Analiza stężenia prozapalnych interleukin w wydzielinie szyjkowej kobiet z PROM i we krwi pępowinowej ich noworodków

Transkrypt

1 Ginekol Pol. 2015, 86, Analiza stężenia prozapalnych interleukin w wydzielinie szyjkowej kobiet z PROM i we krwi pępowinowej ich noworodków Concentration of pro-inflammatory interleukins in cervical secretions of women with PROM and in the umbilical cord blood of their newborns Katedra Ginekologii, Położnictwa i Onkologii Ginekologicznej, Klinika Rozrodczości, Uniwersytet Medyczny im. K. Marcinkowskiego w Poznaniu, Polska 2 Ginekologiczno-Położniczy Szpital Kliniczny Uniwersytetu Medycznego im. K. Marcinkowskiego w Poznaniu, Polska Streszczenie Cel pracy: Celem pracy była analiza stężenia prozapalnych interleukin w wydzielinie szyjkowej kobiet z PROM w zależności od zakażenia Ureaplasma spp. i czasu jaki upłynął od pęknięcia błon płodowych oraz korelacja stężenia tych cytokin w wydzielinie szyjkowej i we krwi pępowinowej noworodka. Materiał i metody: badaniami objęto 30 kobiet z PROM między 24 a 33+6 tygodniem ciąży. Materiał stanowiły wydzielina szyjkowa kobiet z potwierdzonym pęknięciem błon płodowych pobierana w określonych odstępach czasu oraz krew pępowinowa pozyskiwana po urodzeniu noworodka. Wydzielinę szyjkową poddawano ocenie mikrobiologicznej i wykorzystując metodę PCR. Stężenie prozapalnych interleukin IL-6, IL-19, IL-10 oraz TNF- w wydzielinie szyjkowej i krwi pępowinowej badano metodą ELISA. Wyniki: Najczęściej izolowanym drobnoustrojem w wydzielinie szyjkowej kobiet z PROM była Ureaplasma spp. W wydzielinie szyjkowej kobiet z Ureaplasma spp. stężenie IL-6 było wyższe, chociaż bez istotności statystycznej, niż u kobiet bez Ureaplasma spp. Stężenie analizowanych interleukin w wydzielinie szyjkowej nie zmieniało się, w zależności od czasu jaki upłynął od PROM. Porównując stężenie interleukin we krwi pępowinowej noworodków matek z i bez zakażenia Ureaplasma spp. stwierdzono istotnie wyższe stężenie IL-6 w przypadku Ureaplasma spp. niezależnie od czasu w jakiem wystąpił poród. Uzyskano dodatnią korelację miedzy stężeniem IL-6 i TNF- w wydzielinie szyjkowej i we krwi pępowinowej matek z PROM i Ureaplasma spp. Wnioski: 1. Dla wykrycia Ureaplasma spp. w szyjce macicy metoda hodowli wydaje się być wystarczająca. 2. Prozapalne interleukiny, zwłaszcza IL-6, pozyskane drogą nieinwazyjną mogą być wykorzystane do przewidywania reakcji zapalnej płodu. Słowa kluczowe: PROM / interleukiny prozapalne / / / / Adres do korespondencji: Przemysław K. Wirstlein Katedra Ginekologii, Położnictwa i Onkologii Ginekologicznej, Klinika Rozrodczości, Uniwersytet Medyczny im. K. Marcinkowskiego w Poznaniu Polska, Poznań, ul. Polna 33 tel.: ; fax: ; abys@wp.pl Otrzymano: Zaakceptowano do druku: Polskie Towarzystwo Ginekologiczne Nr 6/2015

2 Ginekol Pol. 2015, 86, P R A C E O R Y G I N A L N E Abstract Objectives: The aim of the study was to analyze the levels of pro-inflammatory interleukins in cervical secretions of women with PROM, depending on Ureaplasma spp. infection and the time elapsed since the rupture of the membranes, and to correlate their concentration in cervical secretions and in cord blood of the newborns. Material and methods: The study included 30 women with PROM between 24 and 33+6 weeks of gestation. Cervical swabs from women with confirmed rupture of membranes taken at certain intervals and umbilical cord blood of their newborns constituted the study material. Cervical secretions were evaluated microbiologically and by the PCR method. Concentrations of IL-6, IL-19, IL-10 and TNF- were analyzed by ELISA. Results: Ureaplasma spp. were the most frequently isolated microorganisms in cervical secretions of women with PROM. Secretion of interleukins in the cervix was not influenced by time elapsed since the PROM. Comparison of interleukin levels in cord blood of newborns born to mothers with and without Ureaplasma spp infection revealed significantly higher levels of IL-6 in the case of Ureaplasma spp. A positive correlation between IL-6 and TNF- levels in cervical secretions and in cord blood of mothers with PROM and Ureaplasma spp. was detected. Conclusions: 1. Cervical culture method appears to be sufficient for detecting Ureaplasma spp. 2. Pro-inflammatory interleukins, especially IL-6, obtained by non-invasive methods can be used to predict fetal inflammatory response. Key words: PROM // cervical secretion / / / Wstęp Ureaplasma sppeciesmycoplasma hominis Ureaplasma spp. Ureaplasma spp. Ureaplasma spp. Ureaplasma spp Ureaplasma spp. Nr 6/2015 Polskie Towarzystwo Ginekologiczne 435

3 P R A C E O R Y G I N A L N E Ginekol Pol. 2015, 86, Cel pracy Ureaplasma spp. Materiał i metoda Ureaplasma urealiticumparvummycoplasma hominis Ureaplasma spp.mycoplasma hominis Ureaplasma spp. chorioamnionitis PCR. Ureaplasma parvumureaplasma spp.mycoplasma hominismycoplasma genitalium Analiza statystyczna Wyniki Ureaplasma spp. Ureaplasma spp. Ureaplasma spp Ureaplasma spp. Ureaplasma spp. Tabela I. Rodzaj drobnoustrojów w wydzielinie z szyjki macicy u 30 ciężarnych z PROM. 436 Polskie Towarzystwo Ginekologiczne Nr 6/2015

4 Ginekol Pol. 2015, 86, P R A C E O R Y G I N A L N E Tabela II. Dane kliniczne 30 ciężarnych z PROM. Ureaplasma spp. Bez Ureaplasma spp. 8 8 Tabela III. Stężenie prozapalnych interleukin (pg/ml) w wydzielinie szyjkowej u kobiet z PROM (A). Korelacje stężenia interleukin w wydzielinie szyjkowej u kobiet z PROM (B). A Ureaplasma spp., n=12 Bez Ureaplasma spp., n=18 0,054-0,274 TNF- 0,158 B Ureaplasma spp., n=12 Bez Ureaplasma spp., n=18 TNF- TNF- p p=0,036 p=0,008 p=0,036 p=0,076 - p=0,017 - p=0,666 * W wydzielinie z kanału szyjki macicy u 26 pacjentek pomiary stężenia IL-10 były poniżej czułości testu, dlatego stężenie tej interleukiny nie zostało umieszczone w tabeli. Ureaplasma spp. Ureaplasma spp. Ureaplasma spp Ureaplasma spp., Ureaplasma spp. Nr 6/2015 Polskie Towarzystwo Ginekologiczne 437

5 P R A C E O R Y G I N A L N E Ginekol Pol. 2015, 86, Tabela IV. Analiza zmiany stężenia [pg/ml] badanych cytokiny w wydzielinie z kanału szyjki macicy, w ciągu kolejnych czterech oznaczeń u kobiet z PROM, u których zidentyfikowano Ureaplasma spp. (n=4) oraz u kobiet bez Ureaplasma spp. (n=5). Ureaplasma spp p p TNF- p 0,355 0,754 0,324 Ureaplasma spp p p TNF- p 0,472 0,251 0,564 Tabela V. Porównanie stężenia analizowanych interleukin w wydzielinie szyjkowej i krwi pępowinowej u 13 kobiet, które urodziły w czasie 7 dni od PROM. p p 0,005 0,03 / 0,93 0,202 0,622 TNF- 0,106 0,011 U pacjentek bez Ureaplasma spp. we krwi pępowinowej korelacja IL-6 z TNF-: rho = 0,715; p=0,038. W pozostałych zestawieniach brak korelacji. Tabela VI. Porównanie stężenia analizowanych interleukin w wydzielinie szyjkowej i krwi pępowinowej u 17 kobiet, które urodziły w czasie powyzej 7 dni od PROM. p p 0,591 0,003 NA NA / 0,216 0,623 0,833 TNF- 0,526 0,157 U pacjentek z Ureaplasma spp. we krwi pępowinowej korelacja IL-6 z TNF-: rho = 1,000; p=0,003 oraz IL-6 z IL-10: rho = 0,943; p=0,017. Także we krwi pępowinowej korelacja IL-10 z TNF-: rho = 0,943; p=0,017. W wydzielinie, u pacjentek z Ureaplazma spp. korelacja IL-6 i IL-19: rho = 0,893; p<0,001. Ureaplasma spp. Ureaplasmy Ureaplasma spp. Ureaplasma spp. 438 Polskie Towarzystwo Ginekologiczne Nr 6/2015

6 Ginekol Pol. 2015, 86, P R A C E O R Y G I N A L N E Rycina 1. Zmiany stężenia IL-6 w ciągu kolejnych 6 tygodni od PPROM. Rycina 2. Zmiany stężenia IL-19 w ciągu kolejnych 6 tygodni od PPROM. Figure 3. Zmiany stężenia TNF- w ciągu kolejnych 6 tygodni od PPROM. Ureaplasma spp. Ureaplasma spp. Dyskusja chorioamnionitis Ureaplasma spp. Ureaplasma spp. Ureaplasma urealitycum Ureaplasma spp. Ureaplasma spp. Nr 6/2015 Polskie Towarzystwo Ginekologiczne 439

7 P R A C E O R Y G I N A L N E Ginekol Pol. 2015, 86, Tabela VII. Korelacje stężeń badanych cytokin w wydzielinie z kanału szyjki macicy i we krwi pępowinowej u kobiet z PROM. p TNF- p=0,017 p0,350 p0,017 p=517 p=0,233 p0,233 p=0,783 p0,95 p0,95 TNF- p0,083 p0,133 p0,083 p TNF- p0,491 p0,843 p<0,001 p0,341 p0,968 p0,121 p438 p438 p297 TNF- p545 p0,843 p<0,001 p TNF- p<0,001 p=0,297 p=0,096 p=545 p=0,602 p=0,72 p<0,001 p=0,39 TNF- p<0,001 p=0,217 p=0,121 p TNF- p=0,612 p=0,423 p=0,124 p=0,948 p=0,619 p=0,381 p=0,67 p=0,353 p=0,99 TNF- p=0,612 p=0,885 p=0,775 Ureaplasma spp.ureaplasma spp. 440 Polskie Towarzystwo Ginekologiczne Nr 6/2015

8 Ginekol Pol. 2015, 86, P R A C E O R Y G I N A L N E Ureaplasma spp., Ureaplasma spp. b Ureaplasma spp. Ureaplasma spp Wnioski Ureaplasma spp Ureaplasma spp., Oświadczenie autorów: 1. Jana Skrzypczak autor koncepcji i założeń pracy, przygotowanie manuskryptu autor zgłaszający i odpowiedzialny za manuskrypt. 2. Przemysław K. Wirstlein oznaczenia laboratoryjne, analiza statystyczna, ilustracja wyników. 3. Magdalena Wróbel przygotowanie, korekta ostatecznego kształtu manuskryptu. 4. Mateusz Mikołajczyk współautor koncepcji i założeń pracy, protokołu, korekta, zebranie materiału. Źródło finansowania: Praca finansowana z badań statutowych Kliniki Rozrodczości nr: Konflikt interesów: Autorzy nie zgłaszają konfliktu interesów oraz nie otrzymali żadnego wynagrodzenia związanego z powstawaniem pracy. References 1. Cobo T, Kacerovsky M, Andrys C, [et al.]. Umbilical cord blood IL-6 as predictor of early-onset neonatal sepsis in women with preterm prelabour rupture of membranes. PloS One. 2013, 8 (7), e Hofer N, Kothari R, Morris N, [et al.]. The fetal inflammatory response syndrome is a risk factor for morbidity in preterm neonates. Am J Obstet Gynecol. 2013, 209 (6), 542.e1 542.e Savasan ZA, Chaiworapongsa T, Romero R, [et al.]. Interleukin-19 in fetal systemic inflammation. J Matern Fetal Neonatal Med. 2012, 25 (7), DiGuilio DB, Romero R, Kusanovic JP, [et al.]. Prevalence and diversity of microbes in the amniotic fluid, the fetal inflammatory response, and pregnancy outcome in women with preterm pre-labor rupture of membranes. Am J Reprod Immunol. 2010, 64 (1), Bearfield C, Davenport ES, Sivapathasundaram V, Allaker RP. Possible association between amniotic fluid micro- organism infection and microflora in the mouth. BJOG. 2002, 109 (5), Kacerovsky M, Pliskova L, Bolehovska R, [et al.]. The microbial load with genital mycoplasmas correlates with the degree of histologic chorioamnionitis in preterm PROM. Am J Obstet Gynecol. 2011, 205 (3), 213.e Tomusiak A, Heczko PB, Janeczko J, [et al.]. Bacterial infections of the lower genital tract in fertile and infertile women from the southeastern Poland. Ginekol Pol. 2013, 84, Rodríguez N, Fernandez C, Zamora Y, [et al.]. Detection of Ureaplasma urealyticum and Ureaplasma parvum in amniotic fluid: association with pregnancy outcomes. J Matern Fetal Neonatal Med. 2011, 24 (1), Holst RM, Hagberg H, Wennerholm UB, [et al.]. Prediction of microbial invasion of the amniotic cavity in women with preterm labour: analysis of multiple proteins in amniotic and cervical fluids. BJOG. 2011, 118 (2), Cobo T, Jacobsson B, Kacerovsky M, [et al.]. Systemic and local inflammatory response in women with preterm prelabor rupture of membranes. PloS One. 2014, 9 (1), e Lee SE, Romero R, Jung H, [et al.]. The intensity of the fetal inflammatory response in intraamniotic inflammation with and without microbial invasion of the amniotic cavity. Am J Obstet Gynecol. 2007, 197 (3), 294.e1-294.e Gotsch F, Romero R, Kusanovic JP, [et al.]. The fetal inflammatory response syndrome. Clin Obstet Gynecol. 2007, 50 (3), Holst RM, Hagberg H, Wennerholm UB, [et al.]. Prediction of microbial invasion of the amniotic cavity in women with preterm labour: analysis of multiple proteins in amniotic and cervical fluids. BJOG. 2011, 118 (2), Hitti J, Lapidus J A, Lu X, [et al.]. Noninvasive diagnosis of intraamniotic infection: proteomic biomarkers in vaginal fluid. Am J Obstet Gynecol. 2010, 203 (1), 32.e Kim CJ, Yoon BH, Park SS, [et al.]. Acute funisitis of preterm but not term placentas is associated with severe fetal inflammatory response. Hum Pathol. 2001, 32 (6), Hsing CH, Chiu CJ, Chang LY, [et al.]. IL-19 is involved in the pathogenesis of endotoxic shock. Shock. 2008, 29 (1), Kacerovsky M, Pliskova L, Bolehovska R, [et al.]. The impact of the microbial load of genital mycoplasmas and gestational age on the intensity of intraamniotic inflammation. Am J Obstet Gynecol. 2012, 206 (4), 342.e Ryu A, Park KH, Oh KJ, [et al.]. Predictive value of combined cervicovaginal cytokines and gestational age at sampling for intra-amniotic infection in preterm premature rupture of membranes. Acta Obstet Gynecol Scand. 2013, 92 (5), Robertson SA, Skinner RJ, Care AS. Essential role for IL-10 in resistance to lipopolysaccharideinduced preterm labor in mice. J Immunol. 2006, 177 (7), Terrone DA, Rinehart BK, Granger JP, [et al.]. Interleukin-10 administration and bacterial endotoxin-induced preterm birth in a rat model. Obstet Gynecol. 2001, 98 (3), Frøen JF, Munkeby BH, Stray-Pedersen B, Sangstad OD. Interleukin-10 reverses acute detrimental effects of endotoxin-induced inflammation on perinatal cerebral hypoxia-ischemia. Brain Res. 2002, 942 (1-2), Nr 6/2015 Polskie Towarzystwo Ginekologiczne 441