo liwia negatywn¹ kontrolê procedur w danym urz¹dzeniu rak wyraÿnej barwy w obrêbie tego obszaru, przys³aniaj¹cej trójk¹t lub kropkê kontroln¹ wskazuje, e test zosta³ wykonany poprawnie Do ka dego zestawu do³¹czone s¹ tak e p³ynne kontrole dodatnie +/- oraz +/- Mo na je stosowaæ jako dodatkowe kontrole jakoœci w celu wykazania reakcji dodatniej lub ujemnej Powinny byæ wykonywane w celu przeprowadzenia kontroli jakoœci procedur przynajmniej raz dla ka dej partii otrzymanych urz¹dzeñ Powstanie fioletowego trójk¹ta na b³onie w studzience urz¹dzenia ColorPC podczas kontroli +/- oraz w studzience podczas kontroli +/- dowodzi, e b³ona ma w³aœciwoœci wi¹zania antygenu influenzy Powstanie wy³¹cznie fioletowej kropki kontrolnej w studzience urz¹dzenia ColorPC podczas kontroli +/- to odpowiedni wynik kontroli ujemnej testu Flu, wskazuj¹cy, e odczynniki dzia³aj¹ poprawne, a badanie zosta³o odpowiednio przeprowadzone Podobnie powstanie wy³¹cznie fioletowej kropki kontrolnej w studzience podczas kontroli +/- to odpowiedni wynik ujemny kontroli testu Flu Nie u ywaæ zestawu, jeœli kontrole +/- i +/- nie daj¹ w³aœciwych wyników Kontrole p³ynne mog¹ byæ tak e stosowane w celu wykazania s³abej reakcji dodatniej S³absze reakcje dodatnie mo na uzyskaæ, rozcieñczaj¹c zarówno kontrolê +/-, jak i kontrolê +/- w tej samej probówce DispensTube (2 krople kontroli +/- i 2 krople kontroli +/- dodane do 10 kropli odczynnika do ekstrakcji E) Skutecznoœæ odczynników oraz stosowanej techniki mo na tak e oceniæ za pomoc¹ próbek o znanej wartoœci dodatniej lub ujemnej Nale y postêpowaæ zgodnie z obowi¹zuj¹cymi wymogami kontroli jakoœci, wynikaj¹cymi z przepisów miejscowych, krajowych i (lub) federalnych, wymogami akredytacji i rutynowymi procedurami kontroli jakoœci w danym laboratorium Zaleca siê, aby u ytkownik stosowa³ siê do odpowiednich zaleceñ CLSI (dawniej NCCLS) i przepisów CLI, dotycz¹cych sposobów kontroli jakoœci 6

7 OGRNICZENI PROCEDURY Za pomoc¹ tego testu nie mo na okreœliæ etiologii infekcji dróg oddechowych wywo³anych przez mikroorganizmy inne ni wirusy influenzy typu lub Test Directigen Flu + mo e tak e s³u yæ do wykrywania ywych i niezdolnych do ycia cz¹stek wirusa influenzy typu i Skutecznoœæ testu Directigen Flu + zale y od zawartoœci antygenów i mo e nie mieæ zwi¹zku z wynikami hodowli komórkowych z tej samej próbki Niskie poziomy wydalania wirusów mog¹ daæ fa³szywy negatywny wynik Oznacza to, e ujemny wynik testu nie wyklucza mo liwoœci zaka enia wirusem grypy typu, typu lub obu typami wirusa grypy Tak jak w przypadku wszystkich procedur diagnostycznych, wyniki uzyskane za pomoc¹ testu Directigen Flu + powinny byæ stosowane w po³¹czeniu z innymi informacjami klinicznymi dostêpnymi lekarzowi Cechy wyników dla wirusa grypy typu zosta³y ustalone, kiedy wirusy /H3 i /H1 by³y przewa aj¹cymi wirusami grypy typu w obiegu Kiedy wy³aniaj¹ siê inne wirusy grypy typu, cechy wyników mog¹ siê ró niæ Dzieci mog¹ wydalaæ wirusy przez d³u sze okresy ni osoby doros³e, co mo e spowodowaæ ró nice w czu³oœci miêdzy doros³ymi i dzieæmi Pozytywne i negatywne wartoœci okreœlaj¹ce zale ¹ w wysokim stopniu od prewalencji Fa³szywe pozytywne wyniki testu s¹ bardziej prawdopodobne w okresach niskiej aktywnoœci grypy, kiedy prewalencja jest umiarkowana lub niska U ytecznoœæ testu Directigen Flu + do identyfikacji/potwierdzania izolatów hodowli komórkowych nie zosta³a dowiedziona; test nie powinien byæ w ten sposób wykorzystywany Test nie zosta³ opracowany w celu badania skutecznoœci leczenia antywirusowego grypy OCZEKIWNE WRTOŒCI Liczba wyników dodatnich obserwowana w testach wirusa influenzy ró ni siê w zale noœci od metody pobierania próbek, sposobu postêpowania/transportu, metody wykrywania, okresu roku, wieku pacjenta, lokalizacji geograficznej oraz, co najwa niejsze, prewalencji na danym obszarze Prewalencja grypy jest ró na w ka dym roku W ci¹gu ostatnich 3 lat w Stanach Zjednoczonych waha³a siê od 28 do 34% 20 Przypadki grypy typu s¹ rzadsze ni infekcje grypowe typu W okresie od 1999 do 2000 r w US zachorowalnoœæ na grypê typu u pacjentów zdiagnozowanych jako chorzy na grypê wynosi³a 99,6%, prewalencja grypy typu wynosi³a 0,4% 20 Na podstawie metody hodowli okreœlono, e prewalencja obserwowana w US w okresie prowadzenia badañ klinicznych tego wyrobu waha³a siê od 0 do 33,9% w przypadku grypy typu oraz od 0 do 16,2% w przypadku grypy typu Œrednia prewalencja obserwowana podczas badañ klinicznych testu Directigen Flu + wynosi³a 17,9% w przypadku grypy typu i 2,6% w przypadku grypy typu CHRKTERYSTYK WYDJNOŒCIOW Skutecznoœæ testu Directigen Flu + zosta³a okreœlona podczas badañ prowadzonych w szeœciu oœrodkach klinicznych oraz dwóch gabinetach lekarskich w sezonie grypowym Oœrodki kliniczne by³y po³o one w Kanadzie, Hongkongu oraz na zró nicowanych pod wzglêdem geograficznym obszarach Stanów Zjednoczonych Przy u yciu testu Directigen Flu + zbadano ogóln¹ liczbê 1262 próbek obejmuj¹cych aspiraty nosowo-gard³owe, p³ukanki nosowo-gard³owe, wymazy nosowo-gard³owe, wymazy z ni szej czêœci jamy nosowej, wymazy z nosa/gard³a oraz p³ukanki oskrzelowo-p³ucne, uzyskanych od 1046 pacjentów z objawami grypy W jednym oœrodku klinicznym od ka dego z 216 pacjentów pobierano zarówno wymazy nosowo-gard³owe, jak i wymazy z ni szej czêœci jamy nosowej W zbadanej grupie by³o 58 zamro onych próbek, sk³adaj¹cych siê z wczeœniej wybranych próbek dodatnich wzglêdem wirusa influenzy typu, dodatnich wzglêdem wirusa influenzy typu oraz ujemnych wzglêdem wirusa influenzy typu / Dystrybucja zamro onych próbek zosta³a okreœlona dla ka dej poni szej tabeli danych Próbki oceniane w oœrodku badawczym by³y pobierane i transportowane do laboratoriów zgodnie z procedur¹ stosowan¹ w ka dym z nich Na ka dej próbce przeprowadzono nastêpuj¹ce testy: Directigen Flu +, hodowla komórkowa oraz bezpoœrednie DF próbek Pozosta³e próbki poddano archiwizacji w temperaturze -20 C lub ni szej Metody Hodowla komórkowa: W hodowli komórkowej czêœæ próbki posiano na komórki nerki rezusa (Rhesus Monkey Kidney, RMK) lub psa (Madin-Darby Canine Kidney, MDCK) Komórki badano pod k¹tem wyst¹pienia efektu cytopatycznego (CPE) W zainfekowanych komórkach potwierdzano influenzy typu lub przy u yciu przeciwcia³ fluorescencyjnych (Direct Fluorescent ntibody, DF) Próbki z wynikiem ujemnym pod wzglêdem CPE po up³ywie czternastu dni barwiono DF w celu sprawdzenia wyniku ujemnego ezpoœrednie barwienie DF próbek: W celu wykonania bezpoœrednich testów DF czêœæ ka dej próbki u yto do przygotowania rozmazu do badania przeciwcia³ fluorescencyjnych influenzy i RT-PCR: RT-PCR wykonywano na wszystkich dostêpnych próbkach, które da³y wynik ujemny w hodowli oraz dodatni w bezpoœrednim badaniu DF W ten sposób oceniano tak e podklasê próbek o innych kombinacjach wyników Dok³adnoœæ kliniczna Dla wszystkich badanych próbek ³¹czna czu³oœæ testu Directigen Flu + w przypadku influenzy typu wynosi³a 86,2% w porównaniu z hodowl¹ komórkow¹, a w przypadku influenzy typu 80,8% ¹czna swoistoœæ testu w przypadku influenzy typu wynosi³a 90,7% w porównaniu z hodowl¹ komórkow¹, a w przypadku influenzy 99,5% W przypadku influenzy typu 96 próbek da³o wynik ujemny w hodowli komórkowej, a dodatni w teœcie Directigen ezpoœrednie badanie DF da³o wynik dodatni dla 77 z 96 próbek adanie RT-PCR wykonano na 86 z 96 próbek; ³¹cznie 78 próbek da³o wynik dodatni w RT-PCR Poziom niemo liwych do zinterpretowania wyników testu Directigen Flu + w przypadku influenzy typu i wynosi³ 0,08% 7

8 spiraty nosowo-gard³owe (NP): n=350 (jeden niemo liwy do zinterpretowania wynik testu Directigen nie zosta³ ujêty w tabeli ani w charakterystyce skutecznoœci) Wyniki hodowli komórkowych 95% C I +/- -/+ -/- Influenza typu Czu³oœæ 95 7% 44/ Directigen Flu + +/ * Swoistoœæ 91 4% 277/ / ** Influenza typu Czu³oœæ 87 5% 28/ Swoistoœæ 98 1% 311/ / *Spoœród 26 próbek, 20/26 by³o dodatnich wg DF, a 23/25 by³o dodatnich wg RT-PCR **Spoœród 6 próbek, 6/6 by³o ujemnych wg DF i 5/5 by³o ujemnych wg RT-PCR Próbki nosowo-gard³owe (NP) obejmuj¹: P³ukankê nosowo-gard³ow¹ i/lub wymaz nosowo-gard³owy n=512 Wyniki hodowli komórkowych 95% C I +/- -/+ -/- Influenza typu Czu³oœæ 88 5% 100/ Directigen Flu + +/ * Swoistoœæ 89 7% 358/ /+ 0 12** 0 Influenza typu Czu³oœæ 70 6% 12/ Swoistoœæ 100% 495/ /- 13 5** 341 *Spoœród 41 próbek 32/41 by³o dodatnich wg DF, a 30/35 by³o dodatnich wg RT-PCR ** Zamro one (zarchiwizowane) próbki wirusa influenzy typu Uwaga: Spoœród 50 przebadanych zamro onych zarchiwizowanych próbek 10/13 próbek o wyniku dodatnim w hodowli da³o wynik dodatni w teœcie Directigen Flu +, natomiast 37/37 próbek o wyniku ujemnym w hodowli da³o wynik ujemny w teœcie Directigen Flu + w przypadku influenzy typu W przypadku influenzy typu 12/17 próbek o wyniku dodatnim w hodowli da³o wynik dodatni w teœcie Directigen Flu +, natomiast 33/33 próbki o wyniku ujemnym w hodowli da³o wynik ujemny w teœcie Directigen Flu + Próbki nosowe/gard³owe (NTS) obejmuj¹: Wymazy z gard³a (TS) i/lub wymazy z ni szej czêœci jamy nosowej (LNS) n=389 Wyniki hodowli komórkowych 95% C I +/- -/+ -/- Influenza typu Czu³oœæ 76 7% 56/ Swoistoœæ 90 8% 287/ Directigen Flu + +/ * Influenza typu Czu³oœæ 0 0% 0/ / Swoistoœæ 100% 388/ /- 17 1** 286 *Spoœród 29 próbek, 25/29 by³o dodatnich wg DF, a 25/26 by³o dodatnich wg RT-PCR ** Zamro one (zarchiwizowane) próbki wirusa influenzy typu Uwaga: W przypadku influenzy typu spoœród 5 przebadanych zamro onych zarchiwizowanych próbek 3/3 próbki o wyniku dodatnim w hodowli da³o wynik dodatni w teœcie Directigen Flu + oraz 2/2 próbki o wyniku ujemnym w hodowli da³o wynik ujemny w teœcie Directigen Flu + W przypadku influenzy typu 0/1 próbek o wyniku dodatnim w hodowli da³o wynik dodatni w teœcie Directigen Flu +, natomiast 4/4 próbki o wyniku ujemnym w hodowli da³o wynik ujemny w teœcie Directigen Flu + P³ukanka oskrzelowo-p³ucna (L): n=11 Wyniki hodowli komórkowych +/- -/+ -/- Directigen Flu + +/ /+ 0 2* 0 -/ * Zamro one (zarchiwizowane) próbki influenzy typu ** N/ = nie dotyczy 95% C I Influenza typu Czu³oœæ N/** N/** N/** Swoistoœæ 100% 11/ Influenza typu Czu³oœæ 100% 2/ Swoistoœæ 100% 9/ Uwaga: W przypadku influenzy typu spoœród 3 przebadanych zamro onych zarchiwizowanych próbek 3/3 próbki o wyniku ujemnym w hodowli da³o wynik ujemny w teœcie Directigen Flu + W przypadku influenzy typu 2/2 próbki o wyniku dodatnim w hodowli da³o wynik dodatni w teœcie Directigen Flu +, natomiast 1/1 próbka o wyniku ujemnym w hodowli da³a wynik ujemny w teœcie Directigen Flu + nalizy par próbek: W jednym oœrodku klinicznym od ka dego z 216 pacjentów pobierano zarówno wymazy nosowo-gard³owe, jak i wymazy z ni szej czêœci jamy nosowej Wszystkie próbki z tego oœrodka da³y wynik ujemny dla influenzy typu zarówno w hodowli, jak i w teœcie Directigen Flu + Nie wykryto statystycznie istotnych ró nic miêdzy typami próbek zarówno w teœcie Directigen Flu +, jak i w hodowli komórkowej 8

9 Directigen Flu + wymaz nosowo-gard³owy + wymaz z ni szej czêœci jamy nosowej % zgodnoœci = 206/216 = 95,4% Hodowla komórkowa wymaz nosowo-gard³owy + wymaz z ni szej czêœci jamy nosowej % zgodnoœci = 200/216 = 92,6% Swoistoœæ analityczna i reaktywnoœæ krzy owa Test Directigen Flu + zosta³ oceniony przy u yciu ³¹cznie 90 mikroorganizmów (58 bakterii, dwóch dro d y i 30 wirusów) Izolaty bakterii i dro d y by³y badane w stê eniach od 10 7 do 10 8 CFU/mL akteriê M pneumoniae badano w stê eniu > 10 8 CCU/mL Izolaty wirusowe badano przy mianach miêdzy 10 4 a TCID 50 /ml Influenzê typu C testowano przy mianie 1,6 x CEID 50 /ml aden z mikroorganizmów lub wirusów wymienionych poni ej nie da³ wyniku dodatniego w teœcie Directigen Flu + Panel mikroorganizmów cinetobacter baumannii Kingella kingae Prevotella oralis ctinobacillus suis Klebsiella pneumoniae Proteus mirabilis acteroides fragilis Lactobacillus casei Proteus vulgaris ordetella pertussis Lactobacillus fermentum Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Lactobacillus plantarum Salmonella choleraesuis podkl minnesota Candida glabrata Legionella pneumophila Serratia marcescens Cardiobacterium hominis Listeria monocytogenes Staphylococcus aureus Chlamydia psittaci Moraxella catarrhalis Staphylococcus aureus-(cowen 1) Chlamydia trachomatis Mycobacterium avium Staphylococcus epidermidis Corynebacterium diphtheriae Mycobacterium intracellulare Streptococcus bovis II grupa D Eikenella corrodens Mycobacterium tuberculosis Streptococcus mutans Enterococcus faecalis Mycoplasma orale Streptococcus oralis Enterococcus gallinarum Mycoplasma pneumoniae Streptococcus pneumoniae Escherichia coli Neisseria gonorrhoeae Streptococcus pyogenes Grupa Fusobacterium nucleatum Neisseria meningitidis Streptococcus sanguis Gardnerella vaginalis Neisseria mucosa Streptococcus sp Grupa Haemophilus aphrophilus Neisseria sicca Streptococcus sp Grupa C Haemophilus influenzae Neisseria subflava Streptococcus sp Grupa F Haemophilus parainfluenzae Peptostreptococcus anaerobius Streptococcus sp Grupa G Haemophilus paraphrophilus Porphyromonas asaccharolyticus Veillonella parvula Panel wirusów denowirus Typ 3 Wirus opryszczki Typ 2 denowirus Typ 5 Influenza C/Taylor/1233/47 denowirus Typ 7 Wirus odry Edmonston denowirus Typ 18 Wirus œwinki Wirus Corona Parainfluenca Typ 1 Wirus Coxsackie Typ 9 (Griggs) Parainfluenca Typ 2 Wirus Coxsackie Typ 5 (Faulkner) Parainfluenca Typ 3 Wirus Coxsackie Typ 6 (Schmitt) Wirus nie ytu nosa Typ 1 Wirus Coxsackie Typ 21 (Kuykendall) Wirus nie ytu nosa Typ 2 Wirus Coxsackie Typ 9 P (ozek) Wirus nie ytu nosa Typ 13 Wirus cytomegalii D-169 Wirus nie ytu nosa Typ 16 Wirus ECHO Typ 2 Wirus nie ytu nosa Typ 37 Wirus ECHO Typ 3 Wirus syncytium nab³onka oddechowego (RSV) Wirus ECHO Typ 6 Wirus syncytium nab³onka oddechowego (RSV) Wirus opryszczki Typ 1 Wirus ospy wietrznej i pó³paœca Substancje zak³ócaj¹ce Nastêpuj¹ce substancje przebadano za pomoc¹ testu Directigen Flu + i nie stwierdzono ich wp³ywu na oznaczenie przy badanych poziomach stê eñ: krew pe³na (2%), 4 aerozole do nosa (25%), kwas acetylosalicylowy (20 mg/ml), 3 9

10 p³yny do p³ukania ust (25%), ibuprofen (10 mg/ml), oseltamivir (0,5 mg/ml), zanamivir (1 mg/ml), maleinian chlorofeniraminowy (5 mg/ml), 4 krople do gard³a (25%), gwajafenezyna (20 mg/ml), chlorowodorek difenylohydraminy (5 mg/ml), bromowodorek dekstrometorfanu (10 mg/ml), chlorowodorek pseudoefedryny (20 mg/ml), paracetamol (216 mg/ml), fumaran clemastiny (0 35 mg/ml), chlorowodorek fenylopropanolaminy (20 mg/ml) Czu³oœæ analityczna Czu³oœæ analityczna zosta³a okreœlona dla ³¹cznej liczby 13 szczepów influenzy; siedmiu typu oraz 6 typu Szczepy wirusa influenzy Typ Granica wykrywalnoœci (CEID 50 ) /PR/8/34 (H1N1) 8,2 X /FM/1/47 (H1N1) 5,9 X 10 2 /NWS/33 (H1N1) 1,6 X /Denver/1/57 (H1N1) 6,5 X 10 1 /Port Chalmers/1/73 (H3N2) 2,9 X 10 2 /Victoria/3/73 (H3N2) 3,3 X 10 4 /New Jersey/8/76 (H1N1) 2,1 X 10 2 /Lee/40 1,2 X 10 6 /llen/45 1,8 X 10 2 /Maryland/1/59 4,6 X 10 1 /GL/1739/54 2,5 X 10 3 /Taiwan/2/62 6,6 X 10 2 /Hong Kong/5/72 2,3 X 10 3 Reaktywnoœæ i swoistoœæ szczepów wirusa influenzy typu i Test Directigen Flu + poddano ocenie przy u yciu panelu 62 szczepów influenzy Wszystkie ludzkie i zwierzêce szczepy wirusa influenzy typu da³y dodatnie wyniki w przypadku testu Flu oraz ujemne wyniki w teœcie Flu Wszystkie ludzkie szczepy wirusa influenzy typu da³y dodatnie wyniki w teœcie Flu oraz ujemne wyniki w teœcie Flu Wszystkie znane podtypy hemaglutyniny oraz neuraminidazy influenzy typu przedstawiono poni ej Izolaty ludzkiego wirusa influenzy Typ wirusa Izolaty ludzkiego wirusa influenzy Typ wirusa /PR/8/34 (H1N1) /Human/HongKong/481/97 (H5N1) 1/FM/1/47 (H1N1) /Human/HongKong/482/97 (H5N1) /NWS/33 (H1N1) /Human/HongKong/228156/97 (H5N1) 1/Denver/1/57 (H1N1) /Human/HongKong/229540/97 (H5N1) /New Jersey/8/76 (Hsw N1) (H1N1) /Human/HongKong/242095/97 (H5N1) /HongKong/9821/2000 (H1N1) /Human/HongKong/1073/99 (H9N2) /HongKong/2997/98 (H1N1) /Human/HongKong/1074/97 (H9N2) /HongKong/5405/2000 (H1N1) /Lee/40 /HongKong/6611/2000 (H1N1) /llen/45 /HongKong/15946/2000 (H1N1) /GL/1739/54 /HongKong/16051/2000 (H1N1) /Taiwan/2/62 /Port Chalmers/1/73 (H3N2) /Maryland/1/59 /Victoria/3/73 (H3N2) /HongKong/5/72 /HongKong/114313/2000 (H3N2) /Hong Kong/28637/2000 /HongKong/117393/2000 (H3N2) /Hong Kong/27254/2000 /HongKong/114591/2000 (H3N2) /Hong Kong/28636/2000 /HongKong/119563/2000 (H3N2) /Hong Kong/29130/2000 /HongKong/120277/2000 (H3N2) /Hong Kong/29276/2000 /Hong Kong/68012/2000 (H3N2) /Hong Kong/35952/2000 Izolaty zwierzêcego wirusa influenzy Typ wirusa Izolaty zwierzêcego wirusa influenzy Typ wirusa /Turkey/Kansas/4880/80 (H1N1) /Turkey/Ontario/6118/67 (H8N4) /sia/57 (H2N2) /Chicken/HongKong/G9/97 (H9N2) /Mallard/New York/6750/78 (H2N2) /Swine/HongKong/9/98 (H9N2) /swine/hongkong/5212/99 (H3N2) /Turkey/Wisconsin/66 (H9N2) /Turkey/England/69 (H3N2) /Quail/HongKong/G1/97 (H9N2) /Duck/HongKong/477/78 (H4N6) /Duck/HongKong/865/80 (H10N3) /Chicken/labama/75 (H4N8) /Chicken/Germany/N/49 (H10N7) /Turkey/Wisconsin/68 (H5N9) /Duck/Memphis/546/74 (H11N9) /Goose/HongKong/38/79 (H6N1) /Duck/lberta/60/76 (H12N5) /Turkey/Canada/63 (H6N8) /Gull/MD/704/77 (H13N6) /Turkey/Oregon/71 (H7N3) /Mallard/Gurjev/263/82 (H14N5) /Duck/HongKong/47/76 (H7N2) /Shearwater/W/2576/79 (H15N6) UWG: Nie ustanowiono cech wyników w celu wykrywania wirusa grypy typu w próbkach ludzkich, kiedy wy³aniaj¹ siê inne podtypy wirusa typu ni /H3 i /H1 jako ludzkie czynniki chorobotwórcze 10

11 Odtwarzalnoœæ Odtwarzalnoœæ testu Directigen Flu + poddano ocenie przy u yciu panelu 20 próbek, który obejmowa³ dwa poziomy influenzy typu (s³abo dodatni i wysoce dodatni), dwa poziomy influenzy typu (s³abo dodatni i wysoce dodatni) oraz ujemne kontrole Próbki s³abo dodatnie zarówno w przypadku influenzy typu, jak i influenzy typu znajdowa³y siê na lub w pobli u granicy wykrywalnoœci optycznej w teœcie Directigen Flu + ¹czna dok³adnoœæ testu Directigen Flu + wynios³a 95% w przypadku influenzy typu i 98% w przypadku influenzy typu Odtwarzalnoœæ w laboratorium przy gabinecie lekarskim (Physician Office Laboratory, POL) Test Directigen Flu + by³ oceniany przez piêæ osób w trzech miejscach POL z zastosowaniem tego samego 20- próbkowego panelu, który opisano w rozdziale poœwiêconym odtwarzalnoœci Dwóch techników, laborant pobieraj¹cy krew, recepcjonistka oraz asystent medyczny przeprowadzali w³aœciwe testy Panel oceniano w ci¹gu trzech kolejnych dni ¹czna dok³adnoœæ wynios³a 93% w przypadku influenzy typu oraz 92% w przypadku influenzy typu DOSTÊPNOŒÆ Nr kat Opis Zestaw Directigen Flu + (wirus influenzy typu i ), 20 oznaczeñ L CultureSwab, pojedyncze waciki, p³yn Stuart, opakowanie 50 szt L CultureSwab, pojedyncze waciki, p³yn mies, opakowanie 50 szt PIŒMIENNICTWO 1 Walsh, Paul, et al 2000 Physician s Desk Reference, Medical Economics Company, Inc, Montvale, NJ 2 Kaiser, L, Couch, R, Galasso, G J, Glezen, W P, Webster, R G, Wright, P F, and Hayden, F G 1999 First international symposium on influenza and other respiratory viruses: summary and overview Kapalua, Maui, Hawaii, December 4-6, 1998 ntiviral Res, 42: Cox, N J, and ender, C 1995 The molecular epidemiology of influenza viruses Virology, 6: Todd, S J, Minnich, L, and Waner, J L 1995 Comparison of rapid immunofluorescence procedure with TestPack RSV and Directigen Flu for diagnosis of respiratory syncytial virus and influenza virus J Clin Microbiol 33: McElhaney, J E, Gravenstein, S, Krause, P, Hooton, J W, Upshaw, C M, and Drinka, P 1998 ssessment of markers of the cell-mediated immune response after influenza virus infection in frail older adults Clin Diag Lab Immunol 5: Fan, J, Henrickson, K J, and Savatski, L L 1998 Rapid simultaneous diagnosis of infections with respiratory syncytial viruses and, influenza viruses and, and human parainfluenza virus types 1, 2, and 3 by multiplex quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction-hybridization assay (hexaplex) Clin Infect Diseases 26: Wright, K E, Wilson, G R, Novosad, D, Dimock, C, Tan, D, and Weber, J M 1995 Typing and subtyping of influenza viruses in clinical samples by PCR J Clin Microbiol 33: Kendal, P 1985 Influenza viruses p In H Lennette, (ed ), Laboratory Diagnosis of Viral Infections Marcel Dekker, Inc, New York 9 McQuillen, J, Madeley, C R, and Kendal, P 1985 Monoclonal antibodies for the rapid diagnosis of influenza and virus infections by immunofluorescence Lancet ii: Guenthner, S H, and Linnemann, C C, Jr 1988 Indirect immunofluorescence assay for rapid diagnosis of influenza virus Laboratory Medicine 19: Minnick, L L, and Ray, C G 1986 Early testing of cell cultures for detection of hemadsorbing viruses J Clin Microbiol 25: Schmidt, N J, Ota, M, Gallo, D, and Fox, V L 1982 Monoclonal antibodies for rapid, strain specific identification of influenza virus isolates J Clin Microbiol 16: Shu, L L, ean, W J, and Webster, R G 1993 nalysis of the evolution and variation of the human influenza virus nucleoprotein gene from 1933 to 1990 J Virol 67: Dowdle, W R, Kendal, P, and Noble, G R 1980 Influenza Virus, p In Lennette, et al (ed ), Manual of Clinical Microbiology, 3rd ed, merican Society for Microbiology, Washington, D C 15 Kendal, P, and Dowdle, W R 1986 Influenza Virus, p In Lennette et al (ed ), Manual of Clinical Laboratory Immunology, 3rd ed, merican Society for Microbiology, Washington, D C 16 National Committee for Clinical Laboratory Standards 2001 pproved Guideline M29-2 Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed NCCLS, Wayne, Pa 17 Garner, J S 1996 Hospital Infection Control Practices dvisory Committee, U S Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention Guideline for isolation precautions in hospitals Infect Control Hospital Epidemiol 17: U S Department of Health and Human Services 1999 iosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC) 4 th ed U S Government Printing Office, Washington, D C 19 Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of rticle 16(1) of Directive 89/31/EEC) Official Journal L262, 17/10/2000, p Covalciuc K, Webb K, and Carlson C 1999 Comparison of four clinical specimen types for detection of influenza and virus by optical immunoassay (FLU OI TEST) and cell culture methods J Clin Microbiol 37:

12 m e r I 0 = L T i Manufacturer / Výrobce / Producent / Fabrikant / Tootja / Valmistaja / Fabricant / Hersteller / ÊáôáóêåõáóôÞò / Gyártó / Ditta produttrice / Gamintojas / Producent / Fabricante / Výrobca / Tillverkare Use by / Spotøebujte do / nvendes før / Houdbaar tot / Kasutada enne / Viimeinkäyttöpäivä / utiliser avant / Verwendbar bis / Çìåñïìçíßá ëþîçò / Felhasználhatóság dátuma / Usare entro / Naudokite iki / rukes før / Stosowaæ do / Utilizar em / Použite do / Usar antes de / nvänd före / YYYY-MM-DD / YYYY-MM (MM = end of month) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = konec mìsíce) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutning af måned) JJJJ-MM-DD / JJJJ-MM (MM = einde maand) -KK-PP / -KK (KK = kuu lõpp) VVVV-KK-PP / VVVV-KK (kuukauden loppuun mennessä) -MM-JJ / -MM (MM = fin du mois) JJJJ-MM-TT / JJJJ-MM (MM = Monatsende) EEEE-MM-HH / EEEE-MM (MM = ôýëïò ôïõ ìþíá) ÉÉÉÉ-HH-NN / ÉÉÉÉ-HH (HH = hónap utolsó napja) -MM-GG / -MM (MM = fine mese) MMMM-MM-DD / MMMM-MM (MM = mënesio pabaiga) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutten av måneden) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec miesi¹ca) -MM-DD / -MM (MM = fim do mês) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec mesiaca) aaaa-mm-dd / aaaa-mm (mm = fin del mes) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutet på månaden) Catalog number / Katalogové èíslo / Katalognummer / Catalogusnummer / Kataloogi number / Tuotenumero / Numéro catalogue / estellnummer / Áñéèìüò êáôáëüãïõ / Katalógusszám / Numero di catalogo / Katalogo numeris / Numer katalogowy / Número do catálogo / Katalógové èíslo / Número de catálogo uthorized Representative in the European Community / utorizovaný zástupce pro Evropskou unii / utoriseret repræsentant i EU / Erkend vertegenwoordiger in de Europese Unie / Volitatud esindaja Euroopa Nõukogus / Valtuutettu edustaja Euroopan yhteisössä / Représentant agréé pour la C E E / utorisierte EG-Vertretung / ÅîïõóéïäïôçìÝíïò áíôéðñüóùðïò óôçí ÅõñùðáúêÞ Êïéíüôçôá / Hivatalos képviselet az Európai Unióban / Rappresentante autorizzato nella Comunità europea / Ágaliotasis atstovas Europos endrijoje / utorisert representant i EU / utoryzowane przedstawicielstwo w Unii Europejskiej / Representante autorizado na União Europeia / utorizovaný zástupca v Európskom spoloèenstve / Representante autorizado en la Comunidad Europea / uktoriserad representant i EU In Vitro Diagnostic Medical Device / Lékaøské zaøízení urèené pro diagnostiku in vitro / In vitro diagnostisk medicinsk anordning / Medisch hulpmiddel voor in vitro diagnose / In vitro diagnostika meditsiiniaparatuur / Lääkinnällinen in vitro -diagnostiikkalaite / Dispositif médical de diagnostic in vitro / Medizinisches In-vitro-Diagnostikum / In vitro äéáãíùóôéêþ éáôñéêþ óõóêåõþ / In vitro diagnosztikai orvosi eszköz / Dispositivo medico diagnostico in vitro / In vitro diagnostikos prietaisas / In vitro diagnostisk medisinsk utstyr / Urz¹dzenie medyczne do diagnostyki in vitro / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / Medicínska pomôcka na diagnostiku in vitro / Dispositivo médico de diagnóstico in vitro / Medicinsk anordning för in vitro-diagnostik Temperature limitation / Teplotní omezení / Temperaturbegrænsning / Temperatuurlimiet / Temperatuuri piirang / Lämpötilarajoitus / Température limite / Zulässiger Temperaturenbereich / ¼ñéï èåñìïêñáóßáò / Hõmérsékleti határ / Temperatura limite / Laikymo temperatûra / Temperaturbegrensning / Ograniczenie temperatury / Limitação da temperatura / Ohranièenie teploty / Limitación de temperatura / Temperaturbegränsning Control / Kontrola / Kontrol / Controle / Kontroll / Kontrolli / Contrôle / Kontrolle / ëåã ïò / Controllo / Kontrolë / Controlo atch Code (Lot) / Kód (èíslo) šarže / atch kode (Lot) / Chargenummer (lot) / Partii kood / Eräkoodi (LOT) / Code de lot (Lot) / Chargencode (Chargenbezeichnung) / Êùäéêüò ðáñôßäáò (Ðáñôßäá) / Tétel száma (Lot) / Codice del lotto (partita) / Partijos numeris (Lot) / atch-kode (Serie) / Kod partii (seria) / Código do lote (Lote) / Kód série (šarža) / Código de lote (Lote) / Satskod (parti) Contains sufficient for <n> tests / Dostateèné množství pro <n> testù / Indeholder tilstrækkeligt til <n> test / Voldoende voor <n> tests / Küllaldane <n> testide jaoks / Sisältöon riittävä <n> testejä varten / Contenu suffisant pour <n> tests / usreichend für <n> Tests ÐåñéÝ åé åðáñêþ ðïóüôçôá ãéá <n> åîåôüóåéò / <n> teszthez elegendõ / Contenuto sufficiente per <n> test / Pakankamas kiekis atlikti <n> testø / Innholder tilstrekkelig for <n> tester / Zawiera iloœæ wystarczaj¹c¹ do <n> testów / Contémo suficiente para <n> testes / Obsah vystaèí na <n> testov / Contenido suficiente para <n> pruebas / Räckertill <n> antal tester Consult Instructions for Use / Prostudujte pokyny k použití / Læs brugsanvisningen / Raadpleeg gebruiksaanwijzing / Lugeda kasutusjuhendit / Tarkista käyttöohjeista / Consulter la notice d emploi / Gebrauchsanweisung beachten / Óõìâïõëåõôåßôå ôéò ïäçãßåò ñþóçò / Olvassa el a használati utasítást / Consultare le istruzioni per l'uso / Skaitykite naudojimo instrukcijas / Se i bruksanvisningen / Zobacz instrukcja u ytkowania / Consulte as instruções de utilização / Pozri Pokyny na používanie / Consultar las instrucciones de uso / Se bruksanvisningen m ecton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland U S ENEX Limited ay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon, County Clare, Ireland Tel: Fax: D, D Logo, L, ColorPC, Culturette, Directigen, DispensTube and Trypticase are trademarks of ecton, Dickinson and Company CultureSwab is a trademark of Difco Laboratories, Inc, a subsidiary of ecton, Dickinson and Company 2006 D