BACTEC Mycosis IC /F Culture Vials Podłoże selektywne dla grzybów i drożdżaków PP113JAA(01) 2013-07 Polski PRZEZNACZENIE BACTEC Mycosis IC/F butelki hodowlane służą do tlenowych posiewów krwi. Podstawowe zastosowanie do aparatów BACTEC serii fluorescencyjnej do wybiórczej hodowli i odzysku grzybów i drożdżaków z krwi. STRESZCZENIE I WYJAŚNIENIA Próbkę do badania inokuluje się do jednej lub więcej fiolek, które umieszcza się w aparacie fluorescencyjnym BACTEC w celu inkubacji i okresowego odczytu. Każda fiolka zawiera chemiczny sensor, który może wykrywać zwiększenie ilości CO 2 wytwarzanego w trakcie wzrostu drobnoustrojów. Sensor jest monitorowany przez aparat co 10 min pod kątem wzrostu fluorescencji, który jest proporcjonalny do ilości obecnego CO 2. Odczyt dodatni wskazuje na przypuszczalną obecność w fiolce żywych drobnoustrojów. ZASADY PROCEDURY Jeśli w badanej próbce, inokulowanej do fiolki BACTEC, obecne są drożdżaki lub grzyby, CO 2 będzie wytwarzany, kiedy drobnoustroje będą metabolizować substraty obecne w próbce. Wzrosty fluorescencji sensora zawartego w fiolce, spowodowane przez większą ilość CO 2, są monitorowane przez aparat fluorescencyjny BACTEC. Analiza tempa i wielkości wzrostu CO 2 umożliwia określenie przez aparat fluorescencyjny BACTEC, czy wynik dla danej fiolki jest dodatni, tzn. czy badana próbka zawiera żywe drobnoustroje. ODCZYNNIKI Przed przeprowadzeniem badania fiolki do hodowli BACTEC Mycosis IC/F zawierają następujące aktywne składniki: Lista składników Woda destylowana... 40 ml Bulion mózgowo-sercowy... 1,0% (stężenie wagowe) Bulion trawiący sojowo-kazeinowy... 0,5% (stężenie wagowe) Wyciąg drożdżowy... 0,035% (stężenie wagowe) Sacharoza... 0,6% (stężenie wagowe) Dekstroza... 0,1% (stężenie wagowe) m-inozytol... 0,05% (stężenie wagowe) Cytrynian amonu żelaza... 0,0001% (stężenie wagowe) Polianetolosulfonian sodu (SPS)... 0,05% (stężenie wagowe) Saponina... 0,24% (stężenie wagowe) Chloramfenikol... 0,0037% (stężenie wagowe) Tobramycyna...0,001% (stężenie wagowe) Czynnik przeciwpieniący... 0,01% (stężenie wagowe) Wszystkie podłoża BACTEC są dostarczane z dodanym CO 2. Skład może być dostosowany do wymagań specyficznego badania. Ostrzeżenia i środki ostrożności Do użytku diagnostycznego in vitro. Produkt zawiera suchy kauczuk naturalny. W próbkach mogą być obecne drobnoustroje patogenne, takie jak wirusy zapalenia wątroby i wirus HIV. Podczas pracy z materiałami skażonymi krwią i innymi płynami ustrojowymi należy przestrzegać Standardowych środków ostrożności 1-4 oraz wytycznych obowiązujących w danej placówce. Przed użyciem każdą fiolkę należy ocenić pod kątem śladów zniszczenia, zanieczyszczenia lub pogorszenia jakości. Fiolki mające oznaki zniszczenia lub zanieczyszczenia takie jak przeciek, zmętnienie, zmiana barwy (na ciemniejszą), uwypuklenie lub wklęśnięcie przegrody nie powinny być używane. W fiolce z zanieczyszczeniami może dojść do zwiększenia ciśnienia. Jeśli zanieczyszczona fiolka jest używana do bezpośredniego pobierania materiału, zanieczyszczone podłoże hodowlane może być zassane do żyły pacjenta. Zanieczyszczenie fiolki może nie być łatwo widoczne. Kiedy używa się procedury bezpośredniego pobierania materiału, należy monitorować dokładnie ten proces, aby uniknąć zassania materiału do organizmu pacjenta. W rzadkich przypadkach szyjka fiolki może być pęknięta i może odłamać się podczas zdejmowania pokrywki albo w czasie obsługi. Także w rzadkich przypadkach fiolka może nie być zamknięta wystarczająco szczelnie W obu przypadkach zawartość fiolki może wycieknąć lub rozlać się. Jeśli fiolka była inokulowana, materiał, który wyciekł lub uległ rozlaniu, należy traktować z 1
ostrożnością ze względu na to, że może on zawierać patogenne drobnoustroje (czynniki). Przed utylizacją należy wysterylizować wszystkie inokulowane fiolki w autoklawie. Fiolki z hodowlą, która dała wynik dodatni, do podhodowli, barwienia itd.: Przed pobraniem próbki należy wypuścić gaz, który często jest wytwarzany w wyniku metabolizmu bakterii. Próbki należy w miarę możliwości pobierać w kabinie bezpieczeństwa mikrobiologicznego w odpowiedniej odzieży ochronnej, włączając w to rękawiczki i maski. Dodatkowe informacje na temat podhodowli zob. rozdział Procedury. Aby zminimalizować potencjalny wyciek podczas inokulacji próbki do fiolki hodowlanej, należy użyć końcówek z założonymi na stałe igłami lub zakończeniami typu Luer-Lok. Instrukcja przechowywania Fiolki BACTEC są dostarczane w postaci gotowej do użycia i nie wymagają rozprowadzenia ani rozcieńczenia zawartości. Przechowywać w temperaturze 2 25 C w suchym miejscu. Chronić przed bezpośrednim oświetleniem. POBIERANIE PRÓBKI Próbkę należy pobrać przy użyciu sterylnych technik, aby zredukować możliwość zanieczyszczenia. Typowa objętość próbki to 8 10 ml. Zaleca się inokulację próbki do fiolki BACTEC przy łóżku pacjenta. Najczęściej do pobrania próbki używa się strzykawki z końcówką typu Luer-Lok o pojemności 10 ml lub 20 ml. Dogodnie jest użyć: uchwytu igieł Vacutainer i zestawu Vacutainer do pobierania krwi lub zestawu do pobierania krwi Vacutainer Safety-Lok lub innego zestawu motylkowego. Kiedy używa się igły i zestawu przewodów (bezpośrednie pobieranie), należy uważnie obserwować kierunek przepływu krwi w momencie, kiedy zaczyna się pobieranie próbki. Puste miejsce w fiolce zwykle przekracza 10 ml, tak że użytkownik powinien monitorować pobieraną objętość za pomocą oznaczeń co 5 ml na etykiecie fiolki. Po pobraniu wymaganych 8 10 ml przepływ należy zatrzymać przez zagięcie przewodu i usunięcie zestawu z fiolki BACTEC. Mogą być używane próbki o objętości 3 ml, jednakże odzysk nie będzie tak duży jak przy większych objętościach. Inokulowana fiolka BACTEC powinna być przetransportowana tak szybko jak to możliwe do laboratorium. PROCEDURA Należy usunąć nakrętkę ze szczytu fiolki BACTEC i sprawdzić fiolkę pod względem pęknięć, zanieczyszczenia, nadmiernego zmętnienia i uwypuklenia lub przeciętych przegród. NIE NALEŻY UŻYWAĆ, jeżeli zauważy się jakieś uszkodzenia. Przed inokulacją przetrzeć przegrodę alkoholem (jodyna nie jest zalecana). Aseptycznie wstrzyknąć lub pobrać bezpośrednio 8 10 ml próbki na fiolkę. Pożywka jest przeznaczona do stosowania do próbek krwi o objętości 3 10 ml. Jeśli objętość próbki jest mniejsza niż 3 ml, odzysk nie będzie tak duży jak przy większych objętościach (zobacz rozdział Ograniczenia procedury). Inokulowane fiolki powinny być umieszczone we fluorescencyjnym aparacie BACTEC tak szybko, jak to możliwe do inkubacii i monitorowania. Jeśli umieszczenie inokulowanej fiolki w aparacie jest opóźnione i widoczny jest wzrost, fiolka nie powinna być poddana badaniu we fluorescencyjnym aparacie BACTEC, ale raczej powinna być wykonana podhodowla, a fiolka powinna być traktowana jako przypuszczalnie dodatnia. Fiolki umieszczone w aparacie będą badane automatycznie co 10 minut w czasie rejestrowania przebiegu badania. Fiolki dodatnie będą oznaczane przez fluorescencyjny aparat BACTEC i identyfikowane jako dodatnie (zobacz instrukcję obsługi właściwego fluorescencyjnego aparatu BACTEC). Sensor wewnątrz fiolki w ocenie wzrokowej nie będzie wykazywał różnic między fiolkami z wynikiem dodatnim i ujemnym, jednakże fluorescencyjny aparat BACTEC może wykazać różnicę we fluorescencji. Jeśli po zakończeniu okresu badania ujemna fiolka BACTEC Mycosis IC/F wydaje się wzrokowo dodatnia (np. uwypuklona przegroda i (lub) zmętnienie), z fiolki należy wykonać podhodowlę, odpowiednio wybarwić i traktować jako przypuszczalnie dodatnią. Z fiolek dodatnich należy wykonać posiewy i odpowiednio je wybarwić. W znakomitej większości przypadków pozwoli to dostrzec drobnoustroje i umożliwi wydanie lekarzowi wstępnego wyniku badania. Podhodowle: Przed wykonaniem podhodowli ustawić fiolkę pionowo i umieścić wacik nasycony alkoholem nad przegrodą. Aby obniżyć ciśnienie w fiolce, wbić sterylną igłę z odpowiednim filtrem lub wacikiem poprzez wacik i przegrodę. Igła powinna być usunięta bezpośrednio po obniżeniu ciśnienia i przed pobraniem próbki z fiolki do podhodowli. Wkłucie i wycofanie igły należy wykonać w linii prostej, unikając jakichkolwiek ruchów obrotowych. W celu uzyskania maksymalnej wydajności z izolatów z hodowli, fiolki, w których wynik hodowli był ujemny, należy przed utylizacją sprawdzić za pomocą barwienia i (lub) podhodowli. KONTROLA JAKOŚCI Należy postępować zgodnie z obowiązującymi wymaganiami kontroli jakości, wynikającymi z przepisów lokalnych, krajowych lub federalnych, wymogami akredytacji oraz standardowymi procedurami kontroli jakości w danym laboratorium. Zaleca się, aby użytkownik stosował się do odpowiednich wytycznych CLSI i przepisów CLIA, dotyczących sposobów kontroli jakości. NIE UŻYWAĆ fiolek hodowlanych po upływie ich daty ważności. NIE UŻYWAĆ fiolek do hodowli, które wykazują pęknięcia lub defekty; utylizować fiolkę w odpowiedni sposób. 2
Z każdym opakowaniem kartonowym podłoży dostarczane są certyfikaty kontroli jakości. Certyfikaty Kontroli Jakości zawierają kontrole badanych drobnoustrojów, włączając hodowle ATCC wyszczególnione w Standardzie CLSI Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media 5 (Gwarancja jakości dla przygotowanych do handlu pożywek hodowlanych). Czas niezbędny do wykrycia w godzinach wynosił 72 h dla każdego z drobnoustrojów wyszczególnionych w certyfikacie kontroli jakości tej pożywki: Drobnoustroje Candida albicans* ATCC 10231 Candida parapsilosis ATCC 10232 Candida (Torulopsis) glabrata ATCC 15545 Candida albicans ATCC 14053 Candida krusei ATCC 34135 Cryptococcus neoformans ATCC 13690 Candida tropicalis ATCC 750 *szczep CLSI Zaleca się przeprowadzenie testu wydajności dla każdej porcji podłoży dostarczonej do laboratorium przy użyciu fiolek stanowiących kontrolę dodatnią i ujemną. Fiolka dodatnia powinna być inokulowana szczepem wzorcowym Candida albicans ATCC 10231 lub Candida (Torulopsis) glabrata bądź inokulowana z 0,1 ml 0,5 wzorca McFarlanda. Tę fiolkę i fiolkę niepoddaną inokulacji należy wprowadzić do aparatu i poddać badaniu. Fiolka inokulowana powinna być wykryta jako dodatnia w ciągu 72 h. Fiolka kontroli ujemnej powinna pozostać ujemna. Ta procedura potwierdza, że podłoża nie były nieprawidłowo magazynowane lub też transportowane w niewłaściwych warunkach przed dostarczeniem do Państwa laboratorium. Jeżeli któraś z fiolek nie daje oczekiwanych wyników, nie należy używać tych podłoży do chwili skontaktowania się z lokalnym przedstawicielem firmy BD. Po informacje dotyczące kontroli jakości serii fluorescencyjnych aparatów BACTEC należy sięgnąć do instrukcji właściwego aparatu BACTEC. OGRANICZENIA PROCEDURY Zanieczyszczenie Należy przedsięwziąć środki ostrożności, aby zapobiec kontaminacji podczas pobierania i inokulacji do fiolki BACTEC. Zanieczyszczona próbka da odczyt dodatni, co jednak nie oznacza wyniku istotnego klinicznie. Takie ustalenie musi być wykonane przez użytkownika na podstawie takich czynników jak: typ wykrytych drobnoustrojów, występowanie tego samego drobnoustroju w wielu hodowlach, historia choroby pacjenta itd. Drobnoustroje niewykazujące żywotności Wymaz szczepów zabarwionych metodą Grama z podłoża może zawierać niewielką liczbę niewykazujących żywotności drobnoustrojów, pochodzących ze składników podłoża, odczynników barwiących, olejku immersyjnego, szkiełek szklanych i próbek używanych do inokulacji. Ponadto próbka pobrana od pacjenta może zawierać drobnoustroje, które nie będą rosły w podłożu lub w pożywkach używanych do podhodowli. Takie próbki powinny być posiewane na specjalnie do tego przygotowanych podłożach 6. Grzyby dimorficzne Podłoże Mycosis IC/F zostało zoptymalizowane pod kątem odzysku drożdżaków. Nie udowodniono efektywności tego podłoża w przypadku odzysku grzybów dimorficznych. Rozważania ogólne Optymalny odzysk izolatów będzie osiągany poprzez dodawanie od 8 do 10 ml krwi. Użycie mniejszych lub większych objętości może niekorzystnie wpływać na odzysk i /albo czas detekcji. Krew może zawierać czynniki hamujące wzrost bakterii albo inne inhibitory, które mogą spowalniać wzrost drobnoustrojów albo go uniemożliwiać. Fałszywie ujemne odczyty możemy uzyskiwać na skutek obecności pewnych drobnoustrojów, które nie wytwarzają odpowiedniej ilości CO 2, niezbędnej do wykrycia przez system albo też wzrost znaczący zachodzi przed umieszczeniem fiolki w systemie. Wyniki fałszywie dodatnie mogą zdarzać się w przypadku znacznego podwyższenia liczby krwinek białych. Z powodu charakteru materiału biologicznego zawartego w podłożach i naturalnej różnorodności drobnoustrojów użytkownik powinien zdawać sobie sprawę z potencjalnej różnorodności wyników przy wzroście niektórych drobnoustrojów. OCZEKIWANE WYNIKI I SWOISTA CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŚCIOWA Wydajność w badaniach z posiewami hodowli krwi Wykonano posiewane hodowle krwi, stosując ludzką krew pełną i poziom inokulum od 10 do 100 CFU. Poniżej przedstawiono listę drobnoustrojów rosnących w pożywce Mycosis IC/F, wykrytych w aparatach serii fluorescencyjnej BACTEC. 3
Lista grzybów i drożdżaków wykrytych w posianych próbkach krwi na podłożu BACTEC Mycosis IC/F Aspergillus flavus Candida parapsilosis Mucor ramosissimus Candida albicans Candida rugosa Penicillium roqueforti Candida glabrata Candida tropicalis Trichosporon capitatum Candida krusei Cryptococcus neoformans Wyniki na podłożu selektywnym BACTEC przeznaczonym do odzyskania grzybów i drożdżaków zostały porównane z wcześniej używanym podłożem BACTEC NR Fungal wykorzystywanym w systemie nieradiometrycznym BACTEC. Wykonane przez BD posiewy dały takie same rezultaty dla podłoża Mycosis IC/F, jak i podłoża NR Fungal. DOST PNOŚĆ Nr kat. Opis 442206 BACTEC Mycosis IC/F Culture Vials (fiolki do hodowli), kaseta zawierająca 50 fiolek 442026 BACTEC Mycosis IC/F Culture Vials (fiolki do hodowli), kaseta zawierająca 25 fiolek PIŚMIENNICTWO 1. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2005. Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 2. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: 53-80. 3. U.S. Department of Health and Human Services. 2007. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 5th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045. 5. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2004. Approved Standard M22-A3, Quality control for commercially prepared microbiological culture media, 3rd ed., CLSI, Wayne, Pa. 6. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry and M.A. Pfaller (ed.). 2007. Manual of clinical microbiology, 9th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 4
Becton, Dickinson and Company Benex Limited 7 Loveton Circle Pottery Road, Dun Laoghaire Sparks, MD 21152 Co. Dublin, Ireland (800) 638-8663 www.bd.com/ds ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo, BACTEC, Vacutainer, Safety-Lok AND Luer-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company. 2013 BD 5