OZNACZANIE SULFONAMIDÓW W MIODZIE METODĄ CHROMATOGRAFII CIECZOWEJ Z DETEKCJĄ FUORESCENCYJNĄ



Podobne dokumenty
ZAPYTANIE OFERTOWE. Tłumaczenie pisemne dokumentacji rejestracyjnej ZAPYTANIE OFERTOWE

OZNACZANIE WAPNIA I MAGNEZU W PRÓBCE WINA METODĄ ATOMOWEJ SPEKTROMETRII ABSORPCYJNEJ Z ATOMIZACJA W PŁOMIENIU

SPIS TREŚCI do e-booka pt. Metody badań czynników szkodliwych w środowisku pracy

2.Prawo zachowania masy

W tym elemencie większość zdających nie zapisywała za pomocą równania reakcji procesu zobojętniania tlenku sodu mianowanym roztworem kwasu solnego.

Opis postępowania rekrutacyjnego do oddziału przedszkolnego w Szkole Podstawowej im. Królowej Jadwigi w Nowym Chechle

Szanowni Państwo. Badania laboratoryjne obejmować będą :

40. Międzynarodowa Olimpiada Fizyczna Meksyk, lipca 2009 r. ZADANIE TEORETYCZNE 2 CHŁODZENIE LASEROWE I MELASA OPTYCZNA

KOMISJA WSPÓLNOT EUROPEJSKICH. Wniosek DECYZJA RADY

PRAWA ZACHOWANIA. Podstawowe terminy. Cia a tworz ce uk ad mechaniczny oddzia ywuj mi dzy sob i z cia ami nie nale cymi do uk adu za pomoc

P R O C E D U R Y - ZASADY

Bielsko-Biała, dn r. Numer zapytania: R WAWRZASZEK ISS Sp. z o.o. ul. Leszczyńska Bielsko-Biała ZAPYTANIE OFERTOWE

Ćwiczenie: "Ruch harmoniczny i fale"

KARTA CHARAKTERYSTYKI PREPARATU Pochłaniacz wilgoci, wkład uzupełniający

PROCEDURA OCENY RYZYKA ZAWODOWEGO. w Urzędzie Gminy Mściwojów

OZNACZANIE POZOSTAŁOŚCI CHLORAMFENIKOLU W MOCZU BYDŁA Z ZASTOSOWANIEM POLIMERÓW Z ODWZOROWANIEM CZĄSTECZKOWYM METODĄ LC-MS/MS

UCHWAŁA nr LI/257/09 RADY MIEJSKIEJ GMINY LUBOMIERZ z dnia 28 października 2009 roku

PODSTAWY OBLICZEŃ CHEMICZNYCH DLA MECHANIKÓW

Projekt MES. Wykonali: Lidia Orkowska Mateusz Wróbel Adam Wysocki WBMIZ, MIBM, IMe

Od redakcji. Symbolem oznaczono zadania wykraczające poza zakres materiału omówionego w podręczniku Fizyka z plusem cz. 2.

Regulamin Rekrutacji do Publicznego Przedszkola Centrum Rozwoju Dziecka Berek! we Wrocławiu. Rozdział I Postanowienia ogólne

I.1.1. Technik organizacji usług gastronomicznych 341[07]

Obowiązki przedsiębiorców prowadzących stacje demontażu Art. 21. Przedsiębiorca prowadzący stację demontażu powinien zapewniać bezpieczne dla

DE-WZP JJ.3 Warszawa,

UCHWAŁA NR IV/27/15 RADY GMINY SANTOK. z dnia 29 stycznia 2015 r.

Zasady rekrutacji, kryteria i warunki przyjęć do Przedszkola Samorządowego nr 25 w Kielcach

Zadbaj o to aby wszyscy pracownicy w Twojej firmie zostali odpowiednio przeszkoleni pod kątem BHP

ZAGADNIENIA PODATKOWE W BRANŻY ENERGETYCZNEJ - VAT

Regulamin Pracy Komisji Rekrutacyjnej w Publicznym Przedszkolu Nr 5 w Kozienicach

DZIENNIK URZĘDOWY WOJEWÓDZTWA ŁÓDZKIEGO

SZCZEGÓŁOWE SPECYFIKACJE TECHNICZNE SST RECYKLING

SZKOLENIE PRACOWNIKÓW NARAśONYCH NA SZKODLIWE CZYNNIKI CHEMICZNE. Szkolenia bhp w firmie szkolenie pracowników naraŝonych na czynniki szkodliwe 27

REGULAMIN OBRAD WALNEGO ZEBRANIA CZŁONKÓW STOWARZYSZENIA LOKALNA GRUPA DZIAŁANIA STOLEM

ROZPORZĄDZENIE MINISTRA ROLNICTWA I ROZWOJU WSI 1) z dnia r.

ZASADY REKRUTACJI DO PUBLICZNYCH PRZEDSZKOLI I ODDZIAŁÓW PRZEDSZKOLNYCH W SZKOŁACH PODSTAWOWYCH

Morfolina. Numer CAS:

KOMISJA WSPÓLNOT EUROPEJSKICH, uwzględniając Traktat ustanawiający Wspólnotę Europejską, ROZDZIAŁ 1

KARTA OCENY ZGODNOŚCI Z LSR

Umowa nr.. /. Klient. *Niepotrzebne skreślić

Objaśnienia do Wieloletniej Prognozy Finansowej na lata

Regulamin reklamy produktów leczniczych na terenie Samodzielnego Publicznego Zakładu Opieki Zdrowotnej Ministerstwa Spraw Wewnętrznych w Białymstoku

4.3. Warunki życia Katarzyna Gorczyca

Wyznaczanie współczynnika sprężystości sprężyn i ich układów

UMOWA (wzór) zawarta w dniu... w Płaskiej, pomiędzy: Gminą Płaska, Płaska 53, Płaska, NIP , REGON ,

Podatek przemysłowy (lokalny podatek od działalności usługowowytwórczej) :02:07

Stowarzyszenie Lokalna Grupa Działania EUROGALICJA Regulamin Rady

z dnia Rozdział 1 Przepisy ogólne

spektroskopia UV Vis (cz. 2)

Warszawa, dnia 6 listopada 2015 r. Poz ROZPORZĄDZENIE MINISTRA ROLNICTWA I ROZWOJU WSI 1) z dnia 23 października 2015 r.

Skuteczność i regeneracja 48h albo zwrot pieniędzy

REGULAMIN przeprowadzania okresowych ocen pracowniczych w Urzędzie Miasta Mława ROZDZIAŁ I

POWIATOWY URZĄD PRACY W LIDZBARKU WARMIŃSKIM

Przedmiotowy System Oceniania - zajęcia techniczne kl. IV, V, VI

Kancelaria Radcy Prawnego

Zapytanie ofertowe. (Niniejsze zapytanie ofertowe ma formę rozeznania rynku i nie stanowi zapytania ofertowego w rozumieniu przepisów ustawy PZP)

REGULAMIN WSPARCIA FINANSOWEGO CZŁONKÓW. OIPiP BĘDĄCYCH PRZEDSTAWICIELAMI USTAWOWYMI DZIECKA NIEPEŁNOSPRAWNEGO LUB PRZEWLEKLE CHOREGO

Warszawa, dnia 11. września 2006 r. Szanowna Pani LUIZA GZULA-FELISZEK Agencja Obsługi Nieruchomości ZAMEK Błonie, ul. Łąki 119,

Regulamin Drużyny Harcerek ZHR

Klasyfikacja i oznakowanie substancji chemicznych i ich mieszanin. Dominika Sowa

Materiał obowiązujący do ćwiczeń z analizy instrumentalnej II rok WF (kierunek farmacja)

Liczba stron: 3. Prosimy o niezwłoczne potwierdzenie faktu otrzymania niniejszego pisma.

HPLC? HPLC cz.1. Analiza chromatograficzna. Klasyfikacja metod chromatograficznych

TOM II ISTOTNE DLA STRON POSTANOWIENIA UMOWY. Opis przedmiotu zamówienia opis techniczny + schematy przedmiar robót

z dnia 6 lutego 2009 r.

PROCEDURA REKRUTACJI DZIECI DO KLASY PIERWSZEJ DO SZKOŁY PODSTAWOWEJ W OSTASZEWIE NA ROK SZKOLNY 2015/2016

Regulamin rekrutacji uczniów do Szkoły Podstawowej nr 35 im. Władysława Łokietka w Zespole Szkolno-Przedszkolnym nr 1 w Poznaniu na rok szkolny

SST SZCZEGÓŁOWE SPECYFIKACJE TECHNICZNE.

RZECZPOSPOLITA POLSKA. Prezydent Miasta na Prawach Powiatu Zarząd Powiatu. wszystkie

Gdynia: Księgowość od podstaw Numer ogłoszenia: ; data zamieszczenia: OGŁOSZENIE O ZAMÓWIENIU - usługi

Komentarz do prac egzaminacyjnych w zawodzie technik administracji 343[01] ETAP PRAKTYCZNY EGZAMINU POTWIERDZAJĄCEGO KWALIFIKACJE ZAWODOWE

ZAPROSZENIE DO SKŁADANIA OFERT

SPRAWOZDANIE Z REALIZACJI XXXII BADAŃ BIEGŁOŚCI I BADAŃ PORÓWNAWCZYCH HAŁASU W ŚRODOWISKU Warszawa kwiecień 2012r.

Zarządzenie Nr 325/09 Burmistrza Miasta Bielsk Podlaski z dnia 29 czerwca 2009 r.

woli rodziców w 2010 roku. 1. W roku szkolnym 2016/2017 obowiązek szkolny spełniają dzieci urodzone w 2009 roku oraz z

Do: Uczestnicy postępowania o udzielenie zamówienia publicznego - wg rozdzielnika. ZAPYTANIA NR 8 (pytania od nr 88 do nr 97 )

WYJASNIENIA I MODYFIKACJA SPECYFIKACJI ISTOTNYCH WARUNKÓW ZAMÓWIENIA

Spektroskopia UV-VIS zagadnienia

Rozdział 1 Postanowienia ogólne

POLSKA IZBA TURYSTYKI POLISH CHAMBER OF TOURISM

Wykonanie podziału geodezyjnego działek na terenie powiatu gryfińskiego z podziałem na 2 zadania.

Zasady rekrutacji do Żłobka nr 46 przy ul. St. Przybyszewskiego 70/72

Umowa o pracę zawarta na czas nieokreślony

Metrologia cieplna i przepływowa

INSTRUKCJA SERWISOWA. Wprowadzenie nowego filtra paliwa PN w silnikach ROTAX typ 912 is oraz 912 is Sport OPCJONALNY

- 70% wg starych zasad i 30% wg nowych zasad dla osób, które. - 55% wg starych zasad i 45% wg nowych zasad dla osób, które

PROTOKÓŁ ODBIORU KOŃCOWEGO ROBÓT BUDOWLANYCH

Druk nr 1013 Warszawa, 9 lipca 2008 r.

REGULAMIN PRZEPROWADZANIA OCENY OKRESOWEJ PRACOWNIKÓW SAMORZĄDOWYCH W MIEJSKO-GMINNYM ZESPOLE OŚWIATY W DREZDENKU. Rozdział 1.

Warszawa, dnia 4 czerwca 2013 r. Poz Rozporządzenie Ministra Rolnictwa i Rozwoju Wsi 1) z dnia 22 maja 2013 r.

Korekta do wniosku na wezwanie nr. Wycofanie wniosku Nazwa pełna grupy producentów rolnych 2.2. Nazwa skrócona Powiat. 3.5.

Wymiana nawierzchni chodników oraz dróg dojazdowych wokół budynku, rozbiórka i ponowny montaż prefabrykowanego muru oporowego

ZAPYTANIE OFERTOWE PRZEDMIOT ZAMÓWIENIA: DOSTAWA UŻYWANEGO SAMOCHODU DOSTAWCZEGO DLA ZAKŁADU WODOCIĄGÓW I KANALIZACJI W PACZKOWIE

WNIOSEK O PRZYJĘCIE DZIECKA DO PUBLICZNEGO PRZEDSZKOLA W STANICY NA ROK SZKOLNY 2016/2017

1.2. Zakres stosowania z podaniem ograniczeń Badaniu nośności można poddać każdy pal, który spełnia wymogi normy PN-83/B

Techniczne nauki М.М.Zheplinska, A.S.Bessarab Narodowy uniwersytet spożywczych technologii, Кijow STOSOWANIE PARY WODNEJ SKRAPLANIA KAWITACJI

3 4 5 Zasady udzielania urlopów 6 7 8

Regulamin rekrutacji do Szkoły Policealnej i do Liceum Ogólnokształcącego dla dorosłych przy ZSR w Grzybnie w roku szkolnym 2016/2017

P o d l a s k i K u r a t o r Ośw i a t y

REGULAMIN KONTROLI ZARZĄDCZEJ W MIEJSKO-GMINNYM OŚRODKU POMOCY SPOŁECZNEJ W TOLKMICKU. Postanowienia ogólne

METODOLOGIA PISANIA PRACY DYPLOMOWEJ WYTYCZNE DLA STUDENTÓW

Transkrypt:

BROMAT. CHEM. TOKSYKOL. XLIV, 2011, 2, str. 182 187 Jelena Doroszkiewicz-Fiedoruk, Lech Rodziewicz OZNACZANIE SULFONAMIDÓW W MIODZIE METODĄ CHROMATOGRAFII CIECZOWEJ Z DETEKCJĄ FUORESCENCYJNĄ Pracownia Badań Chemicznych Środków Spożywczych Zakładu Higieny Weterynaryjnej w Białymstoku Kierownik: dr L. Rodziewicz Przedstawiono metodę oznaczania siedmiu sulfonamidów (sulfatiazol, sulfacetamid, sulfamerazyna, sulfametazyna, sulfametoksazol, sulfadimetoksyna, sulfametoksypirydazyna) w miodzie. Próbki rozpuszczano w kwasie solnym, oczyszczano metodą SPE na kolumienkach Oasis HLB i upochodniano flurescenaminą. Pochodne oznaczano przy pomocy LC z detekcją fluorescencyjną. Do rozdziału stosowano kolumnę chromatograficzną Luna C-18 Phenomex z izokratyczną płyną fazą składającą się z acetonitrylu, metanolu i kwasu octowego (1%) (10:45:45, v/v/v). Metodę walidowano zgodnie z kryteriami Decyzji Komisji nr 2002/657/WE. Współczynniki zmienności (CV %) były niższy niż 9%, a średnie odzyski mieściły się w zakresie 56 79%. Decyzyjne wartości graniczne (CCα) oraz zdolność wykrywania (CCβ). mieściły się odpowiednio w zakresie 33,4 35,9 μg/kg i 39,4 42,4 μg/kg. Hasła kluczowe: sulfonamidy, oznaczanie pozostałości, miód, chromatografia cieczowa. Key words: sulfonamides, residue determination, honey, liquid chromatography. Sulfonamidy są to związki krystaliczne, trudno rozpuszczalne w wodzie. Odznaczają się dość szerokim spektrum działania obejmującym liczne drobnoustroje Gram-dodatnie i Gram-ujemne. Sulfonamidy w naturalnych miodach pszczelich mogą występować jako pozostałości preparatów weterynaryjnych stosowanych do zwalczania zgnilca złośliwego. Najczęściej stosowanym preparatem jest Polisulfamid w skład, którego wchodzą trzy sole sodowe sulfonamidów: sulfatiazol, sulfacetamid, sulfametazyna. Niekontrolowane i nadmierne stosowanie tych związków w leczeniu pszczół może prowadzić do zanieczyszczenia miodu ich pozostałościami. Sulfonamidy przedostając się z miodem do organizmu człowieka mogą stać się przyczyną zatruć i alergii. Według Dyrektywy Unijnej 20002/657/WE obowiązującej od dnia 14 sierpnia 2002 r. sulfonamidy zostały zakwalifikowane do grupy B, czyli mają wyznaczony MRL i mogą być stosowane w lecznictwie weterynaryjnym (1). Dla miodu suma ich pozostałości wynosi 0,05 mg/kg. Chromatografia cieczowa sprzężona z tandemem mas (LC-MS/MS) (2, 3, 4) i chromatografia cieczowa z detektorem fluorescencyjnym (LC-FLD) (5, 6, 7) jest

Nr 2 Oznaczanie sulfonamidów w miodzie 183 techniką szczególnie rozpowszechnioną w analizie pozostałości sulfonamidów w miodzie. Jednakże, ze względu na wysoki koszt zakupu LC-MS/MS przeważnie do ich identyfikacji oraz oznaczania ilościowego w miodzie stosowano układ LC-FLD, który spełnia zalecenia decyzji Komisji nr 2002/657/EC. Zastosowanie tego układu możliwe jest po uprzednim upochodnieniu sulfonamidów, ponieważ nie wykazują one naturalnej fluorescencji. Do otrzymania pochodnej stosowano przeważnie fluorescaminę. Pozwoliło to zwiększyć czułość i specyficzność oznaczenia. LOD przy zastosowaniu detektora FLD jest ok. 100-krotnie niższy niż w detektorze spektrofotometrycznym (UV). Celem pracy było opracowanie, w oparciu o dane z piśmiennictwa oraz doświadczenie własne, metody identyfikacji oraz ilościowego oznaczania 7 sulfonamidów (sulfatiazol, sulfacetamid, sulfamerazyna, sulfametazyna, sulfametoksazol, sulfadimetoksyna, sulfametoksypirydazyna) w miodzie pszczelim przy zastosowaniu układu LC-FLD, która spełniałaby zalecenia Decyzji Komisji nr 2002/657/WE. Opracowana procedura jest stosowana w badaniach kontrolnych pozostałości sulfonamidów w miodzie. MATERIAŁ I METODY Przygotowanie próbki do analizy. Do probówek wirówkowych poj. 30 cm 3 odważano po 4 g miodu, dodawano po 10 cm 3 kwasu solnego o stęż. 2 mol/dm 3 i dokładnie mieszano. Ekstrakty inkubowano w temperaturze pokojowej przez 30 min. Próbki wirowano i pobierano po 7 cm 3 uzyskanych ekstraktów, dodawano po 5 cm 3 kwasu cytrynowego o stęż. 0,3 mol/dm 3 i doprowadzano do ph 4,0 za pomocą NaOH o stęż. 5 mol/dm 3. Tak uzyskane ekstrakty poddawano oczyszczaniu na kolumienkach Oasis HLB. Kolumienki z sorbentem HLB poddawano kondycjonowaniu 5 cm 3 acetonitrylu oraz 5 cm 3 wody. Ekstrakty przepuszczano przez kolumienki z prędkością 1 2 krople/sek. Po przejściu ekstraktu kolumienki przemywano 5 cm 3 wody i osuszano pod próżnią (2 3 min). Badane związki eluowano acetonitrylem 2 razy po 2,5 cm 3 do probówek, w których znajdowało się po 100 μl mieszaniny glikol etylenowy: acetonitryl (1:9). Eluat zagęszczano w strumieniu azotu w temp. ok. 50 C. Suchą pozostałość rozpuszczano w 0,4 cm 3 buforu octanowego o ph 3,5 i dodawano po 0,1 cm 3 roztworu fluorescaminy. Dokładnie mieszano i pozostawiano do inkubacji przez 30 min. Tak przygotowane ekstrakty analizowano za pomocą chromatografu cieczowego Hawlett Packard 1100 z detektorem FLD. Warunki analizy HPLC oznaczania sulfonamidów były następujące: detektor FLD Ex: λ = 405 nm., Em: λ = 495 nm., kolumna chromatograficzna C18, 150 4,6 mm, 3 μm, faza ruchoma acetonitryl do HPLC, metanol do HPLC, 1% kwas octowy 10:45:45 (v/v/v), przepływ 0,7 cm 3 /min, temp. kolumny analitycznej 25 C, objętość dozowana 20 μl. Identyfikację związków w próbce przeprowadzano poprzez porównanie czasów retencji pików występujących w badanych ekstraktach z pikami odpowiedniego wzorcowego roztworu roboczego i próbki fortyfikowanej. Tożsamość substancji badanej była potwierdzana, jeżeli czas retencji piku próbki badanej oraz piku wzorca nie różniły się więcej niż ± 2,5%. Jeżeli identyfikacja

184 J. Doroszkiewicz-Fiedoruk, L. Rodziewicz Nr 2 substancji dającej pik na chromatogramie na podstawie jego kształtu lub otrzymanego wyniku była wątpliwa, obecność analizowanej substancji potwierdzano przez zastosowanie kochromatografii. Ekstrakt próbki wzbogacano poprzez dodanie odpowiedniej ilość roztworu roboczego. Ilość dodanych sulfonamidów była porównywalna do ilości zawartej w ekstrakcie próbki. Zawartość poszczególnych związków w badanej próbce obliczano wykorzystując następujący wzór: V C X = M gdzie: X zawartość związku w analizowanej próbce, μg/kg, M masa badanej próbki, g, V objętość końcowa ekstraktu, cm 3, C stężenie sulfonamidów w próbce, ng/cm 3. WYNIKI I ICH OMÓWIENIE Opracowana metoda została zwalidowana zgodnie z zaleceniami zawartymi w decyzji Komisji nr 2002/657/WE (8). Wyznaczono dla każdej matrycy następujące parametry statystyczne metody: specyficzność, liniowość, powtarzalności, poprawność (odzysk), dokładność (błąd względny), odtwarzalność wewnątrzlaboratoryjną oraz limit decyzyjny wartości granicznej (CCα) i zdolności wykrycia (CCβ). Specyficzność metody zbadano przy użyciu próbek ślepych odczynnikowych (odczynniki stosowane w procesie analitycznym), matryc miodu oraz matryc wzbogaconych znaną ilością analitu. Stwierdzono, że opracowana metoda jest specyficzna dla oznaczanych związków. Względny czas retencji sulfonamidów w próbkach wzbogaconych do czasu retencji wzorców jest taki sam z tolerancją ± 2,5%. Na ryc. 1 przedstawiono typowy chromatogram próbki wzmocnionej matrycy miodu na poziomie 25 μg/kg. Chromatogram uzyskano przy zastosowaniu układu LC-FLD. Zakres liniowości metody określono na podstawie krzywych wzorcowych przygotowanych w oparciu o co najmniej 5 poziomów wzorca sulfonamidów w zakresie 12,5 200 μg/kg. Współczynnik korelacji wynosił powyżej 0,998. W celu określenia powtarzalności, odtwarzalności i poprawności (odzysk) metody próbki miodu wzbogacano oznaczanymi stężeniami mieszaniny sulfonamidów na poziomie 12,5, 25, 50, 75, 125, 200 μg/kg dla każdego związku. Dla 7 oznaczanych sulfonamidów przy wzmocnienia w zakresie 12,5 200 μg/kg współczynnik zmienności wynosił 3,4 8,4% zaś odtwarzalności 8,9 21,5%. Średni odzysk wynosił 56,1 79,1%. Decyzja (7) wprowadza dwa nowe parametry wykonawcze, jakie musi spełniać metoda potwierdzająca. Jest to decyzyjna wartość graniczna (CCα) oraz zdolność wykrywania (CCβ). CCα oznacza wartość graniczną od poziomu, której, można wnioskować z prawdopodobieństwem błędu α, że próbka jest niezgodna (fałszywie dodatnia) i wynosi ona dla sulfonamidów (grupa B) 5%. CCβ jest to najniższe stężenie analitu, które może być wykryte, zidentyfikowane i oznaczone w próbce z prawdopodobieństwem 1 β. Błąd β jest to prawdopodobieństwo uznania próbki za fałszywie ujemną i wynosi on dla sulfonamidów 5%. Oba te parametry służą do

Nr 2 Oznaczanie sulfonamidów w miodzie 185 Ryc. 1. Chromatogram LC-FLD z matrycy miodu i matrycy wzmocnionej siedmioma sulfonamidami na poziomie 25 μg/kg. Fig. 1. LC-FLD chromatograms of matrix honey and matrix honey spiked with seven sulfonamides at 25 μg/kg.

186 J. Doroszkiewicz-Fiedoruk, L. Rodziewicz Nr 2 jednoznacznej interpretacji wyników analiz pozostałości chemicznych w żywności pochodzenia zwierzęcego. CCα i CCβ obliczono dla każdego sulfonamidu na podstawie krzywych kalibracji wyznaczonych na podstawie próbek wzmocnionych zgodnie z PN-ISO 11843-2 (8). CCα mieściła się w granicach 33,9 35,9 μg/kg, zaś CCβ 39,4 42,4 μg/kg. Przy szacowaniu niepewności wyniku uwzględniono niepewności standardowe wynikające z powtarzalności metody, ważenia próbki, błędu systematycznego metody, stosowania wzorców oraz naczyń pomiarowych. W celu uzyskania niepewności rozszerzonej, złożoną niepewność standardową mnożono przez współczynnik rozszerzenia k = 2 przy poziomie ufności α = 0,95. W tab. I przedstawiono uzyskane parametry statystyczne metody oznaczania sulfonamidów w miodzie wzbogaconym na poziomie 25 μg/kg. Tabela I. Statystyczna charakterystyka metody oznaczania sulfonamidów w miodzie (wzmocnienie na poziome 25 μg/kg) Table I. Statistical characteristics of the method for determination of sulfonamides in bee honey (spiked at 25 μg/kg) Parametry statystyczne SFT SFA SMR SMZ SMP SMT SDT Wartość średnia (μg/kg) 17,1 15,5 18,2 17,4 17,2 16,8 18,1 Powtarzalności, CV (%) 7,4 5,1 5,6 4,7 4,5 6,3 4,8 Średni odzysk (%) 68,8 62,1 72,9 69,9 68,9 67,5 72,5 Odtwarzalności, CV (%) 17,4 21,5 14,9 19,0 8,9 11,4 13,9 CCα (μg/kg) 33,9 34,5 35,2 34,0 35,1 35,9 35,2 CCβ (μg/kg) 39,8 40,7 41,1 39,4 41,8 42,4 42,1 Niepewność rozszerzona (%) 24 19 25 18 17 21 18 WNIOSKI 1. Przedstawiona powyżej metoda pozwala na wykrycie pozostałości sulfonamidów na poziomie wynoszącym 12,5 μg/kg. 2. Opracowana procedura jest stosowana w badaniach kontrolnych pozostałości tych związków w miodzie. Jelena Doroszkiewicz-Fiedoruk, Lech Rodziewicz DETERMINATION OF SULFONAMIDES IN HONEY BY LIQUID CHROMATOGRAPHY WITH FLUORESCENCE DETECTION Summary The method is presented to analyze seven sulfonamides (sulfathiazole, sulfacetamide, sulfamerazine, sulfamethazine, sulfamethoxazol, sulfadimethoxine, sulfachloropyridazine) in honey. The samples were dissolved in hydrochloric acid (2M), cleaned up Oasis HLB solid phase extraction (SPE) column and derivatized with fluorescamine. The derivatives were determined by LC with fluorescence detection. Chro-

Nr 2 Oznaczanie sulfonamidów w miodzie 187 matographic separation was done on a C-18 Phenomenex Luna column with an isocratic mobile phase consisting of acetonitrile, methanol and 1% acetic acid (10:45:45, v/v/v). The method validation was done according to the criteria laid down in Commission Decision No. 2002/657/EC. The validation includes the determination of specificati, linearity, repeatability, within-laboratory reproducibility, accuracy (recovery), decision limit (CCα), and detection capability (CCβ). Honey samples were fortified with sulfonamides at 12,5 200 μg/kg. The coefficients of variation (CV%) were lower than 9% and mean recovers were between 56 79%. Within-laboratory reproducibility was better than 10% CV. CCα and CCβ ranged 33,9 35,9 μg/kg and CCβ 39,4 42,4 μg/kg, respectively. PIŚMIENNICTWO 1. Decyzja Komisji nr 2002/657/WE z dnia 12 sierpnia 2002 r. ustalająca kryteria dla metod analitycznych ich interpretacji. 2. Krivohlavek A., Smit Z., Bastinac M., Zuntar I., Plevic-Plevsic F.: The determination of sulfonamides in honey by high performance liquid chromatography mass spectrometry method (LC/MS). J. Sep. Sci., 2005; 28(13): 1434-1439. 3. Pang G.F., Cao Y.Z., Zhang J.J., Jia G.Q., Fan C.L., Li X.M., Liu Y.M., Li Z.Y., Shi Y.Q.: Simulationes determination of 16 sulfonamides in honey by liquid chromatography/tandem mass spectrometry. JAOC Int., 2005; 88(5): 1304-1311. 4. Verzegnassi L., Savoy-Perroud M.C., Stadler R.H.: Application of liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry to the detection of 10 sulfonamides in honey. J. Chromatogr. A, 2002; 997: 77-87. 5. Pang G.F., Cao Y.Z., Fan C.L., Zhang J.J., Li X.M., Li Z.Y., Jia G.Q.: Liquid chromatography fluorescence detection for simultaneous analysis of sulfonamide residue in honey. Anal. Bioanal. Chem., 2003; 376: 534-541. 6. Posyniak A., Śniegocki T., Żmudzki A.: Solid phase extraction and liquid chromatography analysis of sulfonamide residua in honey. Bull. Vet. Inst. Pulawy, 2002; 46: 111-117. 7. Posyniak A., Żmudzki A., Niedzielska J., Śniegocki T., Grzebalska A.: Sulfonamide residues in honey. Control and development of analytical procedure. Apiacta, 2003; 38: 249-256. 8. PN-ISO 11843-2: Zdolność wykrywania Cz. 2. Metrologia w przypadku kalibracji liniowej. PKN, lipiec 2003; 19: 1-13. Adres: 15-959 Białystok, ul. Zwycięstwa 26A.